RV/HSV_1-tk/GCV基因治疗系统对卵巢癌细胞体外作用

［目的］观察逆转录病毒载体／单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因／羟甲基无环鸟苷（ＲＶ／ＨＳＶ１－ｔｋ／ＧＣＶ）基因治疗系统对卵巢癌细胞的体外作用及其“旁观者效应”,并探索提高携有ＨＳＶ１－ｔｋ基因的假型逆转录病毒对卵巢癌细胞的感染率的有效途径。［方法］①以ＶＰＣ／ＨＳＶ１－ｔｋｃ细胞培养液的滤过液重复多次感染Ａ０细胞,然后一组以Ｇ４１８筛选阳性克隆,另一组以ＧＣＶ作杀伤试验。②按不同比例分别将ＡＯ／ＨＳＶ１－ｔｋｃ及ＶＰＣ／ＨＳＶ１－ｔｋｃ与ＡＯ细胞混合培养后加入ＧＣＶ, ５天后消化计数。［结果］①随着ＲＶ感染次数增多,所获得的Ｇ４１８筛选阳性克隆数也明显增多,同时,ＧＣＶ对ＡＯ细胞的杀伤效应也有所提高。②在 ＡＯ细胞群体中如 ＨＳＶ１－ｔｋｃ阳性细胞占 ８０％,则 ＧＣＶ对细胞群体的抑制率可达９５．２％。③当 ＡＯ与 ＶＰＣ／ＨＳＶ１－ｔｋｃ以１：４混合培养时, ＧＣＶ对细胞的生长抑制率为９６．６２％。［结论］ ＧＣＶ杀伤ＡＯ／ＨＳＶ１－ｔｋｃ细胞时对ＡＯ细胞具有一定的“旁观者效应”;重复ＲＶ感染及与ＶＰＣ／ＨＳＶ１－ｔｈｃ细胞混合培养可以明显提高ＲＶ／ＨＳＶ１－ｔｋｃ／ＧＣＶ系统对卵巢癌细胞的作用效果。     

HSV—tk基因治疗人脑胶质瘤SHG44的实验研究

为了研究脑肿瘤的基因治疗，构建了含有ｐｇｋ启动子驱动的ＨＳＶ－ｔｋ基因的反转录病毒载体ｐＬＮＴＫ，并成功地对人脑胶质瘤ＳＨＧ４４细胞。经体实验证实，ＳＨＧＬＮＴＫ对阿昔洛韦（Ａｃｙｃｌｏｖｉｒ，ＡＣＶ）的杀伤敏感性高于ＳＨＧ４４约１０００倍，＾３Ｈ－ＴＤＲ掺入法证实，ＡＣＶ能够明显抑制ＳＨＧＬＮＴＫ的ＤＮＡ合成。体内实验证实，ＡＣＶ可抑制ＳＨＧＬＮＴＫ细胞在裸小鼠全内的肿瘤形成，原位基因转 治疗裸     

HSV－tk基因治疗人脑胶质瘤SHG_（44）的实验研究

为了研究脑肿瘤的基因治疗，构建了含有ｐｇｋ启动子驱动的ＨＳＶ－ｔｋ基因的反转录病毒载体ｐＬＮＴＫ，并成功地转移至人脑胶质瘤ＳＨＧ４４细胞。经体外实验证实，ＳＨＧＬＮＴＫ对阿昔洛韦（Ａｃｙｃｌｏｖｉｒ，ＡＣＶ）的杀伤敏感性高于ＳＨＧ４４约１０００倍，３Ｈ－ＴｄＲ掺入法证实，ＡＣＶ能够明显抑制ＳＨＧＬＮＴＫ的ＤＮＡ合成。体内实验证实，ＡＣＶ可抑制ＳＨＧＬＮＴＫ细胞在裸小鼠体内的肿瘤形成，原位基因转移治疗裸小鼠ＳＨＧ４４肿瘤效果明显。提示其可作为脑肿瘤治疗的一种新办法。     

