解淀粉芽孢杆菌MT323生防机制初探

为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)MT323菌株生防制剂的研发及生产应用提供理论依据,采用平板对峙法、二分隔平板法和不同指示培养基检测法相结合,研究MT323菌株的抑菌谱及生防机制。结果表明:MT323菌株对烟草赤星病菌、烟草黑胫病菌、石榴干腐病菌、黄连根腐病菌和高粱叶斑病菌等5种植物病原菌具有明显抑制作用,抑菌率分别为86.3%、87.4%、97.5%、69.5%和76.7%;其产生的挥发性物质(VOCs)对以上5种病原菌也具有一定的抑制效果,抑菌率分别为48.1%、52.2%、6.2%、12.9%和6.4%;VOCs对烤烟幼苗具有明显促生作用,对烤烟叶长、叶宽、株高和根长的促生效果较对照(添加MS培养基培养)分别提高97.3%、54.0%、22.2%和48.1%;菌株MT323具有良好的运动能力,可产生嗜铁素和磷酸酯酶等生防相关酶类物质。     

贝莱斯芽孢杆菌YX-3的筛选鉴定及其抑菌效果

为了分离出对多种植物病害真菌具有生防潜力的拮抗细菌,通过平板法从银杏外种皮中分离纯化到1株细菌YX-3,采用生理生化试验及16S r DNA测序鉴定细菌的分类地位,利用平板对峙法测定菌株YX-3对6种供试植物病原菌的抑制作用。菌株YX-3菌落呈乳白色,边缘光滑,培养5 d后菌落由饱满转变为中心处塌陷,菌体呈杆状,菌体大小约0.5×3.1μm,芽孢大小约0.5×1.0μm,经革兰氏染色结果为阳性,初步确定为芽孢杆菌,经分子生物学鉴定后,其为贝莱斯芽孢杆菌。贝莱斯芽孢杆菌YX-3对灰梨孢菌、禾谷镰刀菌、藤仓镰刀菌、新月弯孢菌、串珠镰刀菌、尖孢镰刀菌6种供试植物病原菌均具有抑制作用,抑制率在60%～69%之间,贝莱斯芽孢杆菌YX-3对藤仓镰刀菌的拮抗作用较强,抑菌率为69.19%±0.24%,对新月弯孢菌的拮抗作用较弱,抑菌率为60.47%±0.09%。贝莱斯芽孢杆菌YX-3对多种植物病原物具有广谱拮抗作用,具有作为生物防治菌剂的潜在价值。     

贝莱斯芽孢杆菌ZC16的分离鉴定及生防效果评价

本研究从香蕉枯萎病重病地块仅存的健康香蕉植株根际采集土样,分离得到一株对枯萎病病原菌Foc4具有很强拮抗作用的芽孢杆菌,经分子鉴定及进化树分析,将其命名为贝莱斯芽孢杆菌ZC16,并通过平板对峙和盆栽试验对其进行生防效果评价。结果表明:贝莱斯芽孢杆菌ZC16对枯萎病病原菌Foc4具有很强的抑制作用,平板对峙抑菌率为65.1%;盆栽试验病情指数为31.43,防效为64.51%,较贝莱斯芽孢杆菌FZB42防效高25%,具有良好的生防潜力。     

贝莱斯芽孢杆菌BP-1对花生网斑病菌的抑菌机制初探

以不同浓度贝莱斯芽孢杆菌BP-1的发酵滤液处理花生网斑病菌孢子,采用显微观察法、电导率测定法和紫外吸收法测定发酵滤液对病菌细胞膜渗透性、麦角甾醇含量、脂质过氧化程度和可溶性蛋白质含量的影响,研究BP-1发酵滤液对花生网斑病菌孢子的抑制作用.结果 表明:BP-1发酵滤液可致花生网斑病菌孢子畸形、破裂;并可导致菌丝体内电解质泄漏,细胞膜上麦角甾醇的合成受阻,脂质过氧化产物(丙二醛)含量明显升高,同时显著抑制菌丝体内蛋白质含量.     

