尖吻蝮蛇毒抗凝血因子(ACF)含量和钙离子含量的定量测定及钙离子结合位点的初步研究

由紫外光谱法测定蛋白质浓度,用ICP测定Ca含量,从而确定一个ACF分子中含一个钙离子.ACF中分子中除一个高亲和性钙结合位点外,至少还有一个低亲和性钙结合位点,只有当过量钙离子存在时,才可能在低亲和性钙结合位点上进一步结合钙离子.Tb³⁺具有比Ca²⁺离子更强的键合ACF能力,能定量结合在ACF中的两个位点上,且能全部取代ACF中Ca²⁺.文中提及的金属离子对ACF的抗凝血活性没有显著的影响.     

尖吻蝮蛇毒抗凝血因子Ⅰ的稀土离子荧光探针研究

稀土离子(Nd3+, Sm3+, Eu3+, Gd3+, Tb3+)对抗凝血因子(ACF Ⅰ)的内源荧光有不同程度的淬灭作用.稀土离子与ACF Ⅰ荧光滴定的结果表明, ACF Ⅰ分子中有两个稀土离子结合位点,稀土离子和钙离子在ACF Ⅰ分子中两个结合位点是共同的竞争结合位点.每个稀土离子与ACF Ⅰ的结合常数K1和K2相接近,说明两个结合位点的结构可能基本一致.不同的稀土离子与ACF Ⅰ之间有相近的结合常数K1或K2,表明ACF Ⅰ分子中的两个结合位点在结构上都有较大的柔性,这种结构柔性为钙离子在ACF Ⅰ与活化凝血因子X的结合反应中所起的激活作用提供了结构基础.     

尖吻蝮蛇毒抗凝血因子Ⅱ的稀土离子荧光探针研究

尖吻蝮蛇毒抗凝血因子(ACF)分子中有两个钙离子结合位点,钙离子对ACF的内源荧光有增强作用,稀土离子(Nd³⁺,Sm³⁺,Eu³⁺,Gd³⁺和Tb³⁺)能取代ACF分子中的钙离子,并对ACF的内源荧光有不同程度的猝灭作用,其中Tb³⁺接受ACF分子中Trp残基传递的能量后,特征荧光增强.稀土离子与ACF荧光滴定表明,ACF分子中有两个稀土离子结合位点,稀土离子和钙离子在ACF分子中两个结合部位是共同的竞争结合部位.ACF与不同稀土离子之间有相近的表观结合常数K₁或K₂.Tb³⁺与RE³⁺(RE=Nd,Sm,Eu或Gd)间线性自由能关系表明,稀土离子与ACF结合时,没有明显的空间效应.ACF分子中的两个结合位点在结构上都有较大的柔性,这种结构柔性为钙离子在ACF与活化凝血因子X的结合反应中起到的促进作用提供了结构基础.     

钙(Ⅱ)对尖吻蝮蛇毒抗凝血因子Ⅰ的抗凝血活性的影响

皖南尖吻蝮蛇毒抗凝血因子Ⅰ(ACFⅠ)不具有酶的活性,通过与活化凝血因子X(FXa)结合成1l的复合物来延长凝血时间。用高效液相色谱分析方法,发现ACFⅠ与FXa的结合反应依赖于Ca     

皖南尖吻蝮蛇蛇毒内抗凝血因子(ACF)的二级结构和金属离子对其影响的CD谱研究

利用ＣＤ谱对皖南尖吻蝮蛇蛇内抗凝血因子的二级结构，即ａ－螺旋，β－折叠和无规则卷曲进行了测定，利用ＣｈｅｎａｎｄＹａｎｇ的方法计算了出它们在ＡＣＦ分的百分比。溶液的ＰＨ值对ＡＣＦ的二级结构影响不大，但当ＰＨ位于５和６时，二级结构稍稍出现了异常。这可能是由于氢离子电离引起的电荷变化带的效应。     

pH值和金属离子对尖吻蝮蛇抗凝血因子Ⅱ二级结构的影响

圆二色谱(CD谱)测量表明，尖吻蝮蛇抗凝血因子Ⅱ(ACF Ⅱ)与抗凝血因子Ⅰ(ACF Ⅰ)的二级结构十分相似，它们的主要骨架构象都为反平行β-折叠和α-螺旋结构。pH值对天然ACF Ⅱ的构象有一定的影响，pH值从3到10增大时，α-螺旋含量逐渐减少，反平行β-折叠含量逐渐增大。钙和其他二价金属离子对ACF Ⅱ的骨架结构没有明显影响。三价稀土离子使ACF Ⅱ的α-螺旋含量升高，同时降低其β-转角和β-折叠的含量。     

