Hymenistatin-1及其类似物的免疫活性研究

目的 研究固相合成的Hymenistatin-1(以下简称HS-1,序列为cyclo-(-Pze-Pro- Tyr-Val-Pro-Leu-Ile-Ile)]及其四种statine类似物的免疫活性.方法 通过DNFB诱导小鼠迟发型超敏反应试验、体外淋巴细胞增殖试验和小鼠碳廓清试验,研究HS-1及其类似物对小鼠迟发型超敏反应、体外淋巴细胞增殖和巨噬细胞吞噬能力的影响.结果 HS-1及其四种类似物对淋巴细胞增殖都表现出抑制作用,且修饰后的HS-1类似物在低浓度时表现出比阳性对照和天然HS-1更强的免疫抑制作用;A3 HS1低浓度组(50 μg/ml)对淋巴细胞增殖的抑制作用最强,抑制率为28.4%.用statine修饰的HS-1类似物A2 HS1和A4 HS1能够抑制巨噬细胞的吞噬功能,但不能对小鼠迟发型超敏反应有很好的抑制作用.通过胸腺指数和肿胀度的比较可以得出,阳性对照在高浓度的时候对迟发型超敏反应有抑制作用,HS-1类似物的低浓度组比高浓度对小鼠迟发型超敏反应的抑制作用强.其中A1 HS1和A3 HS1的低浓度组已经表现出比天然HS-1组和阳性对照组强的免疫抑制活性.结论 HS-1类似物A2 HS1和A4 HS1对巨噬细胞吞噬能力的抑制作用和对淋巴细胞增殖的抑制作用比阳性对照组和天然HS-1组强;HS-1类似物A1 HS1和A3 HS1对小鼠迟发型超敏反应的抑制作用和对淋巴细胞增殖的抑制作用比阳性对照组和天然HS-1组强.由此可见,通过对天然HS-1进行statine修饰,能增强其免疫抑制作用.     

肌肉组织工程研究现状及对运动性肌肉损伤的作用

背景:高水平快节奏的体育运动比赛中容易造成肌肉运动损伤,肌肉组织工程为其修复带来希望.目的:综述肌肉组织工程研究的现状,为运动性肌肉损伤组织工程学研究提供理论基础.方法:以"tissue engineering,anterior cruciate ligament repair,biological material scaffold,cytokines,seed cells"为关键词,采用计算机检索Pubmed数据库中1994-01/2010-12的相关文章.纳入与运动性肌肉损伤及肌肉组织工程相关的文章;排除重复研究或Meta分析类文章.结果与结论:共纳入15篇文献,目前的研究重点包括肌肉组织工程重建、细胞外基质复合材料、肌肉组织工程种子细胞的来源、基质支架4个方面.目前的研究表明肌肉组织工程对运动性肌肉损伤的治疗有良好的应用前景.但在实际应用中,肌肉组织工程的种子细胞的选择、支架材料的构建、细胞外基质复合材料研究和组织的相容性等仍是肌肉组织工程学方面的难点问题.     

血清C超敏反应蛋白与2型糖尿病微量尿白蛋白的关系

目的探讨血清超敏C反应蛋白（hsCRP）与新诊断2型糖尿病微量尿白蛋白的关系。方法选取112例新诊断2型糖尿病患者,根据24h尿白蛋白（UAE）分为2组：正常白蛋白尿组（UAE〈30mg）（n=54）和微量白蛋白尿组（30〈UAE〈300mg）（n=58）。采用免疫透射比子浊法测定血清hsCRP,采用放射免疫法检测尿白蛋白量。结果微量白蛋白尿组的SBP、PBG、hsCRP以及UAE水平明显高于正常自蛋白尿组,2组间的差异均具有统计学意义（P均〈0．05）;而2组间其他临床指标的差异均无统计学意义（P均〉0．05）。Spearman相关性分析显示,hsCRP与UAE、SBP和BMI呈显著性相关（r=0．396,P=0．002;r=0．265,P=0．047;r=0．287,P=0．036）,而且经过校正性别、年龄、SPB、FBG、PBG以及SCr后,hsCRP仍与UAE呈显著相关（r=0．271,P=0．039）。结论血清hsCRP水平与新诊断2型糖尿病UAE相关,从而支持CRP作为一种炎症介质,可能参与糖尿病血管病变的发生与发展。     

