益肾活血清利方对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的防治作用

目的探讨依据益肾活血清利法组方对进展性肾间质纤维化的防治作用。方法制备单侧输尿管梗阻大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、益肾活血清利方低剂量组、益肾活血清利方高剂量组、苯那普利组。观察用药21d对大鼠血肌酐、尿素氮,大鼠肾间质病理变化及大鼠肾组织羟脯氨酸含量的影响。结果用药组较模型组对血肌酐、尿素氮,大鼠肾间质病理变化及大鼠肾组织羟脯氨酸含量的作用均有显著差异,其中中药高剂量组优于苯那普利组。结论益肾活血清利方对肾间质纤维化具有良好的防治作用。     

清化固肾排毒方对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的保护作用及机制

目的:观察清化固肾排毒方对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的保护作用及机制。方法:108只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组、中药高剂量组、中剂量组、低剂量组、洛丁新组,给予相应药物治疗,各组分别于建模后第7、14、21天处死,留取血清测Scr、BUN,留取梗阻侧肾组织行HE和Masson染色,光镜观察各组大鼠肾组织病理变化。免疫组化检测肾组织TGF-β_1、Smad2/3、Smad7的表达。结果:随着输尿管梗阻时间延长,肾小管间质纤维化程度逐渐加重。免疫组化结果显示:与假手术组相比,各时相点UUO组TGF-β1、Smad2/3表达明显上升,Smad7表达明显下降(P均<0.05);药物干预后,与UUO组相比,中药治疗组和洛丁新组TGF-β_1、Smad2/3表达下降,Smad7表达上升(P均<0.05);中药各剂量组与洛丁新组之间比较无统计学差异。结论:清化固肾排毒方可能通过下调Smad2/3及上调Smad7来抑制TGF-β_1/Smads信号转导通路,发挥改善肾间质纤维化的作用。     

莪术对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的探讨中药莪术对大鼠单侧输尿管梗阻动物模型(UUO)的影响及其可能机制。方法利用单侧输尿管梗阻的方法(UUO)建立大鼠肾间质纤维化的动物模型,并用中药莪术对其治疗,设为中药治疗组,以氯沙坦为西药对照组,采用免疫组化和原位杂交方法观察细胞外基质IV型胶元、α-SMA和TGF-β、NF-Kb、PAI-1的表达。应用医学病理图像分析系统对阳性面积进行统计学分析。结果动物实验莪术治疗组与模型组比较,免疫组化、原位杂交各检测指标统计学上有显著差异(P<0.05);莪术组TGF-β、NF-Kb、α-SMA、COL-Ⅳ、PAI-1mRNA表达明显低于模型组,各项检测结果也有显著差异(P<0.05)。莪术组肾间质原位杂交检测阳性面积表达明显低于模型组,有显著差异。结论莪术可能通过抑制与纤维化关系最密切的细胞因子如TGFβ1,核因子NF-Kb来抑制成纤维细胞活性,阻止MyoFb的出现,以及通过下调PAI-1来调节纤溶系统平衡,抑制细胞外基质合成,促进其降解等机制延缓肾间质纤维化。     

补阳还五汤对肾间质纤维化大鼠模型胶原纤维和TGF-β1的作用

目的:观察补阳还五汤对单侧输尿管结扎肾间质纤维化大鼠模型胶原纤维和TGF-β1的作用。方法:将SD大鼠随机分为假手术对照组和单侧输尿管结扎造模组(UUO),造模大鼠再被随机分为模型组、补阳还五汤治疗组(12g/kg)和依那普利组(10mg/kg)。大鼠分别在第7、14、28天进行肾功能、Masson染色和免疫组化检测。结果:与假手术组相比,模型组大鼠肾功能显著下降;依那普利和补阳还五汤干预后,肾功能显著提高。光镜显示模型组大鼠出现显著间质纤维化,依那普利和补阳还五汤干预显著减轻了肾小管损害。各个时间点,模型组肾间质损伤指数、胶原纤维和TGF-β1的表达与假手术组相比,显著升高。通过依那普利和补阳还五汤干预在第7天时,显著降低肾间质损伤指数、胶原纤维和TGF-β1的表达(P<0.05);用药第14、28天后,可进一步降低肾间质损伤指数、胶原纤维和TGF-β1的表达(P<0.01)。结论:补阳还五汤治疗后,可改善单侧输尿管结扎大鼠肾功能和肾小管间质纤维化,降低胶原纤维和TGF-β1的表达,对拮抗肾间质纤维化有一定的作用。     

