买朱尼对骨性关节炎大鼠关节软骨中Wnt/β-catenin信号通路的调控作用研究

目的观察维药买朱尼对骨性关节炎模型大鼠关节软骨中Wnt/β-catenin信号通路的调控作用,探讨买朱尼对软骨细胞的保护作用机制。方法将30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和买朱尼组,每组10只。模型组和买朱尼组采用改良Hulth造模法建立膝骨关节炎模型,建模第2周开始买朱尼组灌胃买朱尼10.31 mg/(kg·d),模型组和假手术组灌胃等量生理盐水,均连续4周。末次灌胃后24 h取3组大鼠膝关节软骨标本进行大体评分和组织学评分,采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测Wnt/β-catenin通路中β-catenin、GSK-3β和Wnt-3a的表达水平。结果模型组大鼠膝关节软骨标本大体评分、软骨组织学Mankin评分及软骨细胞中β-catenin、GSK-3β、Wnt-3a蛋白及mRNA表达水平均明显高于假手术组(P均0.05),而买朱尼组均明显低于模型组(P均0.05)。结论维药买朱尼可以减轻大鼠膝关节软骨退变的程度,其可能通过调节Wnt/β-catenin信号通路来发挥保护关节软骨细胞的作用。     

电针调节Wnt/β-catenin信号通路抑制大鼠膝骨关节炎软骨退变的研究

目的:基于Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路探讨电针治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的作用机制。方法:从50只2月龄SPF级雄性SD大鼠中随机抽取10只为假手术组,其余40只采用改良Hulth法复制膝骨关节炎模型,造模4周后随机分为模型组、实验1组、实验2组、实验3组,每组10只。假手术组和模型组不作任何干预,实验1组取双侧"内膝眼""犊鼻"电针干预15 min,实验2组取双侧"内膝眼""犊鼻"电针干预30min,实验3组取双侧非经非穴电针干预15min。电针干预每天1次,每周5次,共12周。12周后,取大鼠膝关节软骨组织进行染色,光镜下观察关节软骨组织形态学改变;改良Mankin’s评分评价软骨退变程度;ELISA法检测滑膜组织中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量;Western blot检测关节软骨组织Wnt-4、β-catenin、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloprotein-13,MMP-13)蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠软骨形态结构紊乱,细胞数量明显减少,基质失染,潮线不完整;Mankin’s评分显著升高(P0.01);滑膜组织中IL-1β含量显著升高(P0.01);Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平均显著升高(均P0.01)。与模型组比较,实验1组、实验2组大鼠软骨形态结构较整齐,细胞数量增多,基质染色加深,潮线较完整;Mankin’s评分显著降低(P0.01);滑膜组织中IL-1β含量显著降低(P0.01);Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平均显著降低(均P0.01)。与模型组比较,实验3组均未见改善。与实验1组比较,实验3组大鼠软骨形态结构紊乱,细胞数量明显减少,基质失染,潮线不完整;Mankin’s评分显著升高(P0.01);滑膜组织中IL-1β含量显著升高(P0.01);Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平均显著升高(均P0.01)。实验2组与实验1组大鼠软骨形态结构相似,Mankin’s评分、滑膜组织中IL-1β含量及Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平比较差异均无统计学意义(均P0.05)。结论:电针"内膝眼""犊鼻"可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路,降低MMP-13的表达,减少炎性因子IL-1β的生成,从而抑制软骨基质的降解和软骨细胞的凋亡,改善软骨形态结构。     

内热针通过调控Bcl-2/Bax平衡改善大鼠膝骨关节炎损伤

目的:观察内热针治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠的疗效并探究其相关分子机制。方法:32只大鼠随机分为常组、模型组、电疗组和治疗组4组各8例。经过3周治疗后,采用苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)观察大鼠膝关节软骨组织病理变化,酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组大鼠滑膜液中白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素-17(interleukin-17,IL-17)的分泌水平,RT-qPCR及Western blot分别检测软骨组织中B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2-Associated X(Bax)mRNA及蛋白表达水平,TUNEL染色观察各组大鼠膝骨关节中软骨细胞凋亡情况。结果:与模型组比较,内热针能显著改善膝骨关节炎大鼠软骨组织的病理学变化,下调滑膜液中炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-17的表达水平(P<0.01);上调软骨组织中Bcl-2在mRNA及蛋白水平的表达(P<0.01),下调Bax在mRNA及蛋白水平的表达(P<0.01),且能显著抑制膝骨关节中软骨细胞的凋亡。结论:内热针能显著改善膝骨关节炎大鼠的病理学变化,缓解炎症反应,抑制膝骨关节中软骨细胞的凋亡,这可能与其对Bcl-2/Bax平衡的调控密切相关。     

