TGF-β1磷酸化Smad4调控结直肠癌对奥沙利铂的反应性

[目的]探究转化生长因子β1(TGF-β1)通过靶向其下游基因SMAD家族成员4(Smad4),调节结直肠癌细胞对奥沙利铂敏感性的机制研究。[方法]根据结直肠患者对奥沙利铂的敏感性将其分为耐药组以及非耐药组,采用ELISA检测患者血清中TGF-β1的表达量,采用免疫组化检测患者体内Smad4磷酸化水平。采用Western blot检测结直肠癌细胞中Smad4磷酸化水平的变化,采用CCK8检测结直肠癌细胞增殖能力的变化。[结果]结直肠癌患者血清中TGF-β1表达量高于正常组(P<0.001),耐药组患者血清中TGF-β1的表达量高于非耐药组(P<0.001)。癌组织中Smad4磷酸化水平高于癌旁组织(P<0.001),且耐药组患者癌组织Smad4磷酸化水平高于非耐药组(P<0.001)。Pearson相关性分析显示耐药组血清中的TGF-β1表达水平与Smad4磷酸化程度呈正相关性。进一步证实TGF-β1刺激可增加结直肠癌细胞的耐药性;敲减Smad4后,结直肠癌细胞的耐药性下降。[结论]TGF-β1可通过靶向Smad4调控结直肠癌细胞对奥沙利铂的耐药性。     

AZGP1在老年结直肠癌患者中的预后价值及其下调后对结直肠癌细胞的影响

目的探讨锌-α2-糖蛋白1(AZGP1)在老年结直肠癌组织中的表达和临床意义,及其对结直肠癌细胞恶性增殖能力的影响和可能的机制。方法选取行手术切除的结直肠癌存档蜡块和癌旁正常组织(距病变部位5 cm处,且证实为无癌浸润)石蜡标本各70例,应用免疫组织化学法检测结直肠癌组织及癌旁组织中AZGP1蛋白的表达,分析蛋白的表达与结直肠癌临床病理特征间的关系,并进行生存分析。然后通过慢病毒感染的方式成功敲低HCT116、SW480细胞系中AZGP1的表达水平,采用MTT实验检测AZGP1敲低后细胞的增殖情况;采用克隆形成实验检测AZGP1敲低后细胞的克隆形成能力;采用流式细胞技术检测敲低AZGP1后细胞周期的改变;Western blotting检测细胞G_1/S期调控分子cyclin D1、促凋亡分子active-caspase-3及PI3K/AKT信号通路蛋白PI3K、AKT和磷酸化AKT(p-AKT)表达情况。结果 AZGP1蛋白在结直肠癌组织中的表达较癌旁正常组织明显上调,蛋白表达与结直肠癌患者临床分期、肿瘤浸润程度、肿瘤大小、肝脏转移显著相关,而与患者性别、淋巴结转移、肿瘤分化程度无关。生存分析结果提示AZGP1高表达组的患者生存率明显低于低表达组。RT-PCR实验显示:感染慢病毒后HCT116、SW480细胞中AZGP1表达水平显著下降。MTT实验显示:敲低AZGP1可降低结直肠癌细胞的增殖能力,差异有统计学意义。细胞克隆实验显示:敲低AZGP1可降低结直肠癌细胞的克隆形成能力。流式细胞术检测结果显示:敲低AZGP1后G_1期细胞数增加,S期细胞数减少,差异有统计学意义。Western blotting实验显示:敲低AZGP1可降低cyclin D1表达,增加active-caspase-3表达;同时发现,敲低AZGP1后,PI3K和p-AKT蛋白表达下降。结论 AZGP1蛋白在结直肠癌组织中高表达,并可能与结直肠癌的转移及不良预后相关。敲低AZGP1可阻断结直肠癌细胞G_1/S期,抑制结直肠癌细胞的恶性增殖,促进凋亡;并且PI3K/AKT信号通路可能参与其中。     

