高效液相色谱-电感藕合等离子体质谱联用测定植物性食品中硒的形态

目的建立一种简单、有效的高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用(HPLC-ICP-MS)分析食品中5种硒形态的方法。方法对植物性食品样品中不同形态硒化合物提取方法及色谱系统分离柱、流动相、洗脱程序进行交联试验。结果以5 mmol/L柠檬酸,水相pH值=4.7,流速为1.0 ml/min,HamiltonPRP-X100阴离子交换色谱柱能有效分离5种硒形态;超声波辅助链酶蛋白酶E提取30 min,硒形态提取率最高;在5μg/L^100μg/L,5种硒形态呈线性关系,相关系数r均为0.999以上,仪器检出限分别为0.53μg/L^0.96μg/L。平均加标回收率为73.73%~110.6%,相对标准偏差为1.01%~9.75%。结论采用该方法,5种硒化合物分离迅速,6 min内分离出4种化合物,22 min内全部分离完成,分离度R值均>1.5,分离效果良好;用于植物性食品中硒形态的检测,用超声波辅助链酶蛋白酶E的提取效率最高,检测到的5种硒化合物总量与总硒的百分比在75%左右,结果令人满意。     

HPLC-ICP-MS联用技术测定竹笋中六种硒形态

目的采用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱(HPLC-ICP-MS)联用技术,建立分离测定硒酸盐(SeVI)、亚硒酸盐(SeIV)、硒代蛋氨酸(SeMet)、硒代胱氨酸(SeCys2)、甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)和硒代乙硫氨酸(SeEt)等6种硒形态的方法。方法采用超声波辅助酶提法提取雷竹笋硒形态,HPLC-ICP-MS联用技术分离测定SeMet、SeCys2、Se(IV)、Se(VI)、MeSeCys、SeEt 6种硒形态,色谱柱为Hamilton PRP X-100,流动相为5 mmol/L柠檬酸溶液(pH4.72),流速为1.0 ml/min。结果 HPLC-ICP-MS联用技术在22min内分离6种硒形态,6种硒形态的标准曲线均获得良好线性方程和相关系数,检出限在0.4⁴.6·g/L,6种硒形态的加标回收率在80%4.6·g/L,6种硒形态的加标回收率在80%¹17%范围;超声波辅助酶提法提取硒形态的时间短且效率较高;使用上述方法检测富硒雷竹笋,富硒雷竹笋含有SeMet、SeCys2、Se(Ⅳ)、Se(Ⅵ)、MeSeCys,其中SeMet为主要的硒形态。结论建立了快速分离检测6种硒形态的方法,该方法操作简单、高效、精准、实用。     

植物中硒的分离和微波消解鄄原子荧光测定法

目的建立微波密闭H2O2鄄HNO3消解、分离测定植物样品中不同形态硒(Se)。方法以氢化物发生原子荧光光谱法直接测定水溶态的无机Se(IV),还原后测定Se(VI)。用XAD鄄2树脂消除可溶有机质对测定的干扰,以差减法获得可溶态硒、不溶态硒、无机Se(IV)和Se(VI)以及有机硒。结果氢化物发生原子荧光光谱法测定Se(IV)的线性范围为0～80μg/L,最低检出限0.05μg/L。微波消解、原子荧光法测定植物样品硒总量的RSD为1.7%(n=5)。标准参考物质的硒总量测定结果与标准值相吻合。结论微波消解法处理植物样品避免了硒的挥发损失;XAD鄄2树脂消除有机基体对荧光法直接测定植物样品中Se(Ⅳ)的干扰,扩大了该方法在形态分析中的应用;建立的硒形态系统分析流程可以分析植物样品中6种形态的Se,操作简便,方法实用。     

富硒食品含硒量范围标准的研究

目的:制定富硒食品含硒量范围标准,规范富硒食品的生产、加工与销售行为。方法:采集不同硒区农副产品、预包装食品和居民膳食样品,按GB5009.93食品中硒的测定方法进行检测,参考国内相关资料提出的富硒食品含硒量量值设定范围,下限设置注重补硒有效性,上限设置注重食物安全性。结果:谷物硒含量0.1~0.4 mg/kg,蔬菜0.03~0.25 mg/kg,肉食品0.2~1.0 mg/kg范围内的富硒食品,可使居民每天硒的摄入量稳定在50~250μg/d的最适宜摄入量范围之内。     

