白细胞介素6受体

白细胞介素6受体(IL-6R)是造血生长因子受体家族的一员。它由一个80kD的配基结合链(IL-6R)和作为信号转导子的非配基结合链gp130组成。IL-6R既能以膜受体形式存在,也能以可溶性受体形式存在。可溶性白介素6受体(sIL-6R)同样具有膜受体的功能。白介素6受体的表达及调节在某些白介素6相关疾病的发病过程中起着重要作用。     

白细胞介素—6受体研究进展

白细胞介素－６具有广泛的生物学作用，其受体由α、β异源双体组成，均属细胞因子受体家族。α链为配体结合链，β链为非配体结合链，参与１Ｌ－６的信号转导并为多种细胞因子受体共用。１Ｌ－６受体的表达受多种炎症介质的调节，受体表达的异常与自身免疫性疾病关系密切。抗α链及抗β链的单克隆抗体均能阻断１Ｌ－６的生物学功能，并同β的可溶形式一起有希望成为１Ｌ－６的生物拮抗剂。而α链的可溶形式非但不能阻断１Ｌ－６的生     

白细胞介素6受体研究进展

白细胞介素６（ＩＬ－６）是一种多功能细胞因子，它不仅是人多发性骨髓瘤细胞的中心生长因子，还参与了正常机体各种组织细胞的生长，分化和功能的调节，也是机体免疫－神经内分泌调节网络的重要分子，ＩＬ－６对机体的免疫活性细胞（Ｔ，Ｂ淋巴细胞），造血细胞，肝脏细胞，神经细胞，破骨和成骨细胞以及心肌细胞等都具有重要的生理和病理性生物学效应，本文将就有关内容作一综述。     

抗人白介素6受体单抗的制备和鉴定

利用重组人可溶性ＩＬ－６受体免疫小鼠后，制备了两株抗ＩＬ－６Ｒ的单克隆抗体１７６／Ｂ６帮１５１／Ｈ１２两者分别识别ＩＬ－６胞外肽段的近膜区和远膜区。免疫迹分析表明，两株单抗均能够特异地结合天然的膜ＩＬ－６Ｒ蛋白，然而不能阻断ＩＬ－６Ｒ的生物功能。     

可溶性白细胞介素6受体（文献综述）

可溶性白细胞介素６受体存在于人的尿、血清和某些细胞的体外培养上清中。肿瘤、感染和自身免疫性疾病的发生过程中ｓＩＬ－６Ｒ的水平显著升高。用基因重组ｓＩＬ－６Ｒ研究表明，ｓＩＬ－６Ｒ与ＩＬ－６结合后仍能介导ＩＬ－６的生物学功能，因此它不仅不能作为其配体ＩＬ－６的拮抗剂，反而是配体的激动剂，这点与其它细胞因子的可溶性受体绝然不同。ｓＩＬ－６Ｒ在机体的免疫调节和多种疾病的发生、发展过程中可能发挥重要作用。     

抗重组人白细胞介素18单克隆抗体的制备与特性研究

目的 :获得有生物活性的小鼠抗重组人白细胞介素 18(rhIL 18)单克隆抗体。方法 :采用重组hIL 18免疫BALB C小鼠 ,应用杂交瘤技术 ,ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株并经多次克隆化。结果 :建立了 2株小鼠抗hIL 18单克隆抗体杂交瘤细胞 1C7和 1F5 ,染色体数目分别为 92条和 90条 ,所分泌的抗体分别为IgG2a和IgG1,轻链均为κ型 ,腹水IgG抗体经亲和层析法纯化后纯度达 95 %以上 ,效价为 1× 10 - 4和 1× 10 - 5,Westernblot显示 2株单抗均能特异性识别 18 3kD处的rhIL 18蛋白。 1C7单抗的亲和常数Ka=1 7× 10 5,1F5的亲和常数Ka=1 3× 10 5。 2株单抗识别不同抗原表位。结论 :制备的 2株单抗为进一步研究IL 18的分子结构、生物学功能及其与免疫相关性疾病的关系提供了实验材料。     