钙(Ⅱ)对抗凝血因子Ⅱ与活化凝血因子Ⅹ结合反应的影响

皖南尖吻蝮蛇毒抗凝血因子Ⅱ(ACF Ⅱ)不具有酶的活性,通过与活化凝血因子Ⅹ(FXa)结合成1∶1的复合物来延长凝血时间.用高效液相色谱方法,发现ACF Ⅱ与FXa的结合反应依赖于Ca(Ⅱ)浓度,ACF Ⅱ与FXa的最大结合反应所需要的Ca(Ⅱ)浓度约为1×10-3 mol/L.平衡透析的结果表明,ACF Ⅱ分子中有两个不同亲和性的Ca(Ⅱ)结合位点,表观结合常数分别为(1.1±0.3)×105 L/mol和(1.7±0.4)×104 L/mol,ACF Ⅱ与2个Ca(Ⅱ) 结合所需要的Ca(Ⅱ)浓度也约为1×10-3 mol/L.Ca(Ⅱ)对ACF Ⅱ的荧光有增强效应,其最大荧光增强所需要的Ca(Ⅱ)浓度也约为1×10-3 mol/L.由此推测ACF Ⅱ结合上2个Ca(Ⅱ)可能是其与FXa结合的前提条件.     

尖吻蝮蛇毒抗凝血因子I的稀土离子荧光探针研究

稀土离子（Nd^3 ,Sm^3 ,Eu^3 ,Gd^3 ,Tb^3 )对抗凝血因子（ACFI）的内源荧光有不同程度的淬灭作用。稀土离子与ACI I 光滴定的结果表明，ACFI分子中有两个稀土离子结合位点，稀土离子和钙离子在ACF I分子中两个结合位点是共同的竞争结合位点。每个稀土离子与ACF I的结合常数K1和K2相接近，说明两个结合位点的结构可能基本一致。不同的稀土离子与ACF I之间有相近的结合常数K1或K2，表明ACF I分子中的两个结合位点在结构上都有较的柔性，这种结构柔性为钙离子在ACF I与活化凝血因子X的结合反应中所起的激活作用提供了结构基础。     

皖南尖吻蝮蛇毒糖甙水解酶(NADase)的荧光光谱研究

本文用荧光光谱法研究了皖南尖吻蝮蛇毒糖苷水解酶(NADase)的性质。在pH<6时，pH对NADase的荧光强度影响较大，而在pH>6，pH对NADase的荧光强度几乎没有什么影响，Cu²⁺的加入可引起NADase的内源荧光强度的降低，通过荧光滴定测得Cu²⁺与NADase结合常数K_EM为5.3×10³(mol/L)^-1。I^-对NADase发光的淬灭作用很小，I     

钙(Ⅱ)对抗凝血因子Ⅱ与活化凝血因子X结合反应的影响

皖南尖吻蝮蛇毒抗凝血因子Ⅱ(ACFⅡ)不具有酶的活性,通过与活化凝血因子X(FXa)结合成1:1的复合物来延长凝血时间。用高效液相色谱方法,发现ACFⅡ与FXa的结合反应依赖于Ca(Ⅱ)浓度,ACFⅡ与FXa的最大结合反应所需要的CaⅡ浓度约为1×10^-3mol/L。平衡透析的结果表明,ACFⅡ分子中有两个不同亲和性的Ca(Ⅱ)结合位点,表观结合常数分别为(1.1±0.3)×10^5L/mol和(1.7±0.4)×10^4L/mol,ACFⅡ与2个Ca(Ⅱ)结合所需要的Ca(Ⅱ)浓度也约为1×10^-3mol/L。Ca(Ⅱ)对ACFⅡ的荧光有增强效应,其量大荧光增强所需要的Ca(Ⅱ)浓度也约为1×10^-3mol/L。由此推测ACFⅡ结合上2个Ca(Ⅱ)可能性是其与FXa结合的前提条件。     

离子色谱法测定水中钙和镁

水的硬度测定,通常采用EDTA滴定法,文中改用离子色谱法测定,一次进样后同时测定水样中mg.L^-1级的钙和镁,然后换算成以mg.L^-1,硕酸钙表示的硬度,方法的回民率在98．2－102．0％之间,相对标准偏差为0．94％－1．21％,具有简便,快速,准确的特点。     

