糖酵解代谢旁路与树突状细胞诱导免疫耐受的相关性

<正>树突状细胞(dendritic cell,DC)是人类目前已知的免疫系统功能最强大的抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC),其功能为高效地识别、捕获、呈递抗原,从而激活抗原特异性T细胞,启动免疫应答,因此在固有免疫应答(innate immune response)及适应性免疫应答(adaptive immune response)中均具有重要作用。DC自1973年被加拿大科学家Steinman~([1])发现以来,一直是自身免疫性疾病研究的重点。近来关于DC代谢的研究     

骨髓干细胞输注联合低剂量他克莫司在肾移植中诱导嵌合体的形成

背景：骨髓细胞嵌合体通过有效的免疫耐受机制,使其成为临床用于移植免疫耐受的主要候选方法。 目的：探讨大鼠肾移植及活体肾移植中骨髓干细胞移植对免疫耐受的诱导作用及机制。 方法：①大鼠肾移植：40只Wistar大鼠(雌雄各半)随机分为实验组和对照组,进行肾移植手术,术前经门静脉分别注射骨髓干细胞及生理盐水,30 d后观察肉眼和光镜下排斥反应及检测嵌合体的形成。②活体肾移植：实验组为夫妻或亲属共5对,供者均为男性,受者为女性。术前应用他克莫司口服,供者皮下注射生白细胞药物,采集白细胞悬浊液,以流式细胞仪测定CD34细胞比例,0.7%以上为骨髓干细胞含量合格,并通过外周静脉输注至受者体内,10 d后同法再输注1次,1周内行移植手术,术后复查肾功,于半年后采用荧光原位杂交的方法检测Y基因片段。对照组为正常活体肾移植手术,未行骨髓干细胞移植。 结果与结论：动物实验组大体和光镜下排斥反应均较轻微,嵌合体检测均为阳性,活体实验组嵌合体检测4例为阳性,而对照组仅1例为阳性。提示应用他克莫司并输注供者骨髓干细胞,可诱导一定的免疫耐受。移植前输注供者骨髓干细胞形成的嵌合体与免疫耐受有关。     

同种异体肢体移植中他克莫司的应用剂量*☆

背景：他克莫司应用于同种异体肝移植的免疫耐受已多见报道。 目的：探索他克莫司在异体肢体移植时的最佳应用剂量。 方法：建立同种异体肢体移植大鼠模型,移植造模后设立给予不同他克莫司剂量的0.5,1,2 mg/(kg•d)组及对照组,对大鼠进行大体观察、组织学、淋巴细胞亚群测定。 结果与结论：移植后出现排斥反应的时间分别是对照组(3.43±0.79) d、0.5 mg/(kg•d)组(5.68±0.97) d、1 mg/(kg•d)组(9.13±1.17) d、2 mg/(kg•d) 组(9.61±2.38) d,排斥反应的病理分级4组分别为(2.61±0.38),(1.57±0.43),(0.85±0.24),(0.71±0.19)级。移植后各给药组CD4+、CD8+检测值均明显下降,CD4/CD8比值轻度增加或在正常值范围内;对照组CD4+、CD8+无明显变化,CD4/CD8比值明显增加。提示,他克莫司的应用剂量在1 mg/(kg•d)时就能达到理想的抑制免疫排斥反应,提高用量后意义不大。     

免疫耐受性树突状细胞在移植免疫中的作用及其分子机制

新的研究发现一种半成熟树突状细胞亚群,其高表达主要组织相容性复合体II、中等表达CD40、CD80和CD86等分子,在自身免疫性疾病中表现出诱导免疫耐受的潜能,其与未成熟树突状细胞一道被认为是致耐受细胞。这使过去将树突状细胞分为未成熟和成熟两种类型的概念受到挑战。但是,它们在移植免疫中的具体作用和机制仍未完全明了。文章对致耐受树突状细胞的体内迁移过程、在移植免疫中分子机制和体外获得等方面的最新进展进行综合分析和热点追踪,为进一步理解和研究致耐受树突状细胞在移植免疫反应中的作用拓宽视野。     