人白细胞介素15单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :用rhIL 15与沙门氏菌裸菌相偶联制备IL 15单克隆抗体 (monoclonalantibody ,McAb) ,以便为疾病的诊断、治疗和发病机制的研究提供可靠的生物制剂。方法 :将纯化的rhIL 15蛋白与沙门氏菌裸菌相偶联制成免疫原 ,用脾内、腹腔、静脉三种途径相结合免疫BALB c小鼠 ,以PEG为促融剂 ,将脾细胞与SP2 0细胞进行融合 ,HAT选择培养 ,间接ELISA筛选阳性克隆 ,通过多次克隆化 ,获得稳定分泌特异性McAb的杂交瘤细胞株 ,并对所获得的细胞株及分泌的McAb特性进行了分析。结果 :获得 4株能稳定分泌特异性McAb的杂交瘤细胞系 (hybridomacell,Hc) ,ELISA法检测其效价分别为 1:10 6 、1:10 7、1:10 7、1:10 7。Dotblot检测IL 15的灵敏度为 1 5ng ,其中一株 (1 7E4 )尚可用于Westernblot检测。结论 :成功制备了 4株IL 15McAb杂交瘤细胞系。     

白细胞介素－6受体研究进展

白细胞介素－６（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－６，ＩＬ－６）具有广泛的生物学作用，其受体由α、β异源双体组成，均属细胞因子受体家族。α链为配体结合链，β链为非配体结合链，参与ＩＬ－６的信号转导并为多种细胞因子受体共用。ＩＬ－６受体的表达受多种炎症介质的调节，受体表达的异常与自身免疫性疾病关系密切。抗α链及抗β链的单克隆抗体均能阻断ＩＬ－６的生物学功能，并同β链的可溶形式一起有希望成为ＩＬ－６的生物桔抗剂。而α链的可溶形式非但不能阻断ＩＬ－６的生物学功能；反而介导了ＩＬ－６信号，在机体的免疫功能中发挥了一定的生理和病理作用。     

Wu T_(11)(CD2)-小鼠抗人绵羊红细胞受体杂交瘤细胞系的建立

本文报道用T细胞系JMN1免疫BALB/c小鼠,然后取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系X 63Ag8.653融合。用扁桃腺冰冻切片免疫酶染色法,筛选出一株稳定分泌IgG1亚类的抗绵羊红细胞受体(ER)单扰(McAb)的杂交瘤—WuT11。通过E玫瑰花结形成抑制试验,膜抗原抽提物对WuT11的间接免疫荧光阻断试验,对外周血单个核细胞(PBMC)及其E~ 、E~-层细胞,T、B和非T非B细胞系的反应特征以及FACS的反应曲线等,证明WuT11与OKT11和anti-CCT3相类似,竞争抑制试验证明WuT11与anti-CCT3识别同一表位。用WuT11进行亲和层析,提取的相应抗原经SDS-PAGE,测得分子量为50KDa的糖蛋白,证明WuT11属CD_2,为识别人ER的单抗。     

Wu69-小鼠抗人白细胞介素2受体的单抗

本文报导应用杂交瘤技术制备的鼠抗人白细胞介素2受体(IL—2R)的单抗—Wu69.免疫沉淀表明它能识别分子量为56Kd的PHA活化的T细胞膜表面的蛋白分子。该抗体只对部分B细胞及非淋巴样生血细胞系呈阳性反应,而白血病T细胞系均为阴性,但对活化的T细胞及人T细胞克隆有高度的结合力。它可抑制T细胞的同种异体刺激所引起的增殖反应,并与IL—2有竞争作用。进一步应用FACS及顺序免疫沉淀试验证明它与抗Tac完全相同。 本文还对抗IL-2R的重要性及抗IL—2R作为免疫抑制剂的可喜前景进行了讨论。     