HDVtk／GCV自杀基因系统治疗小鼠腹水瘤的研究

目的：研究ＨＳＶｔｋ／ＧＣＶ系统对腹水瘤的治疗作用。方法：采用ＸＴＴ、动物实验、透射电镜和流式细胞仪等方法。结果：ＨＳＶｔｋ（＋）的Ｐ３８８ｔｋ细胞对ＧＣＶ的敏感性约为其亲本Ｐ３８８细胞的３７倍,且对其邻近的ＨＳＶｔｋ（－）的Ｐ３８８细胞或Ｓ细胞具有旁观者效应,当Ｐ３８８ｔｋ细胞与Ｐ３８８细胞或Ｓ细胞混合培养,５／μｇ／ｍｌ ＧＣＶ处理后,Ｐ３８８ｔｋ细胞占混合细胞的１０％,就可杀伤５０％的混合细     

HSV—tk／GCV系统对神经胶质瘤的自杀基因治疗研究

目的在ｉｎｖｉｔｒｏ和ｉｎｖｉｖｏ水平建立致死神经胶质瘤的ＨＳＶ－ｔｋ／ＧＣＶ自杀基因系统,并验证该系统的有效性。方法用携带单纯疱疹病毒胸苷激酶（ＨＳＶ－ｔｋ）基因的重组逆转录病毒,感染大鼠神经胶质瘤细胞Ｃ６,筛选稳定表达ｔｋ的克隆细胞Ｃ６／ｔｋ;经生长抑制试验,比较Ｃ６／ｔｋ细胞对三种核苷类似物ＧＣＶ、ＢＶｄＵ和ＡＣＶ的敏感性;Ｃ６／ｔｋ细胞在裸鼠皮下成瘤,用ＧＣＶ进行治疗并观察疗效。结果ｔｋ基因整合入Ｃ６细胞并在Ｃ６／ｔｋ细胞中稳定表达;生长抑制试验表明,ＧＣＶ是最为有效的原药,Ｃ６／ｔｋ细胞对ＧＣＶ高度敏感,ＩＣ５０＜０．２μｍｏｌ／Ｌ,而野生型Ｃ６细胞和转染空载病毒载体的Ｃ６／０细胞对ＧＣＶ的ＩＣ５０≥１００μｍｏｌ／Ｌ,相差５００多倍。裸鼠ｉｎｖｉｖｏ实验得到相应结果,治疗组肿瘤受到明显抑制和杀伤。结论在ｉｎｖｉｔｒｏ和ｉｎｖｉｖｏ水平,表达ｔｋ基因的肿瘤细胞均被ＧＣＶ有效杀伤,这表明ＨＳＶ－ｔｋ／ＧＣＶ自杀基因系统有可能成为基因治疗脑瘤的有效方法。     

黑色素瘤B16细胞热休克蛋白—抗原肽复合物的体内外抑？…

目的：黑色素瘤Ｂ１６细胞胞浆ＨＳＰ－抗原肽复合物（ＨＡＣ）的制备、免疫原性的诱导及其抑瘤作用的研究。方法：采用Ｔｒｉｓ－ＨＣＩ提取和Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ　Ｓ－２００凝胶过滤制备Ｂ１６细胞ＨＡＣ,通过Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠体内诱导特异性ＣＴＬ,再经体内、体外实验检测其抑癌作用。结果：凝胶过滤获得的含６０～９７ｋＤ蛋白的４１,４７和５３管的ＨＡＣ可以降低肿瘤发生率、延长肿瘤出现时间及降低小鼠死亡率。结论：Ｂ１６细胞胞浆中的６０～９７ｋＤ的ＨＡＣ具有免疫原性及抑瘤作用,为制备肿瘤疫苗提供了实验依据。     

卵巢癌药物敏感基因治疗实验研究——(Ⅱ)体内实验

为探索将单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因／羟甲基无环鸟苷（ＨＳＶ１－ｔｋ／ＧＣＶ）药物敏感基因治疗系统应用于卵巢癌,本刊［１］已介绍体外实验结果,现将体内实验情况介绍如下。材料与方法１．细胞来源及培养详见文献［１］　ＧＣＶ仍由ＲｏｃｈＳｙｎｔｅｘ公司惠赠;４～６周龄ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠由上海市肿瘤研究所动物室提供并饲养。２．ＡＯ皮下移植瘤治疗　本组１２只裸鼠,每只裸鼠左右侧前背部皮下以５号针头分别接种５×１０６的ＡＯ细胞或ＡＯ／ＨＳＶ１－ｔｋｃ细胞。２周后选取左右两侧背部皮下触摸肿块大小较一致的９…     