脑力静胶囊的主要药效学研究

目的 :观察脑力静胶囊的主要药效学。方法 :采用镇静催眠 ,抗惊厥 ,自发活动和爬杆活动测定等方法。结果 :脑力静胶囊 (1 ,2 ,4g·kg- 1,ig ,qd× 7d)能延长戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间 ,对抗士的宁诱发的小鼠惊厥及抑制小鼠的自发活动 ,但对小鼠电休克惊厥发作及爬杆活动无明显影响。结论 :脑力静胶囊有一定的镇静催眠和抗惊厥作用。     

腺病毒介导的热休克蛋白70对脑缺血缺氧大鼠保护作用的研究

热休克蛋白(HSP)是生命体在高温、发热、缺血、缺氧、病毒感染以及炎症等不良环境因素作用下所产生的一组蛋白质,能保护机体或细胞不受或少受伤害,这一反应过程称为热休克反应[J].研究证明,采用基因工程技术诱导HSP70高效表达对心、肺、肠等器官的损伤有保护作用[2-4].本课题组前期成功构建了携带HSP70编码基因的重组腺病毒表达载体,并在体外研究中观察到其对神经细胞的缺血缺氧损伤具有保护作用[5].在此基础上,本研究中将重组腺病毒载体通过尾静脉注入脑缺血缺氧大鼠体内,观察重组腺病毒介导的外源性HSP70表达对脑缺血缺氧大鼠的保护效应,有望为脑缺血缺氧的防治提供可行性的基因治疗途径.     

缺氧对视网膜Mfiller细胞水通道蛋白4表达的影响

目的观察体外培养兔视网膜Mtiller细胞在缺氧条件下水通道蛋白4（AQP4）表达的变化。方法本实验以体外培养的兔视网膜Muller细胞为研究对象,选定不同缺氧时间体外培养MUller,并采用AO／EB染色检测MUller细胞的凋亡情况,根据细胞凋亡情况选定最适缺氧时间进行检测,利用免疫细胞化学染色、流式细胞术及RT-PCR的方法对实验组细胞AQP4的表达进行定性及定量测定。结果Muller细胞缺氧24h为缺氧最大耐受时间。缺氧组Mtiller细胞AQP4表达明显低于正常对照组;流式细胞仪检测中波峰位置明显提前,AQP4表达减少;RT-PCR半定量分析显示：AQP4mRNA的表达比对照组明显降低（P〈0．01）。结论缺氧使体外培养兔视网膜Mailer细胞AQP4表达下调,缺氧可能影响细胞代谢变化,引起K＋外流。     

泥鳅粉对小鼠耐缺氧作用的研究

目的研究泥鳅粉对小鼠耐缺氧作用的影响。方法连续灌胃小鼠不同剂量的泥鳅粉15d,末次给药后1h, 进行密闭缺氧实验、急性脑缺血性缺氧实验和亚硝酸钠中毒缺氧实验,以存活时间、血红蛋白含量和红细胞数作为指标, 观察泥鳅粉对小鼠耐缺氧作用的影响。结果泥鳅粉可延长小鼠在不同缺氧条件下的存活时间,也可提高小鼠血红蛋白的含量和红细胞数量。结论泥鳅粉具有提高小鼠耐缺氧能力的作用。     

S-100B蛋白测定在早产儿缺氧缺血性脑病早期诊断的意义

目的 通过测定早产儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿血清S-100B蛋白含量的变化,研究其在早产儿HIE早期诊断及预后的意义.方法 选择临床诊断为HIE的早产儿78例为观察组,其他早产儿40例为对照组,采用酶联免疫吸附试验、双抗体夹心法检测二组血清S-100B蛋白含量,进行比较研究.结果 观察组含量明显高于时照组,差异有显著性,血清S-100B蛋白含量与早产儿脑损伤程度呈正相关.结论 早期检测早产儿血清S-100B蛋白含量对早产儿HIE早期诊断有重要价值,优于脑CT检查.     

