山奈酚对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响

目的:研究山奈酚(KA)对小鼠T细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨.方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)进行刺激,以不同终浓度的KA与T细胞共培养.流式细胞术结合双色荧光抗体染色,检测T细胞早期活化抗原CD69的表达;MTT法检测KA对T细胞增殖的影响;用碘化丙锭(PI)染色分析T细胞的细胞周期.结果:终浓度为10、20和40 μmol/L的KA可以显著抑制ConA刺激的T细胞CD69的表达,由ConA组的(39.11±1.17)%,分别降低为(30.64±0.23)%、(27.95±0.04)%和(5.63±0.37)%(P<0.05);MTT法结果显示,KA对ConA诱导的小鼠T淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖性;PI染色结果显示,随着KA浓度的增加,均能明显阻止淋巴细胞进入S期和G2/M期.结论:KA可显著抑制ConA刺激下的小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖;它能抑制T淋巴细胞进入细胞分裂期.     

槲皮素对小鼠T细胞体外活化的抑制作用

目的:通过分析槲皮素对淋巴细胞早期活化标记物CD69表达的影响,探讨其对T淋巴细胞体外活化抑制作用的机制。方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂及槲皮素共同培养,分别于2、6、24h收获细胞,进行双色免疫荧光标记,以流式细胞仪对T细胞的CD69分子表达情况进行分析并计算抑制率。结果:槲皮素(终浓度10μmol/L)对未受刺激的T细胞CD69表达百分率无明显影响,而经佛波醇酯(PDB)及刀豆蛋白A(ConA)活化同时加入槲皮素的T细胞CD69表达百分率在2h、6h及24h均显著下降(P＜0.01)。槲皮素对PDB的抑制率随作用时间延长而明显下降,对ConA的抑制率平缓而持久。结论:槲皮素对PDB、ConA活化的T淋巴细胞均显示明显的抑制效应,表明该药可能作用于T细胞活化信号传递通路蛋白激酶Cθ或其下游部位,并且,这种抑制效应表现出一定的可逆性。     

喜树碱对小鼠T淋巴细胞活化、增殖以及细胞周期的影响

目的： 研究喜树碱（CPT）对刀豆蛋白A(ConA)介导的小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖及细胞周期的影响。方法：以ConA刺激小鼠T淋巴细胞，建立小鼠T淋巴细胞活化、增殖的模型，以不同浓度的CPT作用于该模型，流式细胞术检测T细胞早期活化标志CD69分子的表达；以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸（CFDA-SE）染色流式细胞术分析CPT 在Con A刺激下小鼠淋巴细胞的增殖相关指数（PI）；以碘化丙啶染色流式细胞术分析细胞周期的分布情况。 结果： ConA作用6 h后流式细胞术分析显示CD69的表达率为（58.88±0.55）%，不同浓度的CPT组（10 nmol/L、20 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L）CD69的表达率分别为（55.48±0.98）%、（54.67±1.05）%、（50.40±0.82）%、（42.47±1.32）%，均可明显抑制CD69的表达(P<0.01)；ConA刺激48 h后流式细胞术分析显示，不同浓度的 CPT 组（10 nmol/L、20 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L）的增殖指数（PI）明显低于对照组(P<0.05)；细胞周期分析显示刺激48 h后不同浓度的CPT组（10 nmol/L、20 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L）均出现明显的凋亡峰（apoptosis peak，AP），sub-G1期、G₀/G₁期细胞的比率明显高于ConA刺激组(P<0.01)。结论：CPT可明显抑制ConA刺激的T淋巴细胞的活化、增殖，同时使淋巴细胞阻滞于G₀/G₁期。     

淫羊藿甙对小鼠T淋巴细胞体外中期和晚期活化的影响

目的:研究淫羊藿甙(ICA)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T淋巴细胞体外中期和晚期活化的影响.方法:采用流式细胞术(FCM)结合双色荧光抗体染色技术分别检测中期和晚期活化标志CD25和CD71分子的表达; 取中期活化的细胞上清, 利用LuminexTM100分析上清中IL-2、 IL- 4、 IL-10、 TNF-α、 IFN-γ的含量变化.结果:ICA在终浓度0.3、 1.5、 3.0 μmol/L时明显抑制CD25的表达而对CD71没有明显影响; 下调Th2型细胞因子及上调Th1型细胞因子的分泌量, 但没有剂量依赖效应.结论:ICA下调CD25、 IL-2和Th2型细胞因子水平, 抑制T细胞活化, 同时有一定程度的促进细胞免疫反应, 因此ICA可能具有双向调节免疫平衡的作用.     

