hTERT基因电转染人γδT细胞建立可诱导的永生化细胞系

利用电击将外源基因hTERT与pTet-on调控质粒共转染人γδT细胞,建立可诱导的永生化人γδT细胞系.分离人PBMC,体外刺激增殖后经磁珠分选纯化,然后对其进行外源hTERT基因和pTet-on调控质粒的共同电转染,并加入强力霉素诱导目的基因表达.电转染程序T 23和T-20的效率分别为37.5％±0.9860％和30.5％±0.5590％.经鉴定,外源hTERT基因能够整合人γδT细胞基因组中并在诱导后表达.程序T-23的转染效率更高,强力霉素的有效诱导浓度是600ng/mL,志愿者本人的血清更利于电转后细胞的存活.     

急性心肌梗死患者外周血T淋巴细胞和NK细胞的变化

目的：研究急性心肌梗死患者外周血 Ｔ 淋巴细胞的变化。方法：采用流式细胞仪技术,观察１５ 例急性心肌梗死患者外周血 Ｔ 淋巴细胞 Ｃ Ｄ２ ＋ 、 Ｃ Ｄ３ ＋ 、 Ｃ Ｄ４ ＋ 、 Ｃ Ｄ８ ＋ 、 Ｃ Ｄ１６ ＋ 、 Ｃ Ｄ２５ ＋ 、 Ｃ Ｄ２７ ＋ 、 Ｃ Ｄ５７ ＋ 变化,并与１２ 例正常对照组比较。结果： Ｃ Ｄ２ ＋ 、 Ｃ Ｄ３ ＋ 、 Ｃ Ｄ１６ ＋ 、 Ｃ Ｄ２７ ＋ 、 Ｃ Ｄ５７ ＋ 无显著性变化; Ｃ Ｄ４ ＋ 明显减少, Ｃ Ｄ８ ＋ 明显增加, Ｃ Ｄ４ ＋ ／ Ｃ Ｄ８ ＋ 比值显著降低; Ｃ Ｄ２５ ＋ 显著降低。结论：急性心肌梗死患者 Ｔ 淋巴细胞亚群功能紊乱,细胞免疫功能受抑制。     

急性心肌梗死患者外周血T淋巴细胞和NK细胞的 …

目的：研究急性心肌梗死患者外周血Ｔ淋巴细胞的变化。方法：采用流式细胞仪技术,观察１５例急性心肌梗死患者外周血Ｔ淋巴细胞ＣＤ２、ＣＤ３＾＋、ＣＤ４＾＋、ＣＤ８＾＋、ＣＤ１６＾＋、ＣＤ２５＾＋、ＣＤ２７＾＋、ＣＤ５７＾＋变化,并与１２例正常对照组比较,结果：ＣＤ２＾＋、ＣＤ３＾＋、ＣＤ１６＾＋、ＣＤ２７＾２＋、ＣＤ５７＾＋无显著性变化;ＣＤ４＾＋明显减少,ＣＤ８＾＋明显增加,ＣＤ４＾＋／ＣＤ８＾＋幽会     

慢性ITP患者外周血调节性T细胞及相关细胞因子的研究

为研究慢性特发性血小板减少性紫癜（CITP）患者外周血CIM＋CD25＋调节性T细胞（Treg）数量及转化生长因子β1（TGF—β1）的表达水平,探讨它们在CITP发病机制中的作用。流式细胞仪分别检测26例CITP患者及20例健康人外周血Treg细胞的数量,ELISA法检测血清中TGF—β1的含量,并进行相关性分析。CITP患者外周血Treg细胞的数量明显低于正常对照组（P〈0．05）;CITP患者血清TGF—β1的含量也低于正常对照组（P〈0．05）,差异有统计学意义,CITP患者外周血Treg细胞的比例与血清中TGF—β1的含量都呈正相关（P〈0．05）。CITP患者外周血中Treg细胞数量的减少及TGF－β1含量的降低可能与CITP的细胞免疫失调有关。     