贝莱斯芽孢杆菌对玄参根腐病的田间防效

为研究玄参根腐病的生物防治措施,以贝莱斯芽孢杆菌为供试材料,通过在定植期、苗期和营养生长前期使用,研究不同处理方式对玄参根腐病的防治效果。结果表明,贝莱斯芽孢杆菌对玄参根腐病防治效果较好,其防治效果受使用时间影响较大,定植期使用效果优于苗期和营养生长前期。使用次数对防治效果影响较大,同在定植期使用,追施2次效果优于1次。在连续使用3次的情况下,其田间防效最高可达77%。该研究可为玄参根腐病的有效防控提供指导依据。     

贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）的研究进展

贝莱斯芽孢杆菌是芽孢杆菌属的一个新种,在农业上具有促进植物生长和抑制植物病原菌的作用,具有很大的被研发为生防制剂的潜力,在工业上也可被应用于降解有害的工业副产品,还可被广泛应用于生物医学。因此,近年来备受关注。本文就贝莱斯芽孢杆菌的发现与分类、基因组研究、生防作用及应用几个方面展开综述,以期为后续的研究与开发提供参考。     

贝莱斯芽孢杆菌DJB5的生物安全性评价

[目的]研究贝莱斯芽孢杆菌DJB5的生物安全性,为DJB5的开发和安全使用打下基础.[方法]参考微生物菌剂安全性的相关标准,通过灌胃DJB5菌体和发酵液的方式测定DJB5对昆明小鼠的急性经口毒性;通过腹腔注射菌体的方法研究DJB5的致病性;测试DJB5对昆明小鼠的急性眼刺激性、皮肤刺激性和溶血性;用纸片琼脂扩散法检测DJB5的抗菌药物敏感性.[结果]DJB5菌体对昆明小鼠的急性经口半致死剂量(LD50)>5000 mg/kg,灌胃菌体(5000 mg/kg BW)及5和10倍发酵上清浓缩液14d后,昆明小鼠的体征、各脏器石蜡切片、血相和生化指标与对照组无显著差异(P>0.05,下同);腹腔注射DJB5菌体(500 mg/kg BW)后,处理组昆明小鼠的脏器系数和体重与对照组无显著差异;DJB5对昆明小鼠眼和皮肤无刺激性、无溶血性,且对受试的青霉素G、头孢唑林、丁胺卡那、庆大霉素、红霉素、诺氟沙星、环丙沙星、复方新诺明和氯霉素等9种抗菌药物敏感.[结论]贝莱斯芽孢杆菌DJB5及其发酵液的生物安全性高,具有开发成防治玉米贮藏期黄曲霉制剂的潜力.     

贝莱斯芽孢杆菌菌剂对花生白绢病的田间防效及作用机理研究

为探究贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）菌剂对花生白绢病的田间防治效果,以花生品种“鲁花14”为试验材料,通过拌土和喷洒方式接种微生物菌剂,研究了微生物菌剂对花生生长指标、病情指数和产量的影响,并初步探究其生防机制。结果表明,使用贝莱斯芽孢杆菌菌剂可降低花生白绢病的病情指数,增加结果数和百仁重,提高花生产量;以拌土处理效果最佳。微生物菌剂一定程度上可提高土壤真菌群落的多样性,但对土壤细菌群落多样性影响较小;对花生根中的苯丙氨酸解氨酶、多酚氧化酶和过氧化物酶活性无显著影响。研究结果为贝莱斯芽孢杆菌菌剂在花生白绢病病害防治方面的应用研究提供了理论基础,为其生物农药的开发提供了思路。     

生防枯草芽孢杆菌发酵条件的优化

枯草芽孢杆菌B2是从土壤中选出的,它的代谢产物中的抑菌物质对多种病原菌具有强烈的抑制作用。对其发酵条件的研究表明,其产抑菌物质的最佳发酵培养基为葡萄糖15g、黄豆饼粉30g、蛋白胨2g、NaCI 1g、（NH4）2SO45g、CaCO36g、MgSO46g,蒸馏水1000ml,最佳发酵条件为pH值7.0、接种量4％、30℃恒温振荡培养箱培养,发酵时间约60h。     

