食品中荧光假单胞菌的危害及其快速检测方法研究进展

荧光假单胞菌(Pseudomonas Fluorescens)隶属于假单胞菌属,是食品中常见的一种嗜冷致病微生物。它能够产生极其耐热的蛋白酶和脂肪酶,这些酶在高温处理后仍有残留,并在食品储藏过程中继续分解其中的脂肪和蛋白质,导致产品的风味和质地发生变化。因此,研发出一种既快速又实用的荧光假单胞菌检测方法成为食品行业关注的焦点。本文对食品中荧光假单胞菌的危害特点及国内外的一些快速检测方法,如聚合酶链式反应(PCR)、荧光定量PCR、荧光原位杂交、流式细胞术等方法进行了综述,比较各方法的优缺点并展望了荧光假单胞菌快速检测方法的发展趋势。      

聚合酶链式反应技术快速检测原料乳中荧光假单胞菌

目的 利用PCR（polymerase chain reaction）技术建立一种快速、准确检测原料乳中最常见有害嗜冷微生物——荧光假单胞菌的方法。方法 以荧光假单胞菌蛋白酶基因aprX为检测靶标,设计特异性PCR简并引物,建立原料乳中荧光假单胞菌PCR检测体系,对该体系的特异性及检测限进行评价。结果 筛选到特异性引物F3：5’-WSNGGNGGNGAYTTYCAYATGAC-3’;R3：5’-RTCRTTNCCNCCNCCRTCCC-3’,建立了最佳PCR检测体系：引物浓度0.5 μmol/L、Taq DNA聚合酶添加量0.4 μL、dNTPs浓度0.16 mmol/L、Mg²⁺浓度1.6 mmol/L,退火温度56.4 ℃,扩增35个循环。此检测方法对荧光假单胞菌具有特异性,检测限为2.57×10³ CFU/mL。结论 本方法操作简便,特异性强,检测限低,对快速检测原料乳中嗜冷菌,保障原料乳品质与安全具有一定参考意义。     

金枪鱼保鲜技术及其假单胞菌适冷机制的研究进展

金枪鱼肉鲜味美,营养丰富,是一种名贵的生食水产品,但其不易保藏,品质易劣变腐败,它的品质和保鲜方法紧密相关。通过冷链流通可以延缓生食水产品中腐败微生物的代谢过程,从而延长水产品的货架期,但其中仍然有部分适冷微生物生长,尤其是假单胞菌,能够在苛刻的低温环境中继续生长。本文主要综述了金枪鱼保鲜技术现状,并从细胞膜调节、低温蛋白酶、冷激蛋白、低温防护剂四个方面系统阐述假单胞菌这一优势腐败菌在低温下的适应机制。假单胞菌适冷机制的研究可以靶向指导金枪鱼冷藏保鲜方法的应用。      

原料乳中假单胞菌噬菌体的分离及部分生物学特性分析

目的是分离原料乳中假单胞菌的噬菌体,以期利用噬菌体控制原料乳中这一主要嗜冷菌。以从原料乳中分离得到的10株假单胞菌(Pseudomonas spp.)为宿主菌,采用双层平板法从当地食品厂和医院的污水中分离并纯化假单胞菌噬菌体,通过透射电镜观察噬菌体的结构,最后研究了温度、pH、盐浓度等因素对噬菌体活性的影响。研究获得了3株噬菌体(PP6、PP8和PP10),发现均为裂菌性噬菌体,初步推断3株噬菌体均为轻小(光滑)噬菌体。噬菌体PP8和PP10在4℃下能保持较高活性,而噬菌体PP6则在37℃下活性较高;3株噬菌体在pH为5～7以及NaCl为1.5%～5.5%的范围内可保持较高活力。本实验研究结果为进一步利用噬菌体控制原料乳中的假单胞菌提供重要的理论基础。      

饮用水中铜绿假单胞菌快速检测的研究进展

铜绿假单胞菌是一种条件致病菌,广泛存在于各类水体环境中,对消毒剂、紫外线等因素具有很强的抵抗力,可引起急性肠道炎等各种疾病。本文主要阐述了5种饮用水中铜绿假单胞菌快速检测技术的优点和具体应用,可为饮用水中铜绿假单胞菌的检验检测和质量控制工作提供参考。     

