贝母素乙抑制结肠癌细胞生长及裸鼠成瘤

目的研究贝母素乙对结肠癌细胞生长以及裸鼠成瘤的影响.方法体外试验检测贝母素乙对结肠癌SW480细胞增殖和侵袭的影响,以及Ki67、PCNA、VEGF、E-cadherin、N-cadherin、HIF-1α、Akt/p-Akt表达水平;构建结肠癌移植瘤裸鼠模型,分析贝母素乙体内抗肿瘤活性及HIF-1α、VEGF、Akt/p-Akt表达影响.结果贝母素乙能够明显抑制SW480细胞克隆增殖和侵袭(P<0.05),降低Ki67、PCNA、N-cadherin、E-cadherin、HIF-1α、p-Akt/Akt表达量(P<0.05),升高Vimentin表达水平(P<0.05),还可以抑制肿瘤增长,抑制移植瘤组织Ki67、VEGF、HIF-1α、p-Akt/Akt表达(P<0.05).结论贝母素乙可能通过抑制Akt信号通路,抑制结肠癌SW480细胞克隆增殖、侵袭和裸鼠移植瘤的生长.     

lncRNA RAB11B-AS1对结直肠癌SW480细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响

目的探讨lncRNA RAB11B-AS1对结直肠癌SW480细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响及可能机制。方法 qRT-PCR方法检测34例结直肠癌组织及相应的癌旁组织、人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460与人结直肠癌细胞株SW480中lncRNA RAB11B-AS1的表达水平。构建稳定过表达RAB11B-AS1的SW480细胞系,MTT方法检测SW480细胞的增殖能力变化;流式细胞术检测SW480细胞凋亡率;Transwell检测SW480细胞侵袭能力变化,划痕实验检测SW480细胞迁移能力变化;Western blot检测SW480细胞中细胞周期蛋白1(cyclin D1)和CDK6的表达水平。结果 RAB11B-AS1在结直肠癌组织中的表达显著低于癌旁组织(P0.01);在SW480中的表达显著低于NCM460细胞(P0.01)。RAB11B-AS1过表达后,SW480细胞的增殖、侵袭与迁移能力显著降低,凋亡率显著升高,cyclin D1与CDK6的蛋白表达降低(P0.01)。结论 lncRNA RAB11B-AS1在结直肠癌组织中表达降低,过表达RAB11B-AS1能够抑制SW480细胞的增殖、迁移与侵袭,并促进凋亡。     

亚硒酸钠诱导结直肠癌SW480细胞系凋亡

目的探讨亚硒酸钠诱导结直肠癌SW480细胞凋亡的信号通路。方法将SW480细胞分为三组,分别进行亚硒酸钠、Mn TMPy P以及两者联用处理;用DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧;Western blot方法检测细胞信号通路JNK和ATF-2的磷酸化,以及c-Myc、c-Jun、c-Fos、cyclin D1、cyclin A2、Bcl-2等相关蛋白表达;流式细胞术检测SW480细胞凋亡率。结果亚硒酸钠可使SW480细胞产生活性氧;抑制JNK和ATF-2的磷酸化(P0.05),下调c-Myc、c-Jun、c-Fos、cyclin D1、cyclin A2、Bcl-2的表达诱导SW480细胞凋亡(P0.05);用活性氧抑制剂Mn TMPy P可减轻亚硒酸钠所致的上述变化(P0.05)。结论亚硒酸钠可通过产生活性氧,抑制JNK和ATF-2的磷酸化,下调c-Myc、c-Jun、c-Fos、cyclin D1、cyclin A2、Bcl-2的表达,促进SW480细胞的凋亡。     