树突状细胞诱导免疫耐受与神经系统自身免疫性疾病的治疗

近年来树突状细胞(dendritic cells,DCs)诱导免疫耐受成为免疫学的研究热点之一,其作用机制包括诱导调 节性T细胞产生、诱导自身反应性T细胞无能或凋亡等。细胞因子修饰DCs或抗原负载DCs为神经系统自身免疫 性疾病的治疗开辟了新途径。     

Genistein联合小剂量他克莫司在胰腺移植排斥反应中的作用

背景：有实验表明CXCR3拮抗剂Genistein可减轻胰腺移植大鼠的急性排斥反应。 目的：观察Genistein联合小剂量他克莫司在胰腺移植抗排斥反应中的作用。 方法：以Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体,建立胰腺移植模型,随机分成5组：对照组(未进行药物治疗)、大剂量他克莫司组、小剂量他克莫司组、Genistein组、Genistein+小剂量他克莫司组。术后第7天行病理学,肝肾功能,血清中CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞、干扰素γ、白细胞介素2浓度检测。 结果与结论：与对照组、小剂量他克莫司组、Genistein组比较,Genistein+小剂量他克莫司组移植胰腺组织损伤减轻,淋巴细胞浸润减少,急性排斥反应减轻,血清CD3+、CD4+、CD8+ T淋巴细胞明显减少,干扰素γ、白细胞介素2水平降低 (P < 0.05);并且避免了大剂量他克莫司对肝肾功能的损害。说明Genistein联合小剂量他克莫司能有效减轻胰腺移植急性排斥反应而不增加肝肾毒性。     

他克莫司促进神经干细胞移植大鼠脊髓损伤的再生与修复

背景：研究证实,他克莫司不仅抑制T细胞的增殖、活化,还能抑制小胶质细胞、巨噬细胞等炎症细胞在损伤局部聚集、活化及相关炎症因子的释放,减轻继发性炎症反应对原发损伤周围正常组织的破坏,从而对损伤局部的神经组织起保护作用。 目的：观察他克莫司对神经干细胞移植大鼠脊髓损伤后再生修复的影响。 方法：分离培养孕13d SD大鼠神经干细胞。显微镜下动脉瘤夹夹闭SD大鼠T8脊髓,建立压迫型脊髓损伤动物模型。损伤后7 d随机数字表分为3组：对照组,于损伤中心定向注射生理盐水;细胞移植组,于损伤中心定向注射神经干细胞;他克莫司组,于损伤中心定向注射神经干细胞同时给予免疫抑制剂他克莫司1 mg/(kg•d)腹腔注射连续7 d。1,2,4,8周后,通过BDA顺行示踪、苏木精-伊红与免疫组化染色及电镜检测,观察移植后脊髓组织再生和神经元的变化。 结果与结论：对照组在损伤中心端远侧无神经纤维通过。细胞移植组与他克莫司组在治疗1周后有部分神经纤维通过,8周均有部分BDA阳性标记的皮质脊髓束再生通过脊髓损伤部位,特别是他克莫司组可延续至距损伤中心1.7 cm 。苏木精-伊红染色显示,细胞移植组与他克莫司组2周时坏死灶开始缩小,泡沫细胞减少。电镜结果显示,他克莫司组1周时即出现较正常的微丝和微管结构,8周时星形细胞、许旺细胞、髓鞘典型多见,神经轴突的终末有较多的兴奋性递质和不典型的轴树连接,出现较多的结构正常的髓鞘。说明损伤大鼠移植神经干细胞后联合应用他克莫司后可减轻早期的急性炎症反应,保证神经细胞的存活,具有神经保护和神经营养作用,可加快神经功能的恢复。     

他克莫司治疗重症肌无力作用机制的研究

目的：研究他克莫司治疗重症肌无力（MG）的免疫调节机制。方法：收集依据临床表现、实验室和电生理检查确诊的全身型MG患者外周血28份（来自22例患者）,健康对照外周血20份（来自20名健康者）。分离单核细胞,稀释后等量分为4份,分别加入他克莫司0、2、10及50ng·mL^-1,培养48hN收集上清液,以ELISA法检测上清液中IL-12、IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-13、TNF-α、sICAM-1的浓度。结果：对照组随他克莫司浓度的升高（0、2、10和50ng·mL^-1）,IL-2、IL-10的浓度显著升高（P〈0．05）,TNF-α水平有降低趋势,但差异无统计学意义（P〈0．05）。MG组IL-12、IL-2、IFN-Y、IL-10、IL-13和sICAM-1的水平均显著升高（P〈0．05）,而TNF-α水平明显降低（P〈0．05）。结论：他克莫司不是一个单纯的免疫抑制剂。它能抑制炎性因子TNF-α和黏附分子的分泌,诱导和影响Th1和Th2细胞因子产生,最终达到治疗MG的效果。     

