N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对转化生长因子β1介导的心成纤维细胞MMP-1/TIMP-1表达的调节作用

目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对转化生长因子β_1(TGF-β_1)介导的大鼠心成纤维细胞MMP-1/TIMP-1的调节作用。方法:差速贴壁法分离与获取新生大鼠心成纤维细胞。分别采用免疫细胞化学法和Western印迹法检测心成纤维细胞MMP-1、TIMP-1蛋白表达。结果:TGF-β_1可使心成纤维细胞MMP-1蛋白表达水平下降,而促进TIMP-1蛋白表达,MMP-1/TIMP-1比值下降。AcSDKP可以抑制TGF-β_1对心成纤维细胞MMP-1表达的下调作用,使MMP-1蛋白表达增加,而对TGF-β_1介导的TIMP-1蛋白表达无明显影响,MMP-1/ TIMP-1比值增加。结论:AcSDKP可以通过上调TGF-β_1介导的心成纤维细胞MMP-1蛋白表达并增加MMP-1/ TIMP-1比值,以加速细胞外基质降解,这可能与AcSDKP抗心纤维化的作用有关。     

AcSDKP对TGF-β 1诱导的大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白合成及表达的调节作用

目的 探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的调节作用.方法 差速贴壁法获取大鼠心脏成纤维细胞;采用3H-脯氨酸掺入法检测心脏成纤维细胞胶原蛋白的合成.采用免疫细胞化学染色和Western blotting法检测心脏成纤维细胞Ⅰ型与Ⅲ型胶原蛋白的表达.结果 随着TGF-β1浓度的增加(1μg/L, 2.5μg/L,5μg/L,7.5μg/L),细胞脯氨酸含量(CPM值)逐渐增加(分别为147.6±10.2,229.2±16.4,427.0±40.6,454.8±26.1),分别是对照组(CPM值为91.6±9.8)的1.61倍、2.50倍、4.66倍、4.97倍,差异均有显著性(P<0.05).当加入不同浓度的AcSDKP(10-10mol/L,5×10-10mol/L, 10-9mol/L, 10-8mol/L)时,细胞脯氨酸含量逐渐下降(CPM值为378.8±6.4,292.8±14.4,130.6±17.6,230.6±19.4),分别是TGF-β1组(5μg/L)的88.7%,68.6%,30.6%,54.0%.差异均具有显著性(P<0.05).免疫细胞化学结果显示,TGF-β1组(5μg/L)细胞内Ⅰ型与Ⅲ型胶原蛋白平均吸度值分别是对照组的1.36倍和2.12倍,差异具有显著性(P<0.05); Western blotting法结果显示,TGF-β1组的Ⅰ型与Ⅲ型胶原蛋白表达条带吸光度值分别是对照组的1.09倍和1.29倍,差异具有显著性(P<0.05).当给予AcSDKP(10-9mol/L)进行干预时,免疫细胞化学结果显示,细胞内Ⅰ型与Ⅲ型胶原蛋白表达强度较TGF-β1组减弱,其平均吸光度值分别是TGF-β1组的61.3%和68.5%,差异具有显著性(P<0.05).Western blotting法结果显示,Ⅰ型与Ⅲ型胶原蛋白表达条带吸光度值分别是TGF-β1组的83%和54%,差异具有显著性(P<0.05).结论 AcSDKP对TGF-β1介导的心脏成纤维细胞胶原合成与Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达有明显抑制作用,这可能与其抗心脏纤维化的作用相关.     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白合成及表达的调节作用

目的：探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的调节作用。方法：建立新生大鼠心脏成纤维细胞系;采用~3H-脯氨酸掺入法检测心脏成纤维细胞胶原蛋白的合成。采用Western印迹法检测心脏成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果：PDGF对心脏成纤维细胞胶原蛋白合成的促进作用与浓度相关,并以10 ng/ml时最强。AcSDKP对PDGF介导的心脏成纤维细胞胶原合成有抑制作用,并且在10~(-9)mol/L时作用最强。结论：AcSDKP对PDGF介导的心脏成纤维细胞胶原合成有明显抑制作用,可能与其抗心脏纤维化的作用相关。     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对大鼠肺成纤维细胞c-Jun氨基末端激酶通路活化的调节作用

目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号转导通路活化的调节作用.方法:培养新生大鼠肺成纤维细胞.激光扫描共聚焦显微镜观察phospho-JNK在细胞内定位与分布.免疫印迹法检测JNK/phospho-JNK蛋白的表达.结果:激光扫描共聚焦显微镜显示,与对照组比较,TGF-β1刺激后,胞质中phospho-JNK荧光强度变弱,而核浆比值明显增加.经AcSDKP干预作用后,胞质中phospho-JNK的荧光强度较TGF-β1刺激组增强,核浆比值明显减小.免疫印迹法显示,与对照组比较,TGF-β1刺激组phospho-JNK表达明显增加;而AcSDKP干预作用后,phospho-JNK蛋白表达较TGF-β1刺激组明显减少.结论: AcSDKP能阻断TGF-β1介导的肺成纤维细胞JNK通路的活化作用.     