Gli2基因沉默对结肠癌细胞系SW480增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨胶质瘤相关癌基因同源蛋白2(Gli2)基因对结肠癌细胞系SW480增殖、迁移和侵袭能力的影响及相关机制。方法构建靶向Gli2基因的shRNA慢病毒载体,转染到SW480细胞中,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达;实验设干扰组、阴性对照组和空白组。用MTT法、倍增时间与集落形成实验检测细胞的增殖能力;用Transwell小室法检测细胞的迁移、侵袭能力;利用qRT-PCR和Western blot法检测细胞间Gli2、cyclin D和MMP-2基因和蛋白的表达。结果SW480细胞转染慢病毒72 h后可见明显的绿色荧光蛋白表达,干扰组较阴性对照组与空白组Gli2表达降低,细胞增殖减慢,集落形成能力减弱,倍增时间延长,迁移、侵袭能力减弱,cyclin D1和MMP-2表达下降(P0.05)。结论沉默Gli2的表达能够抑制SW480细胞增殖、迁移、侵袭能力,机制可能与cyclin D1和MMP-2的下调有关。     

分泌型卷曲相关蛋白2抑制人结直肠癌细胞系SW480的增殖和迁移

目的探究分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)抑制人结直肠癌细胞系SW480增殖、迁移的分子机制。方法在人正常结肠上皮细胞HCoEpiC和结直肠癌细胞系SW480中采用Western blot和RT-qPCR检测SFRP2的表达;构建shSERP2稳转SW480细胞株;在shNC SW480和shSFRP2 SW480细胞中采用Western blot和RT-qPCR检测SFRP2、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和Twist的表达;HIF-1α抑制剂(IDF-11774)刺激shSFRP2 SW480细胞后,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移、侵袭。结果 SW480细胞中SFRP2的表达量低于HCoEpic细胞(P0.01);敲降SFRP2后,SW480细胞增殖、迁移、侵袭能力显著提高(P0.001);而细胞内HIF-1α和Twist表达水平显著提高(P0.01);HIF-1α抑制剂(IDF-11774)刺激后,其增殖、迁移、侵袭能力显著回降(P0.001)。结论 SFRP2通过调控HIF-1α-Twist信号轴发挥其抑癌作用。     

USP22 siRNA通过TIMP-2抑制人结肠癌细胞系SW480侵袭

目的探讨泛素特异性蛋白酶22(USP22)调控基质金属蛋白酶组织抑制物-2(TIMP-2)对人结肠癌细胞侵袭的影响。方法 Western blot检测USP22在不同结肠癌细胞系的表达,选定高表达USP22的SW480细胞用于后续实验;将SW480细胞分为对照组(NC siRNA)和转染组;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测对照组及转染组Hif-1α、Hif-1β、cdc42、RhoA、Smad7、TIMP-1和TIMP-2 mRNA表达;RT-qPCR和Western blot检测对照组及2种转染组中USP22及TIMP-2蛋白的表达;Transwell小室法检测细胞的侵袭能力。结果 USP22在SW480细胞中表达量较高(P0.05);与对照组相比敲低USP22基因后,TIMP-2表达及SW480细胞侵袭能力均下降(P0.05);敲低TIMP-2基因后,USP22表达无明显变化,SW480细胞侵袭能力下降(P0.05)。结论 USP22可能通过调控TIMP-2的表达抑制人结肠癌细胞的侵袭与转移。     

miR-198过表达抑制视网膜母细胞瘤生长及侵袭的实验研究

目的探究微小RNA-198(miR-198)过表达对视网膜母细胞瘤(RB) Y79细胞系生长、侵袭及裸鼠异体移植瘤的影响。方法培养RB Y79细胞系,随机分为空白对照组(Control组)、阴性对照组和过表达组,采用Lipofectamine~?2000分别转染miR-NC、miR-198模拟物至阴性对照组和过表达组Y79细胞。qRT-PCR检测转染后Y79细胞中miR-198的相对表达水平;利用干细胞成球试验和Transwell小室试验分别检测各组Y79细胞的增殖及侵袭能力; Western blot检测各组Y79细胞中Ki67、SOX2、OCT4、VEGF、Fibronectin蛋白表达水平。将培养好的miR-NC和miR-198 mimic细胞分别进行裸鼠皮下注射,60只裸鼠分为阴性对照组和过表达组,各组每5 d随机处死3只裸鼠,检测RB质量及体积,qRT-PCR检测瘤体中miR-198的mRNA相对表达水平;免疫组化法检测Ki67、SOX2、VEGF阳性表达率。结果与Control组及阴性表达组比较,过表达组Y79细胞中miR-198的相对表达水平较高(P 0.05),并且干细胞成球直径、数量、细胞侵袭率均较低(P 0.05); Western blot结果显示,与Control组及阴性表达组比较,过表达组Y79细胞中Ki67、SOX2、OCT4、VEGF、Fibronectin蛋白表达水平均较低(P 0.05)。过表达组裸鼠的瘤体质量及体积均小于阴性对照组(P 0.05),并且过表达组裸鼠瘤体组织中miR-198的mRNA相对表达水平高于阴性对照组(P 0.05),过表达组Ki67、SOX2、VEGF的阳性表达率低于阴性对照组(P 0.05)。结论 miR-198可能在RB中作为抑癌基因发挥作用,过表达miR-198可明显抑制RB的增殖及侵袭能力,并抑制裸鼠瘤体生成。     