白癜风患者外周血T淋巴细胞异常活化

本文以人类白细胞抗原ＤＲ位点（ＨＬＡ－ＤＲ）及白细胞介素２受体亚单位Ｐ５５和Ｐ７５（ＩＬ－２Ｒ，Ｐ５５和ＩＬ－２Ｒ，Ｐ７５）的表达为Ｔ淋巴细胞活化的指标，用双色免疫标记流式细胞法对白癜风患者外周血Ｔ淋巴细胞（ＶＰＢＴＬ）进行分析。实验发现：ＨＬＡ－ＤＲ在ＶＰＢＴＬ及其亚群Ｔ辅助细胞（Ｔｈ，ＣＤ４＾＋细胞）和Ｔ抑制细胞（Ｔｓ，ＣＤ８＾＋细胞）的表达均明显高于正常人，分别为：４９．６２％比１４．５４％     

黄连素对T淋巴细胞活化和增殖的抑制作用

目的:研究黄连素(Ber)对T细胞体外活化和增殖的影响及作用机制。方法:正常人外周血全血培养,以植物血凝素(PHA)或佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激活化淋巴细胞,双荧光染色及溶血获取有核细胞后,以流式细胞仪分析T细胞表达活化抗原CD69和CD25的水平,并以碘化丙锭染色分析细胞周期分布,7-AAD活染分析细胞死亡率。结果:浓度为100μmol/L和50μmol/L的Ber对PDB+Ion或PHA激活T细胞表达CD69有明显抑制,而25μmol/L的Ber抑制效应无显著性;随时间延长,对CD69表达的抑制程度下降;对于CD25表达,上述3个浓度的Ber抑制作用均有显著性,且呈剂量依赖性。同时,这3个浓度的Ber均能明显阻止淋巴细胞进入S期和G₂/M,对细胞周期的抑制作用没有时相特异性。活染分析显示Ber对淋巴细胞无明显细胞毒性。结论:Ber通过干扰早期活化信号转导通路而抑制T细胞活化和增殖,发挥其免疫抑制作用。     

淫羊藿甙对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的影响

目的研究淫羊藿甙(ICA)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T淋巴细胞体外早期活化和增殖的影响。方法以MTT法检测T细胞药物毒性;利用流式细胞术(FCM)结合双色荧光抗体染色技术检测早期活化标志CD69分子的表达;运用流式细胞术结合活体染料羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色技术和荧光抗体染色技术检测T细胞增殖。结果ICA在终浓度0.3、1.5、3.0μmol·L-1时对于CD69的表达以及淋巴细胞48和72h增殖,均有明显的抑制作用(P<0.01)。结论ICA能抑制ConA刺激的小鼠T淋巴细胞的早期活化和增殖,并呈剂量依赖性,即在最高浓度3.0μmol·L-1时抑制率最强。     

芹菜素对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的抑制作用

研究芹菜素(apigenin,AP)对小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,探讨其作用机制,以及将其开发为免疫抑制药物的可能。无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度(25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、150μmol/L和200μmol/L)的芹菜素预孵育4 h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)诱导T细胞活化和增殖,并用MTT法检测该药物浓度对T细胞的毒性作用。荧光标记抗体双染色结合流式细胞术,检测各浓度AP对ConA诱导的小鼠T细胞表达早期、中期和晚期活化抗原CD69、CD25和CD71的影响;以二乙酰羧基荧光素-琥珀酰亚胺酯(carboxyfluoresceindiacetate-succinim-idyl ester,CFDA-SE)染色结合流式细胞术,检测各浓度AP对ConA诱导的小鼠T细胞增殖的影响,并应用ModFit软件分析其增殖指数(proliferation index,PI)。结果显示,25~200μmol/L AP对ConA诱导的T细胞CD69、CD25的表达有显著抑制作用(P<0.01),且呈剂量依赖关系;25μmol/L和50μmol/L的AP抑制CD71的表达,但高浓度(大于100μmol/L)才有显著抑制作用(P<0.01)。各浓度AP对ConA诱导的T细胞增殖均有显著抑制作用(P<0.01),且呈剂量依赖关系。表明在一定浓度范围内,AP可显著抑制ConA诱导的小鼠T细胞体外活化及增殖,有望通过进一步研究将其开发成免疫抑制药物。     