HER2/neu肽诱导BALB/c小鼠产生特异性CTL及其抑瘤作用的研究

目的：探讨来源于ＨＥＲ２／ｎｅｕ原癌蛋白的多肽诱导特异性细胞免疫应答及其在体内的抗癌效应。方法：利用合成的２个具有小鼠Ｈ－２Ｋ＾ｄ分子结合基序的ＨＥＲ２／ｎｅｕ肽作为肿瘤排斥抗原,在体外刺激小鼠淋巴细胞以及皮下免疫小鼠,观察淋巴细胞的增殖能力、ＣＴＬ的杀伤活性以及ＨＥＲ２／ｎｅｕ肽的抑瘤作用。结果：ＨＥＲ２／ｎｅｕ肽在体内和体外对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠淋巴细胞的增殖都有显显的促进作用。ＨＥＲ２／ｎｅｕ肽免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠后,可以从小鼠淋巴细胞中诱导出肽特异性ＣＴＬ,这些ＣＴＬ可以特异地杀伤ＨＥＲ２／ｎｅｕ阳性ＳＰ２／０细胞,而对ＨＥＲ２／ｎｅｕ阴性ＳＰ２／０细胞却无明显的杀伤活性。ＳＰ２／０ＨＥＲ２细胞在ＨＥＲ２／ｎｅｕ肽免疫小鼠体内的生长受到抑制。结论：研究结果表明ＨＥＲ２／ｎｅｕ肽可以起到一定的抑瘤保护作用,提     

CEA启动子驱动cd—tk表达对CEA阳性肿瘤细胞的杀伤作用

目的：大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ，ｃｙｔｏｓｉｎｅｄｅａｍｉｎａｓｅ）和Ⅰ型单纯疱疹病毒胸苷激酶（ＴＫ，ｔｈｙｍｉｄｉｎｅｋｉｎａｓｅ）融合基因ｃｄｔｋ，在癌胚抗原（ＣＥＡ，ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃａｎｔｉｇｅｎ）阳性肿瘤细胞表达，联合使用前体药５氟胞嘧啶（５ｆｌｕｏｒｏｃｙｔｏｓｉｎｅ，５ＦＣ）和丙氧鸟苷（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ，ＧＣＶ）可明显增强对肿瘤细胞的杀伤作用。方法：ＰＣＲ法分别扩增出ＣＥＡ启动子、ｃｄ和ｔｋ；构建真核表达载体ｐＣＥＡｃｄｔｋ；用脂质体将它导入ＣＥＡ阳性肿瘤细胞株ＨＴ２９、ＬｏＶｏ、ＳＧＣ７９０１、ＧＬＣ８２及ＣＥＡ阴性细胞株ＢＥＬ７４０２中；ＭＴＴ法检测５ＦＣ、ＧＣＶ对这类细胞的毒性作用及对放疗射线的增敏效果。结果：融合基因ｃｄｔｋ只在ＣＥＡ阳性细胞中表达，且表达该基因的肿瘤细胞对５ＦＣ和ＧＣＶ都很敏感。联合使用ＧＣＶ和５ＦＣ时，对这些肿瘤细胞的毒性明显增加，该体系也可明显增强放疗射线对细胞的杀伤作用。结论：与单独使用ＣＤ／５ＦＣ，ＴＫ／ＧＣＶ相比，ＣＤＴＫ／５ＦＣ＋ＧＣＶ体系对肿瘤细胞的杀伤作用明显增强，该体系对放疗射线有较强的增敏作用。     

HSV-tk基因在人乳腺癌细胞中的表达及其诱导杀伤的特性研究

ＨＳＶ ｔｋ基因转移联合ＧＣＶ的方法已成为肿瘤基因治疗的重要策略之一[1] 。ＨＳＶ/ＴＫ ＧＣＶ系统通过直接作用或旁观者效应杀伤肿瘤细胞 ,被杀死的瘤细胞经抗原递呈细胞如ＤＣ处理后 ,递呈给Ｔ细胞 ,从而产生了肿瘤特异性免疫。自杀基因疗法在治疗肿瘤时 ,瘤细胞的接种作用和凋亡现象均能刺激机体免疫系统 ,通过免疫反应可能达到消灭肿瘤、保护宿主以防肿瘤复发和转移的长期作用[2 ] 。本研究利用逆转录病毒将Ｈｙ ｔｋ基因转入人乳腺癌细胞株ＭＣＦ 7中 ,经潮霉素筛选获得了稳定表达ｔｋ的ＭＣＦ 7/ＴＫ细胞克隆 ,在ＧＣＶ作用下 ,其…