miR-299-5p靶向RRS1调控胃癌细胞增殖、凋亡的分子机制

目的探讨微小RNA-299-5p(miRNA-299-5p)对胃癌细胞增殖、凋亡的影响及其可能作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测不同胃癌细胞株(BGC-823、MKN45、MGC803)及正常胃上皮GES-1细胞中miRNA-299-5p、核糖体合成调控因子(RRS)1 mRNA表达水平,采用Western印迹法检测RRS1蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因分析法验证miRNA-299-5p与RRS1的靶标关系。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组BGC-823细胞增殖活力;流式细胞术检测各组BGC-823细胞凋亡情况。结果不同胃癌细胞株中miRNA-299-5p表达水平均低于GES-1细胞,而RRS1 mRNA及蛋白表达水平显著高于GES-1细胞(P0.05)。miRNA-299-5p组GES-1细胞增殖活力显著低于miR-NC组(P0.05),miRNA-299-5p表达水平及细胞凋亡率明显升高(P0.05);与si-NC组相比,si-RRS1组BGC-823细胞增殖活力及RRS1蛋白表达水平显著降低(P0.05),细胞凋亡率显著升高(P0.05);RRS1是miRNA-299-5p的靶基因;与miR-299-5p+pcDNA组相比,miR-299-5p+pcDNA-RRS1组BGC-823细胞增殖活力显著升高(P0.05),细胞凋亡率显著降低(P0.05)。结论 miRNA-299-5p可抑制胃癌细胞增殖及促进细胞凋亡,其主要通过靶向调控RRS1表达而发挥作用。     

miR-524-5p靶向FABP5调控非小细胞肺癌增殖、凋亡的机制研究

目的探讨非编码小RNA-524-5p(miR-524-5p)是否通过靶向调控脂肪酸结合蛋白5(FABP5)从而影响非小细胞肺癌的增殖和凋亡。方法实时定量PCR(qPCR)检测非小细胞肺癌细胞(A549、H1299、H1650)和正常肺上皮细胞(BEAS-2B)中miR-524-5p和FABP5表达,选择miR-524-5p表达量最低的细胞系用于后续实验;运用生物学信息预测miR-524-5p靶基因,双荧光素酶报告基因进行验证;蛋白质印迹法(Western Blot)检测上调或下调miR-524-5p对FABP5的影响,以及A549细胞中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bax蛋白水平;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞术检测凋亡。结果与正常肺上皮细胞相比,miR-524-5p在非小细胞肺癌细胞系中表达下调(P0.05),FABP5 mRNA和蛋白表达上调(P0.05)。miR-524-5p在A549细胞中的表达量最低。FABP5是miR-524-5p的靶基因。miR-524-5p过表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,降低CyclinD1、Bcl-2蛋白水平,提升p21、Bax蛋白水平,差异均达到显著水平(P0.05),与抑制FABP5表达(si-FABP5)作用结果相同。FABP5过表达可以逆转miR-524-5p过表达对细胞增殖的抑制作用,以及对细胞凋亡的促进作用。结论 miR-524-5p能够抑制非小细胞肺癌增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制与靶向调控FABP5表达有关。     

circPDSS1通过靶向miR-1298调控肝癌细胞侵袭、迁移和凋亡的分子机制

目的 探讨环状RNA PDSS1(circPDSS1)对肝癌细胞凋亡、迁移和侵袭的影响及其机制.方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肝癌组织、癌旁组织中circPDSS1和miR-1298的表达.双荧光素酶报告基因实验、RT-qPCR确定circPDSS1对miR-1298的靶向调控作用.将circPDSS1...     

过表达LncRNA LINC00261通过靶向miR-362-5p调控前列腺癌细胞增殖、凋亡的机制

目的 探讨长链非编码RNA LINC00261(LncRNA LINC00261)调控微小RNA-362-5p(miR-362-5p)表达影响前列腺癌细胞增殖及凋亡的机制.方法 实时荧光定量-聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测LINC00261和miR-362-5p在前列腺癌细胞系中的表达情况.双荧光素酶报告基因检测...     