复方金钱草颗粒对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的:探讨复方金钱草颗粒对单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾间质纤维化的影响。方法:将20只雄性SD大鼠随机分为对照组与治疗组,建立UUO模型,治疗组每天早、中、晚各给予复方金钱草颗粒1次,1周为1疗程;对照组则给予生理盐水。1周后处死大鼠,处死前留取大鼠的血液,取对侧肾脏行HE染色,观察肾脏组织的病理改变,并用免疫组化的方法检测大鼠肾脏组织中TGF-β1、III型胶原的表达,并检测大鼠血清中血肌酐、血尿酸的变化。结果:治疗组治疗后TGF-β1和III型胶原水平(0.39±0.06 ng/ml、15.3±4.8μg/L)均显著低于对照组(0.81±0.11 ng/ml、61.5±15.8μg/L)。治疗组治疗后尿素氮水平和肌酐水平(6.1±1.1 mmol/L、46.8±9.8μmol/L)均显著低于对照组(13.5±2.6 mmol/L、118.5±26.1μmol/L)。结论:复方金钱草在改善UUO大鼠中肾组织纤维化及改善肾功能有一定作用。     

解毒活血方对肾间质纤维化大鼠TGF-β1的影响

目的:观察解毒活血法对肾间质纤维化大鼠TGF-β1的影响,探讨其抑制肾间质纤维化的作用机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组,模型组,缬沙坦组,解毒活血低剂量组,解毒活血高剂量组,每组10只。除假手术组,其余各组大鼠结扎左侧输尿管复制肾间质纤维化模型。所有大鼠灌胃给药,缬沙坦组给予26 mg/kg;解毒活血低剂量组予解毒活血中药12g生药/kg;解毒活血高剂量组予24g生药/kg,假手术组和模型组予等容量生理盐水,共14天。左肾组织行HE、Masson染色,观察病理形态学改变,免疫组化检测肾组织中TGF-β1的蛋白表达。结果:模型组大鼠间质大量炎症细胞浸润,胶原成分明显增多,TGF-β1呈强阳性表达,各治疗组炎症细胞浸润及胶原沉积程度均比模型组显著减轻,TGF-β1表达明显减弱。结论:解毒活血方药可抑制肾组织中TGF-β1的表达,继而减少细胞外基质沉积,延缓肾间质纤维化进程。     

芪归益肾方对小鼠肾脏纤维化的延缓作用

目的探讨芪归益肾方对小鼠肾脏纤维化的延缓作用。方法建立单侧输尿管梗阻模型后,40只ICR小鼠随机分为假手术组、模型组、芪归益肾方组(10 g/kg)、贝那普利组(10 mg/kg)、川芎嗪组(100 mg/kg)。HE、Masson染色观察肾小管间质损伤情况;免疫组化、蛋白质印迹检测FN、TGF-β1、PAI-1、TM表达。结果与模型组比较,芪归益肾方组、贝那普利组、川芎嗪组明显改善肾小管间质纤维化,抑制FN、TGF-β1、PAI-1表达,升高TM表达,以芪归益肾方组更显著(P0.05)。结论芪归益肾方可有效延缓单侧输尿管梗阻小鼠肾脏纤维化,其作用机制可能与减少PAI-1表达,增加TM表达或减少其代谢有关。     