自拟益气化瘀补肾方对膝骨关节炎小鼠β-catenin信号通路的影响

目的研究自拟益气化瘀补肾方对β-catenin信号通路的影响及其治疗膝骨关节炎的作用机制。方法通过改良Hulth法切开小鼠右膝部内侧皮肤,切断内侧副韧带,切除内侧半月板,并切断前交叉韧带,造成小鼠膝骨关节炎模型,分为模型组和自拟益气化瘀补肾方组。假手术组单纯切开小鼠右膝部内侧皮肤。造模2个月后给予自拟益气化瘀补肾方灌胃,治疗2个月。采用Micro-CT扫描小鼠膝关节,ABH/OG染色观察小鼠膝关节软骨细胞变化,免疫组化染色观察小鼠膝关节β-catenin、MMP-13、Col X表达,RT-PCR检测Col X、MMP-9、MMP-13和OC基因表达。结果 (1)Micro-CT检测发现,与假手术组比较,模型组膝关节周围骨赘形成增加,自拟益气化瘀补肾方组膝关节周围骨赘形成少于模型组。(2)ABH/OG染色发现,假手术组关节软骨表面光滑,表浅层、移行层、放射层和钙化层4层结构清晰可辨,软骨细胞呈柱状排列,无软骨细胞巢聚;模型组关节软骨组织表浅层细胞数量减少,移行层和放射层见到大量软骨细胞巢聚,潮线前移,出现双潮线;自拟益气化瘀补肾方组关节软骨组织形态较模型组明显改善。(3)β-catenin免疫组化染色结果显示,与假手术组比较,模型组关节软骨细胞β-catenin蛋白表达显著增加,自拟益气化瘀补肾方组关节软骨细胞β-catenin表达比模型组显著减少(P0.05);免疫组化染色结果还发现,与假手术组比较,模型组关节软骨组织Col X、MMP-13蛋白表达显著增加(P0.05)。与模型组比较,自拟益气化瘀补肾方组关节软骨组织Col X、MMP-13蛋白表达显著减少(P0.05)。(4)RT-PCR反应检测结果显示,与假手术组比较,模型组关节软骨组织Col X、MMP-9、MMP-13和OC基因表达显著增加(P0.05)。与模型组比较,自拟益气化瘀补肾方组关节软骨组织中Col X、MMP-9、MMP-13和OC基因表达显著减少(P0.05)。结论自拟益气化瘀补肾方可以治疗膝骨关节炎,其作用机制可能是通过降低β-catenin的表达而实现。     

