溶原性

大多数噬菌体是烈性的(如T4、T7、φ×174等),即它们在生长循环结束时杀死细胞。不过有许多噬菌体,能以另一种方式和寄主相互作用:噬菌体和寄主一起增殖,这样的关系就叫做溶原性。在溶原性细胞中的噬菌体叫做前噬菌体。一、溶原性菌株的性质温和噬菌体感染一个敏感细菌菌株时,可根据各     

产生葡激酶的溶原性转换噬菌体的研究——Ⅰ.转换噬菌体的分离及宿主双溶原性的检出

从葡激酶阳性菌株66分离到两株噬菌体即α及β,α有转换葡激酶产生的能力,β则无。用去溶原方法由菌株66得到葡激酶阴性66SAK~-,由该菌株诱导得到噬菌体β。证明菌株66为带有两个前噬菌体的双溶原菌。在该菌株经过诱导后,得到的裂解液中,不能转换的噬菌体β多于转换噬菌体α。     

产生葡激酶的溶原性转换噬菌体的研究——Ⅱ.由双溶原性菌分离的转换和不能转换噬菌体的比较

我们曾报道了金葡菌66为双溶原菌,先后分离到两株噬菌体即α、β.α具有溶原性转换葡激酶能力,β则无。本文对这两株噬菌体特性作进一步比较,如溶血素的溶原性转换,噬菌斑的形态,溶原菌的免疫性,宿主特异性,血清型别,两株噬菌体DNA的酶切电泳图及溶原化菌株的噬菌体型等,表明菌株66是带有两个不同的亲和群前噬菌体的双溶原菌株。     

白喉毒素单克隆抗体的研究

自从1975年Kohler和Milsbein证明骨髓瘤细胞与免疫动物脾细胞融合成杂交细胞系,并能分泌与免疫抗原相应抗体之后,它已成为许多领域中比较理想的工具。白喉毒素是一个最早被发现的细菌性毒素     

检测噬菌体DNA法鉴别细菌的溶原性

根据前噬菌体的可诱导性,将细菌培养物经丝裂霉素C诱导,诱导液滤过除菌,经核酸酶处理和聚乙二醇(PEG 6000)浓缩,再用苯酚进行抽提。通过检测抽提物中有无DNA,以确定菌株的溶原性。实验证明从溶原菌诱导液中可提取DNA,同时表明该DNA确为溶原菌诱导出的噬菌体DNA,而非溶原性菌以同样方法不能取得DNAo用此方法,可以作为鉴别细菌溶原性的一个手段。     

福氏志贺氏菌溶原转换研究4b亚型福氏志贺氏菌的溶原性及FTP60299一组噬菌体所引致的抗原转换现象

14株4b亚型福氏志贺氏菌中检查出11株溶原菌。由其中10株得到的温和型噬菌体具有相同的抗原转换能力。当这些噬菌体作用于2a、X、Y变种时,可以使这些菌株溶原化,并发生抗原结构上的改变,三种细菌均增加了群6及Ⅲ型抗原,2a亚型菌株并失去与Ⅱ型血清的凝集性,这些细菌分别转变成为3a或3c亚型。作用于4a亚型菌株时可以使其增加群6抗原而转变为4b亚型。这些变化均属于溶原转换作用。 对有关问题曾进行了讨论。     

苏云金芽孢杆菌两株溶原性噬菌体的生物学特性

研究苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的溶原性及其噬菌体的生物学特性,从生产菌株MZ1中分离了两株溶原性噬菌体。MZ1经诱导后产生直径约为3mm和1mm的噬斑,分离获得属长尾噬菌体科的噬菌体MZTP01和MZTP02两株;分别对6株和7株不同亚种的Bt菌株具有侵染力;免疫血清与相应噬菌体的中和反应K值分别为45和326,且两者无相关抗原性。MZTP01抵抗酸、碱、紫外线和热的能力比MZTP02强,但抵抗有机溶剂的程度比MZTP02弱。MZTP01的潜伏期为80min,裂解量为55;MZTP02的潜伏期为40min,裂解量为175。核酸结构分析均表明为线性dsDNA分子。两基因组DNA的凝胶电泳表明分子量均在9.4~23kb之间,并被HindⅢ酶切分别产生8条和9条清晰条带。该菌株被证明为二元溶原菌,可能是造成生产损失的主要原因;为防治溶原性噬菌体提供了生物学信息。     

