聚合酶链反应-反向点杂交方法检测肿瘤坏死因子-α基因启动子区308A/G多态性

随着基因组计划的完成,单核苷酸多态性(SNPs)作为基因组中最普遍的序列差异已成为研究的热点,在易感人群的筛选、疾病的预防及将来的基因治疗研究中发挥重要作用[1].     

慢性HBV感染者TNFα-308位点多态性与HBV C基因区突变的关系

目的 研究慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者肿瘤坏死因子α（TNFα）-308位点的基因多态性与HBV C基因区突变的关系.方法 对95例慢性HBV感染者进行研究,采用聚合酶链反应.限制性片断长度多态性（PCR-RFLP）技术分析患者TNFα-308位点的多态性.对PCR产物直接测序,检测HBV C基因区nt1762/1764、nt1896、nt1899、nt1862、aa60、as87及aa97位点是否存在突变.采用Fisher＇s精确概率法比较TNFα-308位点不同基因型患者HBV C基因区常见突变的检出率.结果 TNFα-308位点共发现3种多态性,分别为G/G型63例（63/95,66.3%）,G/A型28例（28/95,29.5%）,A/A型4例（4/95,4.2%）.TNFα-308位点G/G、G/A、A/A基因型患者HBV C基因区aa87位点及as97位点突变型检出率均分别为39.3%（24/61）、11.5%（3/26）和50.0%（2/4）,差异有统计学意义（F=7.658,P〈0.05）;而nt1762/1764、nt1896、nt1899、nt1862以及aa60位点突变型检出率比较差异无统计学意义（F值分别为0.669、1.542、1.123、2.420和0.966,P值均〉0.05）.结论 慢性HBV感染者TNFα-308位点G/A基因型相对于G/G基因型不易发生HBV抗原性变异,有利于HBV的清除.     

β-纤维蛋白原-455G/A基因多态性与胆囊癌的相关性研

目的 通过检测胆囊癌患者β-纤维蛋白原（Fgβ）-455G/A基因,探讨Fgβ-455G/A基因多态性与胆囊癌的相关性。方法 采集50 例胆囊癌患者（胆囊癌组）和50 例胆囊结石伴慢性胆囊炎患者（胆囊炎组）的静脉血,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）方法对Fgβ-455进行基因分型。 结果 Fgβ-455 基因GA杂合型和AA纯合子在胆囊癌中的频率显著高于胆囊炎组,显著增加胆囊癌发生的危险性,OR值（95%CI）分别为2.526（1.052～6.068）和4.306（1.177～15.749）。结论 Fgβ-455G/A位点G/A单个碱基的改变可能在胆囊癌的发病中起着重要的作用。     

瘦素基因启动子区-2548 G/A多态性与胆囊胆固醇结石的相关性分析

目的探讨瘦素基因启动子区-2548 G/A功能多态性与胆囊胆固醇结石之间的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术对118例胆囊结石患者和53例正常对照人群进行瘦素基因启动子区-2548 G/A基因多态性分析,研究等位基因和基因型分布规律。结果瘦素基因启动子区-2548 G/A多态性在2组中的分布差异有统计学意义,胆囊结石组中AA+GA基因型频率明显高于对照组(2χ=4.251,P=0.039),AA+AG基因型患胆囊结石的风险是GG基因型的2.813倍(OR=2.813,95%CI=1.020～7.757)。等位基因频率在2组中分布也存在差异,胆囊结石组A等位基因频率明显高于对照组(2χ=5.791,P=0.016),A等位基因携带者患胆囊结石的风险是G等位基因携带者的1.777倍(OR=1.777,95%CI=1.110～2.844)。结论瘦素基因启动子区-2548 G/A功能多态性与胆囊结石易感性有关,A等位基因是胆囊结石发病的遗传易感基因,G等位基因是胆囊结石的保护基因。     