AcSDKP与细胞增殖及器官纤维化

N-乙酰基丝氨酰天门冬酰赖氨酰脯氨酸(AcSDKP)是一种生理性造血系统的生长抑制因子。AcSDKP对多器官内的多种类型细胞的增殖、细胞外基质代谢和血管形成等方面有重要的调节作用。它能抑制心脏和肾脏间质成纤维细胞及肾小球系膜细胞的增殖,减少胶原的沉积,对高血压及心肌梗死后心脏和肾脏纤维化有一定的抑制作用。     

N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸对基质金属蛋白酶-1和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1的调节在大鼠矽肺纤维化形成中的作用

目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对大鼠肺内基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达的调节在拮抗矽肺纤维化形成过程中的作用.方法:气管内灌注染尘法制作大鼠矽肺模型,将含有AcSDKP的微量药物释放泵埋入腹腔.实验动物随机分为矽肺模型对照4周组,矽肺模型对照8周组,矽肺模型4周组,矽肺模型8周组,抗纤维化治疗组及预防治疗组.H-E染色和免疫组织化学显色对矽肺纤维化病变和MMP-1和TIMP-1在肺组织内的表达进行形态学观察;免疫印迹法对肺内MMP-1和TIMP-1酶蛋白表达进行检测.结果:与模型对照组比较,矽肺大鼠肺内MMP-1和TIMP-1表达增强.与矽肺模型组比较,AcSDKP能够上调矽肺大鼠肺内MMP-1的表达,下调TIMP-1的表达,使MMP-1/TIMP-1的比值升高.结论:AcSDKP能够促进矽肺大鼠肺内MMP-1的表达,抑制TIMP-1的表达,从而加速了细胞外基质(包括胶原)的降解,这可能与AcSDKP抗矽肺纤维化的作用有关.     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对P38分裂原活化蛋白酶通路调节在肺成纤维细胞胶原合成中的作用

目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)是否通过阻断转化生长因子-β1（TGF-β1）介导的P38分裂原活化蛋白酶(MAPK)途径,进而抑制大鼠肺成纤维细胞增殖与Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达.方法:培养新生大鼠肺成纤维细胞,分为对照组、TGF-β1刺激组、TGF-β受体阻滞剂组、P38MAPK特异性抑制剂组、AcSDKP干预组.采用MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学法检测磷酸化P38蛋白的定位及表达,免疫印迹法检测TGF-β受体、磷酸化P38MAPK、P38MAPK、c-myc及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达.结果:与对照组比较,TGF-β1能够促进细胞增殖,而分别给予LY364947、SB203580和AcSDKP干预后,细胞增殖均受到抑制.与对照组比较,TGF-β1刺激组的TGF-β1受体、磷酸化P38MAPK、c-myc以及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达上调,当分别给予LY364947、SB203580和AcSDKP干预后,肺成纤维细胞TGF-β1受体、磷酸化P38 MAPK、c-myc以及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达均降低.而各组间比较P38MAPK蛋白表达无明显改变.结论:AcSDKP能够通过阻断TGF-β1介导的P38MAPK信号转导途径,进而抑制肺成纤维细胞增殖和Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达.     

高糖与同型半胱氨酸对大鼠皮肤成纤维细胞MMP-9表达及活性的影响

目的: 观察不同浓度糖及同型半胱氨酸对大鼠皮肤成纤维细胞MMP-9表达量及活性的影响。方法: 取1 d龄正常SD大鼠背部皮肤分离成纤维细胞,于含10%胎牛血清的DMEM培养液中培养。2-4代生长状态良好的细胞进行24 h血清剥夺(0.5%FBS)后,分为正常糖浓度组、高糖组、高糖+高同型半胱氨酸组分别培养6 h,之后用RT-PCR、Western blotting和明胶酶谱方法分别检测MMP-9 mRNA、蛋白表达量以及细胞外MMP-9活性。结果: 高糖(22 mmol/L)组MMP-9 mRNA、蛋白表达量及其活性均增高,分别为正常糖浓度组的1.15倍、1.59倍和1.34倍,P<0.05;高糖+高同型半胱氨酸(100 μmol/L)增高组更加明显,依次为正常糖浓度组的1.25倍、2.63倍和2.52倍,P<0.05。结论: 大鼠皮肤成纤维细胞在体外高糖环境下可高表达MMP-9;高同型半胱氨酸在高糖环境下可使MMP-9 表达及酶活性增高更为明显,表明高同型半胱氨酸血症也参与了对MMP-9的调节,可进一步增加高糖环境下成纤维细胞表达MMP-9。     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对大鼠矽肺的结缔组织生长因子和ERK1/2表达的调节作用

