内皮细胞特异性分子-1与肿瘤关系的研究进展

内皮细胞特异性分子(Endothelial cell specific molecule-1,ESM-1)是1996 年由法国科学家Lassalle 等从人脐静脉内皮细胞cDNA 文库中克隆出的一种新型内皮细胞特异性分子[1].     

内皮细胞特异性分子-1在脓毒症中的意义

内皮细胞特异性分子-1（endothelial cell specific molecule-1,ESM-1）是近年来新发现的一种由内皮细胞分泌的特异性分子,是脓毒症时血管内皮细胞激活及功能障碍的一个特异性标记物,其水平高低可能较好的反映血管内皮损伤严重程度,有可能作为脓毒症治疗、判定预后的一项评价指标.本文就ESM-1的研究现状及在脓毒症发病机制中的作用及临床研究做一综述.     

人内皮细胞特异性分子-1的转染及其在ECV304中的表达

目的构建人内皮细胞特异性分子-1(ESM-1)真核表达载体,转染人脐静脉内皮细胞系ECV304,并在ECV 304中获得表达. 方法将ESM-1 cDNA插入真核载体pIRES的多克隆位点中,转染人脐静脉内皮细胞.原位杂交,免疫组化检测ESM-1基因的表达.结果构建的表达载体经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列分析证实,转染后发现ESM-1的表达在转录和蛋白水平都明显的增加. 结论成功构建了人 ESM-1真核表达载体和转染了人脐静脉内皮细胞系ECV304, 并获得高水平的表达,为进一步研究作好准备.     

内皮特异性分子1与肿瘤的研究进展

内皮特异性分子1(ESM-1)最初是对人脐静脉内皮细胞的cDNA文库克隆时意外发现的长度为2kb的cDNA序列,该序列可编码一种可溶性蛋白多糖,又称为Endocan。目前ESM-1的生物学功能尚在研究中,初步的研究结果表明,它与动脉硬化、炎症、肿瘤的发展、血管、淋巴管的生成,以及多种生物分子调控机制都有着重要的关系。但对于ESM-1在肿瘤中的研究,如与肿瘤相关性的炎症、血管增生等的具体作用机制等仍有争议。同时关于它在肿瘤淋巴管增生方面的研究,也处于起步阶段。现对近几年来关于ESM-1与肿瘤的发生、发展之间的研究予以综述。     

内皮细胞特异性分子1在结直肠癌组织中的表达

目的探讨人内皮细胞特异性分子-1(ESM-1)在结直肠癌组织中的表达。方法原位杂交、免疫组织化学法检测ESM-1在9例正常黏膜、37例腺瘤和88例结直肠癌组织中的表达。结果原位杂交检测到ESM-1 mRNA在正常黏膜和腺瘤中的表达呈强阳性,表达率分别为67%和94%,而在结直肠癌组织中表达显著低于正常组织,为34%;免疫组化检测到正常黏膜和腺瘤中ESM-1蛋白表达率为67%和81%,而结直肠癌组织中表达率为39%。ESM-1mRNA和蛋白表达具有较好的一致性。结论ESM-1在结直肠癌组织中的表达明显降低。     

恶性淋巴瘤组织中内皮细胞特异性分子-1mRNA及其蛋白的表达

目的探讨恶性淋巴瘤组织中内皮细胞特异性分子-1(ESM-1)mRNA和蛋白的表达及其与临床病理特征的关系.方法采用免疫组化S-P法、原位杂交方法对58例淋巴瘤组织和10例正常淋巴结的ESM-1蛋白及mRNA进行检测.结果 ESM-1蛋白及 mRNA 在淋巴瘤组织中均有表达,在血管中较少表达.结论 ESM-1分子可能参与了淋巴瘤的发生发展过程.     