骨粉中磷、钙含量的测定

采用氧瓶燃烧消化骨粉样品,比色法测定其磷含量,络合滴定法测定其钙含量。经实际样品测定,测定磷含量的变异系数≤0.24%,测定钙含量的变异系数≤0.14%。经t检验证明,氧瓶燃烧法消化样品的测定结果与湿灰法无显著性差异。     

液相色谱柱后衍生法同时测定Pb~(2+)Cu~(2+)Cd~(2+)Co~(2+)Zn~(2+)和Ni~(2+)

采用液相色谱流动相为0.05mol·L~(-1)草酸和0.095mol·L~(-1)氢氧化锂,流速为1.0ml·min~(-1);柱后衍生试剂为0.001mol·L~(-1)PAR+0.3mol·L~(-1)氨水+0.1mol·L~(-1)乙酸,流速为1.0ml·min~(-1),进样体积为20μl,检测波长为500nm,同时对Pb~(2+)、Cu~(2+)、Cd~(2+)、Co~(2+)、Zn~(2+)和Ni~(2+)检测。方法可用于水样检测。     

离子色谱法测定葡萄糖酸钙中的草酸根

利用单柱离子色谱系统,以NaHCO3-Na2CO3溶液为流动相,对葡萄糖酸钙中的草酸根进行分离,并用电导检测法测定了葡萄糖酸钙中草酸根的含量。线性回归方程为y=1.147x 1.568,相关系数r=0.984,线性范围为0.01-30.00mg/L,以3倍信噪比计算,草酸根的检出限为13．2μg/L,回收率为96％－105％。     

表面活性剂存在下铽-镥(钆、钇)-乙酰水杨酸共发荧光体系的研究

本文研究了镥等三种稀土离子与铽-乙酰水杨酸配合物产生的共发荧光效应。在最佳条件下,Lu³⁺、Gd³⁺、Y³⁺的存在可使铽-乙酰水杨酸配合物的荧光分别增强108,58和73倍。讨论了共发光体系的形成条件和荧光特性。利用Tb-Lu-乙酰水杨酸体系和Tb-Lu-乙酰水杨酸-乙二胺四乙酸-十六烷基三甲基溴化铵体系分析了合成稀土样品和包头稀土标准氧化物中的铽,结果满意,加标回收率为90.5～105.6%,并对共发光的机理和表面活性剂的作用进行了初步探讨。     

脂肪和芳香磺酸盐的离子色谱分析方法研究

试用流动相与多维分离离子色谱法分析己烷磺酸、辛烷磺酸、十二烷基磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠等磺酸盐,并将两种方法作了对比.流动相离子色谱法选用2mmol·L~(-1)四丁基氢氧化铵(TBAOH)作离子对试剂,乙腈作有机改进剂做梯度淋洗,并采用12.5mmol·L~(-1)H_2SO_4作再生液,电导检测.多维分离用电导检测,1.8mmol·L~(-1)Na_2CO_3/1.7mmol·L~(-1)NaHCO_3淋洗液做等浓度淋洗.该方法的检出限为0.75～11.50mg·L~(-1),线性范围为0.75～30mg·L~(-1),方法用于石油样品的分析得到满意结果.     

离子色谱法测定磷酸氢钙中的氟化物

建立了离子色谱法测定磷酸氢钙中氟化物的方法。用本法测得的结果与化学法相符，相对标准偏差为0.65%-4.36%，回收率为99.5%-100.3%。     

超离子导体CaF2中的Ca2+亚晶格和F-亚晶格

CaF_2在熔化以前为超离子导体相。一些实验和理论的研究表明,在超离子导体相中,Ca~(2+)仍维持原有的面心立方骨架,而F~-则在Ca~(2+)骨架中运动。早期的分子动力学模拟结果表明Ca~(2+)的均方根位移仅约0.3A,而F~-的扩散系数可达2.6×10~(-5)cm·s~(-1),已是熔盐扩散系数量级。近年来的中子散射实验表明在扩散离子和近邻离子间存在着某种动力学相关。为解释这些事实,新近Gillan的分子动力学模拟表明扩散离子伴随着F~-亚晶格变形,而Kaneko和Ueda的分子动力学模拟则表明扩散离子伴随着近邻离子在同一运动方向的相关运动。进一步的研究尚待进行。八十年代初,Nelson等人提出了描述晶体、非晶和液态中键取向的键球谐函数方法。