褪黑素对小鼠卵母细胞体外自发成熟的影响

本文通过卵母细胞自发成熟体外培养模型研究了褪黑素(MT)对小鼠如母细胞成熟的影响。结果表明:0.1mg/ml、0.02mg/ml、0.004mg/mg及0.0008mg/ml浓度的MT均能显著抑制小鼠卵丘卵母细胞复合体(CEO_s)自发成熟过程(P<0.01)。但对裸卵(DO_s)自发成熟,没有影响。结论:MT是调节哺乳动物卵母细胞成熟的重要激素之一,其作用机制可能是通过卵丘细胞实现的。     

年龄、成熟方式及培养液对小鼠卵母细胞体外成熟和人工活化的影响

为研究卵母细胞能充分在体外成熟和发育,比较了年龄、成熟方式及培养液对昆明白小鼠卵母细胞体外成熟和人工活化的影响.1.5月龄、3月龄、6月龄、9月龄和12月龄小鼠的GV期卵母细胞其体外成熟率无差异(P0.05).经人工活化后,与体内成熟的卵母细胞相比,体外成熟的卵母细胞发育到原核期胚和2-细胞期胚的比率都明显降低;体外成熟的生长在HTF培养液的卵母细胞发育到2-细胞期胚的比率(44.4%)显著高于生长在M16培养液的比率(22.9%)(P0.01).结果表明昆明白小鼠卵母细胞的体外成熟不受年龄影响,体外成熟的卵母细胞人工活化后支持发育的能力比体内成熟的差,HTF培养液更适合小鼠卵母细胞人工活化后的进一步发育.     

猪体外成熟卵母细胞凋亡的形态观察

将猪成熟卵母细胞直接放入NCSU23培养液中培养,通过形态观察和Hoechst33342染色,并与孤雌激活卵子对照,探明猪体外成熟卵母细胞凋亡的规律.在未激活组中,胞质不均匀分裂是主要的趋势,高于坏死和胞质均匀分裂;胞质不均匀分裂在24 h出现,在24～96 h时间段有较大的增幅,最高胞质不均匀分裂率出现在132 h;胞质均匀分裂在12 h出现,在24～72 h时间段有较大的增幅,最高胞质均匀分裂率出现在120 h,之后略有下降;坏死在12 h出现并持续增加,在24～108 h增幅较大,180 h坏死率为28.6%.孤雌激活组中,胞质均匀分裂是主要趋势,但60 h后坏死率高于胞质不均匀分裂;胞质均匀分裂在12 h出现,在24～60 h时间段有较大的增幅,最高胞质均匀分裂率出现在60 h,并出现了5.6%的囊胚率;胞质不均匀分裂在24 h出现并持续增加,在24～72 h时间段有较大的增幅,180 h的胞质不均匀分裂率为15.4%;坏死在12 h出现,在24～108 h增幅较大,180 h之间的坏死率为39.6%.未激活组胞质不均匀分裂形态明显高于孤雌激活组,96h后差异显著(p《0.05);孤雌激活组胞质均匀分裂形态高于未激活组,60h后,两组差别显著(p《0.05);孤雌激活组坏死形态高于未激活组,96 h后两组出现明显差异(p《0.05).     

花背蟾蜍卵母细胞体外成熟过程的细胞学研究

采用体外跌卵和石蜡切片的方法，对激素诱导下花背蟾蜍卵母细胞的体外成熟过程进行了细胞学研究．结果表明：花背蟾蜍卵母细胞与激素接触１５ｈ可达到生理上的成熟，即第二次成熟分裂中期．在此过程中，卵母细胞的核、质及卵膜均经历了一系列复杂的形态学变化，其中与激素接触１０～１２ｈ期间是卵母细胞形态发生变化最显著的时期     

p90rsk-1在绵羊卵母细胞体外成熟过程中的表达

采用Western blotting检测p90rsk-1在绵羊卵母细胞体外成熟过程中的表达.实验分别在0h、8h、16h、24h检测绵羊卵母细胞p90rsk-1的表达量的变化,并进行统计学分析.结果p90rsk-1在绵羊卵母细胞体外成熟过程中均为阳性表达.随着成熟时间的延长,卵母细胞p90rsk-1在16h的相对表达量显著升高(P<0.05),但在24h又下降.因此推测Rsk在绵羊卵母细胞体外成熟过程中起一定的作用.     