芪蛭真武汤改善单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化及其机制

目的:探讨芪蛭真武汤对单侧输尿管结扎(UUO)大鼠肾间质纤维化的影响,及对转化生长因子-β_1(TGF-β_1)/Smads和氧化应激反应的作用。方法:将30只雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、芪蛭真武汤高剂量组、芪蛭真武汤低剂量组、厄贝沙坦组(n=6)。模型组及各治疗组行左侧输尿管结扎,假手术组不结扎输尿管,仅分离输尿管后关闭腹腔。术后1 d开始灌胃给药,假手术组、模型组予无菌蒸馏水10 mL·kg~(-1),芪蛭真武汤高剂量组予芪蛭真武汤22.2 g·kg~(-1),低剂量组予芪蛭真武汤11.1 g·kg~(-1),厄贝沙坦组予厄贝沙坦片0.02 g·kg~(-1)。各组大鼠分别于术后14 d取材,取材前收集24 h尿液,检测24 h尿蛋白定量(24 h-Upr);收集血清用以检测肌酐(SCr),尿素氮(BUN);取结扎侧肾组织行苏木素-伊红(HE)染色、马松(Masson)染色,光镜下观察其病理改变;免疫组化法(IHC)检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)和纤维连接蛋白(FN)的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TGF-β_1,Smad3,p-Smad3,非吞噬细胞氧化酶Ⅳ(NOX4)的表达。结果:与假手术组比较,模型组SCr,BUN,胶原容积分数(CVF),24 h-Upr均增高(P0.05,P0.01),模型组α-SMA,Col-Ⅰ,FN,TGF-β_1,p-Smad3,NOX4蛋白的表达均较高(P0.05);与模型组比较,芪蛭真武汤高剂量组和厄贝沙坦组的SCr,BUN,CVF,芪蛭真武汤高剂量组的24 h-Upr均较低(P0.05);各中药治疗组α-SMA,Col-Ⅰ,FN,TGF-β_1,Smad3,p-Smad3,NOX4的表达均较少(P0.05)。结论:芪蛭真武汤能够减少UUO大鼠的尿蛋白,保护肾脏功能,抑制肾间质纤维化的发生、发展;其机制可能与抑制TGF-β_1/Smads信号通路和氧化应激反应有关。     

红花黄色素对单侧输尿管梗阻大鼠模型肾间质纤维化的影响

目的：探讨红花黄色素对大鼠肾间质纤维化的影响。方法：将40只SD雄性大鼠随机分为假手术（SO）组、单侧输尿管梗阻（UUO） 组、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂厄贝沙坦组（IRB组） 和红花黄色素组（SY组） 。大鼠肾组织行苏木精-伊红和Masson染色,计算肾间质纤维化的相对面积。免疫组化技术检测I型胶原（Col I）和纤维连接蛋白（FN）在肾组织中的表达。结果：SY治疗组和IRB治疗组能有效改善UUO大鼠的肾脏间质纤维化,SY组和IRB组中各时间点Col I和FN蛋白的表达均低于UUO组（P0.05）。结论：红花黄色素可减轻UUO大鼠肾间质纤维化程度,延缓肾脏间质纤维化。     

益肾降浊汤对慢性肾功能衰竭大鼠肾间质纤维化的影响

目的：研究益肾降浊汤对慢性肾功能衰竭（CRF）肾间质纤维化的疗效与机理。方法：将66只雌雄各半的SD大鼠,随机分为正常对照组、假手术组、病理模型组、依那普利对照组、大黄对照组和益肾降浊汤治疗组。采用5/6肾切除大鼠CRF模型进行造模,并给予不同的药物治疗。观察各组大鼠的血清肌酐（Scr）、血清尿素氮（BUN）、尿渗透压（Urine osmolality）,观察残余肾组织常规病理,并用免疫组化法检测骨形成蛋白-7（BMP-7）及转化生长因子β1（TGF-β1）的表达。结果：依那普利对照组、大黄对照组和益肾降浊汤治疗组肾间质纤维化程度显著轻于病理模型组,而其中益肾降浊汤治疗组病变较依那普利对照组和大黄对照组轻,依那普利对照组和大黄对照组相比无明显差异。Urine os-molality减少的程度、Scr、BUN的结果同肾间质纤维化变化的程度一致（P〈0.01及P〈0.05）。BMP-7在正常组和假手术组中的表达最多,在各治疗组中又以益肾降浊汤治疗组表达最多。TGF-β1在病理模型组表达最多,正常组中表达很少,在各治疗组中益肾降浊汤治疗组表达最少。结论：益肾降浊汤可以延缓CRF大鼠病变的进展,其作用强于单味大黄及依那普利。推测益肾降浊汤具有延缓CRF大鼠肾间质纤维化,降低残余肾脏受损程度的作用。     