贝莱斯芽孢杆菌在改善雪茄烟叶品质中的应用

以CX-014雪茄茄衣晾制结束后的烟叶为材料,对其进行微生物分离纯化,从中筛选出了一株产酶丰富且酶活均处于中高水平的菌株H1,通过形态学和分子生物学方法对该菌株进行了鉴定,并探究了在雪茄烟叶发酵过程中添加外源苯丙氨酸和葡萄糖对该菌株降解烟叶中大分子物质、增加雪茄烟叶香气成分的促进作用。结果表明：H1菌株被鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）;在添加外源营养物的条件下经菌株H1发酵后的雪茄烟叶中果胶降解率达到34.93%,淀粉、木质素、蛋白质和纤维素等大分子物质的含量也明显降低;当接菌量为2.4×107 CFU/g,并添加0.25%苯丙氨酸和0.5%葡萄糖的外源物质的情况下,雪茄烟叶在37℃下发酵6 d后,烟叶中新增了异佛尔酮和2,5-十八碳二炔酸甲酯等香气物质,且β-大马酮、2-仲-丁基环戊酮等的含量明显增多,香气得到明显改善。同时,菌株H1的产香发酵成本低,操作工艺简单,可以在工业生产中推广,以提高烟叶品质。     

贝莱斯芽孢杆菌3A3-15电击转化条件优化

对贝莱斯芽孢杆菌电击转化条件进行优化,以期建立其高效转化体系。采用pIC333质粒电击转化贝莱斯芽孢杆菌3A3-15野生型菌株,考察细胞生长阶段、电压、电阻和质粒DNA加入量对转化效率的影响。当细胞培养物D_(600 nm)为0.9,电压为1.75 kV,电阻为400Ω,质粒DNA加入量为50 ng时,其转化率最高达7.92×10~4 CFU/μg。该研究为贝莱斯芽孢杆菌3A3-15菌株的基因和分子水平操作奠定了基础。     

草莓叶枯病生防芽孢杆菌的分离鉴定及防效研究

为筛选防治草莓叶枯病的生防芽孢杆菌（Bacillus spp.）,采集健康草莓根际土壤,采用稀释涂布平板法和平板对峙法,筛选对草莓叶枯病具有较高防效的芽孢杆菌,采用形态学、生理生化鉴定及分子生物学方法对其进行鉴定,并初步研究其发酵特性,同时采用室内离体叶片法对其防治效果进行验证,通过血平板法和盆栽试验法对菌株安全性进行检测。结果表明,筛选得到一株对草莓叶枯病菌（Neopestalotiopsis clavispora）具有较高抑制效果的芽孢杆菌B125,其平板抑菌率达到75.44%,经形态学、生理生化鉴定及分子生物学鉴定,其为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）。利用液体发酵培养以及热风干燥法制备得到菌株B125菌粉,其菌粉对草莓叶枯病的室内离体叶片防效达到61.69%,安全性试验表明,该菌株不具备溶血性,对作物生长无害且可以显著促进作物生长。综上,贝莱斯芽孢杆菌B125能够显著抑制草莓叶枯病菌的生长,具有较高的工业生产开发价值。     

生防芽孢杆菌的研究进展

针对植物病害问题,概述了生防芽孢杆菌抗菌物质的种类、作用机制以及应用现状,讨论了生防芽孢杆菌在实际应用中存在的问题及发展前景。     

贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4发酵培养基和发酵条件优化

【目的】贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4对许多病原菌具有较强的抑制作用,为提高其生防作用,开展FJ17-4发酵技术研究。【方法】以发酵液的OD₆₀₀值为评估指标,采用单因素和正交试验方法对发酵培养基和发酵条件进行筛选和优化,获得最佳发酵培养基和发酵条件后,进一步对优化后发酵液的菌体数、病原菌抑制率和室内盆栽防治效果进行测定和分析。【结果】菌株FJ17-4的最佳培养基配方为黄豆粉12.5 g·L^-1、玉米粉5.0 g·L^-1、K₂HPO₄ 12.5g·L^-1,最佳发酵条件为：初始pH 7.0,培养温度30℃,装液量20%(50 mL/250 mL),接种量12.5%,转速180r·min^-1,发酵培养时间40 h。优化后发酵液的OD₆₀₀值和菌体数量分别为1.52×10¹⁰、1.03×10¹⁰ cfu·mL^-1,比优化前分别提高了25.62%和21.95%...     