独活寄生汤对膝骨关节炎模型大鼠中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响

目的?观察独活寄生汤（DHJSD）对膝骨关节炎（KOA）模型大鼠中Wnt/β-连环蛋白（β- catenin）信号通路相关蛋白表达的影响，探讨DHJSD治疗骨关节炎（OA）的机制。方法?选取32只SD大鼠，按随机数字表法分为DHJS组、模型（M）组、硫酸氨基葡萄糖（GS）组和正常（NC）组。除NC组外，其余3组予双膝关节腔内注射0.2 mL 4%木瓜蛋白酶法建立KOA模型。造模后DHJS组予DHJSD灌胃，GS组予GS灌胃，NC、M组给予等体积纯净水灌胃。连续给药8周后进行双膝关节X线扫描，观察大鼠膝关节影像学变化并评分，ELISA法检测血清基质金属蛋白酶-13（MMP-13）、白介素-1β（IL-1β）含量，HE染色、番红O固绿染色法观察膝关节软骨病理改变并进行Mankin评分，采用实时聚合酶链式反应（RT-PCR）、蛋白免疫印迹（Western Blot）及免疫组化法检测软骨组织中Wnt/β- catenin通路相关蛋白的mRNA及蛋白表达水平。结果?与NC组比较，M组大鼠膝关节间隙狭窄，软骨层损耗，X线评分、Mankin评分升高（P<0.05），DHJS组和GC组上述改变减轻，X线评分及Mankin评分下降（P<0.05）；DHJS组血清及软骨MMP-13含量减少（P<0.05）；下调软骨β-catenin、Wnt3a mRNA水平以及β-catenin、IL-1β蛋白表达水平（P<0.05），上调骨形态发生蛋白-2（BMP-2）、糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）mRNA 和蛋白表达水平（P<0.05）。结论?DHJSD能通过下调Wnt3a/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平，抑制MMP-13表达、促进BMP-2表达，从而改善大鼠KOA的影像学及病理学改变，发挥软骨保护作用。     

当归多糖通过Wnt/β-catenin信号通路抑制骨关节炎软骨细胞氧化应激损伤与炎症反应

目的:研究当归多糖通过Wnt/β-catenin信号通路对骨关节炎软骨细胞的氧化应激损伤及炎症反应的影响。方法:在大鼠膝关节中注射碘乙酸建立关节炎模型,3 mg/只,对照组注射等量的0.9%氯化钠溶液; 将关节炎模型大鼠分为模型组和当归多糖组。给药3周后,采用酶联免疫吸附法测定SD大鼠血清中炎症因子水平、氧化应激参数水平[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)]、膝关节软骨中基质金属蛋白酶-13(MMP-13)mRNA表达水平和c-Fos蛋白表达水平。采用酶标仪测定当归多糖处理48 h后的IL-1β,损伤SW1353细胞8 h后的细胞活性。通过PCR法检测MMP-13 mRNA、β-catenin mRNA、ADAMTS4 mRNA的表达水平。通过Western blot法测定β-catenin、MMP-13蛋白表达水平。结果:当归多糖治疗后,IL-1β、TNF-α、MDA、SOD、CAT水平及MMP-13 mRNA和c-Fos蛋白均低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05)。在IL-1β刺激的SW1353损伤模型中,经过10、50、100 μg/ml当归多糖处理后,SW1353细胞活性较模型组增加,组间比较差异有统计学意义(均P<0.05); Wnt 4a、GSK-3β、β-catenin、ADAMTS4 mRNA和MMP-13 mRNA蛋白表达均低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:当归多糖通过Wnt/β-catenin信号通路抑制骨关节炎软骨细胞的氧化应激损伤与炎症反应。     

独活寄生汤对膝骨关节炎患者Wnt/β-catenin-BMP信号通路调控作用的临床研究

目的:观察独活寄生汤治疗前后膝骨关节炎患者Wnt5a、β-catenin、BMP-2 mRNA表达的变化,探讨独活寄生汤对膝骨关节炎的作用机制。方法:42例膝骨关节炎患者,予独活寄生汤治疗12周,应用VAS法记录患者治疗前后主要症状变化,应用实时荧光定量PCR技术检测治疗前后Wnt/β-catenin-BMP信号通路中相关指标变化。结果:治疗后KOA患者VAS积分明显降低(P<0.05);Wnt-5a、β-catenin、BMP-2 mRNA表达较治疗前呈下降趋势,与治疗前比较,有统计学意义(P<0.05)。结论:独活寄生汤可能通过介导Wnt/β-catenin信号通路,抑制其下游靶基因BMP-2转录,保护关节软骨,发挥缓解疼痛的治疗效用。     