ESM-1在转染MEK基因的ECV304细胞中的表达

目的探讨内皮细胞特异性分子-1（ESM-1）在转染MEK基因的人脐静脉内皮细胞中的表达,探讨ESM-1的表达是否受分裂原激活的蛋白激酶（MAPK）信号转导通路的调节。方法脂质体转染高活性的MEK基因人ECV304细胞,Western blot检测ESM-1在ECV304细胞中的表达。结果成功获得稳定转染高活性MEK基因的细胞株,并检测到胞外信号调节的激酶（ERKs）的表达量在二株细胞中没有变化,而pERK-2和ESM-1在转染MEK基因的细胞中表达高于未转染的细胞。结论ESM-1可能处于ERK-2的下游,其表达可能受MAPK信号转导通路的调节。     

核酸探针的制备

本实验室用地高辛-dUTP随机引物方法标记人内皮细胞特异性分子(human endothelial specific molecular-1,hESM-1)cDNA探针,并应用于ESM-1基因在肾癌中mRNA转录的检测。现报道如下。     

ESM-1和MMP-3表达与肝癌侵袭转移的关系

目的 探讨内皮细胞特异性分子-1(ESM-1)和基质金属蛋白酶-3(MMP-3)表达与肝细胞癌(HCC)侵袭转移的关系.方法 应用免疫组织化学方法与图像分析系统检测ESM-1和MMP-3在40例HCC组织(实验组)及15例肝内胆管结石患者肝组织(对照组)的表达水平;分析HCC组织中ESM-1、MMP-3的表达与临床病理特征的关系及两者之间表达水平的相关性.结果 ESM-1、MMP-3在HCC组织中均高水平表达,对照组未见阳性表达,实验组与对照组间表达差异均有显著性(P<0.05);ESM-1在HCC组织中的表达与甲胎蛋白含量、肝硬化、肿瘤大小、分化程度、门静脉侵犯及TNM分期有关(P<0.05);MMP-3在HCC组织中的表达与门静脉侵犯、HBV感染、肿瘤大小、分化程度及TNM分期有关(P<0.05);ESM-1与MMP-3在HCC组织中的表达呈正相关(r=0.641,P<0.05).结论检测ESM-1、MMP-3在HCC中的表达可能有助于对HCC侵袭和转移的评估.     

小鼠血吸虫病肝组织中ESM-1的表达及黄芪总苷对其影响

目的观察小鼠血吸虫病肝组织中内皮细胞特异性分子-1(ESM-1)的变化及黄芪总苷(AST)对其影响。方法ICR小鼠120只随机分为AST高剂量(20mg/kg.d-1)组,AST低剂量(10mg/kg.d-1)组,阳性药(护肝片,540mg/kg.d-1)组、模型对照组,每只实验小鼠感染血吸虫尾蚴30条,均于感染40d后以吡喹酮(500mg/kg.d-1)治疗2d。同时设30只小鼠为正常对照组。分别于感染后6、10和14周末,每组随机处死10只小鼠,取肝脏组织作常规病理学检测并制作组织芯片,采用免疫组织化学和原位分子杂交技术检测ESM-1mRNA及蛋白。结果①抗ESM-1蛋白抗体在血吸虫肝病组织中的炎细胞、成纤维细胞、胆管上皮细胞、血管内皮细胞、肝细胞均呈不同程度的阳性反应,ESM-1mR-NA主要在炎细胞、胆管上皮细胞、血管内皮细胞和肝细胞表达,成纤维细胞未检测出ESM-1mRNA;②10周和14周末AST两个剂量组ESM-1的蛋白水平低于模型组(P<0.01),10周末AST高、低剂量组ESM-1mRNA阳性细胞计数低于模型组(P<0.01)。结论小鼠血吸虫病肝组织中,炎细胞可产生ESM-1,成纤维细胞可能存在ESM-1受体。ESM-1可能通过旁分泌作用参与血吸虫肝纤维化过程,黄芪总苷对ESM-1的抑制作用可能是其抗纤维化的机制之一。     

乳腺癌组织中ESM-1的表达及其预后意义

目的探讨ESM-1 mRNA和蛋白在乳腺癌中的表达及其预后意义。方法应用组织芯片平台,采用原位分子杂交和免疫组织化学技术检测108例乳腺癌组织中ESM-1 mRNA及其蛋白表达。结果ESM-1 mRNA和蛋白在乳腺癌组织中均有表达,阳性率分别为42.6%和88.0%,两者呈正相关;存活5年以上者ESM-1蛋白的高表达率为74.4%,明显高于死亡组(44.4%),两者呈负相关,肿瘤直径<2cm者ESM-1高表达率(41.6%)低于肿瘤直径2~5cm者(76.9%)。ESM-1在乳腺癌组织中的表达与组织学分级、ERα、PR、临床分期、淋巴结状况、患者年龄无关。结论ESM-1分子高表达可作为乳腺癌预后的潜在标记。     