长链非编码RNA LINC00271过表达抑制甲状腺癌细胞生长的研究

目的探讨长链非编码RNA LINC00271过表达对甲状腺癌细胞FTC-133恶性生物学行为及裸鼠移植瘤生长的影响。方法构建LINC00271过表达质粒和阴性质粒转染至甲状腺癌细胞FTC-133,细胞随机分为对照组(Control组)、LINC00271阴性对照组(LV-NC组)和LINC00271过表达组(LV-LINC00271组)。Brd U检测细胞增殖,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测LINC00271表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭,Western blot检测Ki67、Caspase-3、Bax、Bcl-2、VEGF、Vimentin、Fibronectin蛋白表达水平。建立裸鼠移植瘤模型,称取肿瘤质量,RT-PCR检测其LINC00271表达水平,免疫组化检测Ki67、Caspase-3和VEGF表达水平。结果与Control组比较,LV-LINC00271组LINC00271表达水平、细胞凋亡率、Caspase-3蛋白表达水平、Bax/Bcl-2比值显著较高,细胞增殖数、细胞侵袭数、Ki67、VEGF、Vimentin、Fibronectin蛋白表达水平显著较低,差异均有统计学意义(P 0.05);与Ctrl组比较,LINC00271组Caspase-3、LINC00271表达水平显著较高,肿瘤质量、Ki67、VEGF表达水平显著较低,差异均有统计学意义(P 0.05)。结论 LINC00271过表达能够抑制甲状腺癌细胞FTC-133增殖、凋亡、侵袭及裸鼠移植瘤的生长。     

碘酸钾对人甲状腺癌细胞系周期的影响

目的探讨碘酸钾(KIO3)对人甲状腺鳞癌细胞系SW579细胞周期/增殖、细胞周期素D1(cyclin D1)及增殖细胞核抗原Ki67 mRNA/蛋白水平的影响。方法 CCK8法检测不同浓度(0、10-6、10-5、10-4、10-3、10-2和10-1mol/L)KIO3对细胞增殖的影响;0、10-6或10-2mol/L KIO3处理细胞48 h后,用碘化丙啶单染流式细胞术检测细胞周期;用实时定量PCR和Western blot分别检测cyclin D1和Ki67的mRNA及蛋白水平。结果 10-6mol/L或10-2mol/L KIO3分别促进或抑制SW579细胞增殖(P0.05);10-6mol/L组细胞G1期比例下降(P0.05),S期比例增加(P0.05),而10-2mol/L组各期细胞比例发生相应变化(P0.05);同时,10-6mol/L KIO3显著上调细胞内的cyclin D1(P0.05)和Ki67(P0.05)mRNA水平;而10-2mol/L KIO3显著下调细胞内的cyclin D1和Ki67 mRNA及蛋白水平(P0.05)。结论 KIO3影响SW579细胞增殖及周期可能与其对cyclin D1和Ki67的调节作用及剂量有关。     