miRNA-31在结直肠癌细胞中的表达及其作用机制的研究

目的探讨miRNA-31在结肠癌细胞生长及转移过程中的作用,为结直肠癌发生、转移机理提供实验依据。方法采用miRNA检测芯片分析10例结直肠癌患者癌组织和癌旁正常组织的miRNA表达谱;RT-PCR检测结直肠癌细胞系与正常结肠细胞miRNA的差异表达;用RT-PCR和免疫印迹等方法进行miRNA-31生物学功能验证;观察结直肠癌细胞系中miRNA-31及其调控靶基因对细胞增殖、周期和侵袭能力的调控作用。结果与癌旁对照组织相比,miRNA-31在结直肠癌组织中高效表达,并与另外39例患者结直肠癌组织标本检测一致,同时miRNA-31的表达水平与结直肠癌患者肿瘤组织的转移性和TNM分期有关。miRNA-31可促进结直肠癌细胞系HCT-116细胞的增殖和侵袭。结论 miRNA-31可作为结直肠癌发生发展的潜在分子标志物,为结直肠癌的临床检测提供新的检测靶点。     

LAPTM4β在人结直肠癌耐药细胞株中的表达及意义

目的建立耐奥沙利铂(L-OHP)的人结直肠癌耐药细胞株(HT-29/L-OHP),检测相关耐药基因LAPTM4β的表达,探讨其在L-OHP耐药中的作用机制。 方法采用药物浓度梯度递增间歇诱导法建立人结直肠癌耐药株HT-29/L-OHP;应用LAPTM4β-35蛋白抑制剂作用于HT-29/L-OHP细胞株后,流式细胞技术检测细胞凋亡,比较其与HT-29/L-OHP细胞株对于L-OHP的耐药情况;应用RT-PCR检测LAPTM4β mRNA的表达;应用Western blot测定LAPTM4β-35蛋白的表达。 结果成功建立人结直肠癌耐药细胞株HT-29/L-OHP,流式细胞技术检测结果表明应用LAPTM4β-35蛋白抑制剂作用于HT-29/L-OHP细胞株后,其对于L-OHP的耐药明显低于HT-29/L-OHP细胞株。HT-29/L-OHP细胞株中LAPTM4β mRNA表达水平明显高于亲本细胞株HT-29,分别为5.613±0.139和1.105±0.187,(P<0.05),LAPTM4β-35蛋白在HT-29/L-OHP细胞和HT-29细胞的相对表达量2.203±0.080和1.033±0.070,(P<0.05)。 结论LAPTM4β在结直肠癌耐药细胞株中过表达,与结直肠癌奥沙利铂耐药密切相关,可以作为结直肠癌耐药的一个敏感的生物学标志物。     

miR-574-3p在结直肠癌中的表达和作用机制研究

目的检测并分析结直肠癌组织和细胞系中miR-574-3p的表达情况及其对结直肠癌细胞发生、发展的影响。方法收集武汉市第三医院11对手术切除结直肠癌患者的癌组织和对应癌旁组织,3种结直肠癌细胞系和1种正常结直肠上皮细胞,通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测临床样本及结直肠癌细胞系中miR-574-3p的表达水平;通过转染miR-574-3p mimic及相应对照mimic NC实现上调结直肠癌细胞(HCT-8、HCT-116)中miR-574-3p的表达水平,采用CCK-8、EdU、克隆形成实验、流式凋亡实验和流式细胞周期实验检测过表达miR-574-3p后对结直肠癌细胞的增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果癌旁组织中miR-574-3p的表达差异倍数显著高于对应癌组织(P<0.05),在3种结直肠癌细胞系中miR-574-3p的表达较正常结肠上皮细胞也显著降低(P<0.05)。CCK-8、EdU、克隆形成实验表明,过表达miR-574-3p抑制结直肠癌细胞的增殖能力。流式凋亡实验结果显示,过表达miR-574-3p促进结直肠癌细胞的凋亡能力。流式细胞周期结果显示,过表达miR-574-3p使结直肠癌细胞发生G₀/G₁期阻滞。结论结直肠癌组织和细胞系中的miR-574-3p均低表达,上调结直肠癌细胞(HCT-8、HCT-116)中miR-574-3p可以抑制细胞增殖,促进凋亡并发生G₀/G₁期阻滞。     