Ⅰ型胶原α1基因多态性与原发性骨质疏松症的相关性研究

目的探讨Ⅰ型胶原α1基因多态性与原发性骨质疏松症、骨质疏松性骨折的相关性.方法 (1)选出60例原发性骨质疏松患者,其中髋部骨折组30例均为新近骨折并有X线片为诊断依据;(2)30例健康对照组,性别、年龄与之对应;(3)全部对象均行骨密度测定;(4)采静脉血,EDTA抗凝;(5)淋巴细胞分离液分离白细胞,置-80℃保存;(6)分离的白细胞中提DNA;(7)ARMS-PCR检测.结果 60例原发性骨质疏松患者中选出1例Ss型,其余均为SS型;30例健康对照组均为SS型.结论Ⅰ型胶原α1基因多态性与原发性骨质疏松症、骨质疏松性骨折无关.     

肾病综合征患者β-Fg-455G／A基因多态性及其与FMPF的关系

目的探讨肾病综合征（NS）患者β-纤维蛋白原（Fg）-455G／A基因多态性频率分布及其与血浆纤维蛋白单体聚合功能（FMPF）的关系。方法对85例NS患者和85例健康志愿者进行FMPF的检测，应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术，检测β-Fg-455G／A基因多态性。结果NS患者血浆Fg和纤维蛋白单体聚合速率／最大吸光度（FMPV／Amax）明显增加，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．01）；NS患者β-Fg-455G／A基因型和等位基因频率与正常对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；NS患者β-Fg-455G／A基因型频率与FMPF无相关性（P〉0．05）。结论FMPF的检测可作为评价NS患者高凝状态的重要监测指标，β-Fg-455G／A基因多态性与NS的高凝状态无相关性。     

CD14基因-260A/G位点多态性与前列腺癌易感性的研究

目的研究CD14基因-260A/G位点多态性与前列腺癌易感性的关系。方法提取168例前列腺癌患者和208例对照组的外周血DNA标本,应用聚合酶链反应-连接酶特异检测技术（polymerase chain reaction-ligase detection reaction,PCR-LDR）分析前列腺癌患者CD14-260A/G位点多态性,比较不同基因型和前列腺癌易感性的关系,并探讨不同基因型与前列腺癌患者年龄、体重指数（body mass index,BMI）、吸烟、饮酒及肿瘤家族史的关系。结果总体来说CD14基因-260A/G多态性与前列腺癌易感性之间无显著相关性（P=0.284,OR=1.27,95%CI=0.82～1.94）;饮酒（P=0.003）和肿瘤家族史（P〈0.001）与前列腺癌的发生密切相关;在分层分析中,年龄〈70岁的男性携带CD14-260G（AG＋GG）等位基因者能增加前列腺癌的易感性（P=0.011,OR=2.93,95%CI=1.28～6.70）。结论 CD14基因-260A/G位点多态性在总体上与前列腺癌易感性无显著相关性,但在年龄小于70岁男性中,携带有CD14-260G等位基因者患前列腺癌的危险性却明显增高。     

转化生长因子β1基因-509C/T多态性与原发性肾病综合征肾小管间质损伤的关系

目的 研究转化生长因子β1（TGF-β1）基因启动子－509C/T多态性与原发性肾病综合征（PNS）患者的易感性和肾小管间质损伤（TID）程度的相关性。 方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术, 检测98例PNS患者和128名健康对照者TGF-β1基因启动子-509C/T位点的基因型, 并根据肾活检病理TID程度分级分组比较。采用双抗体夹心ELISA法,测定所有受试对象的血清TGF-β1水平。同时测尿蛋白量（24 h）、Scr、BUN、血压等。 结果 （1）PNS患者及健康对照人群均能检测出T、C两种TGF-β1等位基因,存在TT型、TC型、CC型3种基因型。（2）TGF-β1基因-509C/T位点多态性在PNS患者和健康人群中的分布差异无统计学意义;等位基因频率在两组间差异也无统计学意义。（3） TID轻度组、重度组TGF-β1基因-509C/T位点的基因型频率和健康对照组比较,差异有统计学意义（均P < 0.01）。TID重度组患者的T等位基因频率和TT基因型频率明显高于TID轻度组和健康对照组（均P < 0.01）,而TID轻度组和健康对照组间差异无统计学意义。（4）TID重度、轻度组及健康对照组TGF-β1血清水平两两比较,差异均有统计学意义（均P < 0.05）。PNS组TT基因型患者血清TGF-β1水平高于CC和CT基因型患者,且与CC基因型间差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论 TGF-β1基因－509C/T多态性与PNS的发病无关,但其T等位基因可能是PNS患者TID的重要遗传因素。血清TGF-β1水平升高和TID程度与TT基因型有关。     