植物中硒的分离和微波消解-原子荧光测定法

目的 建立微波密闭H2O2-HNO3消解、分离测定植物样品中不同形态硒(Se)。方法 以氢化物发生原子荧光光谱法直接测定水溶态的无机Se(Ⅳ),还原后测定se(Ⅵ)。用XAD-2树脂消除可溶有机质对测定的干扰,以差减法获得可溶态硒、不溶态硒、无机Se(Ⅳ)和Se(Ⅵ)以及有机硒。结果 氢化物发生原子荧光光谱法测定Se(Ⅳ)的线性范围为0～80μg/L,最低检出限0．05μg／L。微波消解、原子荧光法测定植物样品硒总量的RSD为1．7％(n=5)。标准参考物质的硒总量测定结果与标准值相吻合。结论微波消解法处理植物样品避免了硒的挥发损失;XAD-2树脂消除有机基体对荧光法直接测定植物样品中Se(Ⅳ)的干扰,扩大了该方法在形态分析中的应用;建立的硒形态系统分析流程可以分析植物样品中6种形态的Se,操作简便,方法实用。     

谷类食品中硒形态超声酶提取-高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法测定

目的采用高效液相色谱–电感耦合等离子体质谱法研究谷类食品中的硒形态。方法采用Hamilton PRP-X100阴离子交换柱作为分析柱,40 mmol/L磷酸氢二铵[(NH_4)_2HPO_4](pH=5.0)和60 mmol/L[(NH_4)_2HPO_4](pH=6.0)为流动相,梯度洗脱,硒代胱氨酸(SeCys_2)、甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)、亚硒酸盐[Se(Ⅳ)]、硒代蛋氨酸(SeMet)和硒酸盐[Se(Ⅵ)]可在16 min内实现基线分离。采用超声辅助酶提取法对谷类食品进行预处理。结果 SeCys_2、MeSeCys、Se(Ⅳ)、SeMet和Se(Ⅵ)的方法检出限分别为2.5、5.0、2.5、10.0和5.0μg/kg;0.5～200.0μg/L范围内,线性相关系数(r)均 0.999,线性关系良好。结论谷类食品中的硒形态主要以硒代蛋氨酸为主,同时含有少量硒代胱氨酸、无机硒及一些未知的硒化合物。     

硒对体外心肌细胞过氧化损伤保护和骨架蛋白actin表达的影响

目的探讨硒对H2O2损伤心肌细胞的保护作用以及α-actin和β-actin表达的影响。方法培养乳鼠心肌细胞随机分为对照组,H2O2组,Se 0.05、0.5、1.0和5.0μmol/L组,采用透射电镜观察实验心肌细胞的超微结构,比色法检测心肌细胞培养介质中LDH和MDA含量,Western Blot检测α-actin和β-actin蛋白的表达。结果 Se 0.5μmol/L可减轻心肌细胞超微结构损伤;各加硒组LDH和MDA水平较H2O2组显著降低(P<0.05),较对照组显著升高(P<0.05),其中Se 0.5μmol/L组LDH和MDA含量在各加硒组中最低;Se 0.5μmol/L组α-actin表达水平较H2O2组升高并高于正常对照组;Se 0.5μmol/L组β-actin表达水平较损伤组升高,低于正常对照组。结论 0.5μmol/L硒对H2O2损伤心肌细胞具有较好的保护作用,可维持和保护α-actin和β-actin的表达,参与细胞骨架蛋白重构。     

硒浓度对发芽大豆中几种营养成分动态变化的影响

目的以东北大豆为材料,研究外源Na2SeO3对大豆种子萌发过程中几种营养成分动态变化的影响。方法设置6个浓度的Na2SeO3溶液(0、9、12、15、18、21μg/ml),恒温恒湿条件下培养发芽大豆5 d,每日取样,检测发芽大豆硒(Se)、可溶性总糖、还原糖、可溶性蛋白质、游离氨基酸、γ-氨基丁酸(GABA)含量。结果硒浓度与发芽大豆无机硒的有机转化率及GABA含量呈明显的负相关。硒处理条件下,硒、还原糖、游离氨基酸、GABA含量随着萌发时间的延长而增高;总可溶性糖,可溶性蛋白呈下降趋势。低浓度硒溶液(≤15μg/ml)可提高发芽大豆还原糖、可溶性蛋白、游离氨基酸、GABA含量,且前三种物质的提高率与硒浓度呈正相关;硒浓度大于15μg/ml,这几种物质含量明显下降,且硒浓度越大,降低越显著。结论低浓度硒可显著提高发芽大豆营养成分和生物活性物质GABA含量,其中15μg/ml的硒浓度对发芽大豆营养物质的累积效果最佳,9μg/ml的硒浓度最有利于GABA的积累。     