一组抗人重组IL－6单克隆抗体的制备及鉴定

以基因重组的人ＩＬ－６免疫了Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，利用小鼠杂交瘤技术，建立了２０余株分泌抗人重组ＩＬ－６单克隆抗体的杂交瘤，并对其中的Ｃ＿（９２）、Ｃ＿（９７）、Ｃ＿（２０３）、Ｃ＿（２２０）进行了较系统的鉴定，其抗体类别均为ＩｇＧ，亚类分别为ＩｇＧ＿（２ａ）、ＩｇＧ＿１、ＩｇＧ＿（２ａ）和ＩｇＧ＿（２ａ）。它们均特异性地识别ＩＬ－６，而与多种其它因子和无关蛋白无交叉反应。免疫转印结果显示，各单抗均能识别分子量为１７ｋＤ的ＩＬ－６单一条带，并具有中和ＩＬ－６生物活性的效应。     

抗人肝癌单克隆抗体HL2的制备及鉴定

用肝癌细胞株QGY-7703、BEL-7402、SMMC-7721以贯序法免疫BALB/c小鼠,获得一株分泌肝癌单抗的杂交窟株HL_2,其染色体数目为97—105。单抗HL_2系IgG_2b亚类。吸收实验及阻断实验证明HL_2抗原与CEA、AFP、HBsAg、HBcAg及HBeAg无免疫同源性。ABC法和ELISA法说明单抗HL_2与四株肝癌细胞、六例肝癌组织均呈明确阳性反应,除与SGC-7901、H_(128)、K_(562)、Hela细胞株及部分胚胎肝脏,胚胎结肠有较弱性反应外,与肝癌旁组织、正常肝脏、其它肿瘤组织和细胞株、二种正常人细胞及其它胚胎组织无反应。显示了单抗HL_2的特异性较好、阳性率较高,是一个有应用前景的单抗。     

抗NPM1单克隆抗体的制备

目的 制备并鉴定NPM1单克隆抗体.方法 利用纯化的NPM1融合蛋白作为抗原,通过常规的细胞融合技术制备杂交瘤细胞,用间接ELISA法筛选能出产生抗NPM1单克隆抗体的阳性细胞株,对抗NPM1单克隆抗体的特性进行分析.结果 筛选出1株产生抗NPM1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,产生的抗体为IgGl亚类,效价达1∶720000;纯化后经SDS-PAGE显示两条蛋白条带,纯度达95％以上,相对分子质量约为50000和25000,与单一抗体重链、轻链分子大小相符.免疫组化证实,纯化的2G7抗NPM1单克隆抗体可检测出NPM1在结直肠癌表达,阳性位点为细胞核.结论 制备的抗NPM1单克隆抗体可用于NPM1蛋白功能的研究与临床检测.     

抗肌红蛋白单克隆抗体的制备与鉴定及其初步应用

目的 制备和鉴定抗肌红蛋白(Mb)单克隆抗体,为人肌红蛋白检测试剂的研制奠定基础.方法 用人肌红蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术进行细胞融合,用ELISA方法筛选,有限稀释法进行克隆化培养阳性杂交瘤细胞株.ELISA法测定小鼠腹水滴度,CLIA法对抗体进行配对实验与特异性鉴定.结果 筛选培养出9株分泌抗肌红蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,腹水滴度为1∶5×104 ～ 1∶2×105.通过配对实验,有5株抗体6种组合可以成功配对.这5株抗体的亲和常数为6.46×108 ～ 3.68×109 L/mol.用5株抗体所建立的6种化学免疫分析方法与人Hb交叉反应率为7.434×103％ ～2.904×10-2％,与人ALB交叉反应率为4.980×10-7％ ～3.830×10-5％.用Mb17B6与Mb21E8两株抗体建立的CLIA标准曲线的线性系数为0.997,灵敏度为6.02ng/mL.结论 成功制备了可以应用于免疫分析的抗肌红蛋白单克隆抗体.     