X染色体连锁的凋亡抑制蛋白在胰腺癌组织及细胞中的表达及与化疗耐药的关系

目的研究X染色体连锁的凋亡抑制蛋白（XIAP）在胰腺癌组织及细胞中的表达情况，并探讨XIAP表达与胰腺癌细胞对化疗药物耐药性之间的关系。方法运用免疫组化染色法研究XIAP在胰腺癌组织中的表达水平以及与临床分期、病理分级之间的关系；用5-氟尿嘧啶（5-FU）间歇诱导SW1990提高其对药物的耐药性，以逆转录-聚合酶链反应（RTPCR）和Western印迹检测XIAP在胰腺癌细胞系中表达的改变，探讨与细胞耐药性之间的关系。结果在胰腺癌（20／23，89．6％）、正常胰腺组织（4／12，33．3％）和SW1990细胞中均有XIAP的表达。胰腺癌组织中的表达阳性率（P〈0．01）以及表达水平均强于癌旁正常胰腺组织（P〈0．05）；5-FU可诱导SW1990的耐药性（P〈0．01）和XIAP的表达水平升高（P〈0．05），XIAP的表达水平与细胞耐药性之间存在相关性（P〈0．05）。结论XIAP在胰腺癌中的表达水平升高，可能与胰腺癌的化疗耐药性、恶性转化以及增殖有关，可以作为胰腺癌基因治疗的一个新靶点。     

IQGAP3在结直肠癌组织中的表达及其与临床预后的关系

目的 探讨含三磷酸鸟苷水解酶激活蛋白的IQ基序(IQGAP)3在结直肠癌组织中的表达及其与临床预后的关系。方法 收集157例病理诊断为结直肠癌患者的癌组织和癌旁正常组织。评估IQGAP3在结直肠癌中的表达水平,检测IQGAP3表达与临床和病理特征及预后的相关性。结果 在结直肠癌组织中,IQGAP3水平显著上调(P<0.05)。IQGAP3高表达与淋巴结转移、更高的肿瘤标志物水平和更短的总生存期相关(均P<0.05)。在细胞水平研究发现,IQGAP3在结肠癌细胞系HT-29中表达显著升高(P<0.05),而在IQGAP3基因敲除后,结直肠癌细胞的增殖和迁移能力明显受到了抑制(P<0.05)。结论 结直肠癌组织IQGAP3的高表达是结直肠癌预后不良的有效标志物,可以作为今后治疗的潜在预测标志物。     

miR-646调控BIRC5基因表达对结直肠癌细胞增殖与侵袭的影响

目的检测微小RNA-646(miR-646)与含杆状病毒凋亡抑制蛋白重复序列蛋白5(BIRC5)基因在结直肠癌组织表达情况,探讨miR-646对结直肠癌细胞(HT-29)增殖、迁移及侵袭的影响。方法 2018年4月-2020年12月在本院行手术治疗的结直肠癌患者72例,手术中取结直肠癌组织及癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-646、BIRC5 mRNA表达水平。体外培养结直肠癌细胞系HT-29细胞并随机分为对照组、miR-646阴性对照(NC)组和miR-646模拟物(mimics)组(设正常结肠上皮细胞CCD841对照),RT-qPCR检测各组HT-29细胞miR-646、BIRC5 mRNA的表达;MTT法检测HT-29细胞存活率变化;Transwell小室法检测HT-29细胞迁移与侵袭情况;Western blot检测HT-29细胞凋亡抑制蛋白Survivin、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及MMP-9表达的变化;双荧光素酶报告验验证miR-646与BIRC5基因的靶向关系。结果与癌旁组织和正常结肠上皮细胞CCD841细胞比较,结直肠癌组织与HT-29细胞miR-646相对表达水平显著降低,BIRC5 mRNA相对表达水平显著升高(P0.05)。targetscan数据库预测miR-646与BIRC5基因3’UTR区有结合位点。与BIRC5-3’UTR-WT+miR-646 NC组(0.81±0.09)比较,BIRC5-3’UTR-WT+miR-646 mimics组(0.28±0.04)荧光素酶活性降低(P0.05);与对照组[(3.04±0.21)个、(3.41±0.24)个、(98.56±0.64)%]和miR-646 NC组[(2.96±0.25)个、(3.32±0.23)个、(97.94±0.57)%]相比,miR-646 mimics组HT-29细胞miR-646表达水平显著升高(P0.05),细胞存活率[(47.34±1.78)%]、迁移数[(1.35±0.08)个]与侵袭数[(1.48±0.05)个]、BIRC5和Survivin蛋白、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均显著降低(均P0.05)。结论 miR-646与BIRC5基因存在靶向关系,可能通过靶向抑制BIRC5基因的表达抑制HT-29细胞的增殖、迁移与侵袭。     

