酶联免疫法快速测定原料乳中αs-酪蛋白质量浓度

用牛αs-酪蛋白纯品免疫新西兰白兔，制得兔抗牛αs-酪蛋白的多克隆抗体。以αs-酪蛋白包被抗原，自制抗体为一抗，辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为二抗，邻苯二胺（OPD）为底物，建立了牛乳中αs-酪蛋白的间接ELISA检测方法。检测的线性范围是25～1200ng／mL，相关系数是0．9825，回收率在91．97％‖115．61％之间，证明可以用酶联免疫法简单快速地测定牛乳中的αs-酪蛋白，因为该蛋白在酪蛋白中质量浓度稳定，所以可以计算出牛乳中酪蛋白的质量浓度。显然该方法可以用于牛乳掺杂使假的鉴别和原料奶酪蛋白质量浓度是否合格的快速检测。     

ELISA法快速检测婴儿配方奶粉中酪蛋白含量

目的建立快速检测奶粉中酪蛋白含量的方法。方法通过夹心酶联免疫吸附法(ELISA)定量测定婴儿配方奶粉中的酪蛋白含量。按照试剂盒内附的操作说明,制作标准曲线,计算3种奶粉样品所对应的酪蛋白含量,同时测量另外10种奶粉样品的酪蛋白含量。结果酪蛋白在0.5~13.5μg/g内具有良好的线性关系,相关系数(R~)大于0.99。3种奶粉样品实际测得酪蛋白含量与标签上的含量一致性在99%以上。10种奶粉样品酪蛋白含量在4.17~6.65 g/100 g范围内。结论该方法专一性强,灵敏度高,简便、快速、准确,可用于婴儿配方奶粉中的酪蛋白含量的测定。     

酶联免疫法测定牛初乳中乳铁蛋白含量

应用酶联免疫法制定牛初乳中乳铁蛋白的含量,最小检出量为０．５ｎｇ／ｍｌＬＦ,浅性范围为０．８ｎｇ／ｍｌ至１００ｎｇ／ｍｌ。标准曲线性方程为Ｙ＝－２２．７２Ｘ＋２１．３８,相关系数γ为０．９９６。结果较为理想,这种对ＬＦ的检测方法在国内未见报道。     

酶联免疫吸附法快速检测婴儿配方奶粉中乳铁蛋白含量

目的采用乳铁蛋白快速检测试剂盒,通过酶联免疫吸附法定量测定婴儿配方奶粉中的乳铁蛋白含量,并验证该方法的准确性、稳定性和可靠性。方法按照试剂盒操作说明制作标准曲线,选取乳铁蛋白阴性样品进行添加回收实验,验证方法的准确性;选取一个乳铁蛋白阳性样品,重复检测6次,计算结果偏差,验证方法的稳定性;选取12个乳铁蛋白阳性样品,分别采用试剂盒方法和高效液相色谱法进行检测,对比2种方法的检测结果,验证试剂盒方法的可靠性。结果试剂盒检出限为2 mg/100 g;试剂盒检测方法回收率在101.6%~109%;相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为5.34%;试剂盒方法检测结果与标签值的偏差为-6.90%~6.45%,和高效液相色谱法检测结果的偏差为-6.45%~6.9%,说明试剂盒方法具有很好的可靠性。结论乳铁蛋白试剂盒检测方法灵敏度高、操作简单,能快速准确地测定婴儿配方奶粉中的乳铁蛋白含量。     

双抗夹心酶联免疫吸附法检测沙门氏菌

沙门氏菌是自然界中普遍存在的一种食源性致病菌,在中国的食物中毒中沙门氏菌引起的病例占第一位。本研究以福尔马林灭活的鼠伤寒沙门氏菌免疫雌性日本大耳兔,制备抗沙门氏菌多克隆抗体。以抗沙门氏菌多克隆抗体作为捕获抗体,以抗沙门氏菌单克隆抗体C1359作为检测抗体,建立快速检测沙门氏菌双抗夹心ELISA方法。结果表明:该方法可以检测A、B、C、D、E等五种典型的沙门氏菌,对沙门氏菌纯培养液的最低检测量为1×104CFU/mL,与其他杂菌不存在交叉反应,具有较好的灵敏性和特异性。      