恶性淋巴瘤单克隆抗体的制备和初步鉴定

采用人恶性淋巴瘤细胞株Raji细胞作为免疫原免疫BALB/C小鼠, 按常规方法融合并经间接ELISA法筛选, 成功地制备了1株抗Raji细胞单克隆抗体(MAb), 命名为SZ138.用琼脂糖双扩散鉴定其为IgG1类, ELISA法测定其腹水效价为1:3.2×104.MAb流式细胞仪检测表明, 该抗体与Raji和Daudi呈阳性反应;与外周红细胞、白细胞(包括淋巴细胞和中性粒细胞)、未活化血小板、内皮细胞株ECV呈阴性反应.免疫组化SP法显示, MAb SZ138识别的抗原在胃肠道的腺体和肝脏有所表达, 而在心、脑、扁桃体、脾、脂肪组织、动脉血管壁、神经节、横纹肌、平滑肌等组织不表达或表达很低.Western blotting分析显示, MAb SZ138可特异识别还原条件下相对分子量为170kD的蛋白多肽.结果提示: MA SZ138对恶性淋巴瘤的诊断和治疗可能具有一定的临床意义.     

抗人心肌肌球蛋白轻链单克隆抗体的制备及鉴定

用常规方法免疫得到的抗人心肌肌球蛋白轻链(CM-LC)的抗血清,常与骨骼肌及平滑肌肌球蛋白轻链有较强的交叉反应。单克隆抗体因系特异地识别CM-LC上的单一抗原决定簇,因而能克服这一困难。我们应用淋巴细胞杂交瘤技术已经得到四株分泌抗人CM-LC单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对其中三株(1G_6、2B_4、2F_6)进行了克隆。它们与人骨骼肌及平滑肌肌球蛋自轻链的交叉反应分别为2F_6 28.6％及15.6％;2B_4 45％及81％;1G_6对二者的交叉反应均为81％。2F_6属小鼠IgG亚类IgG_3;2B_4及1G_6则均为IgG_1。     

人促甲状腺激素单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备特异性强、灵敏度高的人促甲状腺激素（hTSH）单克隆抗体,为建立高灵敏性和高特异性的hTSH检测方法奠定基础。方法：人工合成人促甲状腺激素（hTSH）上的28个氨基酸,采用戊二醛交联法与牛血清白蛋白（BSA）构建完全抗原。用人工免疫原免疫BALB／c小鼠,利用杂交瘤技术建立分泌抗hTSH单克隆抗体的杂交瘤细胞,并对得到的单抗进行鉴定。结果：建立了一株杂交瘤细胞4E5,制备了腹水单抗,经鉴定,抗体重链属于IgG1类型,轻链属于K型,McAb腹水ELISA效价达1：1．6×10^5,与促黄体生成激素（LH）、促卵泡激素（FSH）、人绒毛膜促性腺激素（HCG）无明显交叉反应,细胞株冻存复苏后抗体分泌稳定。结论：本实验建立的细胞株显示稳定性好,特异性高,McAb腹水效价高,为进一步提高hTSH检测的灵敏性和简便性提供依据。     

PC-1蛋白单克隆抗体制备和鉴定

为获得高效价PC-1蛋白的鼠单克隆抗体(mAb),用于PC-1功能的实验,采用纯化的PC-1蛋白与GST的融合蛋白(GST-PC-1)为抗原,免疫小鼠和骨髓瘤细胞进行细胞融合,用直接ELISA法进行克隆化筛选,mAb的染色体分析及亚类鉴定及初步应用.结果表明细胞融合和ELISA筛选后,获得2株抗鼠PC.1蛋白mAb,两株PC-1 mAb效价分别为1:25600,1:13600,抗体亚型为IgG1,Western blot证实其特异性识别PC-1蛋白.该mAb可以用于测定PC-1蛋白.