miR-646调控BIRC5基因表达对结直肠癌细胞增殖与侵袭的影响北大核心CSCD

目的检测微小RNA-646(miR-646)与含杆状病毒凋亡抑制蛋白重复序列蛋白5(BIRC5)基因在结直肠癌组织表达情况,探讨miR-646对结直肠癌细胞(HT-29)增殖、迁移及侵袭的影响。方法 2018年4月-2020年12月在本院行手术治疗的结直肠癌患者72例,手术中取结直肠癌组织及癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-646、BIRC5 mRNA表达水平。体外培养结直肠癌细胞系HT-29细胞并随机分为对照组、miR-646阴性对照(NC)组和miR-646模拟物(mimics)组(设正常结肠上皮细胞CCD841对照),RT-qPCR检测各组HT-29细胞miR-646、BIRC5 mRNA的表达;MTT法检测HT-29细胞存活率变化;Transwell小室法检测HT-29细胞迁移与侵袭情况;Western blot检测HT-29细胞凋亡抑制蛋白Survivin、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及MMP-9表达的变化;双荧光素酶报告验验证miR-646与BIRC5基因的靶向关系。结果与癌旁组织和正常结肠上皮细胞CCD841细胞比较,结直肠癌组织与HT-29细胞miR-646相对表达水平显著降低,BIRC5 mRNA相对表达水平显著升高(P<0.05)。targetscan数据库预测miR-646与BIRC5基因3’UTR区有结合位点。与BIRC5-3’UTR-WT+miR-646 NC组(0.81±0.09)比较,BIRC5-3’UTR-WT+miR-646 mimics组(0.28±0.04)荧光素酶活性降低(P<0.05);与对照组[(3.04±0.21)个、(3.41±0.24)个、(98.56±0.64)%]和miR-646 NC组[(2.96±0.25)个、(3.32±0.23)个、(97.94±0.57)%]相比,miR-646 mimics组HT-29细胞miR-646表达水平显著升高(P<0.05),细胞存活率[(47.34±1.78)%]、迁移数[(1.35±0.08)个]与侵袭数[(1.48±0.05)个]、BIRC5和Survivin蛋白、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均显著降低(均P<0.05)。结论 miR-646与BIRC5基因存在靶向关系,可能通过靶向抑制BIRC5基因的表达抑制HT-29细胞的增殖、迁移与侵袭。     

miR-503在结直肠癌组织和细胞中的表达及对细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨microRNA-503(miR-503)在结直肠癌组织和细胞中的表达情况及其对细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法采用实时定量PCR(qPCR)检测54例结直肠癌组织及4种结直肠癌细胞(SW480、Lovo、LS174T和HT-29)中的miR-503水平,分析结直肠癌组织miR-503表达与常见临床病理参数的关系,采用脂质体转染miR-503模拟物(mimics)至miR-503水平最低的细胞,采用MTT法、流式细胞仪及Transwell法检测过表达miR-503对细胞增殖、凋亡、细胞周期和侵袭的影响。结果 54例结直肠癌组织的miR-503相对表达量为(0.257±0.011),低于癌旁组织(P0.05),且miR-503水平与TNM分期、分化情况、肿瘤大小和术前癌胚抗原均有关(P0.05);与人正常结肠细胞系CCD-18Co相比,4种不同恶性程度结直肠癌细胞SW480、Lovo、LS174T和HT-29的miR-503相对表达量依次为(0.342±0.072)、(0.161±0.054)、(0.260±0.041)和(0.415±0.086),差异均有统计学意义(P0.05);与对照组相比,转染miR-503 mimics后的细胞增殖抑制率和凋亡率均升高,G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期细胞比例均降低,穿膜细胞数减少(P0.05)。结论 miR-503在结直肠癌组织和细胞中低表达,且与结直肠癌的临床病理参数有关,上调miR-503水平可抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭并诱导细胞周期阻滞和凋亡。     