精制白喉毒素脱毒工艺的改进

为了改进精制白喉毒素脱毒工艺中存在的时间长和损失大等问题,我们考虑进行脱毒过程中加入Ｌ－赖氨酸协同脱毒的试验,并以原工艺进行比较,结果使原工艺存在的问题均得到较好的解决。     

溶原性噬菌体在猪链球菌2型分离株中的检出和鉴定

[目的]为了研究噬菌体整合酶基因在猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)中的分布情况.[方法]根据噬菌体整合酶基因设计引物,建立了PCR方法,并对扩增产物进行测序.[结果]结果显示,25株SS2致病菌株均扩增出目的片段,非毒力株T15、5株其它血清型猪链球菌及兰氏C群猪源链球菌未扩增出目的片段.经丝裂霉素C诱导后,SS2致病菌株出现完全的细胞溶解,而非毒力株T15未出现溶解.SS2致病株HA9801和ZY05719诱导均产生溶原性噬菌体,分别命名为SS2-HA和SS2-ZY,电镜观察,二者均头部呈正六边形,无尾部,其核酸类型为dsDNA,可鉴定为复层噬菌体科(Tectiviridae)的成员.噬菌体SS2-HA和SS2-ZY整合酶基因序列与已报道的SS2噬菌体整合酶基因序列高度同源,显示SS2噬菌体整合酶具有较高的特异性.[结论]从SS2致病株中检出溶原性噬菌体和噬菌体整合酶基因,且噬菌体整合酶基因与SS2溶菌酶释放蛋白(mrp)等7种毒力相关基因有相关性,表明SS2的溶原性噬菌体可能与其致病性有关.     

一种用分子杂交技术检测谷氨酸生产菌溶原性的方法

谷氨酸生产菌用于发酵生产谷氨酸和其他氨基酸,由于外源噬菌体污染或者由溶原菌内诱导出的噬菌体污染,往往给工业发酵带来严重的危害,于是测定谷氨酸生产菌是否为溶原菌便成了当务之急。本文以溶原菌E.coli K_(12)为研究模型,首先用~(32)P标记的λDNA作探针,建立了检测溶原菌株的分子诊断方法,继而通过寄主菌株从生产环境样品中分离筛选到7_6和7_(?)两大类共20多株噬菌体。由该两类噬菌体制得的~(32)P-7_(?)和7_(?)探针,可分别与以生产谷氨酸的棒杆菌B_9、7338和T_(?)三个菌株为寄主,从环境样品中分离的18个和6个噬菌体分离物杂交。而采用缺口翻译系统制备的7_(?)和7_(?)混合探针,或混合使用7_(?)和(?)探针,使得检测方法更为简便易行。通过Southern Blot技术和菌落杂交对菌DNA的分析,结果表明三个寄主菌株均不是所分离的噬菌体的溶原菌。最后,本文还就烈性噬菌体和温和噬菌体之间的同源性与分子诊断的可行性作了初步探讨。     

白喉毒素超滤浓缩后膜通透性恢复试验的研究

应用超滤浓缩技术对白喉毒素培养液进行澄清过滤和超滤浓缩,已经早已为生产厂家所使用.但是,超滤膜的通透性下降很快,使膜的使用期限大大缩短,生产成本较高.因此在试验过程中,注重摸索超滤过程的中间控制以及超滤结束后的清洗方法,特别是使用0.5 mol/LNaOH+200ppm次氯酸钠作为清洗剂,在超滤结束以后对滤膜进行彻底的恢复性清洗,可以使澄清和浓缩过滤速度分别达到平均77 L/M2·h和75 L/M2·h,回收率分别达到93.1%和92.8%,使滤膜的滤过性能(NWP)基本恢复到滤前水平.     

用裂解气相色谱分析法鉴别带有不同前噬菌体的溶原性金黄色葡萄球菌

α和β为两株温和性噬菌体,金黄色葡萄球菌1157为不带前噬菌体的非溶原性菌株,分别或同时经α、β溶原化后,得到溶原性菌株1157(α),1157(β)及1157(α、B),前两者分别带有前噬菌体α或β,后者带α和β,为双溶原性株,4株菌用居里点裂解器-岛津GC-R1A计算机气相色谱仪进行分析,以目视法及计算数据分析法均能较好地鉴别1157,1157(α),1157(β)和1157(α、β)各菌株。     