基因工程小鼠剖宫产生物净化技术的研究

目的 改进剖宫产手术,提高剖宫产生物净化效率,获得SPF级基因工程小鼠.方法 结合小鼠妊娠时间,触诊判断胎鼠发育情况推测剖宫产手术时间,优化剖宫产手术流程,缩短手术时间以提高手术效率;改进剖出仔鼠由SPF级ICR小鼠代乳以提高成活率;采用统计学方法对剖宫产净化数据进行分析.结果 以触摸胎鼠四肢清晰,头部与躯干长度相似,...     

羔山羊卵泡的发育及卵母细胞体外成熟的研究

为利用羔羊作供胚羊，采用三种超数排卵的方法，对出生后４０～１５０日龄的羔山羊进行超数排卵处理以后，从活体采集卵巢卵母细胞在体外进行了培养．研究结果表明，采用超数排卵的技术能够诱导未性成熟羔山羊的卵巢卵泡的发育，由超排后采集到的羔山羊卵泡卵母细胞经体外培养有继续发育成熟的能力．适宜的超排方法为ＦＳＨ１０ｍｇ＋ＬＨ１．５ｍｇ（肌肉注射），羔山羊适宜的超排日龄为４０～９０ｄ，卵母细胞的体外适宜培养时间为１８～２８ｈ．     

猪卵母细胞体外成熟及电激活后发育能力的研究

探讨了不同的成熟培养液及外源激素对猪卵母细胞体外成熟培养及电激活后孤雌胚胎发育能力的影响. 结果表明：（1）改良M199（mM199）组猪卵母细胞成熟率显著高于M199组，且这两组又较NCSU-23组能极显著提高卵母细胞的成熟率. （2）孕马血清（PMSG）+人绒毛膜促性腺激素（hCG）+促卵泡素（FSH）组卵母细胞成熟率略高于FSH+促黄体素（LH）组，两者卵母细胞成熟率极显著高于尿促性腺激素（hMG）组. （3）含胎牛血清（FBS），猪卵泡液（PFF），表皮生长因子（EGF）的培养液较对照组在卵母细胞成熟率上无显著差异，但均能显著提高电激活后的卵裂率.添加EGF组桑囊率明显高于不添加组.但分别添加FBS和PFF组较对照组在桑囊率上均无显著差异. （4）卵丘细胞扩散与卵母细胞第一极体排出之间无直接相关性，但扩散程度好能提高电激活后的卵裂率.     

EGF、IGF-Ⅰ对牛卵母细胞体外成熟的影响

在牛卵母细胞体外成熟培养液中添加不同量的EGF、IGF-Ⅰ,观察其对牛卵母细胞体外成熟的影响并确定成熟液中添加这两种生长因子的最佳浓度.在卵母细胞成熟培养液中分别添加1 ng/m l、10 ng/m l、50 ng/m l、100 ng/m l、200 ng/m l的EGF,10 ng/m l、50 ng/m l、100 ng/m l、150 ng/m l、200 ng/m l的IGF-Ⅰ,分析成熟培养22 h后的卵母细胞成熟率.发现添加有EGF实验组的成熟率分别是36.73%、42.18%、56.18%、53.67%、56.50%,同对照组相比都较对照组的成熟率(34.04%)高,且50 ng/m l、100 ng/m l、200 ng/m l实验组的成熟率同对照组差异显著(P<0.05).IGF-Ⅰ实验组的成熟率分别是38.46%、46.94%、58.73%、55.00%、58.70%,50 ng/m l、100 ng/m l、150 ng/m l、200 ng/m l都较对照组的成熟率(38.60%)要高,100 ng/m l、150 ng/m l、200 ng/m l实验组同对照组相比差异显著(P<0.05).将50 ng/m l的EGF、100 ng/m l的IGF-Ⅰ共同添加在成熟培养液中得到的成熟率为75.00%,同对照组(36.54%)相比差异极显著(P<0.01).在牛卵母细胞体外成熟培养液中添加EGF、IGF-Ⅰ会提高卵母细胞的成熟率,并且随着浓度的增加,这种作用将达到饱和,其最佳作用浓度为50ng/m l EGF、100 ng/m l IGF-Ⅰ.     