TMB-8对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响

目的: 研究胞内钙离子释放阻断剂8- (N,N-二乙胺) 辛基-3,4,5-三甲氧基苯甲酸酯（TMB-8）对刀豆蛋白A（Con A）介导的小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响。方法: 以Con A作为T细胞活化、增殖的刺激剂，以不同浓度的TMB-8及与环孢菌素A（CsA）联合作用于该系统，用流式细胞术检测T细胞早期活化标志CD69分子的表达；以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸（CFDA-SE）染色流式细胞术，分析TMB-8在Con A刺激下小鼠淋巴细胞的增殖相关指数（PI）；以碘化丙啶染色分析细胞周期的分布情况。结果: Con A作用6 h后，CD69+ T细胞的比率为（74.88±1.88）%，TMB-8在终浓度10、20、40 μmol/L下均抑制Con A介导的T细胞CD69表达（P<0.01），其中，40 μmol/L的TMB-8为（52.55±1.54）%, 达到最高抑制率。培养48 h和72 h，Con A刺激下的PI值分别为1.24±0.01和2.05±0.07，TMB-8从5 μmol/L起均抑制Con A介导的淋巴细胞增殖（P<0.01），以40 μmol/L的效果最为显著，PI值分别为1.01±0.01和1.10±0.01；10 μmol/L的TMB-8与25 μg/L的环孢菌素A（CsA）具有明显的协同抑制作用（P<0.01）。细胞周期分析显示，培养48 h的TMB-8从10 μmol/L起即显著抑制S期（P<0.01）。结论: TMB-8可明显抑制Con A介导下的T细胞早期活化及增殖，并具T细胞周期的S期阻滞作用。     

T淋巴细胞在不同类型白血病患者外周血中的变化

目的通过对不同类型白血病患者外周血T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)的检测以评价不同类型白血病患者的细胞免疫功能。方法采用流式细胞术检测200例不同类型白血病患者和52例健康志愿者外周血T细胞亚群的水平。结果与正常对照组相比,急性白血病和慢性白血病患者的CD4+/CD8+比值都是下调的(P<0.05);急性白血病患者(包括急淋和急粒)的CD3+、CD8+细胞水平是上升的,且急淋患者还伴随着CD4+细胞的降低(P<0.05);慢性白血病患者的CD3+、CD4+细胞水平是下调的,其中慢淋患者的CD3+细胞下调更为显著,而慢粒患者则是以CD8+细胞增高为主(P<0.05)。结论不同类型白血病患者外周血T淋巴细胞均存在免疫异常,且具有不同异常方式,对指导治疗及疗效观察有一定的临床意义。     

放线菌酮对小鼠T细胞活化影响的血清免疫药理评价

目的:利用淋巴细胞的早期活化标记物CD69的表达,探讨CHX对T淋巴细胞体外活化的影响。方法:分离小鼠淋巴结细胞,分别与放线菌酮(CHX)、CHX血清预孵1h,加入多克隆刺激剂继续培养,总计培养24h后收获细胞,进行双色免疫荧光标记,以流式细胞术对T细胞的CD69分子表达情况进行分析。结果:在CHX(终浓度10μmol/L)、CHX血清作用下,ConA活化的T细胞CD69表达百分率依次为(12.33±4.75)%、(20.39±6.32)%,与相应对照[分别为(64.67±3.00)%、(64.35±10.13)%]比较均有显著差异(P＜0.01);相应的,药物作用下PDB活化的T细胞CD69表达的百分率依次为(13.07±11.05)%、(6.10±4.91)%,与相应对照[分别为(84.79±6.87)%、(79.68±4.17)%]比较均有显著差异(P＜0.01)。结论:CHX(10μmol/L)、5%的CHX血清对ConA、PDB活化的T淋巴细胞均显示了强烈的抑制效应,证明T细胞活化过程中CD69的表达存在蛋白质的从头合成,对"CD69表达中CD69分子可能储存于细胞浆及其表达的发生并不需要蛋白质的从头合成"这一观点提出质疑。     