小鼠Foxp3融合蛋白的原核表达及纯化

目的克隆小鼠Foxp3(MFoxp3)基因,构建含该基因的原核表达载体,并表达、纯化出小鼠的Foxp3融合蛋白。方法RT-PCR方法从小鼠淋巴细胞扩增出小鼠Foxp3基因,连入T Easy Vector进行测序,然后将序列正确的小鼠Foxp3基因用酶切的方法从T Easy vector切下,并将其连接到用相同酶切,含有硫氧还蛋白(含6个组氨酸“标签”)的pET 32a( )原核表达载体中构建pET 32a( )-MFoxp3表达载体。用IPTG诱导转化pET 32a( )-MFoxp3表达载体的大肠杆菌BL21(DE3),并以镍螯合层析法纯化MFoxp3融合蛋白。结果经RT-PCR成功地克隆了1,290 bp的小鼠Foxp3基因,测序正确后转化大肠杆菌原核表达载体pET 32a( ),重组质粒在BL21(DE3)中成功表达出分子质量约为63 kD的融合蛋白,运用Ni-NTA方法纯化出目的蛋白,纯化后的蛋白纯度达80%,并用Western Blotting检测蛋白的灵敏度和特异性。结论构建了小鼠Foxp3的融合蛋白原核表达载体并成功表达与纯化出小鼠Foxp3的融合蛋白。     

东茛菪内酯对小鼠耐缺氧作用的研究

目的:研究东茛菪内酯在小鼠常压条件下及脑缺血和心肌耗氧量增加的情况下耐缺氧的作用及其机制。方法:①常压耐缺氧实验法:小鼠(n=40)随机分为4组,分别腹腔注射东茛菪内酯(0.01mg/g,0.02mg/g),15min后,将小鼠分别放入250mL的磨口广口瓶内密封,以最后一次呼吸为指标,观察小鼠存活时间。②脑缺血实验法:小鼠(n=30)随机分为3组,分别腹腔注射东茛菪内酯(0.01mg/g,0.02mg/g),15min后,不需麻醉,用剪刀在耳下部快速断头,记录喘气时间。③异丙肾上腺素增加紧心肌耗氧量实验法:小鼠(n=30)随机分为3组,对照组按0.03mL/g剂量给小鼠皮下注射溶剂对照溶液,5min后按0.02mL/g剂量给小鼠腹腔注射溶剂对照溶液;模型组按0.015mg/g的剂量给小鼠皮下注射异丙肾上腺素,5min后按0.02mL/g剂量给小鼠腹腔注射溶剂对照溶液。给药组按0.015mg/g剂量给小鼠皮下注射异丙肾上腺素,5min后腹腔注射东茛菪内酯(0.01mg/g)。给药后10min,分别放入广口瓶内密封,记录小鼠存活时间。结果:东茛菪内酯(0.01mg/g,0.02mg/g)能非常显著延长常压耐缺氧条件下小鼠的存活时间犤(66.4±8.9)和(90.3±7.4)min犦,与对照组比较,差异均有显著性意义(t=3.356,3.147;P<0.01);东茛菪内酯(0.01mg/g,0.02mg/g)能显著延长断头小鼠的呼吸时间犤(21.2±0.8)和(23.5     

蛋白C、蛋白S的研究与应用

蛋白C(protein C,PC)抗凝系统是机体内重要的抗凝系统,主要由PC、蛋白S(protein S,PS)、蛋白C抑制物(protein C inhibitor,PCI)和血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)组成[1],在血液凝固和纤溶过程起着重要的平衡作用.PC是PC系统最主要的组成成分,是体内重要的抗凝因子,其抗凝活性占全血的20%-30%,体外只要达到0.2μg/ml即可引起明显的抗凝效应,直接影响凝血与抗凝血机制的平衡[1,2],而PC的生理功能又与PS密切相关,故我们综合有关资料对PC抗凝系统中的PC、PS做一介绍.     