miRNA-224-3p对人结肠癌细胞株SW480的增殖及侵袭的作用

目的探讨低表达miRNA-224-3p对结肠癌细胞株SW480增殖及侵袭的作用机制。方法采用siRNA技术沉默miRNA-224-3p在结肠癌细胞株SW480中的表达,实验分为si RNA组和NC组;采用CCK8法检测细胞增殖率;采用流式细胞术检测细胞周期分布;采用Western blot检测细胞中miRNA-224-3p、Cyclin D1以及CDK4蛋白的表达;采用Transwell小室检测细胞侵袭力。结果转染si RNA后,siRNA组中miRNA-224-3p蛋白表达明显低于NC组(P0.05);CCK8结果表明在结肠癌细胞株在转染24 h、48 h和72 h时的细胞增殖率分别明显低于NC组(P0.05);流式检测结果表明在siRNA组中,处于G0～G1期的SW480的细胞数量显著高于NC组(P0.05),处于S期的SW480细胞数量显著低于NC组(P0.05);Western blot结果表明siRNA组中的Cyclin D1和CDK4蛋白表达明显高于NC组(均P0.05);Transwell小室检测表明siRNA组细胞的侵袭力明显低于NC组(P0.05)。结论低表达miRNA-224-3p可显著抑制结肠癌细胞株SW480增殖和侵袭,其机制可能与阻滞细胞周期进程有关。     

shRNA 干扰长链非编码RNA PVT1 对甲状腺乳头状癌IHH-4细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的:探究沉默长链非编码RNA PVT1 对甲状腺乳头癌IHH-4 细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法:慢病毒 转染PVT1 shRNA(sh-PVT1),RT鄄PCR 检测PVT1 的表达,CCK8 检测细胞增殖倍数,流式检测细胞凋亡及细胞周期,Western blot 检测细胞Ki67、Caspase-3 和Cyclin A 的表达;复制裸鼠甲状腺乳头状癌肿瘤移植模型,记录肿瘤生长情况,Western blot 检 测肿瘤组织Ki67、Caspase-3 和Cyclin A 的表达。结果:sh-PVT1 转染细胞24 h 后,IHH-4 细胞PVT1 的表达水平明显降低(P< 0.01);转染细胞4 d 后,细胞增殖倍数显著降低,增殖标志蛋白Ki67 表达明显被抑制(P<0.05,P<0.01);同时,sh-PVT1 能显 著升高IHH-4 细胞凋亡率,诱导凋亡标志蛋白Caspase-3 表达(P<0.01);此外,sh-PVT1 还可诱导细胞G2/ M 期阻滞,抑制周期 蛋白Cyclin A 的表达(P<0.05,P<0.01)。干扰PVT1 表达能显著抑制甲状腺乳头瘤生长(P<0.01),下调肿瘤组织Ki67 和 Cyclin A 的表达水平(P<0.01),诱导Caspase-3 表达(P<0.01)。结论:沉默PVT1 表达能显著抑制甲状腺乳头癌IHH-4 细胞 增殖且诱导细胞凋亡和周期阻滞。     

番泻苷B抑制STAT3和ERK1/2磷酸化对A549细胞生长侵袭及裸鼠成瘤的影响

目的　探讨番泻苷B对A549细胞生长、侵袭及裸鼠成瘤的影响及机制。 方法　采用0、5、10、20 μM番泻苷B处理非小细胞肺癌A549细胞,将细胞随机分为4组进行后续实验,Brdu染色检测各组细胞增殖;Hoechst染色检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;蛋白免疫印迹检测ki67、PCNA 、cl-caspase-3、cl-caspase-9、VEGF、N-cadherin和E-cadherin蛋白表达水平,STAT3和ERK1/2的磷酸化情况;建立荷瘤小鼠模型,检测肿瘤重量,免疫组化检测Ki67和VEGF表达。 结果　与Control组相比较,各番泻苷B剂量组Brdu阳性细胞数量、侵袭细胞数明显减少（P<0.05）,细胞凋亡率明显上升（P<0.05）,细胞划痕愈合率降低（P<0.05）,ki67、PCNA、VEGF、N-cadherin蛋白水平明显降低（P<0.05）,cl-caspase-3、cl-caspase-9、E-cadherin蛋白水平明显升高（P<0.05）,STAT3和ERK1/2的磷酸化水平均明显降低（P<0.05）,降低荷瘤小鼠肿瘤重量与Ki67和VEGF表达水平（P<0.05）。 结论　番泻苷B抑制STAT3、ERK1/2磷酸化对A549细胞体内外生长有抑制作用。     