内皮细胞特异性分子-1水平与阿尔茨海默病患者抑郁的相关性

目的 探讨内皮细胞特异性分子-1（ESM-1）水平和阿尔茨海默病（AD）患者抑郁的相关性。方法 采用ELISA检测26例伴抑郁的AD患者（研究组）、29例不伴抑郁的AD患者（对照组）及29例健康志愿者（正常组）的ESM-1水平与抑郁症状。采用简易精神状态检查表（MMSE）和老年忧郁量表简明版（SGDS）评估受试者抑郁症状和认知功能。结果 研究组ESM-1水平低于对照组和正常组,差异有统计学意义（P?<0.05）。ESM-1水平与SGDS评分呈负相关（r?=-0.254,P?=0.009）,与MMSE评分无相关性（r?=0.120,P?=0.378）。结论 ESM-1与AD患者抑郁相关,能够作为AD患者抑郁程度的生物指标。     

涎腺腺样囊性癌组织中内皮细胞特异性分子-1与E钙黏着蛋白的表达

目的探讨内皮细胞特异性分子-1（ESM-1）和E-钙黏着蛋白（E-cad）在涎腺腺样囊性癌中的表达及意义。方法采用免疫组织化学法检测52例涎腺腺样囊性癌及11例癌旁“正常”涎腺组织中ESM-1和E-cad的表达。结果涎腺腺样囊性癌的ESM-1高表达率显著高于癌旁“正常”涎腺组织（P〈0.01），与患者性别、肿瘤组织学类型、有无淋巴结转移及侵犯神经无相关性（P〉0．05）。E-cad在涎腺腺样囊性癌中呈低表达，E-cad低表达与涎腺腺样囊性癌组织类型、有无淋巴结转移、侵犯神经显著相关（P〈0．05）。癌组织中ESM-1和E-cad表达间无相关性。结论ESM-1和E-cad均与涎腺腺样囊性癌的发生有相关性。E-cad的表达可作为临床判断涎腺腺样囊性癌恶性程度、评估预后的潜在指标。     

急性冠状动脉综合征患者PCI术前血清ICAM-1、ESM-1水平与术后冠状动脉慢血流/无复流的相关性

目的 探讨急性冠状动脉综合征(ACS)患者行经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术前血清细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、内皮细胞特异性分子-1(ESM-1)水平与PCI术后冠状动脉慢血流/无复流(CSF/CNR)的相关性.方法 选择2018年10月—2021年5月华北石油管理局总医院心内科行PCI术的ACS患者354例为...     

血清ESM-1、Myo水平变化与冠心病不稳定型心绞痛患者MACE风险的相关性及临床意义

目的：分析血清内皮细胞特异分子-1(ESM-1)、肌红蛋白(Myo)水平变化与冠心病不稳定型心绞痛患者主要不良心血管事件(MACE)风险的相关性及临床意义。方法：选取我院2020年3月—2021年3月期间收治的冠心病不稳定型心绞痛患者120例作为研究组，另选同期健康者135例作对照组，对比两组、不同分级(Braunwald分级)、不同预后血清ESM-1、Myo水平变化，并分析血清ESM-1、Myo水平变化与MACE风险的相关性。结果：研究组血清ESM-1、Myo水平高于对照组(P<0.05);随病情加重，血清ESM-1、Myo水平持续升高，即Ⅲ级血清ESM-1、Myo水平高于Ⅱ级、Ⅰ级，Ⅱ级血清ESM-1、Myo水平高于Ⅰ级(P<0.05);经Pearson分析结果显示，血清ESM-1(r=0.519)、Myo(r=0.603)水平与Braunwald分级呈正相关(P<0.05);随访6个月，120例冠心病不稳定型心绞痛患者中MACE发生率25.83%;MACE者血清ESM-1、Myo水平高于非MACE者(P<0.05)。结论：血清ESM-1、Myo水平在冠心病...     