食品中铜绿假单胞菌实时荧光PCR检测的研究

根据铜绿假单胞菌外毒素A基因片段序列,用Primer express 3.0设计一对特异性引物和一个Taq Man探针,建立铜绿假单胞菌实时荧光PCR检测方法。通过对梯度含量的铜绿假单胞菌标准菌液样品DNA和多种细菌的DNA进行实时荧光PCR检测,来检测其灵敏度和验证引物和探针的特异性。试验结果表明,只有铜绿假单胞菌产生扩增曲线,其他细菌无扩增,说明引物及Taq Man探针特异性较好,检测灵敏度为1×10~3 CFU/m L。该方法具有很好的研究价值和应用前景。     

嗜盐菌及胞外蛋白酶的研究进展

文章围绕嗜盐菌和由其分泌的胞外蛋白酶相关研究领域,从分类学、结构生理生化特征、嗜盐机制及应用现状等方面,对中度嗜盐菌和极端嗜盐菌进行了介绍,并综述了针对嗜盐菌分泌的胞外蛋白酶(包括结构性质、研究历程、应用现状与前景等)的研究成果与方法手段等,并以部分实例加以说明。     

生鲜肉中假单胞菌致腐机制的研究进展

生鲜肉的腐败是一个与多种特定微生物密切相关并受多种外界环境因素影响的生态现象。假单胞菌属是生鲜肉中的优势腐败菌之一;但假单胞菌属对生鲜肉的致腐机制仍然缺乏较为系统的总结,尤其是对影响肉腐败的相关基因调控及表达尚未有定论。因此本文首先概述了假单胞菌的特性、分类及种间差异,进而分析了假单胞菌的污染来源,最后从底物利用(糖代谢、氨基酸代谢、脂代谢等)角度分析了假单胞菌基因水平上的致腐原因,其中调控Entner-Doudoroff途径中相关酶类的基因、调控胞外蛋白酶的AprX基因和编码ABC转运蛋白的基因、编码脂肪酶的lipA基因在不同条件下和不同菌类中表达量的差异可能是导致假单胞菌腐败的根本原因。通过本文的总结,以期为揭示肉品中假单胞菌的腐败机制和控制腐败提供理论参考。     

中国舟山海域海水嗜盐假单胞菌多样性分析

目的 研究中国东海舟山海域海水中嗜盐假单胞菌的分布并评价其抗菌活性.方法 采集中国东海舟山海域(东经121°～123°,北纬29°～31°)海水样品14个.分离、纯化、鉴定其中的微生物种类,并评价其抗菌活性.利用PCR技术筛选分离得到的细菌中非核糖体多肽合成酶(NRPS)的分布情况.结果 分离得到的126株细菌中,82...     

肉鸡中铜绿假单胞菌的研究

目的调查屠宰前肉鸡铜绿假单胞菌的携带情况,为铜绿假单胞菌流行病学的调查和相关疾病的预防控制提供依据。方法采集49份屠宰前肉鸡的肛拭子,并分离可疑菌株,对分离到的菌株进行氧化酶实验、绿脓菌素试验和VITEK生化鉴定实验。结果从49份屠宰前肉鸡中分离出8株可疑菌株,阳性检出率为16.3%。通过形态学观察、生化鉴定,8株可疑菌株均被鉴定为铜绿假单胞菌。8株可疑菌株的生化反应结果符合铜绿假单胞菌的生化反应特点。结论健康肉鸡可携带铜绿假单胞菌。铜绿假单胞菌可作为一种食源性致病菌而危害人类健康。     

原料乳危害及控制措施研究

分析了原料乳的生物性、化学性和物理性危害，针对各种危害的来源提出相应的控制措施．为原料乳HACCP体系的建立提供参考。     

供港原料奶兽药残留危害及控制

讨论了原料奶中药物残留对人类健康以及乳制品加工造成的危害，介绍了中国大陆和香港两地关于原料奶中药物残留的相关规定，提出了控制供港原料奶中药物残留的5项措施，包括提高饲养和防疫管理水平、规范兽药管理、加强牛群管理、使用高效低毒的药物以及加强药残检测。     

原料乳与乳制品中碳水化合物质量控制研究进展

原料乳与乳制品中碳水化合物具有极高的营养价值,对人体健康具有重要作用,但其掺伪现象较普遍,严重影响了原料乳与乳制品的品质。文章综述了原料乳与乳制品中碳水化合物及其掺伪物质检测技术研究进展,旨在为做好原料乳与乳制品中碳水化合物质量控制提供科学依据。      