艾灸对膝骨关节炎兔软骨Wnt信号通路及血清炎性因子的影响

目的：基于Wnt/β-连环蛋白（Wnt/β-catenin）信号通路探讨艾灸干预膝骨关节炎（KOA）模型兔的可能作用机制。方法：将24只新西兰兔随机分为正常组、模型组及艾灸组，每组8只。除正常组外，其余2组兔采用右膝关节腔内注射木瓜蛋白酶水溶液的方法制作KOA模型。造模成功后，艾灸组兔每日予艾条悬灸右膝犊鼻穴20 min，连续治疗21 d ；正常组和模型组正常饲养，不给予任何干预措施。干预结束后次日，各组兔麻醉后心脏采血，采用酶联免疫吸附（ELISA）法测定血清白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平；取各组兔右膝关节股骨端软骨，采用苏木精-伊红（HE）染色法观察各组兔膝关节软骨的组织形态，采用蛋白免疫印迹（Western blot）法和实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）法分别测定各组兔膝关节软骨组织中Wnt信号蛋白-3α（Wnt3α）、β-连环蛋白（β-catenin）、基质金属蛋白酶-13（MMP-13）蛋白及mRNA的表达水平，采用免疫组化法检测各组兔膝关节软骨组织中IL-1β、TNF-α的表达，并分析其积分光密度（IOD）。结果：模型组兔血清IL-1β、TNF-α明显高于正常组（P＜0.05），艾灸组上述指标明显低于模型组（P＜0.05）。与正常组比较，模型组兔膝关节软骨细胞明显变性，软骨组织损伤严重；艾灸组兔膝关节软骨结构较为完整，软骨细胞数目较多且分布较均匀，细胞形态较为正常。模型组兔膝关节软骨组织中Wnt3α、β-catenin、MMP-13蛋白和mRNA相对表达量均明显高于正常组（P＜0.05），艾灸组兔膝关节软骨组织中上述指标蛋白和mRNA相对表达量均明显低于模型组（P＜0.05）。模型组兔膝关节软骨组织IL-1β、TNF-α蛋白表达显著高于正常组（P＜0.05），艾灸组兔膝关节软骨组织上述蛋白表达明显低于模型组（P＜0.05）。结论：艾灸犊鼻穴可下调KOA模型兔血清及软骨组织中炎性因子的表达，有效缓解膝关节软骨组织损伤，其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化有关。     

芍药舒筋片通过miRNA-140对骨关节炎大鼠软骨细胞中Wnt/β-catenin信号通路的调控作用

目的:研究芍药舒筋片通过miRNA-140对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用,探讨芍药舒筋片对骨关节炎(OA)大鼠软骨细胞的保护作用。方法:取SD大鼠45只,随机分为假手术组、OA对照组、OA治疗组,每组各15只。OA对照组和OA治疗组采用改良Hulth造模法建模,假手术组和OA对照组在建模2周后开始生理盐水灌胃,OA治疗组等量芍药舒筋片灌胃。采用CCK-8溶液检测药物对细胞增殖的影响; 软骨组织学采用Mankin评分; 检测各组软骨细胞miRNA-140、Wnt-3a、β-catenin、GSK-3β miRNA和蛋白表达。结果:OA对照组中软骨细胞的增殖速率、miRNA-140相对表达量均明显低于假手术组,而OA治疗组均明显高于OA对照组(P<0.05)。OA对照组中Mankin评分、细胞Wnt-3a、β-catenin、GSK-3β miRNA和蛋白表达水平均明显高于假手术组,而OA治疗组均明显低于OA对照组(P<0.05)。结论:芍药舒筋片能够增加OA大鼠软骨细胞中miRNA-140的相对表达量和软骨细胞的增殖速率,降低Mankin评分,且能够通过调节Wnt/β-catenin信号通路活性来发挥其对关节软骨细胞的保护作用。     

龟鹿二仙胶及其拆方对SD大鼠膝骨关节炎的影响

目的:通过观察龟鹿二仙胶及其拆方对SD大鼠膝关节软骨退变的影响,探讨龟鹿二仙胶的配伍机制。方法:切除SD大鼠双侧卵巢、双膝内侧副韧带和前交叉韧带、实验跑台跑步4周,制作退化膝骨关节炎模型。中药灌胃2、4、8周后放射免疫法检测血清雌二醇(E2)、免疫组化检测Bax、Bcl-2、白介素1β(IL-1β)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、Ⅱ型胶原(Collagen-Ⅱ)的表达。结果:8周时龟鹿参组可显著提高大鼠血清E2水平,龟鹿杞组可显著抑制Bax、促进Bcl-2表达,龟鹿参组可显著地抑制软骨细胞产生IL-1β和MMP-13、提高Collagen-Ⅱ的表达,其效果均与龟鹿二仙胶作用相同。结论:龟鹿配伍人参可提高血清E2水平、抑制关节软骨产生炎症、促进软骨细胞Collagen-Ⅱ合成;龟鹿配伍枸杞可以抑制软骨细胞凋亡。     