β-Casomorphin-7的酶联免疫吸附分析(ELISA)方法的建立

β－酪啡肽－7（β－Casomorphin-7)是一个有代表性的乳源外啡肽，有调节动物消化道运动和采食、内分泌、免疫等多种生物学功能。本研究以β－Casomorphin-7与人血清白蛋白（HSA）经戊二醛交联的复合物作为包被抗原；一抗为鸡抗β－Casomorphin-7与牛血清白蛋白（BSA）交联复合物的抗血清；酶标二抗为兔抗鸡IgG经戊二醛与辣根过氧化物酶（HRP）交换的复合物。包被抗原和一抗的稀释度经方阵稀释实验确定。本实验所建立的竞争ELISA方法的孔间差异为3．3％，板间差异为8．6％，检测灵敏度20ng/ml，检测范围20－320ng/ml，在实验浓度范围内。β－Casomorphin-7的抗血清与β－内啡肽、脑啡肽、强啡肽、精氨酸降压素和神经降压素等活性肽未显示免疫交叉反应。表明所建立的方法有较高的特异性，可用于酪啡肽的体内功能研究。     

沙丁胺醇直接酶联免疫快速检测的方法

沙丁胺醇与瘦肉精同属于禁用的饲料添加剂,可以在动物体内大量残留,人体过量摄入会引起中毒反应。为了建立沙丁胺醇的快速检测方法,从硫酸沙丁胺醇出发制备了半抗原沙丁胺醇丁二酸衍生物,用混合酸酐法将半抗原与载体蛋白-钥孔嘁血蓝蛋白(KLH)偶联作为免疫抗原制备了沙丁胺醇的多克隆抗体,建立了沙丁胺醇直接竞争酶联免疫检测方法,该方法抗体最佳包被抗体量为1μg/孔,酶标抗原稀释比例为1∶16000,掩蔽剂采用脱脂奶粉。所建立的方法具有很高的灵敏度和特异性I,C50为0.90ng/mLI,C15达到了0.05ng/mL,远低于国家残留限量标准,与沙丁胺醇的结构类似物基本没有交叉反应。     

两种牛乳κ-酪蛋白的间接ELISA定量检测研究

分别以兔血清IgG与鸡卵黄抗体(IgY)为检测抗体,建立了两种牛乳κ-酪蛋白的间接ELISA定量方法。牛乳κ-酪蛋白分别免疫新西兰大白兔和临产母鸡,经亲和层析分离纯化后得到anti-κ-CN-IgG与anti-κ-CN-IgY两种抗体。两种抗体均与β-酪蛋白、α-乳白蛋白和乳清粉存在一定交叉反应,抗体与相应抗原进行免疫吸收后得到高特异性IgG与IgY。用吸收后的anti-κ-CN-IgG建立的间接ELISA法,当标准κ-CN质量浓度在0.098~3.125 mg/L时,A450 nm值与κ-CN的质量浓度具有线性关系,变异系数小于1%,回收率在99.10%~101.1%之间;用吸收后的anti-κ-CN-IgY检测κ-CN,在0.098~6.25 mg/L时,A450 nm值与κ-CN的质量浓度成良好的线性关系,变异系数小于2%,回收率在98%~100.8%之间。当三聚氰胺掺假量在0~20%时,两种抗体均能通过κ-CN的定量检测而实现乳品的掺假检验。     

小麦球蛋白单克隆和多克隆抗体制备及建立酶联免疫吸附法快速检测技术

目的建立小麦球蛋白的ELISA检测技术,用于蛋白质掺假以及过敏原成分的快速检测。方法从麦胚粉中提取球蛋白,抗原免疫Balb/c小鼠进行4次免疫后,通过脾脏细胞杂交瘤技术及间接ELISA筛选制备单克隆抗体,同时制备兔抗小麦球蛋白的多克隆抗体。通过棋盘滴定法,初步确定单克隆抗体和多克隆抗体的最佳工作浓度,建立双抗夹心ELISA。结果通过免疫和杂交瘤技术获得了抗小麦球蛋白的单克隆抗体,纯化后抗体的效价均达到1:107,通过免疫兔制备的多克隆抗体经纯化后效价在1:2.4×105左右,所建立的双抗体夹心ELISA方法最低检测限为10 ng/m L,与其他物种的蛋白不发生交叉反应。结论本文建立的双抗体夹心ELISA方法具有良好的特异性和灵敏度,为建立乳品中小麦成分掺假及过敏原成分快速检测提供理论依据。     

牛乳铁蛋白的酶联免疫吸附分析(ELISA)方法的建立

用牛乳铁蛋白(Bovine Laetoferrin，BLf)、纯品免疫新西兰白兔制得兔抗BLf的多克隆抗体，琼扩效价最高为l：64。经ELlSA方法检测，该抗体与牛乳中的主要蛋白质：α—乳清蛋白、β—乳球蛋白、血清白蛋白以及酪蛋白之间不存在免疫交叉性，说明抗体特异性良好。以BLf纯品为包被抗原，自制抗体为一抗，辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔IgG为二抗，邻苯二胺(OPD)为底物，建立了BLf的竞争抑制性ELISA方法。包被抗原及抗体的浓度均由方阵稀释实验确定。所建立的ELlSA方法孔间误差1．6％，板间误差4．3％，灵敏度25μg／L，检测范围25～800μg／L。标缝曲线线性方程（Logit）Y=-1.488IgC 3.8116，相关系数R=0.990。     