未成熟树突状细胞表面CD1d分子在体外移植免疫中的作用☆

背景：树突状细胞具有双向免疫调节作用,成熟树突状细胞激活免疫应答,而未成熟树突状细胞则倾向诱导免疫耐受。 目的：探讨鼠CD1d分子在未成熟树突状细胞诱导移植免疫耐受中的作用,以及在此过程中细胞因子的参与机制。 方法：利用vIL-10转染的BALB/c小鼠未成熟树突状细胞在体外用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因、脂多糖刺激成熟,经抗CD1d(anti-CD1d)干预。观察培养后的细胞表型、细胞因子表达。为探明CD1d分子在异体T细胞存在下的免疫作用,进行不同实验条件的初次、再次混合淋巴细胞培养(1stMLC、2ndMLC),观察T细胞增殖、细胞因子表达。 结果与结论：Anti-CD1d的干预降低了未成熟树突状细胞增殖异体T细胞的能力,anti-CD1d干预的未成熟树突状细胞致敏异体T细胞后其免疫功能低下;anti-CD1d干预在异体T细胞存在时影响未成熟树突状细胞在功能上的成熟,主要表现在抑制白细胞介素12的分泌,加强白细胞介素10的分泌。     

他克莫司对骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的影响

目的骨髓间充质干细胞(BMSC)移植同时应用他克莫司(FK506),观察两者对脊髓损伤后大鼠恢复的影响。方法用钳夹法制作大鼠急性脊髓损伤动物模型30只,随机分成3组。A组为单纯损伤组,B组为单纯骨髓干细胞移植组,C组为骨髓干细胞联合FK506组。于伤后1w、2w、4w、6w、8w采用BBB评分。8周后取材,行免疫组化及病理学检查。结果B、C两组大鼠后肢运动功能均有较明显恢复,C组较B组为快,两组统计学上有差异(P<0.05)。A组亦有所恢复,但程度较轻。A组切片,未见神经轴索通过,B、C组可见少量神经轴索样结构。免疫组化显示:A组NF200阳性细胞,GFAP阳性细胞均较B组C组少(P<0.05)。C组Nogo阳性神经元较A、B两组明显减少(P<0.05)。B组NF200阳性细胞,GFAP阳性细胞均较C组少(P<0.05)。结论骨髓间质干细胞移植对于后肢功能的恢复有促进作用,联合应用FK506有协同效果。     

肢体缺血预处理在未成熟心脏移植中的应用

背景：有学者提出远隔器官预处理概念,即在心脏以外的器官施行缺血预处理,同样能达到缺血预适应效果。肢体缺血预处理是一项机体自我调节的保护机制,但是对未成熟心肌保护的研究较少,在心脏移植方面的利用价值尚未明确。 目的：通过对未成熟幼犬进行肢体缺血预处理,与传统心脏保存方法比较,试图分析肢体缺血预处理在供体心脏保存中的应用价值。 方法：纳入未成熟幼犬12只,按随机数字表法分为2组,每组6只,采用有创性方法游离股动脉,肢体缺血预处理组夹闭股动脉10 min,开放5 min,3个循环后常规开胸,游离心脏,插灌注管,灌注st.Thomas停跳液,离体心脏于保护液中4 ℃保存(离体前取上腔静脉血3 mL)。对照组游离股动脉但不夹闭,余同实验组。在心脏保存时期(3 h)内每隔半小时取左心室心肌样本,3 h后取心尖部心肌烘干测得干湿比。测量心肌组织丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性及肌钙蛋白Ⅰ含量。 结果与结论：离体前心肌组织肌钙蛋白Ⅰ含量无明显变化(P > 0.05),离体后肢体缺血预处理组的心肌丙二醛含量及干湿比均低于对照组(P < 0.05),超氧化物歧化酶活性高于对照组(P < 0.05)。结果提示,肢体缺血预处理对未成熟心脏有明显的保护作用,在未成熟供体心脏离体前进行缺血预处理可以提高供体心脏的保存效果,降低心肌水肿。离体前肌钙蛋白Ⅰ含量无变化说明肢体缺血预处理对心肌没有损伤,是一种安全的保护措施。 关键词：肢体缺血预处理;未成熟心肌;心脏移植;心肌保护;犬     