目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对大鼠矽肺纤维化模型肺组织中胶原含量、结缔组织生长因子(CTGF)和细胞外信号调节激酶 1/2(ERK1/2)表达的影响.方法:选用非暴露式气管灌注法复制大鼠矽肺模型,并给予AcSDKP,采用羟脯氨酸测量法定量分析肺组织中总胶原蛋白的含量,免疫组织化学法、免疫印迹法检测肺组织内CTGF、phospho-ERK1/2及ERK1/2蛋白的表达.结果:AcSDKP治疗组胶原含量低于相对应的矽肺模型组.与相应的对照组相比,矽肺模型组大鼠肺组织内CTGF、phospho-ERK1/2蛋白表达均增加;与相应矽肺模型组相比,给予AcSDKP后,大鼠肺组织内CTGF、phospho-ERK1/2蛋白表达均明显降低.而各组间比较ERK1/2蛋白表达无明显改变.结论:AcSDKP可能通过阻断ERK1/2途径抑制了CTGF的表达,从而发挥抗矽肺纤维化的作用.     

缺氧对肺动脉成纤维细胞MMP-2、TIMP-1表达的影响

目的：探讨缺氧对肺动脉成纤维细胞（Fpa）分泌基质金属蛋白酶（MMPs）、金属蛋白酶组织抑制剂（TIMPs）的影响。 方法： 采用酶谱法测定Fpa培养基中MMP-2的酶活性，免疫印迹法检测培养基中MMP-2、TIMP-1 的蛋白水平，免疫组化法测定细胞原位的蛋白表达， RT-PCR法检测mRNA表达量。 结果： 缺氧后Fpa分泌的MMP-2酶活性、细胞内外蛋白表达量、mRNA表达量均下降；而TIMP-1的表达则呈相反变化。 结论： 缺氧可使肺动脉成纤维细胞MMP-2/TIMP-1的表达失衡，可能参与缺氧性肺血管重建。     

家兔慢性冬眠心肌MMP-2、MMP-9和TIMP-2表达与胶原重构

目的观察家兔慢性冬眠心肌(CHM)心肌间质胶原纤维变化及基质金属蛋白酶-2,9(MMP-2、MMP-9)及其抑制剂(TIMP-2)的表达。方法27只家兔随机分为模型组(CHM,n=15)及假手术组(SHAM,n=12)。观察心肌间质胶原容积百分比(ICVF)、Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维比例、计算Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维比例记分(CRS);免疫组化染色及Western blot观察MMP-2、MMP-9及TIMP-2表达。结果与SHAM组相比,CHM组ICVF显著增加(P<0.01);Ⅰ/Ⅲ胶原比例增高;CRS显著增加(P<0.01);MMP-2及MMP-9的表达明显增多(P<0.01),TIMP-2的表达明显减少(P<0.01)。结论在CHM过程中,MMPs/TIMPs比例失平衡,可能是CHM间质胶原重构的机制之一。     

细胞外信号调节激酶1/2途径在血小板衍生生长因子诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖与胶原合成中的调节作用

目的:探讨血小板衍生生长因子(PDGF)是否通过细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)途径调节大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原的合成。方法:建立新生大鼠心脏成纤维细胞系,MTT法检测心脏成纤维细胞代谢活性的改变,流式细胞仪法检测细胞周期变化,免疫细胞化学法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的改变,Western印迹法检测ERK1/2及Phospho-ERK1/2表达的改变。结果:在PDGF刺激下,大鼠心脏成纤维细胞代谢活性增强,细胞增殖指数(PI)增加,Ⅰ、Ⅲ型胶原表达增加,ERK1/2表达无明显改变,而Phospho-ERK1/2表达增强;25μmol/LPD98059预孵育1h抑制PDGF的以上刺激作用。结论:PDGF能够通过ERK1/2途径调节大鼠心脏成纤维细胞的增殖和胶原合成。     