SLE患者淋巴细胞凋亡及血清新蝶呤、γ-干扰素水平研究

探讨SLE患者体内淋巴细胞凋亡率、巨噬细胞功能相关的细胞因子(新蝶呤、γ-干扰素)水平及两者间相互关系,并同时与抗ds-DNA抗体滴度、疾病活动性评分(SLAM评分)进行相关性分析.应用Annexin V凋亡检测试剂盒及流式细胞仪检测淋巴细胞凋亡率;采用ELISA法检测血清γ-干扰素、新蝶呤水平.结果发现:(1)SLE活动期患者外周血淋巴细胞凋亡率((13.07±7.39),n=30)明显高于非活动期患者((4.08±3.55),n=8,P<0.001)及正常人((5.13±3.37),n=11,P<0.001).(2)抗ds-DNA抗体阳性组患者淋巴细胞凋亡率((12.98±9.25),n=20)与阴性组((9.35±4.76),n=18)相比无差异(P=0.14).淋巴细胞凋亡率与抗ds-DNA抗体滴度无相关性(r=0.112,P=0.77).(3)SLE患者血清新蝶呤水平((1.39±1.10)μg/L,n=20)极显著高于正常人((0.36±0.19)μg/L,n=20,P<0.01).(4)SLE活动期患者血清γ-干扰素水平((58.97±34.52)ng/L,n=15)显著高于正常人((28.06±2.35)ng/L,n=16,P<0.05).(5)SLE患者淋巴细胞凋亡率与血清新蝶呤水平呈正相关(r=0.446,P<0.05,n=22),与SLAM评分呈正相关(r=0.533,P<0.001,n=38),血清新蝶呤水平与SLAM评分亦呈正相关(r=0.485,P<0.05,n=22).未发现SLE患者淋巴细胞凋亡与抗ds-DNA抗体产生相关,未发现明显升高的细胞凋亡率与血清新蝶呤     

Sonic hedgehog调控T细胞分化和功能的研究

T细胞是体内重要的免疫细胞,T细胞介导的细胞免疫应答参与了肿瘤、自身免疫性疾病等疾病的病理生理过程.研究T细胞分化和功能调控机制将有助于阐明相关疾病的发病机制,并为疾病防治提供思路.近来有国外研究显示,早期胚胎发育过程中的关键成形素(mophorgen)--Sonic hedgehog(SHH)不仅调控T细胞发育的各个...     

SLE患者TNF—α基因及蛋白水平的测定

目的 探讨ＴＮＦ－α在ＳＬＥ患者免疫调节紊乱中的作用。方法 ＥＬＩＳＡ法测定血清ＴＮＦ－α蛋白水平,ＰＢＬＲＮＡ斑点杂交测定ＴＮＦ－α蛋白水平有增高趋势,但血清ＴＮＥ－α蛋白水平差别很大。ＴＮＦ－α基因转录比正常显著增高（Ｐ〈０．０１）。结论 提示ＴＮＦ－α参与ＳＬＥ的免疫调节紊乱。     

中枢记忆性T细胞和效应记忆性T细胞

免疫记忆是适应性免疫应答的重要特征,其细胞学基础的阐明是疫苗开发和疾病预防的关键。近年来的研究表明,记忆性T细胞可以被进一步划分为中枢记忆性T细胞和外周记忆性T细胞2个亚群,它们的分布和功能迥异,在生物学特性上也不尽相同。二者关系的深入探讨对于免疫记忆的认识和疾病防治均具有重大的理论和实践意义。     

FOXP3蛋白复合体及调节性T细胞功能研究进展

 FOXP3⁺CD4⁺CD25⁺调节性T 细胞（FOXP3⁺Tregs）负责正常机体免疫稳态的维持。人类许多重大免疫性疾病均与调节性T 细胞的功能异常相关。叉头状家族转录蛋白FOXP3 是调节性T 细胞中特异性表达的关键转录因子,对调节性T 细胞的发育与功能有着重要作用。近年来的研究表明,FOXP3 蛋白转录调控复合体的装配及其翻译后修饰调节对调节性T 细胞的功能至关重要,相关生理过程受到各种炎症微环境的动态调节。深入研究FOXP3⁺Tregs 活性调节的分子机制将为攻克人类重大免疫及相关性疾病提供创新性线索。     