肉制品加工中有害物检测及控制技术研究进展

随着人们生活水平的提高,肉制品的消费量日益增多,肉制品的安全性也倍受广大消费者的关注。肉制品加工过程中带来或产生的亚硝胺类、杂环胺类、多环芳烃类以及生物胺类等有害物质,一定程度上会危害消费者健康。有关这些有害物质的检测与控制技术已成为肉品科学领域中的研究热点,国内外学者对此展开了大量的研究。本文综述了高效液相色谱法、气相色谱法、液相色谱-质谱法和毛细管电泳法等技术在肉制品有害物检测中的应用研究进展,并阐述了肉制品加工中的有害物质(亚硝酸盐及亚硝胺类、杂环胺类、多环芳烃类以及生物胺类)的控制技术,为建立肉制品加工中有害物质的高效准确检测方法及控制技术提供理论参考。     

原料乳中嗜冷菌产脂肪酶条件的优化

研究了原料乳中嗜冷菌产生脂肪酶的几组影响条件。主要从pH值、培养温度、产酶培养基组成几个方面考虑。优化产酶条件，从而可提高脂肪酶的检测活力，为原料乳中嗜冷菌分泌的脂肪酶的研究奠定理论基础。     

Development of a novel loop-mediated isothermal amplification assay for the detection of lipolytic Pseudomonas fluorescens in raw cow milk from north China

Lipases secreted by psychrotrophic bacteria are known to be heat resistant and can remain active even after the thermal processing of milk products. Such enzymes are able to destabilize the quality of milk products by causing a rancid flavor. Rapid detection of a small amount of heat-resistant lipase-producing psychrotrophic bacteria is crucial for reducing their adverse effects on milk quality. In this study, we established and optimized a novel loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay for the detection of Pseudomonas fluorescens in raw cow milk, as the most frequently reported heat-resistant lipase-producing bacterial species. Pseudomonas fluorescens-specific DNA primers for LAMP were designed based on the lipase gene sequence. Reaction conditions of the LAMP assay were tested and optimized. The detection limit of the optimized LAMP assay was found to be lower than that of a conventional PCR-based method. In pure culture, the detection limit of the LAMP assay was found to be 4.8 × 10¹ cfu/reaction of the template DNA, whereas the detection limit of the PCR method was 4.8 × 10² cfu/reaction. Evaluation of the performance of the method in P. fluorescens-contaminated pasteurized cow milk revealed a detection limit of 7.4 × 10¹ cfu/reaction, which was 10² lower than that of the PCR-based method. If further developed, the LAMP assay could offer a favorable on-farm alternative to existing technologies for the detection of psychotrophic bacterial contamination of milk, enabling improved quality control of milk and milk products.     

Bioactive amines changes in raw and sterilised milk inoculated with Pseudomonas fluorescens stored at different temperatures

The presence of bioactive amines in raw and sterilised milk inoculated with Pseudomonas fluorescens during storage at 4°C, 7°C and 10°C for 6 days was investigated. Spermine, spermidine, putrescine, serotonin and phenylethylamine were present in the samples immediately after milking. Histamine, cadaverine and tyramine were formed in the raw milk on the 4th day of storage at 10°C, increasing significantly afterwards. Cadaverine was formed during sterilisation. There was no significant change in amines, acidity, thermostability and alizarol tests throughout storage of the sterilised milk; however, a putrid smell was detected at every temperature on the 6th day. Therefore, raw or sterilised milk storage at 4–7°C should not exceed 4 days. Furthermore, raw milk should not be stored at 10°C.     

Temperature modulates the production and activity of a metalloprotease from Pseudomonas fluorescens 07A in milk

This work evaluated the expression and activity of a metalloprotease released by Pseudomonas fluorescens 07A in milk. Low relative expression of the protease by the strain was observed after incubation for 12 h at 25°C while the strain was in the logarithmic growth phase. After 24 h, protease production significantly increased and remained constant for up to 48 h, a time range during which the strain remained in the stationary phase. Conversely, at refrigeration temperatures, at 12 h the strain was still in the lag phase and expressed the protease at higher levels than when the logarithmic phase was reached. Casein fractions were highly degraded by P. fluorescens 07A, the purified protease, and the bacterial pellet on d 7 of incubation at 25°C and to a lesser extent at 10°C for the sample incubated with the bacterium. Heat treatment at 90°C for 5 min completely inactivated the proteolytic activity of the purified protease and the bacterial pellet. This work contributes to the knowledge about the conditions of milk storage that influence the production and activity of this extracellular metalloprotease. The results demonstrate the need to find alternative strategies to control the synthesis and activity of proteolytic enzymes in the dairy industry to ensure the quality of processed products.     

绿脓杆菌分子生物学检测的研究进展

绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)是一种临床上常见的条件致病菌。近年来其检测技术取得了一定进展,本文对绿脓杆菌的分子生物学检测技术进行了综述,并对其检测新策略进行了展望。