PCR-SSCP法检测小儿原发性肾病综合征载脂蛋白E基因多态性

目的探讨小儿原发性肾病综合征（ＮＳ）脂质代谢紊乱机制。方法测定了６８例小儿ＮＳ及１２０例健康对照组７项血脂指标，采用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术检测其载脂蛋白Ｅ（ＡｐｏＥ）基因多态性。并采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测ＮＳ组尿蛋白类型。结果所有７项指标在携不同ＡｐｏＥ等位基因（Ａｐｏε２、Ａｐｏε３及Ａｐｏε４）的患儿之间均无显著性差异（Ｐ＞０．０５），而携Ａｐｏε３等位基因型的选择性蛋白尿（ＳＰＵ）组血总胆固醇（ＴＣ）、甘油三酯（ＴＧ）显著高于同型的非选择性蛋白尿组（ＮＳＰＵ）（Ｐ＜０．０５）。ＮＳＰＵ组的Ａｐｏε２等位基因频率显著高于健康儿童组（１２．９６％ｖｓ５．００％，Ｐ＜０．０５）。结论小儿原发性ＮＳ的脂质紊乱主要与其蛋白代谢异常有关而与ＡｐｏＥ基因多态性无明显关系。但携Ａｐｏε２等位基因的ＮＳＰＵ患儿有进行性肾脏损害的可能。     

肿瘤坏死因子α基因-308位点多态性与乙型肝炎病毒慢性感染的关系

目的探讨肿瘤坏死因子(TNF)α基因-308位点多态性与乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染之间的关系。方法运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析法检测90例慢性乙型肝炎(CHB)患者、30例乙型肝炎肝硬化(HC)患者、42例慢性重型乙型肝炎(CSHB)患者以及40例健康对照者的TNFα基因启动子区-308位点单个核苷酸多态性(SNP),观察其在不同临床类型慢性HBV感染者及健康对照者中的分布频率。结果所检测的CHB、HC、CSHB患者中TNFα-308G/A基因型频率及TNFαA等位基因频率均显著高于健康对照组,CSHB组更显著。结论TNFα-308G/A多态性可能对转录产生影响,A等位基因能够增强TNFα转录。TNFα-308G/A基因型个体HBV感染的风险增高,且与临床类型有关。TNFα-308位点A等位基因可能是乙型肝炎易感性的遗传标记之一。     

载脂蛋白E基因多态性与原发性骨质疏松症的相关性研究

目的探讨载脂蛋白E基因多态性与原发性骨质疏松症、骨质疏松性骨折的相关性。方法选出60例原发性骨质疏松患者,其中髋部骨折组30例均为新近骨折并有X线片为诊断依据,30例健康对照组性别、年龄与之对应。全部对象均行骨密度测定;采静脉血,EDTA抗凝;淋巴细胞分离液分离白细胞,置-80℃保存;分离的白细胞中提取DNA;基因位点DNA扩增;PCR扩增产物SSCP分析。结果骨质疏松组及骨质疏松性骨折组载脂蛋白E基因2型、3型、4型等位基因频率分别为0.05、0.80和0.15,0.1167、0.5667和0.3167,而30例健康对照组依次为0.10、0.8667和0.0333。载脂蛋白E基因4型等位基因频率三组比较差异有显著性(X2=17.520,P<0.01);骨质疏松组及骨质疏松性骨折组携带载脂蛋白E基因4型频率明显高于正常人群;骨质疏松性骨折组携带载脂蛋白E基因4型频率明显高于骨质疏松组。结论载脂蛋白E4与原发性骨质疏松症、骨质疏松性骨折有密切相关性;载脂蛋白E4是原发性骨质疏松症,尤其是骨质疏松性骨折一个有用的标志物。     