梗阻性肾间质纤维化大鼠血流变及微循环研究

目的 观察单侧输尿管梗阻(UUO)致大鼠肾间质纤维化的血液流变学及微循环的变化特点,从络病角度探讨肾间质纤维化的中医病机.方法 建立单侧输尿管梗阻致大鼠肾间质纤维化模型,观察肾间质纤维化大鼠全血粘度150/s切变率、30/s切变率、5/s切变率、1/s切变率、红细胞压积、舌下及耳廓的脉络变化,同时检测肾纤维化指标、血清肌酐及尿素氮.结果 肾间质纤维化模型组的全血粘度150/s切变率、30/s切变率、5/s切变率、1/s切变率、红细胞压积、透明质酸酶(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、IV型胶原(C IV)、血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)与假手术组相比显著升高;且肾纤维化指标(HA、LN、 PCⅢ、C IV)与全血粘度的各个切变率及红细胞压积呈显著正相关.结论 肾间质纤维化大鼠血流变及微循环的变化特点一定程度上反应了肾间质纤维化"络脉瘀组"的中医病机,为抗肾间质纤维化"活血通络"的治疗提供初步依据.     

真武汤抗大鼠肾间质纤维化作用的研究

目的:观察真武汤对肾间质纤维化大鼠的作用,并通过观察真武汤对肾脏Ⅰ,Ⅲ型胶原纤维的影响,探讨真武汤抗肾间质纤维化的作用机制。方法:采用"单肾切除加腺嘌呤灌胃法"建立大鼠慢性肾衰竭模型。治疗组予真武汤9.8,2.45g.kg-1 ig,对照组予尿毒清溶液ig。给药4周后处死大鼠取血测肌酐(Cr),尿素氮(BUN),钙(Ca2+)、磷(P3+),肾脏切片分别进行HE染色、PASM染色、Masson染色、Sirius Red染色、Mallory染色,光镜下观察大鼠肾组织的病理形态学改变,HE染色进行肾小管间质病变半定量分析,PASM染色、Masson染色、Sirius Red染色进行肾脏组织病理学图像分析。结果:在肾间质纤维化面积、肾小球系膜积分吸光度等方面,真武汤高、低剂量组的作用优于模型组和尿毒清组,P0.05。真武汤高、低剂量组在肾间质中Ⅰ,Ⅲ型胶原分布面积等方面的作用与模型组比,P0.05。结论:真武汤具有抗肾间质纤维化的作用,其作用途径可能与抑制Ⅰ,Ⅲ型胶原纤维增生有关。     

苦碟子注射液对输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的:研究苦碟子注射液(简称苦碟子)对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的作用及机制。方法:采用单侧输尿管结扎法制备大鼠肾间质纤维化模型,随机分为正常组、假手术组、模型组、缬沙坦(0.01 g·kg-1)组、苦碟子低、高剂量(0.15,0.30 g·kg-1)组。各组大鼠在给药后第7,14天分批次处死,采集血液,肾组织,测定血清肌酐(serum creatinine,SCr),尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)含量;肾组织匀浆检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;肾脏苏木素-伊红(HE),马松(Masson)染色观察肾脏病理变化;免疫组化法检测各组大鼠肾组织转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1),磷酸化-Smad2/3(phosphorylated Smad2/3,p-Smad2/3),骨形成蛋白-7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)的表达,并行半定量分析;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾组织TGF-β1,Smad2,Smad3,BMP-7及I型胶原(ColⅠ)mRNA表达。结果:苦碟子能降低肾间质纤维化大鼠血肌酐水平,能减轻肾间质小管损伤,减少肾间质胶原相对面积,MDA含量,下调TGF-β1,p-Smad2/3,ColⅠ的表达;增加SOD的活性以及BMP-7表达水平,与苦碟子低剂量组比较,以苦碟子高剂量(0.30 g·kg-1)组效果最为显著(P0.05)。结论:苦碟子对大鼠肾间质纤维化的保护作用,可能与其降低大鼠肾组织氧化应激水平、抑制TGF-β1/Smad/BMP-7信号通路传导,从而抑制细胞外基质增生有关。     