肾移植后他克莫司与五酯胶囊合用致高血钾症1例

背景：肾移植患者由于免疫抑制剂的药物肝毒性,肝功能异常发生率高,对临床出现肝功能异常者,需护肝治疗。但合用护肝药必须监测免疫抑制剂浓度。 目的：探讨肾移植患者他克莫司与五酯胶囊合用对他克莫司浓度及血生化的的影响。 方法：回顾性分析1例以他克莫司为免疫抑制剂的肾移植患者加服及停用五酯胶囊时他克莫司浓度及肾功能、血生化变化。患者因“慢性肾小球肾炎,慢性肾功能不全”于1998-06起行血液透析治疗。2000-08行同种异体尸体肾移植,移植后免服他克莫司+吗替麦考酚酯+泼尼松。移植后4个月患者出现肝功能异常,加用联苯双酯。2010-07-25患者停用联苯双酯,改服五酯胶囊。2010-07-29患者停用五酯胶囊。 结果与结论：服用他克莫司的肾移植受者,合用五酯胶囊,他克莫司血浓度显著升高。由5.3 ng/L升至24.7 ng/L,并合并高血钾症,停用五酯胶囊1周,他克莫司浓度由24.7 ng/L降至6.1 ng/L,血钾由6.4 mmol/L降至4.6 mmol/L。提示移植肾功能稳定的肾移植受者,在加用五酯胶囊,必须严密监测他克莫司血浓度及肝肾功能、电解质,及时调整他克莫司用量,保护移植肾功能。     

未成熟髓源树突状细胞负载P2 58-73肽段诱导免疫耐受对实验性自身免疫性神经炎的预防作用

目的观察未成熟髓源树突状细胞(iMDC)负载P258-73肽段诱导免疫耐受对实验性自身免疫性神经炎(EAN)的预防作用,以及对干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-33(IL-33)mRNA表达的影响。方法(1)P258-73aa与iMDC共培养。(2)21只Lewis大鼠随机分为EAN组(A组)、iMDC组(B组)和P258-73aa-iMDC组(C组),并分别于皮下注射磷酸盐缓冲液(PBS)、iMDC及P258-73aa-iMDC;7d后,各组均给予P253-78aa和完全弗氏佐剂(CFA)进行免疫,诱发EAN。观察各组发病情况并作临床评分至免疫后16d(发病高峰期)。(3)采用3H-TdR掺入法检测淋巴细胞增殖反应;RT-PCR检测大鼠坐骨神经、脾脏和淋巴结中IL-33、IFN-γmRNA的表达。结果(1)发病高峰期,A组、B组、C组的临床评分为(7.4±1.9)分、(5.2±1.6)分和(3.4±0.9)分,各组间比较差异有统计学意义(均P<0.01)。(2)A组、B组、C组抗原特异性淋巴细胞增殖反应依次明显降低(均P<0.01)。(3)A组、B组、C组坐骨神经、脾脏和淋巴结中IFN-γmRNA表达水平依...     