大豆硒蛋白的生物学功能初探

目的:探讨大豆硒蛋白的生物学功能。方法:用纯昆明种小鼠及移植法建立的S180肿瘤动物模型,以不同剂量的天然大豆硒蛋白喂饲,通过机体抗氧化能力、免疫调节能力、对肿瘤的抑制作用及相关生理生化指标的检测考察大豆硒蛋白的生物学功能。结果:(1)补充剂量在硒0￣202.5μg/kgbw范围内,随着补充剂量增大,实验小鼠的白细胞计数、血红蛋白含量、胸腺重量显著增加;血清GSH-Px、SOD及肝脏GSH-Px酶活力增强;血清及肝组织脂质过氧化物(LPO)均明显降低。但补充剂量达607.5μg/kg后,实验条件下,各项评价指标逆转。(2)在硒0￣202.5μg/kg剂量范围内,随大豆硒蛋白补充剂量的增加,对S180肉瘤的抑制作用显著增强(补硒剂量在202.5μg/kg时其抑瘤率达78%左右),荷瘤小鼠的存活时间延长;(3)实验条件下,补充硒剂量达202.5μg/kg时,未见试验小鼠有任何中毒迹象。结论:补充硒剂量在202.5μg/kgbw范围内,大豆硒蛋白能显著增加体内抗氧化酶的活力、促进免疫器官发育、抑制S180肿瘤生长,且无任何毒副作用。     

4种富硒植物预防MNNG诱发大鼠胃癌效果研究 二、不同源硒预防大鼠胃癌的安全性对比研究

目的对比研究长期摄入高剂量不同源硒的安全性。方法以亚硒酸钠为对照硒材料,采用N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱发大鼠胃癌模型,连续灌以4种不同富硒植物(高剂量硒)17周,测定肝脏谷胱甘肽硫转移酶(GST)、血清谷草转氨酶(AST)和血清谷丙转氨酶(ALT)活性,并观察肝脏和肾脏的病理变化。结果各组大鼠肝GST活性均无显著性差异;75μg/kg bw(以Se计,下同)亚硒酸钠低剂量组大鼠血清AST和ALT活性不仅显著高于空白对照和MNNG组,而且显著高于150μg/kg bw和300μg/kg bw植物硒处理组(P<0.05)。病理分析发现75μg/kg bw亚硒酸钠低剂量组胆管周围有棕黄色颗粒,窦内枯否氏细胞轻度肥大、增生;其余各组未发现有意义的病变。结论亚硒酸钠毒性至少是实验用其它富硒植物的4倍。     

硒对镉诱导的大鼠肝脏端粒酶逆转录酶和c-Myc及p53表达的影响

目的研究亚硒酸钠时氯化镉诱导的大鼠肝脏端粒酶逆转录酶（TERT）mRNA、c-Myc蛋白、p53蛋白表达的影响。方法健康雄性SD大鼠随机分为6组，对照组、硒组（5μmol／kg亚硒酸钠）、5μmol／kg氯化镉组、10μmol／kg氯化镉组、研（5μ／kg亚硒酸钠）＋5μmol／kg氯化镉组、硒（5μmol／kg亚硒酸钠）＋10μmol／kg氯化镉组。每组动物5只，染毒48h后取出肝脏，用RT-PCR方法检测TERP基因的表达，用免疫组织化学方法检测c-Myc蛋白和p53蛋白的表达。结果与对照组比较，5μmol／Lkg氯化镉组和10μmol／kg氯化镉组TERP表达增多，10μmol／L kg氯化镉组c-Myc蛋白表达增多，5μmol／L kg氯化镉组和10μmol／L kg氯化镉组p53蛋白表达增多。TERT的表达，硒＋10μmol／Lkg氯化镉组与10μmol／L kg氯化镉组比较降低；硒＋10μmol／L kg氯化镉组比10μmol／L kg氯化镉组c-Myc蛋白表达降低；硒＋5μmol／L kg氯化镉组、硒＋10μmol／L kg氯化镉组与相对应的镉组比较p53蛋白表达降低。结论镉在5～10μmol／L kg的剂量条件下可以诱导大鼠肝脏高表达TERT、c-Myc蛋白和p53蛋白，而硒对镉引起的TERT、c-Myc蛋白和p53蛋白的表达增高具有一定的拮抗作用。     