长非编码RNA H19在结直肠癌化疗敏感性中的作用研究

目的研究长非编码RNA H19在结直肠癌化疗药物敏感性中作用。 方法分别构建lncRNA H19稳定过表达及表达沉默的结肠癌细胞株,分别加入5-FU培养,RT-qPCR检测H19表达,MTT法检测各组细胞增殖率,通过划痕实验检测各组迁移能力;Western blot检测各组细胞凋亡蛋白、耐药蛋白MDR1、MRP1和BCRP表达。 结果与正常细胞比较,lncRNA H19在结直肠癌细胞中表达升高,lncRNA H19稳定过表达组细胞增殖率明显高于H19表达沉默组,lncRNA H19稳定过表达组细胞48 h迁移距离明显大于H19表达沉默组,lncRNA H19稳定过表达组Bax蛋白表达下调,BCL-2、MDR1、MRP1和BCRP表达上调,H19表达沉默组Bax蛋白表达上调,BCL-2、MDR1、MRP1和BCRP表达下调。 结论lncRNA H19高表达的结直肠癌降低结直肠癌对化疗药物的敏感性,下调lncRNA H19表达可提高化疗药物的疗效。     

EYA4基因在结直肠癌中的甲基化状态及其意义

背景：EYA4（eyes absent4）是一种非巯基蛋白酪氨酸磷酸酶,参与器官发育、细胞凋亡调控、先天性免疫、DNA损伤修复、血管生成等过程。目的：研究EYA4基因在结直肠癌中的甲基化状态及其意义。方法：选取2006年6月～2007年1月上海交通大学医学院附属仁济医院31例结直肠癌患者,采集其癌组织和相应癌旁非癌组织。以5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza—dC）处理人结肠癌细胞株HT29、HCT116、SW480、SW1116。应用MSP技术检测结直肠癌组织、癌旁非癌组织、HT29、HCT116、SW480、SW1116细胞中EYA4基因启动子的甲基化状态。分析结直肠癌患者临床病理特征与EYA4基因甲基化关系。采用RT—PCR和蛋白质印迹法分别检测结肠癌细胞株中EYA4基因和蛋白的表达水平。结果：结直肠癌组织EYA4基因启动子甲基化率显著高于癌旁组织（77．4％对6．5％,P〈0．01）。EYA4基因和蛋白在启动子甲基化的HT29、HCT116、SW480细胞中不表达,在启动子非甲基化的SW1116细胞中显著表达。以5-Aza—dC处理后EYA4基因和蛋白在LIT29和SW480细胞中表达上调。结论：EYA4基因是结直肠癌发生的甲基化相关基因,有望成为结直肠癌的诊断标记物。     