心肺复苏大鼠脑红蛋白缺氧诱导因子-1α的表达变化

目的 研究大鼠心肺复苏后不同时间点脑红蛋白(neuroglobin,Ngb)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在mRNA水平表达中的变化规律,探讨Ngb在心脏骤停后脑缺血缺氧损伤病理变化中的作用机制及其诱导表达途径.方法 SD雄性大鼠40只随机分为五组(n=8):假手术组及复苏后1 h、6 h、12 h、24 h组.窒息法致大鼠心脏骤停后予以心肺复苏,复苏后不同时间点处死大鼠,应用RT-PCR法观察脑组织Ngb mRNA、HIF-1α mRNA表达情况.结果 复苏组脑组织Ngb mRNA表达高于假手术组(P<0.05),并于损伤后12 h达高峰;与假手术组比较,复苏组脑组织HIF-1α mRNA表达增加(P<0.05),且于复苏后1 h、6 h、12 h、24 h呈持续上升趋势.结论 大鼠心脏骤停后早期脑组织Ngb mRNA、HIF-1α mRNA表达增加,且呈时相性改变.     

人重组促红细胞生成素增强耐缺氧作用的实验研究

目的观察人重组促红细胞生成素(EPO)对小鼠缺氧耐受力的影响。方法小鼠随机分为EPO组和对照组,经皮下注射不同剂量的EPO和0.9%氯化钠注射溶液,1次/d,连续1周。检测小鼠血红蛋白、红细胞比容改变,测定常压耐氧实验、亚硝酸中毒存活试验以及急性脑缺血性缺氧试验等指标。结果EPO能明显增加小鼠血液内血红蛋白含量和红细胞比容(与对照组相比,P<0.01),缺氧存活时间显著延长(与对照组相比,P<0.01)。结论EPO能明显增强机体的耐缺氧能力。     

干扰素同源序列结合蛋白及其与急慢性白血病的关系

干扰素同源序列结合蛋白(ICSBP)是干扰素调节因子家族成员之一。本文对ICSBP的命名、结构与功能区,ICSBP在正常细胞的表达与调节,以及ICSBP与血液病的关系进行综述。     

苯并[a]芘神经毒作用及对小鼠脑组织热应激蛋白70,90β水平的影响

背景苯并[a]芘代表的多环芳烃是一种广泛存在于生产和生活环境中的化学污染物,国外发现苯并[a]芘在一定条件下具有体外神经毒性.目的研究苯并[a]芘对小鼠的神经毒性及对脑组织中两种热应激蛋白70,90β表达的影响.设计以实验动物为研究对象的随机对照实验.单位一所大学的热生物与分子毒理实验室及一所大学的预防医学系.材料实验在华中科技大学同济医学院热生物与分子毒理实验室进行.将50只昆明种小鼠随机分为5组,10只/组,染毒组分为高、中、低3个剂量组,设溶剂对照及空白对照组.染毒组用苯并[a]芘植物油溶剂腹腔注射,高、中、低剂量组每次分别注射7.8,3.2和1.3 mg/kg,4次/周.溶剂对照组用植物油溶剂作平行处理,空白对照组不做处理.方法观察动物一般情况及神经系统表现,8周后取各组小鼠全脑组织,计算脑组织脏器系数,Western blot法检测两种热应激蛋白70,90β水平.主要观察指标苯并[a]芘染毒对小鼠脑组织热应激蛋白70及90β表达的影响.结果①中、高剂量苯并[a]芘染毒组小鼠脑组织质量明显低于空白对照组(P＜0.01,P＜0.001),高剂量BaP染毒组小鼠脑组织脏器系数明显低于其他组(P＜0.001).②热应激蛋白70表达改变以低剂量苯并[a]芘染毒组相对表达值明显增高为特征;热应激蛋白90β表达改变为中、高剂量苯并[a]芘染毒组相对表达值升高.结论苯并[a]芘具有一定的神经毒性.随着染毒剂量增加,热应激蛋白90β表达水平增高,一定条件下可作为毒理学损害标志.     

新生儿缺氧缺血性脑病血浆蛋白C和抗凝血酶活性的检测

目的:探讨新生儿缺氧缺血性脑痛血浆蛋白C、抗凝血酶活性的改变.方法:采用发色底物法测定新生儿缺氧缺血性脑病患儿106例(58例未合并感染,如例合并感染)和健康新生儿30例血浆蛋白C和抗凝血酶的活性.结果:缺氧缺血性脑病各组与正常对照组相比蛋白C、抗凝血酶活性均有不同程度下降,差异有统计学意义.中、重度新生儿缺氧缺血性脑病合并感染较非感染组蛋白C、抗凝血酶活性下降更为明显,差异有统计学意义.结论:新生儿缺氧缺血性脑病患儿血浆蛋白C、抗凝血酶活性检测是反映病情严重度的指标.     