双抗夹心酶联免疫吸附法检测荞麦过敏蛋白

提取制备荞麦过敏原蛋白(TBt)并免疫动物,分别制备鼠多克隆抗体和兔多克隆抗体,建立了双抗夹心酶联免疫吸附检测法(ELISA)用于检测食品中的荞麦过敏原。SDS-PAGE结果表明,纯化的TBt纯度达到98%以上,鼠抗血清效价为1∶6400。建立的双抗夹心ELISA法对荞麦过敏原蛋白的最低检测限为0.16μg/m L,线性范围为0.16~16μg/m L。并采用建立的双抗夹心ELISA法对市场出售的15种食品中荞麦过敏成分进行了检测。结果显示,该方法对绝大多数食品中的荞麦过敏原都有很好的特异性及灵敏性,说明该法可用于食物过敏原的诊断及食品中微量荞麦过敏成分的检测。     

双抗夹心酶联免疫吸附法检测荞麦过敏蛋白

提取制备荞麦过敏原蛋白（TBt）并免疫动物,分别制备鼠多克隆抗体和兔多克隆抗体,建立了双抗夹心酶联免疫吸附检测法（ELISA）用于检测食品中的荞麦过敏原。SDS-PAGE结果表明,纯化的TBt纯度达到98%以上,鼠抗血清效价为1∶6400。建立的双抗夹心ELISA法对荞麦过敏原蛋白的最低检测限为0.16μg/m L,线性范围为0.16¹6μg/m L。并采用建立的双抗夹心ELISA法对市场出售的15种食品中荞麦过敏成分进行了检测。结果显示,该方法对绝大多数食品中的荞麦过敏原都有很好的特异性及灵敏性,说明该法可用于食物过敏原的诊断及食品中微量荞麦过敏成分的检测。      

牛乳β-酪蛋白检测的间接ELISA方法

将从干酪素中提取的牛β-酪蛋白对新西兰白兔进行多次皮下免疫注射.采集血清并用硫酸铵沉淀法进行抗体纯化,以制备兔抗牛β-酪蛋白的多克隆抗体.最后将纯化的抗体用于间接ELISA法检测牛乳β-酪蛋白的含量.     

测定食品中呋喃它酮代谢物3-氨基-5-吗啉甲基-2-恶唑烷酮的酶联免疫吸附法

目的建立以多克隆抗体为基础的测定食品中呋喃它酮代谢物3-氨基-5-吗啉甲基-2-恶唑烷酮(AMOZ)的间接竞争酶联免疫吸附分析法(ELISA)。方法以4-甲酰基苯氧基乙酸(4-FPA)为修饰剂,合成AMOZ半抗原衍生物,并使其分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)交联制备得到免疫原和包被抗原,经免疫动物(兔),获得抗NPAMOZ(AMOZ与衍生化试剂2-硝基苯甲醛所形成的结合物)的多克隆抗体。用酶联免疫分析法测定AMOZ(以NPAMOZ形式)。结果在包被抗原为2.5ng/mL,抗体为1:300000稀释,酶标二抗为1:10000稀释的优化条件下,ELISA测定AMOZ(以NPAMOZ形式)的IC50值(标准曲线中吸光度抑制至最大吸光度值50%时所对应的待测物浓度)为1.86ng/mL。抗体与呋喃它酮的交叉反应率较高(70.7%),与AMOZ的交叉反应率仅为0.32%,与其余三种硝基呋喃抗生素及它们的代谢物以及其它八种药物的交叉反应率很小(0.01%),表明抗体的特异性高。四种市售的肉样(鱼肉、虾肉、鸡肉、猪肝)用作加标实验,加标浓度分别为0.5、1.0和5.0ng/g,加标样品经衍生化处理后用ELISA测定,回收率为75.6%~112.2%,批间相对标准偏差(RSD)为8.3%~17.5%。结论本法具有高灵敏性和高特特异性,能用于动物产品中AMOZ的检测。     

直接竞争酶联免疫吸附法检测虾过敏蛋白

目的:建立酶标抗原的直接竞争酶联免疫吸附法(dcELISA)检测食品中虾过敏蛋白,为食品过敏诊断试剂的开发和应用提供理论基础。方法:提取虾主要过敏蛋白,免疫小鼠制备抗虾过敏蛋白多克隆抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记抗原,建立酶标抗原的dcELISA检测虾过敏蛋白。结果:所建立的dcELISA法最低检测限为3.94ng/mL,标准曲线在0.12～128.86ng/mL范围内线性良好,批内和批间变异系数分别为6.16%和2.73%,回收率为82%～98%。结论:该方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性,为进一步研制检测虾过敏蛋白的ELISA试剂盒提供有效的方法。      