硼对培养大鼠肾细胞和人羊膜细胞内氟含量的影响

通过动物实验和人群观察结果证实,硼进入人体与氟结合形成氟硼酸根随尿排出,减轻氟负荷。通过体外实验,首次发现2．2mmol四硼酸钠在2－3h内可降低6．0mmol氟化钠暴露下的WISH人羊膜细胞和大鼠肾细胞内的氟含量,这可能是硼拮抗氟的细胞毒作用的重要途径之一。根据不同情况下培养细胞内和培养液中氟含量的测定结果,推测硼可直接降低细胞膜对氟离子的通透性,从而减少完整细胞内的氟含量,增加机体的耐氟力,减轻氟毒性。     

肿瘤患者自体CIK细胞治疗及其对患者免疫功能的影响

目的　从恶性肿瘤患者外周血中高效诱导扩增CIK细胞并观察自体CIK过继免疫治疗对患者免疫功能的影响.方法体外利用抗CD3单抗、IL 2、γ IFN等细胞因子从12例肿瘤患者外周血单个核细胞(PBMC)中诱导扩增CIK细胞,分3次自体回输;并用流式细胞仪检测回输前后患者T细胞亚群和NK细胞变化.结果　CIK细胞经13d培养后细胞总数和CD3+CD56+T效应细胞均获得大量增殖,分别平均增殖123(46～301)倍和1656(177～5130)倍.肿瘤患者经自体CIK细胞免疫治疗后,CD3、CD4T细胞和NK细胞比例均显著提高(P<0.01).结论　可从不同恶性肿瘤患者PBMC中高效诱导扩增CIK细胞;自体CIK细胞过继免疫治疗可以显著提高患者免疫功能,且副作用小,具有良好的应用前景.     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在肺癌患者外周血中的表达

目的探讨肺癌患者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的变化及其与临床病理因素的关系。方法用流式细胞术检测60例肺癌患者和60例健康对照者的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞数量变化。结果肺癌患者外周血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞水平明显高于正常组（P〈0．05）,其变化与病理分期和是否有转移有关（P〈0．05）,而和性别、家族史、病理类型和肿瘤体积等无关。结论CD4^＋CD25^＋调节性T细胞可能在肿瘤免疫中发挥重要作用,导致和促进肺癌的发生和转移。     

同种异体的细胞毒性T淋巴细胞诱导和培养

通过诱导获得了移植的ＣＴＬ（细胞毒性Ｔ淋巴细胞）并为建立大规模培养系统而研究了其培养条件，通过外周血单核细胞（ＰＭＢＣ）与经Ｘ－射线辐射的肿瘤ＳＱ－５在含有白细胞介素（ＩＬ）１、２、４、６的Ｒｈａｍα培养液中共同培养３天以上，获得了抗人肺鳞状癌肿ＳＱ－５的人的ＣＴＬ．ＣＴＬ杀伤靶细胞的靶效比是１．在含有人的血清白蛋白（ＨＳＡ）培养液中这种ＣＴＬ生长很快，保存３个月以后仍保持很高杀伤活性，达９５％以上。与非靶的肿瘤细胞相比，ＣＴＬ表现出对靶细胞的特异活性，在一个月内即可获得足够量的ＣＴＬ（１０￣（１０）－１０￣（１１）个）．这些结果表明应用培养的ＣＴＬ治疗各种癌症是有良好前景的治疗技术。     

Bcl-6对滤泡辅助性T细胞的调控作用及机制进展

Bcl-6是滤泡辅助性T细胞(Tfh)的亚群决定转录因子,在Tfh细胞分化和功能调节过程中发挥关键作用.Bcl-6调控Tfh细胞的分子机制及其受到的精密分子调控受到广泛研究,近年来已取得了一定的进展.该文回顾了Bcl-6被鉴定为Tfh细胞亚群转录决定因子的研究历程,总结Bcl-6在Tfh细胞中的功能,综述Tfh细胞调控Bcl-6表达机制的研究进展,并对Bcl-6研究中的潜在问题和未来研究方向进行了展望.     