番泻苷B抑制STAT3和ERK1/2磷酸化对A549细胞生长侵袭及裸鼠成瘤的影响

目的　探讨番泻苷B对A549细胞生长、侵袭及裸鼠成瘤的影响及机制。 方法　采用0、5、10、20 μM番泻苷B处理非小细胞肺癌A549细胞,将细胞随机分为4组进行后续实验,Brdu染色检测各组细胞增殖;Hoechst染色检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;蛋白免疫印迹检测ki67、PCNA 、cl-caspase-3、cl-caspase-9、VEGF、N-cadherin和E-cadherin蛋白表达水平,STAT3和ERK1/2的磷酸化情况;建立荷瘤小鼠模型,检测肿瘤重量,免疫组化检测Ki67和VEGF表达。 结果　与Control组相比较,各番泻苷B剂量组Brdu阳性细胞数量、侵袭细胞数明显减少（P<0.05）,细胞凋亡率明显上升（P<0.05）,细胞划痕愈合率降低（P<0.05）,ki67、PCNA、VEGF、N-cadherin蛋白水平明显降低（P<0.05）,cl-caspase-3、cl-caspase-9、E-cadherin蛋白水平明显升高（P<0.05）,STAT3和ERK1/2的磷酸化水平均明显降低（P<0.05）,降低荷瘤小鼠肿瘤重量与Ki67和VEGF表达水平（P<0.05）。 结论　番泻苷B抑制STAT3、ERK1/2磷酸化对A549细胞体内外生长有抑制作用。     

基因沉默PRDX1 表达对人结直肠癌SW480 细胞侵袭迁移的影响

目的:探讨RNA 干扰过氧化还原酶1(Peroxiredoxin 1,PRDX1)表达对人结直肠癌SW480 细胞侵袭转移能力的影响。方法:筛选RNA 干扰PRDX1 的慢病毒质粒,与阴性对照慢病毒质粒分组转染结直肠癌SW480 细胞,转染后的SW480 细胞可分为PRDX1 基因沉默组(si-PRDX1)和阴性对照组(Vector)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)分别检测两组细胞中PRDX1 mRNA 和蛋白表达;采用Transwell 侵袭和迁移实验检测基因沉默PRDX1 表达对结直肠癌细胞侵袭及迁移能力的影响;通过Western blot 检测两组细胞中基质金属蛋白酶(MMP)家族部分蛋白表达水平。结果:基因沉默PRDX1 表达可有效抑制结直肠癌SW480 细胞中PRDX1 mRNA 和蛋白水平的表达,与阴性对照组相比(Vector),差异均具有统计学意义(P<0.01),说明基因沉默PRDX1 的SW480 细胞系构建成功;Transwell 侵袭和迁移实验显示si-PRDX1组细胞的侵袭及迁移能力较对照组均明显降低(P<0.01);Western blot 结果显示,与Vector 组相比,si-PRDX1 组细胞中组织基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)的表达明显增加,而MMP-2 及MMP-9 的表达显著下降,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:基因沉默人结直肠癌SW480 细胞的PRDX1 表达可有效抑制细胞的侵袭、迁移及转移能力,其机制可能会通过调控TIMP-2、MMP-2 及MMP-9 的表达介导。     

细丝蛋白A抑制人结肠癌SW480细胞体外侵袭转移能力

 摘要 目的 研究细丝蛋白A（filamin A,FLNa）对人结肠癌SW480细胞侵袭转移行为的影响,并初步探讨其抑癌的机制。方法 将FLNa基因质粒载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO/FLNa,以脂质体介导方式转染SW480细胞。经G418筛选,获得FLNa基因稳定表达的SW480 /FLNa细胞。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot技术检测FLNa基因的导入情况;RT-PCR和Western blot检测了SW480细胞中基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinases-9,MMP-9）的表达水平;MTT法检测细胞的增殖能力;划痕损伤实验、Transwell小室和Matrigel侵袭模型评价FLNa对细胞侵袭和转移能力的影响。结果 RT-PCR和Western blot证实FLNa的表达载体pcDNA3.1/V5-His -TOPO/FLNa在SW480细胞中获得稳定表达;SW480/FLNa细胞MMP-9的mRNA和蛋白表达水平低于野生型SW480细胞;划痕损伤实验、Transwell小室和Matrigel侵袭模型表明FLNa抑制SW480细胞的侵袭和转移。结论 FLNa能够抑制SW480细胞的侵袭和转移能力,其机制可能与降低MMP-9的表达有关。     