白喉毒素突变体CRM197的应用研究进展

CRM197(cross reacting material 197)是一种无毒的白喉毒素突变体,主要用作疫苗蛋白载体及药物透过血脑屏障的载体,其在抗肿瘤方面也有一定的应用。     

苏云金芽孢杆菌生产菌株溶原性噬菌体pep基因的克隆、表达及功能分析

溶原性噬菌体的随机爆发是微生物杀虫剂苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,B.t)发酵生产的首要危害.[目的]本文的目的就是通过研究B.t生产菌株溶原性噬菌体的遗传背景,以便从分子水平上控制其在生产中的随机爆发.[方法]通过对广东梅州某公司的生产菌株MZ1采用Mitomycin C进行诱导,提取噬菌体颗粒MZTP01的基因组DNA,克隆和表达该噬菌体的pep基因,并进行了功能分析.[结果]诱导获得的溶原性噬菌体MZTP01斑点清晰,直径约1mm,成斑时间12h;从噬菌体基因组DNA双酶切(Hind Ⅲ/EcoR Ⅰ)片段中回收长度为2362bp的D片段(Genbank登录号:AY639599),又从D片段中克隆了长度为1101bp、编码367aa、分子量为47kDa的Pep基因,表达载体M15(pQE30pep)在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)中表达获得了47kDDa的清晰表达带,在1h时开始产生蛋白并有逐步上升的趋势;Western blot也在47kDa处得到一条清晰的条带;可溶性分析表明PEP蛋白在重组菌株中是以不可溶的包含体形式存在的,该蛋白的产生明显地抑制了宿主的生长速度;噬菌体PEP氨基酸序列之间的同源性比较表明,噬菌体MZTP01 PEP蛋白与来自E.coli K12噬菌体的PEP蛋白的同源性程度最大.[结论]我们获得了一种新的噬菌体MZTP01,并首次报道了该噬菌体D片段的核苷酸序列及pep基因的功能,试验证明PEP表达蛋白能够水解酪蛋白,其活力相当于0.3mg/mL的胰蛋白酶.     

贡菜提取液的抗病原性真菌活性研究

用1：1的丙酮水对贡菜干品浸提,经减压回收丙酮,以乙酸乙酯萃取,再减压回收乙酸乙酯,得到贡菜提取液。以人体致病性和条件致病性真菌为指标菌,采用试管法对贡菜提取液进行体外抑制和杀灭试验,以了解贡菜提取液的抗真菌活性。试验结果表明,贡菜提取液对白色念珠菌、烟曲霉菌、新生隐球菌、石膏状小孢子菌、短帚霉菌和狗小孢子菌等均有不同程度的抑制和杀灭作用。表明贡菜提取液中存在有抗真菌有效成分,对病原性真菌有不同程度的抑制和杀灭活性。     

白喉毒素／IL—6的高效表达及细胞毒作用的研究

白喉毒素是由携带β噬菌体基因组的白喉杆菌产生的由５３５个氨基酸组成的单链外毒素,毒性极强,１￣２个分子即可灭活１个真核细胞,肿瘤细胞对它尤为敏感。在骨髓瘤、原发性肝癌等肿瘤细胞表面,ＩＬ－６受体可过度表达,利用受体与配体的特异性结合,可将细胞毒性药物定向导入肿瘤细胞。基于上述理论,用ＩＬ－６ｃＤＮＡ取代白喉毒素的受体结合区,构建了白喉毒素／ＩＬ－６融合蛋白表达载体ｐΔＤＴ／ＩＬ－６。ＩＰＴＧ诱导后     

葡激酶溶原转换性血清A型噬菌体

从金黄色葡萄球菌菌株120中分离列两株血清 A 型噬菌体,其中一株具有产生葡激酶的溶原性转换能力,过去未曾见过报道。     

重组白喉毒素表达质粒H21G-his序列分析及改造研究

以源自国外的重组白喉毒素表达质粒H21G-h is为模板,利用PCR技术,扩增H21G-h is的基因并测定核苷酸序列,确证重组白喉毒素表达质粒H21G-h is的突变位点;对表达载体多克隆位点上下游的功能序列进行测定,确定组氨酸标签位置;在基于对载体正确分析的基础上,改造质粒,除去组氨酸标签,表达天然蛋白;利用pET表达系统重新构建新的非融合表达载体,并对表达量进行比较,为该蛋白作为载体用于多糖结合疫苗奠定基础。