活血膏对膝骨性关节炎大鼠关节软骨Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:观察活血膏对骨性关节炎模型大鼠运动能力的干预效应,同时评估其对关节软骨超微结构以及Wnt/β-catenin信号通路标志性蛋白表达的影响。方法:将30只SD大鼠随机分为空白组、模型组以及活血膏组,每组10只。其中模型组及活血膏组大鼠接受4%木瓜蛋白酶关节腔注射以复制骨性关节炎模型,随后活血膏组大鼠接受活血膏外用涂抹,连续干预14 d,比较3组大鼠关节腔软骨下骨组织形态学、软骨形态以及软骨组织Wnt-2、β-catenin含量的变化。结果:1)接受造模的大鼠膝关节活动度明显低于空白组,其中活血膏组大鼠膝关节活动度大于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。2)模型组大鼠骨小梁出现明显硬化现象,局部存在断裂,骨小梁排列顺序紊乱,可见骨赘形成,活血膏组大鼠骨小梁排列明显较模型组整齐,断裂现象明显减少。接受造模大鼠BS/BV较空白组升高,Tb.Th及Tb.N均较空白组下降,其中活血膏组较模型组改善,差异均有统计学意义(P<0.05);3)HE染色显示空白组大鼠软骨面形态正常,基质着色均匀正常,潮线清晰可见;模型组大鼠软骨出现不同程度的纤维化,软骨细胞数量减少,潮线模糊不清;活血膏组软骨细胞较模型组增多,可见部分潮线。4)Western Blot检测法提示模型组软骨组织Wnt-2、β-catenin含量较空白组明显升高,活血膏组虽较空白组上调但较模型组明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:活血膏对骨性关节炎大鼠的软骨及软骨下骨有保护效应,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路表达有关。     

右归丸经IL-6/STAT3信号通路对膝骨关节炎模型大鼠软骨组织退变的调控机制

目的:观察右归丸对膝骨关节炎(KOA)模型鼠软骨组织信号转导和转录激活因子3(STAT3)和白细胞介素-6(IL-6)表达水平的影响。方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、硫酸氨基葡萄糖组、右归丸高、中、低剂量组,每组10只。采用改良Hulth法制备大鼠KOA模型,假手术组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,右归丸高、中、低剂量组分别给予右归丸4.8,2.4,1.2 g·kg^-1灌胃,硫酸氨基葡萄糖组给予硫酸氨基葡萄糖0.17 g·kg^-1灌胃,连续给药8周。干预结束24 h后股动脉采血处死各组大鼠,取鼠膝关节软骨,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察各组软骨的病理改变,并进行Mankin评分;免疫组化法检测各组关节软骨组织中STAT3,超氧化物歧化酶3(SOD3)和Wnt抑制因子1(WIF1)的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测软骨组织中IL-6 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组关节软骨组中WIF1蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠软骨组织Makin评分明显升高,软骨组织STAT3在蛋白水平上的表达明显增加和IL-6 mRNA水平上的表达显著增加,WIF1在蛋白水平上的表达显著降低(P<0.01);模型组关节软骨边缘严重破坏,软骨细胞排列紊乱。与模型组比较,右归丸高剂量干预组大鼠软骨组织Makin评分,STAT3的在蛋白水平上的表达明显降低,右归丸各干预组IL-6 mRNA水平上的表达显著降低,WIF1在蛋白水平上的表达显著增加(P<0.05,P<0.01),软骨结构趋于正常,软骨细胞分布仅偶见不均,关节软骨表面欠光滑。结论:右归丸能显著改善KOA大鼠的关节软骨退变,抑制KOA中软骨组织的炎症反应,这可能与其抑制STAT3和IL-6的表达有关。     