慢病毒介导的sTNFR1在小鼠骨髓未成熟树突状细胞的表达

摘要 背景：未成熟树突状细胞 (imDC) 能够诱导免疫耐受,如何维持DC在未成熟状态是关键,TNF-α是介导DC成熟的重要细胞因子之一,可溶性肿瘤坏死因子受体1 (sTNFR1) 与TNF-α结合可阻断TNF-α的作用,维持DC于不成熟状态。 目的：构建含有人sTNFR1的慢病毒表达载体,观察其在imDC中的表达,为进一步研究imDC在骨髓移植免疫耐受中的作用奠定基础。 设计、时间及地点：开放性实验于 2007-12/2009-06 在徐州医学院附属医院血液病研究室完成。 材料：293FT包装细胞株、包装质粒ΔNRF、被膜蛋白质粒pVSVG、pXZ208由本实验室构建保存。克隆载体pCR2.1为美国Invitrogen公司产品。DC培养的各种单克隆抗体等。成年雄性C57BL/6小鼠购自徐州医学院实验动物中心。 方法：1. 以人外周血MNC总RNA为模板,RT-PCR扩增出sTNFR1基因片段,亚克隆至慢病毒转移质粒pXZ208,通过IRES连接EGFP报告基因,建立双顺反子慢病毒转移质粒,命名为pXZ9-sTNFR1,DNA测序鉴定。采用脂质体转染293 FT细胞,根据报告基因EGFP测定病毒滴度。 2.采用小剂量GM-CSF + IL-4体外扩增培养C57BL/6小鼠骨髓来源的DC,于培养第5 d,用pXZ9- sTNFR1重组慢病毒上清感染imDC,同时以pXZ9病毒作为对照,流式细胞术评估感染效率,RT-PCR检测感染后imDC中sTNFR1的转录,Western blot法检测 sTNFR1蛋白在imDC细胞和培养上清中的表达。观察骨髓来源的DC成熟过程中的表型变化,以及sTNFR1基因修饰DC及外源性脂多糖 (LPS) 刺激后的表型特征。 主要观察指标：重组表达载体pXZ 9-sTNFR1的酶切鉴定。慢病毒的包装及病毒滴度测定。sTNFR1基因转染imDC后sTNFR1的表达及sTNFR1基因修饰DC的表型特征。 结果：1. 成功构建重组质粒 pXZ9-sTNFR1,转染293 FT细胞12 h后在荧光显微镜下观察到EGFP表达,48 h、72 h 和96 h收集病毒上清,病毒滴度为106 U/L以上,获得携带sTNFR1基因的重组慢病毒 pXZ9-sTNFR1。2. 流式细胞术检测病毒上清对imDC感染效率达 (61.37±5.48) %。RT-PCR检测到sTNFR1的表达,Western blot法检测到sTNFR1蛋白存在于感染后imDC细胞的培养上清中,而对照组未检测到sTNFR1的转录和表达。3. 小鼠骨髓MNC在培养4 d 左右出现半黏附细胞集落,集落逐渐增多、变大,第5 d的DC低表达CD40、CD86、CD80和MHCⅡ类分子,第8 d时高水平表达MHCⅡ类分子和CD40、CD86、CD80分子,在LPS的刺激下,Day-7-DC或pXZ-DC 表达高水平MHCⅡ类分子和CD40、CD80、CD86分子,显示出成熟型DC 的表型特征,而sTNFR-DC 的MHCⅡ类分子和CD40、CD80、CD86 分子的表达水平变化不明显。 结论：1. 成功构建了负载sTNFR1基因片段及含EGFP报告基因的慢病毒载体,获得了高滴度的重组慢病毒颗粒。2. 经慢病毒高效转导imDC后sTNFR1的mRNA及蛋白稳定地表达,sTNFR1可以保护imDC不被外源性LPS 刺激所活化,维持DC于非成熟型状态。     

Artifactual dendritic beading in rat spinal cord induced by perfusion with cold saline and paraformaldehyde

Extensive dendritic beading of MAP2 (microtubule-associated protein 2) immunoreactivity has previously been observed in the contused rat spinal cord. However, we have also observed dendritic beading in occasional uninjured animals. The purpose of this study was to examine the possibility that perfusion conditions contributed to the dendritic beading. Under deep anesthesia, uninjured rats (adult female Long-Evans, 200-225 g) were transcardially perfused with 0.9% saline solution followed by 4% paraformaldehyde at cold (4 degrees C) or warm (20 degrees C) temperature, and at a low (20 ml/min) or high (50 ml/min) flow rate. Dendrites were visualized by MAP2 immunoreactivity. The results demonstrate that perfusion with cold solutions at a high flow rate induces pronounced dendritic beading, and when perfused at a low flow rate, results in moderate dendritic beading. Warm perfusates did not induce dendritic beading when administered at a low flow rate, but occasional beading was observed with a high flow rate. Western blots revealed spectrin breakdown, but not MAP2 loss, in rats perfused with cold saline solution at a high flow rate, conditions that also resulted in dendritic beading. These findings demonstrate that dendritic morphology is sensitive to both temperature and flow rate of the perfusate. Warm fixative and a low perfusion flow rate minimized the perfusion-induced dendritic beading.     