TNFα、β基因多态性对内蒙古汉族IgA肾病患者的预后影响

目的：研究TNFα、β基因多态性对内蒙古汉族IgA肾病患者的预后影响。方法：选100例内蒙古汉族IgA肾病患者（对其中33例患者进行1月～60月的随访）及105例正常对照组,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）技术检测TNFα、β基因多态性,分析不同基因型与IgA肾病临床特征、病理类型及预后的关系。结果：（1）IgA肾病患者TNFα、β的3种基因型与健康对照组间差异无统计学意义（P〉0.05）。（2）IgA肾病患者的TNFβ2等位基因频率（63.5%）较正常人（54.3%）升高（χ2=1.83,P〈0.01）。（3）TNFα、β的3种基因型与IgA肾病患者的年龄、血压、血尿、尿蛋白、肾功能及病理间无显著关系。（4）相对于其他基因型,TNFα1/1基因型在进展组高于非进展组,P=0.04〈0.05。结论：（1）TNFβ2等位基因频率与IgA肾病发病易患性相关。（2）TNFα1/1基因型可能是IgA肾病慢性化进展的危险因子之一。     

代谢综合征与原发性IgA肾病蛋白尿的相关性研究

目的:统计代谢综合征(metabolic syndrome,MS)在原发性Ig A肾病(Ig A nephropathy,Ig AN)患者中的发生率;探讨Ig AN合并MS患者的临床特点以及MS与Ig AN蛋白尿的相关性。方法:回顾性分析了2018年01月～2018年12月杭州市中医院行肾组织活检确诊为原发性Ig AN的317例患者的临床资料,统计MS的发生率,对比MS组与非MS组间的临床资料,采用Logistic回归分析确定蛋白尿的危险因素。结果:317例原发性Ig AN患者中,MS发生率为24. 61%,MS组患者的24 h尿蛋白定量、血尿酸(UA)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)显著高于非MS组,肾小球滤过率(e GFR)明显低于非MS组(均P 0. 05)。根据蛋白尿水平分组,发生大量蛋白尿组MS比例(40. 91%)明显高于少量蛋白尿组(15. 25%)和中等量蛋白尿组(35. 59%)(P 0. 05)。MS及各组分与Ig AN患者发生中等量以上蛋白尿(≥1. 0 g/d)密切相关,校正后的多元Logistic回归分析结果显示:餐后血糖(PBG)、血压、三酰甘油高密度脂蛋白比值(TG/HDL-C)升高是大量蛋白尿的独立危险因素。结论:原发性Ig AN患者中MS发生率为24. 61%,MS及其组分与蛋白尿密切相关。其中以餐后血糖、血压、血脂影响最为显著。     

血管内皮生长因子基因多态性与糖尿病肾病的相关性研究

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)-634G／C基因多态性与糖尿病肾病(DN)的关系。方法 运用PCR-限制性多态性片段长度(RFLP)技术检测98例健康对照者和216例2型糖尿病患者[其中DN患者104例，单纯2型糖尿病(DM)患者112例]的基因型，比较各组的基因型和等位基因频率。结果 (1)CC基因型者血清VEGFT水平高于CG及GG型者；(2)DN组CC基因型和C等位基因频率显著高于DM组和正常对照组；(3)与GG型和CG型组相比，CC型组DN的发生率明显上升；(4)Logistic回归分析显示VEGF、VEGF基因多态性、收缩压(SBP)、HbA1c、LDL-C、体重指数(BMI)是DN的危险因素。结论 VEGF-63gG／C多态性与2型DM伴发肾病的发生有关，C等位基因可能是DN的易感基因。     