温针灸对膝骨关节炎大鼠滑膜组织肿瘤坏死因子水平及软骨中 Wnt3a.β-catenin 蛋白表达影响的研究

目的:探讨温针灸对膝骨关节炎(Knee osteoarthritis,KOA)大鼠滑膜组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及软骨中Wnt3a、β-catenin蛋白表达的影响。方法:将48只大鼠随机分为正常组、模型组、药物组和温针灸组,每组12只。治疗2周后,比较大鼠滑膜组织TNF-α水平及软骨中Wnt3a、β-catenin蛋白表达情况。结果:模型制备前各组大鼠LequesneMG评分差异无统计学意义。模型制备后与正常组比较,模型组、药物组、温针灸组LequesneMG评分均升高(P0.05)。治疗2周后,与正常组比较,模型组大鼠LequesneMG评分、滑膜组织TNF-α水平、软骨Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平明显升高(P0.05)。与模型组比较,温针灸组和药物组大鼠LequesneMG评分、滑膜组织TNF-α水平、软骨Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平均明显降低(P0.05)。与药物组比较,温针灸组LequesneMG评分、软骨Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平均明显降低(P0.05);滑膜组织TNF-α水平差异无统计学意义(P0.05)。结论:温针灸可以降低KOA大鼠滑膜组织TNF-α水平,其机制为抑制软骨中Wnt3a、β-catenin蛋白表达,从而达到优于西药的治疗效果,值得在临床上推广应用。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨脊蛇祛湿胶囊治疗膝骨关节炎的作用机制

目的：探究脊蛇祛湿胶囊通过调控Wnt/β-catenin信号通路治疗膝骨关节炎（KOA）的作用机制。方法：70只大白兔随机分成7组：空白组,模型组,脊蛇祛湿胶囊低、中、高剂量组,盐酸氨基葡萄糖对照组及美洛昔康对照组,每组10只。造模、灌胃干预后,ELISA检测血清Wnt3a、Wnt5a、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、β-catenin、基质金属蛋白酶（MMP）13含量,HE染色观察膝关节软骨病理改变、AB-PAS染色进行Mankin’s评分,免疫组化检测软骨组织Wnt5a、Axin、GSK-3β、β-catenin、MMP13蛋白表达。结果：与空白组比较,模型组Mankin’s评分显著升高（P<0.05）,血清中Wnt3a、Wnt5a、GSK-3β、β-catenin、MMP13含量显著升高（P<0.05）,软骨组织中Wnt5a、GSK-3β、β-catenin、MMP13蛋白表达显著升高（P<0.05）,Axin蛋白表达显著降低（P<0.05）;与模型组比较,各药物组Mankin’s评分显著降低（P<0.05）,血清中Wnt3a、Wnt5a、GS...     

盘龙七片对膝骨关节炎大鼠软骨细胞凋亡的抑制及其作用机理

目的:分析中成药盘龙七片对膝骨关节炎大鼠软骨细胞凋亡的抑制作用,并探讨其作用机理。方法:采用膝关节穿刺注射胶原酶法制备膝骨关节炎大鼠模型,检测不同剂量盘龙七片处理后大鼠膝关节肿胀及外周血中炎性因子IL-1β和IL-6水平变化情况;同时检测盘龙七片对炎症因子诱导的软骨细胞凋亡及Bcl-2和Caspase-3表达水平、GSK3β磷酸化水平的影响。结果:高、低剂量盘龙七片均可降低膝骨关节炎大鼠膝关节肿胀程度及炎症因子IL-1β和IL-6水平。盘龙七片处理后,大鼠膝关节软骨组织中及体外炎症因子诱导的软骨细胞中凋亡抑制因子Bcl-2的表达水平明显增高,Caspase-3表达量则显著降低,激酶GSK3β磷酸化水平及细胞凋亡水平明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。以GSK3β激活剂LY294002作用于细胞后,可明显减弱盘龙七片对软骨细胞凋亡的抑制作用。结论:盘龙七片可通过抑制GSK3β激酶活性,缓解膝关节软骨细胞的凋亡,进而对膝骨关节炎发挥治疗作用。     