牛蒡苷元通过调节 MMP-2，MMP-9表达抑制增生性瘢痕的形成

目的：观察牛蒡苷元对增生性瘢痕(hypertrophic scar)形成的作用,并探讨其抑制增生性瘢痕形成的机制。方法新西兰大耳兔25只,将其分为对照组( A 组),模型组(B 组),牛蒡苷元治疗组(0.5 mg/ ml)(C 组),牛蒡苷元治疗组(2 mg/ ml)(D 组),牛蒡苷元治疗组(6 mg/ ml)(E 组),在兔耳腹侧面建立增生性瘢痕模型,术后按组别进行相应处理,观察创面愈合和瘢痕的增生情况。用药后在第6周取材,进行 HE 染色,天狼猩红染色和 Masson 染色,并用 Western 印迹检测 MMP-2, MMP-9表达情况。结果 HE 染色,天狼星红染色和 Masson 染色结果表明,牛蒡苷元治疗组(2 mg/ ml)可以明显抑制增生性瘢痕的形成。与模型组相比,牛蒡苷元治疗组的瘢痕较平坦,成纤维细胞的数量减少,胶原的密度降低。并且 Western 印迹的结果表明,牛蒡苷元治疗组(2 mg/ ml)能够使 MMP-2, MMP-9表达降低。结论牛蒡苷元能有效抑制增生性瘢痕的发展,其机制可能是通过下调 MMP-2和 MMP-9的表达。牛蒡苷元可能具有治疗增生性瘢痕的作用。     

67ku层黏连蛋白受体促进肝癌细胞MMP-2和MMP-9的表达

目的研究分析67ku层黏连蛋白受体(laminin receptor,67LR)与肝癌细胞基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)及其组织抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMPs)表达的关系,探讨67LR促进肝癌细胞体外侵袭能力的分子机制。方法以67LR转染HepG2的稳定细胞株及其对照细胞为材料,采用半定量RT-PCR分析目前已知的23种MMPs和4种TIMPs的表达及变化情况,对表达有变化的基因采用荧光定量PCR进行验证,采用明胶酶谱分析MMP活性的变化。结果半定量RT-PCR和荧光定量PCR发现,67LR高表达的LR4细胞,其MMP2,9的表达比67LR低表达的LR6及对照组pcD-NA-1细胞明显升高,明胶酶谱分析也揭示,LR4细胞分泌的MMP-2和MMP-9的活性明显上升。结论67LR可以促进肝癌细胞MMP-2和MMP-9的表达和分泌,从而促进肝癌细胞体外侵袭能力。     

垂体腺瘤中MMP-9及TIMP-1表达与肿瘤生物学行为的关系

目的　探讨MMP 9及其抑制因子TIMP 1在垂体腺瘤中表达与肿瘤生物学行为的关系。方法　应用免疫组化S P法检测上述基因蛋白在 2 3例侵袭性和 2 4例非侵袭性垂体腺瘤组织中的表达。结果　侵袭性垂体腺瘤组中MMP 9的表达和MMP 9表达超过TIMP 1的比例高于非侵袭性腺瘤组 (P <0 0 5 ) ;TIMP 1在侵袭性垂体腺瘤组的表达有降低的趋势 ,但无统计学意义 (P >0 0 5 ) ;MMP 9与TIMP 1表达呈正相关 (P <0 0 5 )。结论　MMP 9表达上调导致其和TIMP 1的表达失衡与垂体腺瘤侵袭性有关 ,MMP 9可作为评估垂体腺瘤侵袭性的分子生物学指标     

乳腺癌中环氧化酶-2的表达及其与VEGF、MVD、MMP-9、 TIMP-1的关系

目的研究乳腺癌组织中环氧化酶-2（COX-2）的表达及其与VEGF、MVD、MMP-9和TIMP-1的相互关系,探讨其在乳腺癌发生和浸润中的生物学意义。方法应用S-P法检测65例浸润性乳腺癌组织中COX-2、VEGF、MMP-9、TIMP-1及血管内皮标记物CD34的表达情况,并观察7例导管原位癌（DCIS）、45例癌旁乳腺组织中COX-2的表达。结果65例浸润性乳腺癌、7例DCIS均表达COX-2,其中浸润性乳腺癌中COX-2高表达率为66．2％（43／65）,而45例癌旁组织中21例有COX-2弱表达,两者之间差异有显著性（P〈0．01）。COX-2与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、组织学分级、TNM分期、腋窝淋巴结转移均无相关性,但COX-2在浸润性乳腺癌中的表达与VEGF、MMP-9、TIIMP-1及MVD均呈正相关（P〈0．05）。结论COX-2可能与乳腺癌组织中微血管形成和细胞外基质代谢有关。