比色法快速检测食品中硒含量

目的建立快速检测食品中硒含量的方法。方法采用硒(IV)-SCN---罗丹明B显色体系,通过优化体系反应时间、pH、显色剂浓度、吐温用量等条件,建立了基于比色法快速检测硒含量的方法。结果该方法在606nm处吸光值最大,检测的线性范围为0~3.6μg/L,相关系数为0.9938,相对标准偏差和检出限分别为4.64%和0.118μg/L。使用该方法和原子荧光光谱法分别测定富硒大米和富硒粽叶中的硒含量,检测结果没有显著性差异。结论建立了快速检测食品中硒含量的方法,该方法操作简单、快速、实用。     

微波消解—原子荧光光谱法测定富硒精米中硒

目的建立微波消解—氢化物发生原子荧光光谱法测定富硒精米中硒的方法。方法富硒精米样品经微波消解后,用氢化物原子荧光光谱法测定富硒精米中硒的浓度。结果本法在硒浓度为0～10μg/L范围有良好的线性关系,相关系数r=0.9997,检出限为0.002 mg/kg;相对偏差为0.57%～2.7%;回收率为99.8%～101.0%。结论该方法具有简便、快速、灵敏度高等优点,适合日常批量检测。     

甲苯萃取-微波消解-原子荧光光谱法测定富硒保健品中有机硒和总硒

目的：建立分离、消解、测定富硒保健品中有机硒和总硒的分析方法。方法：采用甲苯萃取分离样品中的有机硒后,利用HNO3-H2O2消解体系微波消解,原子荧光光谱法测定样品中的有机硒和总硒。结果：在优化工作条件下,硒的检出限为0.088μg/L,相对标准偏差为0.43%-0.53%,线性范围为0-200μg/L,应用该方法检测不同富硒保健品中的总硒含量为0.87-13.04 mg/kg,有机硒含量为0.76-8.54 mg/kg,总硒加标回收率为95.1%-106.2%。结论：该方法简便、灵敏、重现性好、干扰少,适合富硒保健品中的有机硒和总硒测定。     

硒蛋白对糖尿病小鼠血糖、Ca2+转运以及NO系统影响的实验研究

目的研究硒蛋白对糖尿病小鼠血糖、Ca2+转运及NO系统的调控作用.方法体重(20.3±1.7)g昆明种雄性小鼠,腹腔注射200mg/kgbw,2%的四氧嘧啶造糖尿病(DM)模型.实验分6组正常对照组(Ⅰ)、正常+硒蛋白组(Se 100μg/kgbw)(Ⅱ)、糖尿病对照组(Ⅲ)、DM+硒蛋白低剂量组(Se 100μg/kgbw)(Ⅳ)、DM+硒蛋白高剂量组(Se 300μg/kgbw)(Ⅴ)、DM+亚硒酸钠组(Se 100μg/kgbw)(Ⅵ).结果Ⅴ组血糖(20.4±6.3)mmol/L明显低于Ⅲ组(45.3±3.3)mmoi/L,P＜0.05;肾脏三磷酸腺苷酶(Ca2+-ATPase)活性,Ⅴ组0.90±0.5明显高于Ⅲ组(0.35±0.1)μmol/(h·mg prot),P＜0.05;一氧化氮合酶(NOS)活性,Ⅴ组(25.0±4.3)U/ml明显低于Ⅲ组(35.2±4.4)U/ml,P＜0.05.结论补硒剂量为Se 300μg/kgbw的硒蛋白能够显著的降低糖尿病小鼠血糖、提高肾脏Ca2+-ATPase活性和降低血浆NOS活性.     

双通道原子荧光光谱法同时测定海产品中的硒和汞

目的:建立海产品中痕量硒和汞的原子荧光同时快速分析方法。方法:采用微波消解处理后,用氢化物发生-原子荧光光谱法同时测定。结果:对消解液组成及仪器工作条件(负高压、载气流量、屏蔽气流量)进行优化后,在优化的工作条件下,硒、汞的检出限分别为0.039μg/kg和0.010μg/kg,线性范围分别为0.5μg/L~10.0μg/L和0.05μg/L~1.0μg/L,经加标回收试验和国家一级标准物质验证,测定结果与标准值吻合,回收率范围为90.8%~104.8%,相对标准偏差均<5%。结论:该方法简便灵敏、准确度高,适用于海产品中痕量硒和汞的同时检测。     