miR-128-3p靶向xCT基因在结直肠癌中的分子机制及其与肠癌患者临床病理特征的相关性

背景结直肠癌(colorectal carcinoma, CRC)是临床上最为常见的消化系统恶性肿瘤,但结直肠癌细胞增殖和迁移的分子机制并为完全阐明.胱氨酸/谷氨酸反转运体X(cystine/glutamate antiporter, x CT)被证实在多种肿瘤中高表达并与细胞的铁死亡有关.目的探讨mi R-128-3p靶向x CT基因抑制结直肠癌细胞增殖、侵袭的分子机制及其与患者临床病理特征关系.方法癌症基因图谱(the cancer genome atlas, TCGA)、Oncomine数据库中比较胱氨酸/x CT基因在人结直肠癌及多种实体肿瘤中的表达.肿瘤免疫(tumor immune estimationresource, TIMER)数据库中分析x CT表达水平与淋巴细胞浸润程度关系.基因表达综合(gene expression omnibus, GEO)数据库下载结直肠癌患者癌组织vs癌旁组织差异表达mi RNA数据集GSE18392,筛序癌组织与癌旁组织差异表达mi RNA,筛选条件为Log2FC1, adj P0.05. micro RNA靶基因在线预测算法(Targetscan, mi RDB和Star Base)预测x CT上游靶mi RNA.GSE18392差异表达mi RNA和预测靶基因取交集得到mi R-128-3p.并采用双荧光素酶报告实验验证mi R-128-3p与x CT靶向调控关系.实时荧光定量聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative polymerase chainreaction,RT-PCR)检测人正常肠上皮细胞及人结直肠癌细胞系、38例结直肠癌患者癌组织和癌旁组织中x CT及mi R-128-3p表达水平.溴化噻唑蓝四氮唑[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT)]实验和划痕实验观察转染外源性mi R-128-3p-mimic后人结癌细胞(SW480)增殖和迁移能力有无改变.结果结直肠癌组织x CT表达水平显著高于癌旁正常组织(P 0.05).筛选并预测mi R-128-3p为x CT上游靶向调控基因.荧光素酶报告基因显示, mi R-128-3p可靶向结合x CT基因3’UTR区域. x CT在人结直肠癌细胞系(HT-29,SW480,Lo Vo及SW620)中的表达水平显著高于正常肠上皮细胞(NCM460),(P0.05),而mi R-128-3p在人结直肠癌细胞系中的表达水平显著低于正常肠上皮细胞异(P0.05).转染外源性mi R-128-3p mimic可显著下调SW480细胞中x CT表达水平,并抑制SW480细胞增殖和迁移能力. x CT在38例结直肠癌患者癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织(P0.05),而mi R-128-3p在癌组织中相对表达水平显著低于癌旁组织(P0.05).癌组织中mi R-128-3p与x CT表达负相关(rpearson=-0.43,P 0.05).免疫组化显示x CT阳性表达于细胞膜,呈棕黄色颗粒,在癌组织中阳性率63.2%. x CT阳性表达与肿瘤分化(P0.05)和脉管浸润(P0.05)有关. x CT表达水平与结肠癌CD8+T细胞,中性粒细胞,树突状细胞浸润有关(P0.05),与直肠癌CD8+T细胞和中性粒细胞浸润有关(P0.05),而于其他淋巴细胞浸润水平无关(P0.05).结论x C T在结直肠癌中表达上调,m i R-128-3p可通过与x C T基因3’ U T R结合抑制肠癌细胞的增殖和迁移,mi R-128-3p/x CT通路有望成为肠癌靶向治疗新的潜在靶点.     

趋化因子受体CCR7在结直肠癌中的异常表达

目的: 检测趋化因子受体CCR7在结直肠癌中的表达状态,探讨CCR7在结直肠癌发病中的作用.方法:采用免疫组化检测标本中CCR7蛋白表达,逆转录PCR(RT-PCR)检测CCR7mRNA表达,Western blotting检测结肠癌细胞CCR7蛋白表达.结果:45例结直肠癌组织标本检出CCR7 mRNA表达,而其相应的癌旁组织中12例检出(x2=34.44,P<0.01).34例结直肠癌组织标本检出CCR7蛋白表达,其相应的癌旁组织中,则有6例检出(x2=28.51,P<0.01).结肠癌细胞SW-480中CCR7mRNA和蛋白表达显著,而在HT-29中表达较弱.结论:CCR7参与结直肠癌的发病过程,其表达与结直肠癌转移有关.     

非小细胞肺癌组织中耐药相关基因的表达及意义

目的探讨耐药相关基因在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及意义。方法应用RT-PCR半定量法检测60例未行化放疗的NSCLC患者癌组织及癌旁组织中耐药相关基因[多药耐药相关蛋白1（MRP1）、肺耐药蛋白（LRP）、乳腺癌耐药蛋白（BCRP）、切除修复交叉互补基因1（ERCC1）]mRNA的表达。结果与癌旁组织比较,癌组织中MRP1、LRP、ERCC1 mRNA表达显著升高,BCRP mRNA显著降低（P〈0.05）;BCRP mRNA在癌组织和癌旁组织中的表达呈正相关（rs=0.339,P=0.008）,癌组织中MRP1 mRNA与LRP mRNA、BCRP mRNA与ER-CC1 mRNA呈正相关。COX多因素回归分析示,MRP1 mRNA高表达是影响预后的独立因素（RR=4.784,P=0.026）。结论检测MRP1 mRNA对预测NSCLC患者生存期、协助临床选择化疗方案可能具有一定意义。     