MTHFR基因多态性与2型糖尿病肾病相关性的研究

目的 研究亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因多态性与2型糖尿病肾病（DN）易感性的关系.方法 选择111例山西地区汉族人2型糖尿病患者,其中糖尿病肾病（DN＋）组56例,糖尿病非肾病（DN-）组55例,运用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术并结合琼脂糖凝胶电泳的方法检测111例患者的MTHFR基因多态性,测定各组间基因型频率和等位基因频率.结果 纯合基因型TT、T等位基因在DN＋组（21.43％,46.43％）的频率均明显高于DN-组（7.27％,29.09％）,差异均具有统计学意义（P＜0.05）.无论是在DN＋组还是DN-组中,TT基因型患者血同型半胱氨酸（Hcy）平均水平均大于CC基因型和CT基因型患者,DN＋组血浆Hcy水平明显高于DN-组,差异均具有统计学意义（P＜0.05）.在叶酸浓度≤6.92nmol/L时,DN＋组（24.24％,48.49％） TT型发生率及T等位基因频率明显高于DN-组（3.70％,25.93％）（P＜0.05）,当叶酸浓度＞6,92nmol/L时,DN＋组TT型发生率及T等位基因频率与DN-组无差异（P＞0.05）.结论 MTHFR基因C677T多态性与糖尿病肾病（DN）发生具有相关性,突变的T等位基因是DN易感基因,但其影响效果受叶酸浓度的影响.     

马兜铃酸肾病与代谢酶基因多态性的相关性研究

目的：探讨依赖还原型辅酶Ⅰ/Ⅱ醌氧化还原酶（NQO1）和细胞色素P450 1A1（CYP1A1）基因多态性与马兜铃酸肾病（AAN）的相关性。方法：应用双相引物-聚合酶链反应（PCR-CTPP）,对90例AAN患者和159例健康对照组进行NQO1基因609位点和CYP1A1基因4889位点单核苷酸多态性的检测,比较两组基因型分布频率的差异。并将病例组按不同基因型分组,分析不同基因型与临床表现的关系。Logistic回归检验AAN患者发生重度贫血的影响因素。结果：CYP1A1A4889G基因型和等位基因分布频率在两组间差异均无统计学意义（P〉0.05）。AAN组NQO1C609T低表达基因型（TT＋CT）分布频率高于对照组（76.7%vs65.4%,P〈0.05）;TT基因型患者重度贫血的发生率明显增高（P〈0.05）;Logis-tic回归分析提示NQO1C609T低表达基因型为AAN患者重度贫血的危险因素。结论：NQO1 C609T基因多态性与马兜铃酸肾病的发病有关,并且可能增加了AAN患者早期重度贫血的风险。     

TNF-α-308位点基因型多态性与膀胱肿瘤关系

目的 探讨TNF-α-308位点基因型与膀胱肿瘤的关系. 方法 应用PCR-SSP测定从膀胱肿瘤患者血中提取的DNA样本TNF-α的基因型,探讨其基因型与膀胱肿瘤的关系.结果膀胱肿瘤患者TNF-α-308位点基因型多态性与肿瘤的分级相关(P<0.05),而与肿瘤的分期、复发无关. 结论 检测膀胱肿瘤患者的TNF-α基因型为膀胱肿瘤发生发展的研究提供了一个新的思路.     

肾透明细胞癌易感性与表皮生长因子基因-61G＞A多态性的相关性

目的 探讨中国南方汉族人群中表皮生长因子(EGF)基因-61G＞A多态性与肾透明细胞癌(CCRCC)易感性的相关性.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测中国南方汉族295例患者和295例正常人群的EGF-61G＞A基因型,分层分析探讨罹患CCRCC的相关因素.结果 与GG型携带者比较,GA型(OR=1.49,95%CI=1.05～2.12)或AA型(1.99,1.12～3.52)携带者发生CCRCC的危险性明显升高.分层分析显示当携带GA或AA型的患者年龄、性别、吸烟以及体质量指数大于23是发生CCRCC的危险因素(年龄:2.48,1.54～4.01;男性:1.56,1.03～2.36;吸烟:2.17,1.23～3.82;体质量指数:1.96,1.28～3.01).结论 EGF-61 G＞A多态性可能与我国南方地区汉族人群CCRCC易感性有关.