硒代蛋氨酸对肝细胞L02中硒蛋白表达的影响及丝氨酸的协同作用

目的观察硒代蛋氨酸对肝细胞L02硒蛋白表达的影响及丝氨酸的协同作用。方法培养L02细胞,分为硒代蛋氨酸组和丝氨酸+硒代蛋氨酸组。硒代蛋氨酸剂量设为0.001、0.01、0.1、1和10μmol/L,丝氨酸和硒代蛋氨酸按照2∶1摩尔比混合。作用于L02细胞48 h后,采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immuno-sorbent assay,ELISA)双抗体夹心法检测细胞培养上清液中硒蛋白P和裂解液中谷胱甘肽过氧化物酶1(glutathione peroxidase 1,GPx1)浓度,采用免疫印迹法检测裂解液中硒蛋白P和GPx1表达水平。结果硒代蛋氨酸浓度为0.1和1μmol/L时,硒蛋白P和GPx1表达分别达到拐点,硒代蛋氨酸浓度为10μmol/L时,GPx1和硒蛋白P表达下降。硒代蛋氨酸剂量为0.001~10μmol/L时,丝氨酸对细胞内GPx1和硒蛋白P表达具有协同作用。结论硒代蛋氨酸作用于人正常肝细胞L02时,硒蛋白合成出现拐点,且丝氨酸对硒代蛋氨酸在肝细胞L02内表达GPx1和硒蛋白P具有协同作用。     

碘过量对仔鼠脑α-微管蛋白表达的影响及硒的干预作用

目的研究碘过量摄入对小鼠仔鼠脑α-tubulin基因表达的影响及硒的干预作用。方法将60只BALB/c小鼠随机分为四组正常对照组(饮用自来水,NC)、碘过量组(饮水含碘3000μg/L,EI+)、补硒组(饮水含Se200μg/L,Se+)、碘过量加硒(饮水含碘3000μg/L+Se200μg/L,EI+Se+)组。以纯系鼠饲料饲养。4个月后,雌雄交配。测定D14和D28仔鼠血清总T4和总T3水平,分别用实时荧光定量PCR和Western Blot测定D0、D14和D28仔鼠大脑组织α-微管蛋白和α-微管蛋白mRNA表达。结果D14仔鼠血清T4水平碘过量组显著低于对照组和碘过量加硒组(P<0.05)。D0仔鼠脑组织α-微管蛋白mRNA水平碘过量组显著低于对照组、单独补硒组和碘过量补硒组(P<0.05)。14d仔鼠脑组织α-微管蛋白mRNA和蛋白表达水平碘过量组显著高于其它组(P<0.05)。碘过量和补硒对D28仔鼠血清T4水平和脑组织α-微管蛋白表达水平无明显影响。结论碘过量引起仔脑α-微管蛋白的发育迟滞,补硒具有缓解作用。     

微波消解氢化物原子荧光光谱法测定福建宁德大黄鱼中的硒

目的:建立宁德大黄鱼中硒的微波消解氢化物原子荧光光谱测定方法。方法:样品经微波消解,在铁氰化钾—盐酸体系中,用硼氢化钾作还原剂,采用氢化物原子荧光光谱法测定。结果:硒浓度在0~50μg/L的范围内线性良好,相关系数r=0.9998,方法检出限为0.15μg/L,样品检出限0.019 mg/kg,相对标准偏差0.91%~4.22%,回收率94%~104%。结论:方法灵敏度高,准确度好,精密度高,干扰少,简便适用,适合大黄鱼中硒的测定。     

纳米红色元素硒的急性毒性和生物利用性

纳米红色元素硒是以蛋白质为分散剂的元素硒的纳米粒子,粒径在60nm 以内。体外研究证实,纳米红色元素硒能够与谷胱甘肽反应,其反应能力约为亚硒酸钠的1/20至1/10。急性毒性实验证实以口服硒元素的量计,纳米红色元素硒的LD50 = 112.98(89.95～141.90)m g/kgBW,亚硒酸钠的LD50= 15.72(13.38～18.47)m g/kgBW,显示出纳米红色元素硒的毒性低。生物利用性试验证实:小鼠分别口服纳米红色元素硒和亚硒酸钠(Se 50μg/kg BW)30天,与对照组比,2种硒都能显著提高小鼠血硒和肝硒浓度,血中谷胱甘肽过氧化物酶活性升高。这说明纳米红色元素硒能被小鼠较好利用