Rab5A在结直肠癌中的表达及其意义

背景:结直肠癌是消化系统常见恶性肿瘤之一,多数患者确诊时已为进展期,预后较差,早期诊断对改善患者预后尤为重要。目前,分子标记物诊断结直肠癌备受关注。目的:探讨Rab5A在结直肠癌中的表达及其意义。方法:收集135例行结直肠癌切除术患者的癌组织及其配对癌旁非癌组织。采用real-time PCR检测21例患者癌组织及其配对癌旁非癌组织以及结肠癌细胞株HCT116、HT-29、LoV o、SW480和正常结肠上皮细胞株NCM460中的Rab5A mRNA表达;采用蛋白质印迹法检测4例患者癌组织及其配对癌旁非癌组织中的Rab5A蛋白表达;采用免疫组化法检测110例患者癌组织中的Rab5A蛋白表达;分析Rab5A表达与结直肠癌临床病理特征和预后的关系。结果:结直肠癌组织中的Rab5A mRNA表达水平显著高于癌旁非癌组织(P=0.003);结肠癌细胞株HCT116、HT-29、LoV o、SW480中的Rab5A mRNA表达水平显著高于正常结肠上皮细胞株NCM460(P0.05)。结直肠癌组织中的Rab5A蛋白表达水平显著高于癌旁非癌组织。110例结直肠癌组织中,51例(46.4%)为Rab5A低表达,59例(53.6%)为Rab5A高表达。Rab5A蛋白表达与肿瘤大小、血清癌胚抗原(CEA)水平和TNM分期相关(P=0.008;P=0.002;P=0.010)。Rab5A高表达患者的3年生存率显著低于低表达者(52.1%对77.5%,P0.05)。Rab5A、血清CEA和TNM分期与结直肠癌患者的预后相关(P=0.009;P=0.006;P=0.017),是影响预后的独立因素(P=0.026;P=0.032;P=0.014)。结论:Rab5A参与了结直肠癌的恶性演进过程,其高表达提示患者预后不良,可作为预测结直肠癌患者预后的有效指标。     

miR-199对结直肠癌细胞增殖、侵袭的影响及机制

目的 探讨微小RNA-199(miR-199)对结直肠癌细胞增殖、侵袭的影响及其作用机制。方法 常规培养人正常结肠上皮细胞系（HCoEpiC细胞）、结直肠癌细胞系（LOVE、SW620、SW480、HT29、DLD-1细胞），用实时定量PCR法检测细胞中miR-199表达。将SW620细胞随机分为miR-199过表达组、阴性对照组及miR-199+转铁蛋白受体1(TFR1)共表达组（miR-199mimics+TFR1组），分别将miR-199mimics、mimic-NC、miR-199mimics+TFR1过表达质粒转染至细胞内；另取部分未转染细胞作为空白对照组。实时荧光定量PCR法检测TFR1 mRNA表达，MTT实验检测细胞增殖能力，Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力，Western blotting法检测TFR1蛋白表达，生物学软件TargetScan及双荧光素酶报告基因实验分析miR-199的靶基因。结果 人结直肠癌细胞系中miR-199相对表达量均低于人结肠上皮细胞系（P均<0.05），且SW620细胞中miR-199相对表达量最低，故选SW620细胞为实验...     