腹内高压对肝硬化小鼠肺水通道蛋白1及水通道蛋白5表达的影响

目的 探讨腹水引起的腹内高压对肝硬化小鼠肺组织水通道蛋白1(AQP1)和水通道蛋白5(AQPS)表达的影响.方法 雄性美国癌症研究所(Institudo of Cancer Reseach.ICR)小鼠50只,随机取10只作正常对照组(腹压0 cm H<,2>O,1 cm H<,2>O=0.098 kPa),其余40只...     

新生儿缺氧缺血性脑病S-100蛋白监测研究--附76例报告

目的:探讨缺氧缺血性脑病(hypoxicischemiceucephalopathy,HIE)患儿血清S-100蛋白含量的动态变化及其临床意义。方法:采用酶联免疫吸附试验双抗体夹心法测定76例HIE组患儿(出生时有脑损伤症状56例、无症状20例)出生时、出生后48小时、出生后7日的血清S-100水平,并与正常对照组21名健康新生儿进行比较分析。结果:HIE组各时间段血清S-100蛋白水平均高于正常对照组(P<0.01),HIE有症状组中重度者血清S-100蛋白水平较轻、中度者高。结论:血清S-100蛋白可作为早期诊断HIE的主要指标及评估HIE病情的客观依据。     

腺病毒介导的热休克蛋白70在神经元和胶质细胞中的抗缺氧研究

目的 探讨重组腺病毒介导的热休克蛋白70(HSP70)表达对神经元和胶质细胞缺氧/再复氧损伤的保护作用.方法 制备携带全长HSP70基因的重组腺病毒vAd-HSP70.感染体外培养的神经元和胶质细胞,检测靶细胞中外源性HSP70的表达.感染vAd-HSP70 24、48、72 h组和感染vAd-GFP对照组的细胞经缺氧/再复氧处理后,分别测定细胞活性、细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性及线粒体和胞质内细胞色素C含量.结果 感染vAd-HSP70的神经细胞可检测到外源性HSP70基因表达.经缺氧/再复氧处理,感染vAd-HSP70组细胞活性较感染vAd-GFP对照组明显增强(P均＜0.05);感染vAd-HSP70 24、48、72 h组细胞培养上清液中LDH活性[(1 480±121)、(1 023士106)、(1 132±197)U/L]均明显低于感染vAd-GFP对照组[(1 976±190)U/L],线粒体中细胞色素C含量(0.986±0.012、1.028±0.007、1.014±0.008)均明显高于感染vAd-GFP对照组(0.970±0.003),而胞质中的细胞色素C含量(0.987±0.008、0.960±0.005、0.964±0.003)则低于感染vAd-GFP对照组(1.011±0.005,P＜0.05或P＜0.01),其中以感染48 h最为理想(P均＜0.01).结论 腺病毒介导的外源性HSP70表达可保护神经元和胶质细胞抵抗缺氧/再复氧损伤,具有明确的细胞保护作用.     

缺氧对视网膜Müller细胞水通道蛋白4表达的影响

目的 观察体外培养兔视网膜Müller细胞在缺氧条件下水通道蛋白4(AQP4)表达的变化.方法 本实验以体外培养的兔视网膜Müller细胞为研究对象,选定不同缺氧时间体外培养Müller,并采用AO/EB染色检测Müller细胞的凋亡情况,根据细胞凋亡情况选定最适缺氧时间进行检测,利用免疫细胞化学染色、流式细胞术及RT-PCR的方法 对实验组细胞AQP4的表达进行定性及定量测定.结果 Müller细胞缺氧24 h为缺氧最大耐受时间.缺氧组Müller细胞AQP4表达明显低于正常对照组;流式细胞仪检测中波峰位置明显提前,AQP4表达减少;RT-PCR半定量分析显示:AQP4 mRNA的表达比对照组明显降低(P<0.01).结论 缺氧使体外培养兔视网膜Müller细胞AQP4表达下调,缺氧可能影响细胞代谢变化,引起K+外流.