直接竞争酶联免疫吸附法检测虾过敏蛋白

目的:建立酶标抗原的直接竞争酶联免疫吸附法(dcELISA)检测食品中虾过敏蛋白,为食品过敏诊断试剂的开发和应用提供理论基础。方法:提取虾主要过敏蛋白,免疫小鼠制备抗虾过敏蛋白多克隆抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记抗原,建立酶标抗原的dcELISA检测虾过敏蛋白。结果:所建立的dcELISA法最低检测限为3.94ng/mL,标准曲线在0.12～128.86ng/mL范围内线性良好,批内和批间变异系数分别为6.16%和2.73%,回收率为82%～98%。结论:该方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性,为进一步研制检测虾过敏蛋白的ELISA试剂盒提供有效的方法。     

酶联免疫法检测食品中乳酸链球菌素

建立了酶联免疫吸附法来检测乳制品、肉制品和含乳饮料中的乳酸链球菌素含量。在抗乳酸链球菌素多克隆抗体的基础上,建立间接竞争酶联免疫吸附法。所建立的间接竞争ELISA方法的灵敏度为0.1μg/mL,标准曲线范围为0.1～62.5μg/mL,乳制品的检测限为1.0μg/mL,肉制品的检测限为0.5μg/g,样本的添加回收率范围在80%～120%之间,变异系数<20%。所建立的间接竞争ELISA方法及制备的相关试剂盒具备准确、快速、简便的优点,能够满足乳制品、肉制品和含乳饮料中乳酸链球菌素含量的检测要求。     

酪蛋白和乳球蛋白的抗体及酶标物制备研究

选用牛乳中的β-酪蛋白(β-CN)和β-乳球蛋白(β-Lg)为抗原对鸡体免疫,从鸡卵黄中用水稀释法及亲和色谱(HiTrapTM IgY Purification HP)纯化特异性鸡卵黄抗体(IgY)。PAGE电泳分析IgY纯度高达90%,ELISA效价为1:4096。用过碘酸钠氧化法进行抗原的过氧化物酶(HRP)标记,HRP与β-CN和β-Lg的分子个数比分别为1:1和1.5:1的标记效果最好,β-CN-HRP和β-Lg-HRP的效价高达1:640,其ELISA工作浓度分别为1:80和1:40。特异性IgY和酶标抗原为特异检测牛乳蛋白的酶联免疫吸附(ELISA)分析提供必要条件。     

食品中酪蛋白过敏原检测方法的比较

目的 比较市场上销售的三种检测牛奶中酪蛋白ELISA试剂盒效果。方法 以脱脂奶粉、酪蛋白做作阳性添加成分, 对三个品牌的ELISA试剂盒从回收率、精密度、特异性等方面进行比较。结果 ELISA试剂盒可以对多种食品进行酪蛋白含量检测, 回收率、精密度等各项检测性能指标均可满足相关检测低限要求。结论 ELISA检测试剂盒无需大型分析仪器、操作简便快捷、适用于大量样品快速初筛和各种基层实验室食品品质监控。     

酶联免疫法快速检测保健食品中吲哚美辛和阿西美辛

针对保健食品中吲哚美辛和阿西美辛的非法添加问题,以吲哚美辛和阿西美辛分别作为免疫半抗原和包被半抗原,通过活泼酯法与载体蛋白偶联制备完全抗原,免疫动物筛选获得了可同时识别吲哚美辛和阿西美辛的兔多克隆抗体,并建立了抗风湿类保健食品中吲哚美辛和阿西美辛同时检测的间接竞争酶联免疫分析方法。方法对吲哚美辛的检出限为0.3 ng/mL,半抑制质量浓度(IC₅₀)为5.6 ng/mL,线性范围为0.9～32.9 ng/mL;对阿西美辛的检出限为1.1 ng/mL,IC₅₀为7.4 ng/mL,线性范围为2.2～24.3 ng/mL;与多种非甾体抗炎药无交叉反应。片剂、硬胶囊和软胶囊3种剂型的抗风湿类保健食品经甲醇超声提取,通过标准稀释液稀释消除基质效应,吲哚美辛和阿西美辛的添加回收率为80.0%～119.7%,相对标准偏差低于15%;检测结果与液相色谱-串联质谱法检测结果的线性相关系数均大于0.99,结果一致性良好,可用于保健食品中吲哚美辛和阿西美辛的快速筛查。