miR-509靶向Rac1调节人肝癌LM3细胞侵袭和迁移及裸鼠模型的存活

目的:探究微小RNA-509(miR-509)对人肝癌细胞生长、侵袭、迁移及荷瘤裸鼠存活的作用及其作用机制。方法:将miR-509模拟物(miR-509 mimic)和pcDNA Ras相关的C3肉毒毒素底物1(pcDNA Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1, pcRac1)转染人肝癌LM3细胞,Western blot检测Rac1的表达;萤光素酶报告基因实验证明miR-509和Rac1的靶向关系;Transwell实验检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;采用皮下注射LM3细胞的方法建立肝癌裸鼠移植瘤模型,检测裸鼠存活率,Western blot检测肿瘤组织Rac1的表达。结果:miR-509 mimic能明显抑制LM3细胞Rac1的表达(P0.05),pcRac1能明显减弱miR-509 mimic对Rac1表达的抑制作用(P0.05);miR-509 mimic还能显著减弱Rac1野生质粒的萤光素酶活性(P0.05);同时,miR-509 mimic可减少侵袭细胞数,抑制肝癌细胞迁移(P0.05)。此外,miR-509过表达还能升高肝癌移植瘤模型小鼠存活率(P0.05),降低肿瘤组织Rac1的蛋白表达水平(P0.01)。结论:miR-509能通过靶向抑制Rac1的表达而抑制肝癌细胞侵袭和迁移,并促进肝癌模型小鼠存活。     

钙释放激活钙通道调节分子1促进结肠癌细胞系SW480的增殖

目的 探讨钙释放激活钙通道调节分子1(ORAI1)对结肠癌细胞系SW480增殖的影响及其机制.方法 以ORAI1干扰慢病毒感染SW480细胞,分别用实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞中ORAI1mRNA和蛋白的表达,通过MTT法、集落形成实验和倍增时间检测细胞的增殖,流式细胞仪检测其周期,激光共聚焦显微镜检测细胞钙内流(SOCE),Western blot法检测细胞中ERK1/2、p-ERK1/2和CyclinD1蛋白表达.结果 SW480转染ORAI1干扰慢病毒72 h后,可见明显的荧光表达;干扰组较空病毒组和对照组,ORAI1的表达降低(P＜0.01)、细胞生长减慢(P＜0.05)、集落形成能力减弱(P＜0.01)、倍增时间延长(P＜0.01)、G1期细胞比例增高(P＜0.05)、SOCE内流峰值降低(P＜0.05)、p-ERK1/2和CyclinD1的蛋白表达量降低(P＜0.01).结论 ORAI1可能通过SOCE调节胞内Ca2+浓度,并进一步通过MAPK信号通路促进SW480细胞的增殖.     