生防菌贝莱斯芽孢杆菌MC2-1全基因组测序分析

【目的】分析贝莱斯芽孢杆菌MC2-1的全基因组序列信息,挖掘该菌株拮抗物质合成的相关基因,为其生防机理研究和开发应用提供数据基础。【方法】采用二代Illumina Hiseq与三代Pacbio平台相结合的测序技术,对从美洲大蠊肠道内分离获得的烟草疫霉拮抗菌MC2-1进行全基因组测序,并对测序数据进行基因组装、预测、功能注释、共线性分析及次级代谢产物合成基因簇预测。【结果】菌株MC2-1的全基因组大小为3929792 bp,平均GC含量为46.5%,共编码4015个基因;包含tRNA基因86个、rRNA基因27个、sRNA基因81个;含有基因组岛2个、前噬菌体1个、CRISPRCas 9个。在NR、Swiss-Prot、COG、GO和KEGG数据库中分别注释到4015、3347、2996、2841和2223个基因。在CAZyme数据库中注释到几丁质酶、纤维素酶和淀粉酶等可降解植物病原真菌细胞壁的相关酶基因。预测到菌株MC2-1中有12个次级代谢产物合成基因簇,编码表面活性素（Surfactin）、丰原素（Fengycin）、杆菌素（Bacillibactin）、杆菌溶素（Bacilysi...     

生防芽孢杆菌的研究进展

利用芽孢杆菌防治植物病害是生物防治的一个重要内容。生防芽孢杆菌种类多,作用范围广,生防芽孢杆菌类微生物制剂能够有效控制植物病害,因此,生防芽孢杆菌在现代农业中有广阔的应用前景。本文就针对生防芽孢杆菌种类及其生防作用机制、国内外生防芽孢杆菌微生物制剂化研究现状及其在应用中存在的问题及对策分析展开简要论述。     

利用响应面法优化贝莱斯芽孢杆菌ZJ20发酵参数

【目的】优化贝莱斯芽孢杆菌的培养条件,以提高其菌落数和抗菌活性,为该菌株工业化生产提供理论依据。【方法】以贝莱斯芽孢杆菌ZJ20为供试菌株,采用单因素试验,研究培养基、pH、温度、转速对ZJ20菌落数和抗菌活性的影响;在此基础上,以菌落数为考察指标,采用响应面法对pH、温度、转速3个因素进行进一步的优化,得到了贝莱斯芽孢杆菌ZJ20的最佳培养条件;最后在温室采用盆栽试验,研究最佳培养条件得到的贝莱斯芽孢杆菌ZJ20对杂交竹梢枯病的防治效果。【结果】单因素试验结果显示,供试培养基中,NB培养基(牛肉膏3g,蛋白胨10g,氯化钠5g,琼脂20g,蒸馏水1L,pH 7.0～7.2)上贝莱斯芽孢杆菌ZJ20的菌落数和抑菌圈直径均最高,分别为4.11×108 CFU/mL和6.10mm,且显著高于其余培养基,说明NB培养基更有利于贝莱斯芽孢杆菌的生长。当pH为4～10时,随着pH的增加,贝莱斯芽孢杆菌ZJ20的菌落数和抑菌圈直径均先增后降,其中当pH为7～8时ZJ20的菌落数和抑菌圈直径均显著高于其他处理;在此基础上的复筛结果显示,7.0～7.4为贝莱斯芽孢杆菌的最优pH。当转速为140～200r/min时,随着转速的增加,贝莱斯芽孢杆菌ZJ20的菌落数和抑菌圈直径均先增后降,其中当转速为160～180r/min时,菌落数和抑菌圈直径均较高。温度为22～30℃时,随着温度的升高,菌落数和抑菌圈直径均先增加后下降,其中当温度为22～28℃时菌落数和抑菌圈直径均较高。响应面试验结果显示,3个因素中,转速对菌落生长和繁殖的影响最大,其次是温度,影响最小的是pH,贝莱斯芽孢杆菌ZJ20最优培养条件为:pH 7.27,转速160r/min,温度28℃,在此条件下测定的菌落数为769×107 CFU/mL。盆栽试验结果显示,优化培养条件下得到的ZJ20悬液防治效果明显提高,均超过50%。【结论】得到了贝莱斯芽孢杆菌的最佳培养条件,这不仅使其菌落数增加,而且极大地增强了该菌的抗病活性。