不同培养液对卵母细胞体外成熟及重组卵母细胞孤雌活化的影响

为研究生发泡(GV)移植后的重组卵母细胞能充分在体外成熟和发育,比较了几种培养液对GV期卵母细胞体外成熟和重组卵母细胞孤雌活化的影响.自然获得的GV期卵母细胞和经显微操作获得的重组卵母细胞在M2、HTF和M199培养液培养,其体外成熟率无差异(P&gt;0.05);但成熟的重组卵母细胞经人工活化后,生长在HTF培养液的细胞发育到2-细胞期胚的比率(49.2%)明显高于生长在M199培养液的比率(28.9%)(P&lt;0.05).结果表明HTF培养液更适合小鼠卵母细胞的体外成熟和进一步发育.     

绵羊卵母细胞不同采集方法对体外成熟培养的影响

为提高绵羊卵巢卵母细胞的采集效率,提供用于卵母细胞体外成熟培养和体外受精的更多优质的成熟卵母细胞,试验利用抽吸法和剖切法2种采集方法采集绵羊卵巢卵母细胞进行体外成熟培养并对其效果进行了对比研究.结果表明剖切法获得的卵子数量显著高于抽吸法(P<0.05),而所用时间则无显著差异(P>0.05);A、B级卵母细胞的比例在剖切法中显著高于抽吸法(P<0.05),抽吸法所采集的C级细胞显著高于剖切法(P<0.05);剖切法中卵丘扩散率和第一极体排出率要显著高于抽吸法(P<0.05).     

"两步法"体外培养山羊卵母细胞的初步研究

体外成熟培养的卵母细胞经本外受精后，囊胚发育率远低于体内成熟卵母细胞，原因之一是由于体外成熟卵母细胞的不充分获能造成的，有假说认为：卵母细胞在体外培养过程中，如果延长GV期，可促进卵母细胞进一步获能，从而提高发育潜能。本文以山羊卵子为研究对象，探讨了山羊卵泡各种成分以及异种家畜卵泡液对山羊卵母细胞核成熟抑制以及抑制解除后减数分裂的影响，结果显示，山羊50％Q卵泡液、100％卵泡液、半卵泡、打孔整体卵泡以及完整卵泡对山羊卵母细胞的核成熟抑制率分别为：0.00%、9.38%、60.47％、78.26%和70.09%，随后，对经山羊半卵泡、打孔整体卵泡、完整卵泡抑制培养后的卵子进行恢复培养发现，卵子核成熟率分别为：64.29%、3.49%和4.13%，山卵母细胞与半卵泡共培养24h后进行0h、12h、20h、24h和30h的恢复培养，核成率分别为：0.00%、20.00%、61.90%、64.29%和43.75%，表明山羊半卵泡可以有效抑制山羊卵母细胞使之处于GV期，并且这种抑制作用可以恢复，恢复培养时间以20h和24h较为适宜，初步研究异种家畜卵泡液对山羊卵母细胞核成熟抑制的影响发现，50％牛卵泡液、1005牛卵泡液、50％绵羊卵泡液、100％绵羊卵泡液对山羊卵母细胞核成熟抑制率分别为3.7%、21.88%、10.00%、58.82%，表明，100％绵羊卵泡液对山羊卵母细胞核成熟抑制效果较好。     