白藜芦醇诱导人T淋巴瘤Jurkat细胞凋亡的研究

用荧光染色、透射电镜、Wright-Giemsa染色方法检测人T淋巴瘤Jurkat细胞在白藜芦醇（resveratrol，Res）诱导凋亡时的形态学变化情况，并用流式细胞仪对其进行定量分析，Westblot检测部分凋亡信号分子分泌的变化情况．发现白藜芦醇能明显诱导该细胞凋亡，显现出典型的凋亡现象，且凋亡有明显的药物依赖性．流式细胞仪检测发现，各药物处理组（0．125，0．25，0．5，1．0，2．0μL／mL）的凋亡率（3．01％，8．93％，17．97％，22．45％，32．88％）和对照组的凋亡百分率（0．91%）比较有显著性差异．West Blot检测则发现，Ras降低了bcl-xl，bax的表达，以至不能进一步产生bcl-2／bax和bcl-2／bcl-xL二聚体来抑制细胞凋亡，即减除了这些凋亡抑制因子对细胞凋亡的抑制，从而使细胞顺利进入caspase介导的凋亡途径．     

淋巴瘤白血病患者TCRVβ亚家旆T细胞的分布及其克隆性

目的：了解B细胞淋巴瘤白血病（LL）患者TCRVβ亚家族T细胞的分布及其克隆性。方法：利用RT－PCR分别扩增3例LL患者外周血单个核细胞TCRVβ24亚家族基因的CDR3，以了解患者的Vβ亚家族的利用情况，然后将阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的GDR3长度，了解T细胞克隆性。结果：患者中仅存在2－6个Vβ亚家族T细胞。基因扫描分析显示，2例患者外周血中的Vβ1、Vβ2或Vβ4亚家庭出现在隆性增殖T细胞。结论：LL患者外周血存在倾斜性分布和克隆性增殖的Vβ亚家族T细胞，这可能是机体T细胞受白血病细胞相关抗原的刺激作用而引起机体产生相应的特异性抗白血病的免疫反应。     

肿瘤患者外周血CD4+和CD8+T淋巴细胞TCR Vβ基因克隆化分析

目的探讨肿瘤患者T细胞抗原受体(TCR)Vβ基因克隆化改变特征.方法应用多引物巢式PCR技术检测肿瘤患者外周血CD4+T细胞和CD8+T细胞TCR Vβ基因22个亚家族的克隆化改变,与正常对照组比较,分析肿瘤患者TCR单克隆改变的特点.结果 CD8+T细胞TCRVβ基因亚家族单克隆改变的数量多于CD4+T细胞;肿瘤患者的CD4+T细胞中,只有Vβ2,Vβ7和Vβ8三个亚家族单克隆改变高于正常对照组(P0.01或P0.05),其他Vβ亚家族单克隆改变与正常对照组无明显差异.肿瘤患者的CD8+T细胞中,有14个Vβ亚家族单克隆改变均高于正常对照组(P0.01或P0.05);4组肿瘤患者中,CD4+T细胞和CD8+T细胞的TCR Vβ7亚家族的单克隆改变均明显高于正常对照组(P0.01或P0.05).结论通过检测TCR Vβ基因克隆化改变,可以初步了解T细胞对肿瘤的免疫应答状况.     

荷瘤裸鼠模型的T细胞功能重建与肿瘤凋亡

给人大肠癌Ｈ９０１和ＳＷ１１１６ＮＣ裸小鼠模型接种同系半裸鼠的胸腺，经２－３周免疫效应潜伏期后，直径约１ｃｍ的瘤块逐渐缩小，在９周内完全消失。光镜检查发现，肿瘤细胞在瘤块内逐渐缩小，被浸润的淋巴细胞和间质分割成孤岛状，在５周未肿瘤细胞基本消失，继而是一个肿瘤残存结构被逐步完全吸收的过程。透射电镜检查发现肿瘤细胞的死亡与细胞凋亡现象有关，即肿瘤细胞的核染色质浓聚，沿核膜分布。在先天性Ｔ细胞免疫缺陷的ＮＣ裸小鼠中经胸腺移植后部分重建裸鼠Ｔ细胞功能杀灭实体肿瘤的模型对进一步研究免疫系统抗肿瘤作用的机理有一定的意义。