加味丹玄口康调控口腔黏膜下纤维化大鼠Wnt/β-catenin信号通路机制研究

目的:探讨加味丹玄口康调控口腔黏膜下纤维化大鼠Wnt/β-catenin信号通路表达作用机制。方法:从35只SPF级成年雄鼠中随机挑选5只作为正常组,剩余30只大鼠采用槟榔提取物建模,成功建立25只口腔黏膜下纤维化(OSF)大鼠模型。将25只OSF模型大鼠随机分为OSF模型组、加味丹玄口康低剂量组、加味丹玄口康中剂量组、加味丹玄口康高剂量组和Wnt抑制剂组,每组各5只。加味丹玄口康低剂量组、加味丹玄口康中剂量组、加味丹玄口康高剂量组大鼠分别给予4、8、12 ml/kg加味丹玄口康灌胃,Wnt抑制剂组大鼠给予25 mg/kg的KYA1797K腹腔注射,OSF模型组和正常组大鼠给予4 ml/kg的0.9%氯化钠溶液灌胃。1次/d,持续给药4周。分别于治疗前、治疗2周、治疗4周比较各组大鼠张口度和颊黏膜评分。给药4周后处死大鼠,采用PCR和Western blot分别检测Wnt-1、β-catenin、Cylin D1和Axin基因及蛋白表达情况。结果:治疗2周及治疗4周后,Wnt抑制剂组、加味丹玄口康中剂量组、加味丹玄口康高剂量组大鼠的张口度增大,颊黏膜评分减小,加味丹玄口康高剂量组大鼠的张口度最大、颊黏膜评分最低,差异有统计学意义(均P<0.05); 且以上各组大鼠张口度和颊黏膜评分与正常组比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。加味丹玄口康高剂量组与OSF模型组、加味丹玄口康低剂量组、加味丹玄口康中剂量组、Wnt抑制剂组比较,Wnt-1、β-catenin、Cylin D1 mRNA和蛋白表达水平降低,Axin mRNA和蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(均P<0.05)。加味丹玄口康高剂量组Wnt-1、β-catenin、Cylin D1和Axin基因及蛋白表达与正常组比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:加味丹玄口康可有效改善OSF模型大鼠临床症状,通过抑制Wnt/β-catenin信号通路相关基因及蛋白表达,抑制大鼠口腔黏膜纤维化。     

消肿止痛颗粒对大鼠膝骨性关节炎软骨中NF-κB和ICAM-1表达的影响

目的:探讨消肿止痛颗粒对大鼠膝骨性关节炎软骨中核因子-κB(NF-κB)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法:将80只SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组、硫酸氨基葡萄糖片组和消肿止痛颗粒组4组,每组20只。除假手术外,其余3组通过改良Hulth法行膝骨关节炎造模。药物干预8周后,取各组大鼠膝关节软骨,用肉眼观察软骨大体形态学改变,光镜下观察各大鼠HE染色的病理变化,采用RT-PCR录际跫觳馊砉侵蠳F-κB、ICAM-1 mRNA的表达情况。结果:消肿止痛颗粒组关节软骨透明度略差于假手术组,软骨关节面欠光滑,个别区域颜色偏暗;消肿止痛颗粒组软骨组织损伤程度好于模型对照组,但比假手术组损伤程度严重,不规则排列的软骨细胞在部分区域仍可见。与模型对照组对比,消肿止痛颗粒组关节软骨组织中NF-κB、ICAM-1mRNA表达明显降低,差别有统计学意义(P0.05)。结论:消肿止痛颗粒可通过降低NF-κB、ICAM-1mRNA含量表达,保护膝关节骨性关节炎大鼠关节软骨的病理改变,从而减轻关节损伤,保护关节软骨,延缓病情进展。     