穿心莲内酯对口腔鳞状细胞癌体内外抑制作用的实验研究北大核心CSCD

目的:研究穿心莲内酯在体内外对口腔鳞状细胞癌(OSCC)生长的抑制作用。方法:穿心莲内酯浓度梯度处理CAL-27细胞,CCK8检测OSCC细胞活力,流式细胞术检测细胞周期,克隆形成实验检测克隆形成率,RT-PCR检测PCNA和P21表达水平,Hoechst观察细胞形态,Western blot检测caspase-9、caspase-3、cleaved PARP、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和TGF-β1蛋白表达水平。OSCC细胞系CAL-27皮下注射裸鼠建立移植瘤裸鼠模型,检测肿瘤重量,免疫组化检测Ki67、caspase-3和Vimentin表达水平。结果:与0μmol/L穿心莲内酯组比较,15μmol/L、30μmol/L穿心莲内酯处理组细胞活力显著降低(P<0.05),克隆形成率显著降低(P<0.05),PCNA mRNA表达水平下调,P21 mRNA表达水平显著上调(P<0.05),caspase-9、caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05),N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与对照组比较,50 mg/kg和100 mg/kg穿心莲内酯组肿瘤重量明显下降(P<0.05),caspase-3细胞阳性率显著增高,Ki67和Vimentin细胞阳性率显著减少(P<0.05)。结论:穿心莲内酯在体内外均能抑制OSCC细胞生长。     

miR-490-5p 靶向SP1 抑制骨肉瘤的发生发展

目的:研究miR-490-5p对骨肉瘤细胞生长和运动的作用。方法:体外实验设置control组、mimic-NC组、miR-490-5p mimic组、SP1组、mimic+SP1组,通过Lipofectamine 2000将质粒分别或联合转染进入各组骨肉瘤MG63细胞,运用基因预测软件预测靶基因,荧光素实验验证靶向关系,RT-qPCR检测miR-490-5p和SP1的表达,MTT法检测细胞增殖,Western blot检测Ki67、PCNA、Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9、E-cadherin和N-cadherin的表达,Transwell检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移;体内实验设置Control组和miR-490-5p mimic组,分别在裸鼠右后肢腹侧皮下注射0.2 ml骨肉瘤MG63细胞和转染miR-490-5p mimic的骨肉瘤MG63细胞悬液,第30天颈椎脱位法处死裸鼠,电子天平称肿瘤重量,Western blot检测Ki67、Bax、caspase-3、E-cadherin蛋白表达情况。结果:miR-490-5p在骨肉瘤细胞MG63中低表达,miR-490-5p与SP1在3′UTR区存在结合位点,miR-490-5p直接靶向作用于SP1,且miR-490-5p过表达抑制SP1表达;在体外,miR-490-5p过表达明显降低骨肉瘤MG63细胞生长速度,下调Ki67、PCNA和Bcl-2表达,上调Bax、caspase-3和caspase-9表达,减少侵袭细胞数目,增宽划痕,降低愈合率,上调E-cadherin表达,下调N-cadherin表达;在体内,miR-490-5p过表达减轻肿瘤重量,降低Ki67、Bax和caspase-3的表达,升高E-cadherin表达。结论:miR-490-5p靶向SP1抑制骨肉瘤细胞MG63生长和运动。     

过表达Oct4B1 诱导结直肠癌SW480 细胞发生上皮间质转化

目的:探讨Oct4B1 基因过表达是否诱导人结直肠癌SW480 细胞发生上皮间质转化(EMT)及其可能的机制。方法:用带G418 抗性的Oct4B1 基因过表达质粒及阴性对照质粒转染人结直肠癌SW480 细胞株,分别称为实验组(SW480-Oct4B1)及对照组(SW480-NC),转染成功后用G418 筛选建立稳定转染的细胞株,对两种稳定转染细胞进行如下检测: RT-qPCR 检测Oct4B1 的mRNA 水平;于划痕实验和Transwell 小室实验检测迁移和侵袭能力;盂Western blot 检测EMT 相关标记物E-cadherin、N-cadherin 及Vimentin 蛋白表达; RT-qPCR 和Western blot 检测EMT 转录因子Twist 的mRNA 及蛋白表达。结果:稳定转染细胞株建立后,实验组与对照组比较:Oct4B1 基因表达水平明显升高(P<0.01);细胞迁移明显增强(P<0.01);细胞侵袭能力明显提高(P<0.01);上皮标记物E-cadherin 蛋白表达量明显下降(P<0.01);而间质标记物N-cadherin 及Vimentin蛋白表达量明显上调(P<0.01);Twist 的mRNA 及蛋白表达量均明显升高(P<0.01)。结论:过表达Oct4B1 基因可诱导人结直肠癌SW480 细胞发生EMT,增强细胞迁移及侵袭能力,其分子机制可能与提高Twist 表达有关。