结直肠癌患者组织中CST1基因表达的相关研究及其临床意义

[目的]探讨CST1在结直肠癌中的表达及其临床意义。[方法]采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测课题组2013～2015年收集的195例确诊结直肠癌患者的癌组织及对应癌旁正常组织中CST1的表达量,并根据其表达量高低分为高表达组和低表达组;分析CST1表达量与结直肠癌患者临床特征、生存期之间的关系;通过过表达CST1的表达后检测其对结直肠癌细胞系增殖、迁移和侵袭能力的影响。[结果]CST1在结直肠癌组织中表达量高于对应癌旁正常组织(0.0062±0.0198vs.0.0032±0.0139,P=0.026);CST1高表达与结直肠癌患者分期(χ~2=16.465,P0.001)、是否原位癌(χ~2=10.739,P=0.013)、淋巴结转移(χ~2=14.461,P=0.001)、远端转移(χ~2=17.278,P0.001)相关;CST1高表达与结直肠癌患者生存期明显缩短(χ~2=13.04,P0.001)CST1过表达后促进结直肠癌细胞增殖(F=43.88,P=0.0002)、迁移(78.0±6.7 vs.51.2±10.6,P0.001)和侵袭(63.6±8.0vs.43.0±9.3,P0.001)相关。[结论]CST1在结直肠癌中高表达,且高表达将缩短结直肠癌患者生存期,过表达CST1能够促进结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

小干扰RNA表达质粒转导逆转人结肠癌羟基喜树碱耐药表型的研究

目的探讨结肠癌羟基喜树碱(HCPT)多药耐药现象的逆转策略。方法应用RT-PCR法检测结肠癌HCPT耐药细胞中耐药相关基因的表达;构建并转导乳腺癌耐药蛋白(BCRP)基因小干扰RNA(siRNA)表达质粒;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法进行药物敏感实验;流式细胞仪测定细胞周期分布;软琼脂克隆形成实验检测肿瘤细胞体外成瘤性;RT-PCR和Western印迹法测定BCRP基因敲除效果。结果SW1116/HCPT细胞8个耐药相关基因中,2个表达下调,4个表达上调,还有2个表达无明显改变;成功构建BCRP基因siRNA表达质粒,转染效率约42%;与耐药细胞相比,转染细胞对HCPT敏感性增加,IC_(50)下降62.5%;转染细胞周期分布有明显改变:G1期细胞减少,S期细胞增加;转染细胞体外成瘤性下降,形成克隆体积减小;RT-PCR和Western印迹显示,转染细胞中BCRP基因mRNA和蛋白质的表达下降甚至消失。结论siRNA表达质粒转导是逆转结肠癌HCPT耐药现象的一种有效手段。     

韦荣氏球菌调节结直肠癌细胞PI3K通路的分子机制研究

目的探讨结直肠癌小鼠结直肠中的韦荣氏球菌Veillonellaparvula对结直肠癌细胞的影响。方法 AOM/DSS诱导C57BL/6小鼠形成结直肠癌后,收集结直肠内容物并涂布于LB平板进行培养。挑取平板上的单克隆菌落进行摇菌培养,取韦荣氏球菌Veillonellaparvula菌液上清处理结直肠癌细胞HT-29,微量滴定板法检测其活力;质谱分析上清中的蛋白质并进行纯化。用纯化的蛋白处理结直肠癌细胞HT-29,检测其活力和相关通路。结果取结直肠癌小鼠结直肠中的韦荣氏球菌Veillonellaparvula培养上清处理HT-29细胞,细胞活力显著增强(P0.05)。收集Veillonellaparvula培养上清作质谱分析,评分大于150的分泌蛋白有12个,分别是RIW09983.1、EQC65645.1、WP_004692917.1、SNU97803.1、EQC64312.1、SNU98422.1、PKZ92195.1、EQC65720.1、WP_174892117.1、WP_060919644.1、KXB83763.1和EQC67766.1。将上述蛋白纯化后以10μg/ml的浓度处理结直肠癌细胞HT-29后,其中EQC65720.1能够显著增强结直肠癌细胞HT-29的活力(P0.05)。同时,将EQC65720.1(GroEL)以10μg/ml的浓度处理结直肠癌细胞SW620、COLO 205、HCT 116、LoVo、RKO、SW480、CT26.WT和LS513,细胞活力均显著增强(P0.05)。用10μg/ml GroEL处理结直肠癌细胞HT-29,JNK、ERK、p-JNK、p-ERK和AKT的表达水平无显著变化(P0.05),p-AKT的表达水平显著增强(P0.05)。加入PI3K/AKT通路抑制剂LY294002后再用GroEL和LY294002同时处理,结直肠癌细胞HT-29的活力无显著变化(P0.05)。结论韦荣氏球菌通过分泌GroEL蛋白激活结直肠癌细胞PI3K/AKT通路,并能促进结直肠癌细胞的活力。