Ischemic "cross" tolerance in hypoxic ischemia of immature rat brain

The phenomenon of ischemic tolerance has been closely associated with the expression of heat shock proteins but recently, stress tolerance not related to hsp72 has been reported. In the present study, we focused on ischemic tolerance induced by hypoxia and hyperthermia in neonatal rat brain and analyzed the expression of hsp72. In a neonatal rat model of hypoxic ischemia (H-I), preconditioning by whole-body hyperthermia or hypoxia was induced 24 h prior to the ischemia. Brain damage was histologically evaluated and the expressions of hsp72 were analyzed. Hyperthermic preconditioning at 41 degrees C for 15 min, as well as hypoxic preconditioning with 8% hypoxia for 3 h, had almost complete neuroprotective effects. However, we failed to detect the expression of hsp72 in any of preconditioning. Only the H-I insult itself induced hsp72 in the dorsal striatum and slightly in the thalamus and the hippocampus. Hyperthermic preconditioning has neuroprotective effects which are comparable to hypoxic preconditioning in immature brain. The expression of hsp72 is not likely necessary for the ischemic tolerance in immature brain.     

Flunarizine limits hypoxia-ischemia induced morphologic injury in immature rat brain

We examined the impact of pre-treatment with the calcium antagonist flunarizine on the development of hypoxic-ischemic brain injury in the immature rat. Unilateral carotid artery ligation and subsequent exposure to 2 hours of 8% oxygen in 7-day-old rats was used as a model for perinatal hypoxic-ischemic encephalopathy. This procedure leads to atrophy in the cerebral hemisphere ipsilateral to carotid occlusion, with prominent foci of neuronal infarction in the caudate-putamen (striatum). The morphologic injury develops after 1 1/2 hours of hypoxia; and there is an equivalent time threshold for duration of hypoxic exposure needed to acutely stimulate dopamine release in the ipsilateral striatum. Parenteral administration of 30 mg/kg of flunarizine before hypoxic exposure limited both the release of dopamine acutely and the extent of morphologic damage observed two weeks after the insult. Oral administration of 30 mg/kg of flunarizine in a different vehicle prevented morphologic damage but had no effect on stimulated dopamine release. The drug vehicle for the parenteral preparation also prevented tissue injury, but to a lesser degree than flunarizine. However the parenteral vehicle was equipotent with parenteral flunarizine in limiting acute stimulation of dopamine release. The results demonstrate that flunarizine has potent neuroprotective properties against morphologic brain injury from hypoxia-ischemia, acting by a mechanism which is independent of effects on dopamine release.     

5000/灯盏花提取物对异基因大鼠肾移植外周血树突状细胞的影响

目的：研究灯盏花提取物对异基因大鼠肾脏移植模型血中树突状细胞（dendritic cell,DC）的影响。方法：取Wistar大鼠作为供体,SD大鼠作为受体,行原位左肾移植手术并同时切除受体右侧肾脏,将移植术后大鼠随机分为灯盏花提取物低剂量组（5mg•kg-1•d-1）、中剂量组（10mg•kg-1•d-1）、高剂量组（15mg•kg-1•d-1）和NS组。术后按不同剂量向受体大鼠腹腔注射提取物或NS。手术后3d收集大鼠外周血,观察DC形态学变化并测定成熟状态;酶联免疫吸附法检测外周血白细胞介素-12（IL-12）水平;混合淋巴细胞培养（MLR）测定细胞的抗原递呈功能。结果：灯盏花提取物组DC形态较为幼稚,表面标记物、血中IL-12水平及MLR中的刺激指数（SI）均低于NS组（P<0.01）,随提取物剂量加大,各组指标逐渐下降,各组间比较差异有统计学意义（P<0.01）。结论：灯盏花提取物能抑制大鼠肾移植后外周血中树突状细胞的成熟和功能,随剂量加大,抑制作用增强。