Abstract：

Objective To investigate the association between the -61G ＞ A polymorphism in the epidermal growth factor (EGF) gene and susceptibility to renal clear cell carcinoma (RCC) in a southern Chinese population. Methods We obtained information on demographic factors by a personal interview.The polymorphism was analyzed by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) using genomic DNA isolated from 295 patients with RCC and 295 age- and sex-matched controls. Stratification analysis by age, sex, smoking, drinking and BMI status was performed. Results As compared with the -61GG genotype, individuals carrying GA genotype (OR = 1.49, 95％ CI = 1.05 -2. 12) or AA genotype (1.99, 1.12-3.52) had an increased risk of RCC. Stratified analysis revealed that the increased risk was more pronounced among young people (2. 48, 1.54-4. 01 ), males ( 1.56, 1.03-2. 36), smokers (2. 17, 1.23-3. 82) and those with body mass index larger than 23 ( 1.96, 1.28-3.01 ).Conclusion EGF-61G ＞ A polymorphism may contribute to the etiology of RCC in a southern Chinese population.     

胆固醇7α-羟化酶基因——204A/C基因多态性与胆石病及血清脂质水平相关性的meta分析

目的评价CYP7A1-204A/C基因多态性与胆石病风险及血清脂质水平之间的相关性。方法通过纳入排除标准,获取符合要求的文献;根据研究间的异质性,确定使用随机效应模型或固定效应模型,使用Rev Man对数据进行分析。结果使用5篇文献评估CYP7A1-204A/C基因多态性与胆石病风险间的关系,涉及病例组人群830名,对照组健康人群882名。结果显示,CYP7A1-204A等位基因导致GSD风险提高5%(OR=1.05,95%CI:0.91~1.22,P=0.48),提高幅度不显著。以种族进行的亚组分析后,仍未见显著差异。使用4篇文献对CYP7A1-204A与血清脂质水平的相关性进行分析,涉及病例组人群802名,健康对照组人群691名。所有对象均为亚洲人。数据整合结果显示,AC基因型比AA基因型人群TG水平更高,差异显著(MD=-0.42,95%CI=-0.76~0.08,P=0.01)。显示AC基因型比AA基因型人群TG水平更高,差异显著(MD=-0.42,95%CI=-0.76~0.08,P=0.01)。CC基因型病例组人群的LDL-C显著高于AA基因型病例组人群(MD=-0.40,95%CI=0.06~0.73,P=0.02);AA基因型比CC基因型对照组人群有着更高的TC水平(MD=-0.35,95%CI=-0.60~0.10,P=0.007);AC基因型对照组人群的TG水平高于CC基因型对照组人群,差异显著(MD=-0.35,95%CI=-0.61~-0.08,P=0.01);对比对照组人群的CC基因型,AA基因型人群的HDL-C水平更高(MD=-0.15,95%CI=-0.21~0.09,P=0.0000098)。结论 CYP7A1-204A/C多态性与GSD风险在亚洲人群中无相关性;但是,CYP7A1-204A/C多态性与血清脂质水平有显著相关性。     

PAI-14G/5G基因多态性与严重急性呼吸综合征后骨坏死

[目的]测定严重急性呼吸窘迫综合征(SARS)后骨坏死患者低纤溶倾向的纤溶酶原激活抑制物PAI和相关基因PAI-4G/5G基因多态性与国人SARS后骨坏死的关系,以便于非创伤性骨坏死的早期诊断和易感人群的筛选.[方法]取61例SARS后骨坏死患者抽取空腹肘静脉血.另取健康人群52名为对照,应用凝血仪、酶联免疫吸附(ELISA)方法测定PAI值,应用PCR 固相寡核苷酸连接分析(SPOLA)法测定PAI-1基因4G/5G多态性.[结果]SARS后骨坏死患者PAl异常明显PAI(15.64±1385)U/ml VS(7.96±4.27)U/ml,PAl-1基因4G/4G在骨坏死人群中增高,但统计学未见差异性,血浆PAI活性与4G/4G纯合子基因型密切相关.[结论]SARS后骨坏死患者的凝血指标异常,PAI可作为骨坏死易感因素的筛选指标.PAI-1基因4G/4G可能是国人骨坏死的遗传标记.