肾病Ⅰ号方对单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化的影响

目的:观察肾病Ⅰ号方对肾纤维化大鼠α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅳ型胶原(COL-Ⅳ)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法:24只雄性SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组、洛丁新组和肾病Ⅰ号方组,每组6只。采用单侧输尿管结扎的方法制备大鼠肾纤维化模型。假手术组和UUO模型组每日予2 m L生理盐水灌胃,洛丁新组按洛丁新片1.67 mg·kg~(-1)·d~(-1)给药,肾病Ⅰ号方组按18.75 g·kg~(-1)·d~(-1)给药。灌胃14 d后处死大鼠,采集血清检测尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和血肌酐(serum creatinine,SCr);取肾组织行HE染色评价肾小管间质纤维化损伤程度;采用免疫组织化学染色方法检测α-SMA、COL-Ⅳ、TGF-β1在肾组织中的表达情况;免疫印迹试验(Western blot)检测α-SMA相对蛋白表达量。结果:与模型组比较,洛丁新组、肾病Ⅰ号方组大鼠的SCr,BUN明显下降(P<0.05),肾组织α-SMA、COL-Ⅳ、TGF-β1表达量下降显著,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:肾病Ⅰ号方对肾纤维化具有一定改善作用,其作用机制可能是通过下调α-SMA、COL-Ⅳ、TGF-β1的表达,从而达到肾脏保护的作用。     

抗纤灵冲剂对单侧输尿管梗阻大鼠CTGF基因调控的影响

目的 探讨抗纤灵冲剂防治肾间质纤维化可能的作用靶点及分子生物学机制.方法 将72只SPF级SD大鼠中54只行经典单侧输尿管结扎,制备UUO大鼠模型,造模成功后分为模型组、抗纤灵组、氯沙坦组.药物干预后分批于14d,21d,28d处死,留取左侧肾组织,运用PCR Array法,检测肾间质纤维化基因CTGF的阳性表达.结果 各时间点模型组CTGF基因水平分别较假手术组上调7.12倍、8.26倍及6.55倍,均＞2倍,具有非常显著差异.各时间点抗纤灵组CTGF基因表达分别比模型组下调1.79倍、1.63倍、1.63倍,下调均＞1.5倍,具有明显差异.结论 抗纤灵冲剂作用靶点及分子生物学机制之一是有效诱导CTGF基因表达下调而发挥抗肾间质纤维化效应.     

灯盏细辛注射液对大鼠肾间质纤维化的影响

目的 观察灯盏细辛注射液对大鼠肾间质纤维化的改善作用并探讨其机制。方法 采用单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction,UUO）大鼠模型为研究对象。36只SD大鼠随机分为对照组、UUO模型组（模型组）和灯盏细辛治疗组（治疗组）。治疗组每天给予灯盏细辛注射液〔5 mL/(kg·d)〕腹腔注射治疗,由术前24 h 始至术后第9天止;术后第10天取术侧肾脏组织,常规石蜡包埋切片,HE、PAS和苦味酸－天狼星红染色,光镜下观察大鼠肾小管间质病理改变、肾脏皮质相对间质容积和相对胶原含量的变化;免疫组织化学方法检测肾脏转化生长因子β1（TGF β1）、α 平滑肌肌动蛋白（α SMA）和Ⅰ型胶原的表达。结果 模型组和治疗组均出现明显的肾间质纤维化病理改变,但治疗组病变程度相对较轻。肾皮质相对间质容积和相对胶原含量模型组及治疗组明显高于对照组,但治疗组明显少于模型组（P＜0.01）。免疫组化染色显示： TGF β1、α-SMA和Ⅰ型胶原表达模型组和治疗组明显多于对照组,但治疗组较模型组明显减少（P＜0.05）。结论 灯盏细辛注射液对大鼠肾间质纤维化具有显著的改善作用,这种作用可能是通过抑制TGF-β1表达,阻止肾小管上皮细胞转分化,减少Ⅰ型胶原合成实现的。