LPS对人脐静脉内皮细胞增殖和ESM-1表达的影响

目的 探讨LPS对人脐静脉内皮细胞(E(2V304)的生长和内皮细胞特异性分子-1(endothelial cell-specific molecule-1,ESM-1)表达的影响。方法在体外,用1ml／L和5ml／L的LPS在不同时间作用于ECV304。观察细胞形态的变化。用MTT法和免疫细胞化学方法对细胞增殖和ESM-1、ERK、p-ERK在细胞中的表达。结果 LPS作用于ECV304 24h后,细胞形态发生变化,梭形明显,排列紊乱。短时间内(0．5、1h)LPs对ECV304有增殖作用。LPS可快速促进ESM—l的表达,住0．5、lh时表达量较高。LPS作用后,ERK的表达无明显变化,但在一段时间(0．5-4h)内ERK的磷酸化明显增加。结论 LPS对E(2V304中ESM-1的表达有促进作用。推测ESM-1可能作为一种细胞因子与LPS在炎症反应中发挥着作用。     

MEK转染的内皮细胞表达人内皮细胞特异性分子-1的初步研究

目的人内皮细胞特异性分子-1(Human endocellular-specific molecule-1, ESM-1)表达载体的构建及其体外表达,表达产物的纯化及多克隆抗体和单克隆抗体的制备.重组MEK基因的真核转染,转染的内皮细胞中ESM-1的表达. 方法用PCR方法扩增ESM-1的基因片段,扩增产物与T-Vector连接,构建克隆载体pGEM-T- ESM-1.在宿主菌中扩增重组质粒,提取质粒并进行酶切纯化,将目的基因插入pET-28b中构建成表达载体,再次转化入大肠杆菌XL1-blue,蓝白选择、耐药性标记粗筛并挑取阳性克隆,经限制性内切酶酶谱分析、DNA序列分析两种方法鉴定.然后提取质粒,转化入大肠杆菌BL-21,用IPTG诱导表达.表达产物行SDS-PAGE,割下所需条带,用电洗脱方法纯化得到所需目的蛋白.免疫新西兰纯种大白兔,制备多抗,并用免疫双扩散法测定抗体效价;免疫BALB/C小鼠,制备抗人ESM-1的单克隆抗体.用重组MEK( )基因转染人脐静脉内皮细胞ECV304,加以鉴定,并检测转染细胞中ESM-1表达的改变. 结果经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证明所构建质粒为pET-28b-ESM-1重组质粒,SDS-PAGE证实获得的融合蛋白分子量为24 ku,表达量约占菌体总蛋白的24%.所得多抗效价为1:16(免疫双扩散),单抗效价为1:6000(ELISA).重组MEK基因转染成功,用Western blot和免疫荧光的方法检测显示,转染不同活性型重组MEK基因的ECV304其ERK-2的表达量不同, ESM-1的表达量在转染不同活性型重组MEK基因的细胞中也不同,都是转染高活性型的细胞中表达量最高,转染野生型的细胞中次之,未转染的ECV304中表达最少. 结论成功获得ESM-1的表达载体, 并在大肠杆菌中获得表达,成功制备了抗ESM-1的多克隆抗体和单克隆抗体.在转染了不同活性型重组MEK基因的ECV304细胞中,ESM-1的表达量有改变,在转染高活性型重组MEK基因的细胞中表达量最高,转染野生型重组MEK基因的细胞次之,未转染的ECV304中ESM-1的表达量最少.说明ESM-1可能是MAPK信号转导通路上的一个重要的成分,并在肿瘤转移以及肿瘤血管生成中发挥作用.     