正常成人外周血Th1/Th2细胞亚群体外活化的研究

目的:探讨CD4⁺T细胞在体外活化的条件下向Th1或Th2极化的规律。方法:用Ficoll-Hypaque梯度离心法分离出正常成人抗凝外周血单个核细胞(PBMC)和血浆,将PBMC置于含或不含有自身血浆环境中,并在植物血凝素(PHA,20mg/L)的刺激下进行培养,培养24、48、72h后收获细胞,分别用双色免疫荧光标记,以流式细胞术对CD4⁺T细胞表达表面分子CCR3、CCR5进行分析。结果:CD4⁺T细胞受自身血浆和PHA刺激后向Th1/Th2两个方向极化,24、48、72h后极化率分别达到(13.28±1.59)%/(12.70±1.65)%、(17.19±1.03)%/(17.50±1.30)%、(19.49±2.87)%/(18.58±1.49)%;而只有PHA刺激的极化率很低,两组有显著性差异(P＜0.01);Th1∶Th2之比约等于1。结论:正常成人外周血CD4⁺T细胞可以在体外自身血浆和PHA的条件下明显极化,而且Th1/Th2细胞处于等值的平衡状态。     

蛋白酶体抑制剂对T淋巴细胞增殖活化的影响

目的：探讨蛋白酶体（proteasome）抑制剂LAC（lactacystin）和β-LAC（β-lactacystin）对外周血T淋巴细胞增殖、活化的影响。方法： 以植物血凝素（phytohemagglutinin，PHA）作为刺激剂，经流式细胞仪检测T淋巴细胞增殖（BrdU掺入率），检测CD3+CD25+/CD3+及CD3+CD69+/CD3+细胞比例, 同时用RT-PCR检测蛋白酶体11S调节蛋白PA28及细胞因子IL-2 mRNA的表达。结果： （1）对预先活化的T淋巴细胞，LAC和β-LAC降低 T淋巴细胞BrdU掺入率（P＜0.05）；（2）LAC和β-LAC不影响T淋巴细胞CD69的表达（各时点，P＞0.05），而显著抑制T细胞表面抗原CD25表达（48 h、72 h，P＜0.05）；（3）与对照组相比，LAC和β-LAC明显下调T淋巴细胞PA28、IL-2 mRNA的表达(48 h、72 h，P＜0.05)。结论： LAC和β-LAC能够显著抑制T淋巴细胞增殖，这一效应与其抑制T淋巴细胞表面早期活化抗原CD25表达,下调PA28、IL-2 mRNA的表达有关。     

异体角膜刺激引起的人外周血T细胞及其亚群CD25分子表达

目的：观察异体角膜体外对人外周血T细胞及其亚群CD25分子表达的影响。方法： 异体角膜与外周血淋巴细胞体外共同培养后，进行单克隆抗体标记和流式细胞分析。结果： 对照组T细胞CD25表达为25.2％；受角膜或沸波醇酯（PDB）激活后T细胞CD25表达分别为56.8％和80.9％；受角膜和沸波醇酯共同激活后T细胞CD25表达为70.2％；受异体角膜激活后，CD4和CD8 T淋巴细胞CD25表达分别为67.3％和52.3％。结论： 异体角膜组织体外能够刺激人外周T细胞CD25表达和T细胞活化，CD4 T细胞比CD8 T细胞活化更明显。     

Ultrastructure and differential antigens of human T-lymphocytes during embryogenesis