加味身痛逐瘀汤调控Wnt/β-catenin信号通路对大鼠骨质疏松症的防治作用

目的:探讨加味身痛逐瘀汤防治去卵巢大鼠骨质疏松症(OP)的疗效及其可能作用机制。方法:将60只SD大鼠,体重(245±25)g,随机分为假手术组、模型组、戊酸雌二醇组、加味身痛逐瘀汤高、中、低剂量组,每组10只。利用双侧卵巢切除法制备大鼠骨质疏松模型,手术模型制备成功后,戊酸雌二醇组大鼠给予戊酸雌二醇(剂量为 0.09 μg/g)灌胃; 加味身痛逐瘀汤治疗组大鼠给予加味身痛逐瘀汤(剂量为 32、16、8 g/kg)灌胃; 假手术组和模型对照组大鼠给予等体积蒸馏水灌胃,连续灌胃给药2个月。利用双能 X 线骨密度检测仪、HE染色法及Western blot分别测定骨密度,观察骨组织病理形态变化,分析大鼠股骨组织中Wnt、Wnt1、β-catenin、cyclin D1蛋白表达情况。结果:与假手术组比较,模型对照组骨密度明显降低(P<0.05),骨微结构遭到严重破坏,股骨组织中Wnt、Wnt1、β-catenin、cyclin D1蛋白的表达量显著降低(P<0.05)。与模型对照组相比,戊酸雌二醇组、加味身痛逐瘀汤高、中、低剂量组骨密度显著升高(P<0.05),骨微结构明显改善,股骨组织中Wnt、Wnt1、β-catenin、cyclin D1蛋白的表达量显著升高(P<0.05),且加味身痛逐瘀汤高剂量组和戊酸雌二醇组对骨密度及蛋白表达量的影响最为显著。结论:加味身痛逐瘀汤可能通过调节 Wnt/β-catenin 信号通路提高骨质疏松症大鼠的骨密度以及改善骨组织形态,从而发挥抗骨质疏松的作用。     

补肾益脑灸法通过Wnt信号通路影响围绝经期抑郁症大鼠海马神经发生

目的:基于Wnt信号通路观察补肾益脑灸法对围绝经期抑郁症大鼠海马神经干细胞分化标记物表达的影响并探讨其治疗机制。方法:60只大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、假手术组、西药组和艾灸组5组,采用去势和慢性不可预见刺激结合制备围绝经期抑郁症大鼠模型。连续治疗28 d,观察大鼠一般情况变化、动情周期、体质量及糖水消耗实验结果,运用ELISA法检测海马组织中的GFAP、Tuj-1、GSK-3β、β-catenin,RT-PCR法检测海马组织中的GSK-3βmRNA、β-catenin mRNA表达。结果:造模后其他组较空白组表现出抑郁行为,而治疗后抑郁行为好转,西药组、艾灸组及假手术组较模型组海马组织中GFAP、GSK-3β及GSK-3βmRNA的表达量增加,Tuj-1、β-catenin及β-catenin mRNA表达量有所减少。结论:补肾益脑灸法可以通过调节海马Wnt通路GSK-3β、β-catenin的表达调控海马神经干细胞的定向分化,对围绝经期抑郁症起到治疗作用。     

蠲痹颗粒对兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡的影响

目的探讨蠲痹颗粒对兔膝骨关节炎软骨软骨细胞凋亡的影响,揭示其治疗骨关节炎(OA)的部分作用机制,为蠲痹颗粒方治疗OA提供理论依据。方法将42只新西兰兔采用改良Hulth法建立兔膝OA模型,造模后,随机分为假手术组、模型组、蠲痹颗粒组及阳性药(双醋瑞因)组。药物干预或灌生理盐水6周后,取出关节软骨,石蜡切片HE染色观察软骨组织镜下病理形态改变,免疫组化法检测软骨组织caspase-3表达水平,TUNEL法检测软骨细胞凋亡情况。结果蠲痹颗粒组和阳性药对照组兔膝关节软骨组织caspase-3蛋白的表达、软骨细胞凋亡率明显低于模型组,比较有统计学意义(P0.05)。结论蠲痹颗粒能下调caspase-3蛋白表达,抑制膝关节软骨细胞凋亡,可能是蠲痹颗粒治疗骨关节炎的作用机制之一。