体外培养绵羊卵母细胞超微结构的变化

实验利用透射电镜研究了根据卵泡大小和卵丘细胞层多少分类后类绵羊卵母细胞在体外成熟增培养前后超微结构的变化,结果表明,小卵泡卵经过体外培养其线粒体、皮层颗粒等细胞器均未达到熟卵母细胞中这两种超微结构的分布状态;大、中两类卵泡卵经过体外培养细胞成熟较好,     

生物大分子纯化系统的应用与管理

生物大分子纯化系统是一类利用色谱技术,对各种生物大分子进行分离纯化的自动化运行系统。该文阐述了凝胶色谱柱的种类、生物大分子的分离纯化方法、纯化工艺中不同色谱技术的衔接及如何依据蛋白质等生物大分子的理化性质合理设计色谱方案、生物大分子纯化系统的维护与保养,并简要概述了生物大分子纯化系统在生命科学研究中的应用。     

生物实验室仪器设备的管理与共享

从实际工作出发,根据生物实验室的特点,对仪器设备共享平台的建设、技术培训机制和仪器监管机制的建立以及仪器设备的维护与管理等方面进行了阐述。特别是对仪器设备共享之后如何管好、用好,更有效地提高仪器设备的使用率等方面进行了经验总结,对仪器共享平台今后的发展方向进行了探讨。     

野生小鼠体外受精技术实验初探

应用实验小鼠体外受精技术对Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠和Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ与ＤＢＡ／２杂交的Ｆ１代ＤＢＦ１小鼠进行了体外受精实验研究,就体外受精相关指标与国际常规工作做了比较;同时将这些技术应用于实验动物化中的ＴＷ（Ｔｉａｎｊｉｎ Ｗｉｌｄ）野生小鼠,就小鼠精子质量、野生小鼠体外受精情况及体外受精机理做了初步探讨。     

昆明白小鼠精原干细胞的体外培养

建立了一种小鼠精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)的分离、纯化和培养体系,主要包括SSCs的差异贴壁分选(differential adherence selection)、无血清培养基和MEF(mouse embryonic fibro-blast)饲养层。无血清培养基以StemPro-34 SFM为基础培养液,补充多种添加剂和GDNF(glial cell line-derived neurotrophic factor)、可溶性GFRα1(soluble GDNF family receptorα-1)和bFGF(basic fibroblastgrowth factor)等因子。昆明白小鼠(KMmice)幼鼠的生精细胞在这一培养体系中能够培养和增殖1个月。RT-PCR检测还表明培养的细胞同时表达Oct4和Sox2,说明SSCs与ESCs两者的自我复制可能享有共同的维持机制。     

重组金针菇免疫调节蛋白的纯化及生物活性研究

目的研究重组的金针菇免疫调节蛋白(re FIP-fve)对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用、诱导小鼠脾淋巴细胞对白细胞介素-2(IL-2)的促分泌作用及对血细胞的凝集作用.方法采用离子交换色谱法,利用SP Sepharose XL色谱柱纯化重组的免疫调节蛋白;将纯化后的蛋白作用于小鼠脾淋巴细胞和血细胞,用MTT法检测蛋白对脾细胞增殖和血细胞凝集的影响;用ELISA法检测蛋白对淋巴细胞分泌细胞因子的作用.结果经过SP Sepharose XL色谱柱纯化后可获得纯度为86%的重组蛋白;纯化蛋白浓度在80μg/m L时最大限度促进细胞增殖;蛋白浓度在2μg/m L时开始出现凝血;ELISA检测结果显示:重组的金针菇免疫调节蛋白能明显增强小鼠脾淋巴细胞分泌白细胞介素2(IL-2)的水平.结论经过SP Sepharose XL色谱柱纯化后可获得纯度较高的蛋白;纯化后的蛋白与小鼠脾淋巴细胞共同培养,不仅可以促进脾细胞的增殖,而且能增强小鼠脾淋巴细胞分泌白细胞介素2的水平;蛋白与血细胞共同培养能够促进血细胞的凝集.