血清内皮细胞特异性分子1与降钙素原联合检测在慢性阻塞性肺疾病急性加重细菌感染中的临床意义

目的 探讨血清内皮细胞特异性分子1(ESM-1)与降钙素原（PCT）联合检测在细菌感染导致慢性阻塞性肺疾病急性加重（AECOPD）中的临床意义。方法 选择2019年1月至2021年12月在上海市金山区亭林医院呼吸内科住院治疗的AECOPD患者200例作为研究对象,依据痰培养报告分为两组：细菌性感染组113例、非细菌性感染组87例。以同期在上海市金山区亭林医院行健康体检的志愿者100例作为对照。采集AECOPD患者及健康对照组血清,用ELISA法检测血清ESM-1和PCT表达水平。绘制ROC曲线,评价ESM-1、PCT单独或两者联合检测对AECOPD细菌感染的诊断价值。结果 经抗感染治疗前,AECOPD细菌性感染组患者的血清ESM-1和PCT水平均高于AECOPD非细菌性感染组及健康对照组（P均<0.05）;经抗生素治疗后,AECOPD细菌性感染的患者血清ESM-1和PCT表达水平均下降,与治疗前比较差异均有统计学意义（P均<0.05）。用血清ESM-1、PCT单独诊断AECOPD细菌感染的AUC为0.902、0.828;ESM-1最佳临界值为1.326μg/L,诊断AECO...     

麻风病患者血浆内皮细胞特异性分子-1的水平及其临床意义

目的 检测麻风病患者血浆内皮细胞特异性分子-1(endothelial cell-specific molecule 1, ESM-1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和CD105内皮糖蛋白的水平,探讨其对麻风病辅助诊断的临床价值。方法 选择不同临床型别的麻风病患者33例为研究对象,对照组为健康者17例,采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测患者和对照组血浆中的ESM-1、VEGF和CD105水平,并比较两组间上述因子的水平。受试者工作特征曲线(receiver operation characteristic curve, ROC)分析ESM-1、VEGF和CD105对麻风病诊断的价值。结果 麻风病患者组血浆ESM-1浓度(3.79±0.62) ng/mL高于对照组(3.20±0.85) ng/mL(P<0.05);ESM-1诊断麻风病的ROC 曲线下面积(area under the ROC curve, AUC)为0.715;ESM-1最佳临界值为3.73 ng/mL时诊断麻风病的灵敏度66.7％,特异度82.4％,约登指数为0.491。患者组血浆VEGF浓度(0.64±0.13) ng/mL高于对照组(0.54±0.11) ng/mL(P<0.05);VEGF诊断麻风病的AUC为0.722;当VEGF最佳临界值为0.67 ng/mL时诊断麻风病的灵敏度45.5％,特异度94.1％,约登指数为0.396。患者组(42.04±9.44) ng/mL和对照组(45.08±9.43) ng/mL间血浆CD105浓度差异无统计学意义(P>0.05);CD105诊断麻风病的AUC为0.423。结论 麻风病患者血浆ESM-1和VEGF水平高于正常组,ESM-1的灵敏度和约登指数较VEGF高,对于麻风病的诊断有一定的参考价值。     

血清ESM-1、sICAM-1水平对帕金森病患者发生认知障碍的预测价值

目的：分析血清内皮细胞特异性分子-1(ESM-1)、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)水平对帕金森病（PD）患者发生认知障碍的预测价值。方法：选取2020年8月至2022年12月该院收治的93例PD患者进行前瞻性研究,根据蒙特利尔认知评估量表（MoCA）评分将其分为认知正常组（n=50）和认知障碍组（n=43）,另选取同期50名健康体检者,设为对照组。比较三组ESM-1、sICAM-1水平及MoCA评分,采用Pearson相关性分析血清ESM-1、sICAM-1水平与认知障碍的相关性,并绘制受试者工作特征（ROC）曲线分析血清ESM-1、sICAM-1单项及联合检测预测PD患者发生认知障碍的价值。结果：认知障碍组、认知正常组血清ESM-1水平、MoCA评分均低于对照组,且认知障碍组低于认知正常组,差异有统计学意义（P<0.05）;认知障碍组、认知正常组血清sICAM-1水平均高于对照组,且认知障碍组高于认知正常组,差异有统计学意义（P<0.05）;Pearson相关性分析结果显示,血清ESM-1水平与认知功能呈正相关（r>0,P<0.05）;血清sICA...