Thymocytes of human embryos at the 7–8-week stage have irregularly shaped nuclei with one to three distinct nucleoli, characterized by absence of compact chromatin or heterochromatin. The electron-dense cytoplasm of these cells contains polysomes and a few mitochondria. Receptors for sheep's red blood cells and T-antigen are absent on the surface of the cells. In 11–12-week human embryos, the T-lymphocytes are reduced in size, clumps of heterochromatin appear in their nuclei and receptors for sheep's red blood cells (79%) and T-antigen (60%) appear on the surface of the cells. Later, the quantity of compact chromatin in the nuclei of the thermocytes increases and the cells acquire their definitive properties and structure.Laboratory of Human Embryonic Histogenesis, Institute of Human Morphology, Academy of Medical Sciences of the USSR, Moscow. (Presented by Academician of the Academy of Medical Sciences of the USSR A. P. Avtsyn.) Translated from Byulleten' Éksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 88, No. 10, pp. 470–473, October, 1979.     

通痹灵对多克隆刺激剂作用下小鼠T细胞CD69表达影响的血清免疫药理评价

目的：应用血清免疫药理方法探讨通痹灵对T细胞体外活化的影响，以进一步揭示通痹灵的免疫调节分子机理，为临床用药提供理论依据。方法：分离小鼠淋巴结细胞，分别与CHX、5％CHX血清、CsA、5％CsA血清、5％通痹灵血清预孵后加入多克隆刺激剂继续培养，总计培养24h后收获细胞，进行双色免疫荧光标记，以流式细胞术对T细胞的CD69分子表达情况进行分析。结果：5％通痹灵作用下ConA活化的T细胞CD69表达百分率为（54．67±6．69）％，与相应对照［（64．35 ±10．13）%］比较有显著差异（P<0．05）；药物作用下PDB活化的T细胞CD69表达的百分率为（80．99±6．18）%，与相应对照［（79．68±4．17）％］比较无显著差异（P>0．05）。结论：通痹灵含药血清选择性地抑制ConA刺激的T细胞活化，而对PDB刺激的T细胞活化无影响；推测抑制类风湿关节炎疾病启动与发展中异常的T细胞活化，是通痹灵治疗类风湿关节炎重要机制之一；。     

Selective effects of cholera toxin on the activation of mouse B cells by different polyclonal activators

Murine B cells were stimulated in vitro with anti-immunoglobulin (Ig) antibodies, lipopolysaccharide, or with various combinations of phorbol dibutyrate and ionomycin. Very low concentrations (ca. 10(-14) M) of cholera toxin inhibited anti-Ig-stimulated DNA synthesis, while the response to LPS was only abrogated by 2 X 10(4)-10(5)-fold greater concentrations of the toxin. Earlier responses in anti-Ig-stimulated B cells, such as increases in Ia antigen levels, were not affected by the toxin. Protein kinase C-activating phorbol esters, together with Ca2+ ionophores, are believed to stimulate DNA synthesis in lymphocytes by mimicking the two second messengers resulting from ligation of the antigen receptors. However, concentrations of cholera toxin which totally abolish anti-Ig-induced B cell proliferation significantly enhanced DNA and RNA synthesis induced by phorbol dibutyrate plus ionomycin. The results are discussed in terms of possible effects of cholera toxin on guanine nucleotide-binding (G) proteins controlling receptor coupling to second messenger-generating systems in B cells.     

染料木黄酮对小鼠T细胞体外活化及增殖的影响

目的:研究染料木黄酮(Gen)对T细胞体外活化及增殖的影响,并探讨其机制。方法:利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测多克隆刺激剂佛波醇酯(PDB)或刀豆蛋白(ConA)刺激下小鼠T细胞表达活化抗原CD69、CD25的百分率;以羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE)标记技术结合流式细胞术,分析PDB＋Ion(Ionomycin)或ConA刺激下T细胞增殖相关指数。结果:Gen对ConA刺激组T细胞CD69、CD25表达有明显抑制作用(P＜0.05),且呈剂量依赖关系,而对PDB刺激组T细胞CD69及CD25表达的抑制需要较高浓度(＞50μmol/L);Gen无论对ConA或PDB＋Ion刺激组T细胞增殖均有显著抑制作用(P＜0.01),且均呈剂量依赖关系。结论:Gen可明显抑制多克隆刺激剂诱导的T细胞体外活化及增殖,其作用机制可能是抑制早期活化相关蛋白酪氨酸激酶活性。