miR-509-3p靶向BCL2基因调控乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的分子机制

目的探讨微小RNA-509-3p(miR-509-3p)调控乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的分子机制。方法 qRT-PCR检测miR-509-3p、B淋巴细胞瘤(BCL)2在乳腺癌组织及不同乳腺癌细胞株中的表达情况;双荧光素酶报告基因实验检测miR-509-3p与BCL2之间的相互作用;噻唑蓝(MTT)实验与流式细胞术分别检测miR-509-3p对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡能力的变化情况;Transwell迁移及侵袭实验检测miR-509-3p对MDA-MB-231细胞迁移及侵袭行为的变化情况;Western印迹检测miR-509-3p对BCL2、细胞周期蛋白(CyclinD)1、p21、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白的调控情况。结果与癌旁正常组织相比,乳腺癌组织中miR-509-3p的表达水平显著下调(P<0.05),与其他乳腺癌细胞相比,乳腺癌MDA-MB-231细胞中miR-509-3p表达最低,而BCL2的表达水平相反;上调miR-509-3p表达MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭能力明显降低(P<0.05),而细胞凋亡水平明显升高(P<0.05),CyclinD1、MMP-2、MMP-9表达水平明显降低(P<0.05),而p21表达水平明显升高(P<0.05);miR-509-3p可靶向调控BCL2表达;上调BCL2表达可逆转上调miR-509-3p表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的作用。结论 miR-509-3p能够靶向抑制BCL2而抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡。     

miR-217靶向SPRY1调控血管内皮细胞增殖和凋亡的分子机制

目的探讨miR-217对血管内皮细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法运用25μmol/ml高糖建立血管内皮细胞EAhy926损伤;运用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-217、软脂酰化磷蛋白(SPRY1)的表达;将HG+anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、HG+anti-miR-217组(转染anti-miR-217)、HG+pcDNA组(转染pcDNA)、HG+pcDNA-SPRY1组(转染pcDNA-SPRY1)、HG+anti-miR-217+si-con组(共转染anti-miR-217和si-con)、HG+anti-miR-217+si-SPRY1组(共转染anti-miR-217和si-SPRY1)用脂质体法转染至EAhy926细胞,再用高糖处理;Western印迹检测细胞中SPRY1、细胞周期蛋白依靠性激酶抑制剂(p21)、B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染法检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测miR-217与SPRY1的靶向结合关系。结果成功建立高糖诱导的血管内皮细胞EAhy926;与NG组相比,HG组细胞中miR-217表达明显上调,SPRY1表达明显下调(P 0.05);抑制miR-217、过表达SPRY1均可促进高糖诱导的EAhy926细胞增殖,抑制凋亡,上调p21、Bcl-2,下调Bax;miR-217可抑制野生型SPRY1细胞的荧光活性,负向调控SPRY1表达;敲减SPRY1可逆转抑制miR-217对高糖诱导的EAhy926细胞增殖、凋亡的调控及相关蛋白表达的影响。结论 miR-217可调控血管内皮细胞的增殖、凋亡,其机制可能与靶向SPRY1有关,可为高糖引起的心血管疾病的治疗提供新方向。     

miR-16通过靶向调控YAP1基因表达影响肺癌细胞的增殖

目的探讨miR-16通过靶向调控Yes相关蛋白(YAP) 1基因表达影响肺癌细胞的增殖。方法采用RT-PCR法检测miR-16在不同肺癌细胞株及人正常胚肺细胞中的表达。脂质体LipofectamineTM3000将miR-16 mimics和miR-16NC转入肺癌细胞中,RT-PCR检测miR-16表达,MTT法检测细胞活力,软琼脂糖克隆形成实验检测细胞克隆数目,Ho-echst33258检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,RT-PCR法及Western印迹检测细胞中YAP1蛋白及mRNA表达,并进行荧光素酶报告基因分析。结果 miR-16在A549、H1050、H1299、NCI-H520、NCI H596及MIRC-5中的表达分别为(0. 38±0. 03)、(1. 35±0. 01)、(1. 10±0. 11)、(1. 43±0. 14)、(1. 56±0. 15)、(2. 38±0. 25);与MIRC-5比较,肺癌细胞中miR-16表达量下调(P<0. 01),且在A549细胞中表达量最低,因此选为后续实验研究对象。与miR-16 NC组比较,miR-16 mimics组miR-16表达量显著提高(P<0. 01);且转染24、48、72 h后,细胞活力均下降(P<0. 01);转染48 h后,细胞克隆形成数目减少(P<0. 01),细胞凋亡率提高(P<0. 01),细胞周期阻滞于G1期(P<0. 01);同时,miR-16 mimics能够靶向调控YAP1,下调YAP1蛋白及mRNA表达(P<0. 01)。结论 miR-16 mimics通过靶向下调YAP1表达进而抑制A549细胞增殖。     

骨关节炎软骨细胞凋亡的信号传导

骨关节炎（osteoarthritis，OA）是一种严重危害老年人健康的慢性退行性骨关节疾病。在最常见的三大老年病（脑血管疾病，骨质疏松症，老年性骨关节病）中，OA患病率在世界范围内居于首位。60—70岁的老年人OA患病率约为60％，70岁以上老年人的OA患病率约为70％。联合国业已宣布2000—2010年是骨与关节的十年，以提醒人们注意骨关节疾病对世界健康的影响。而软骨细胞凋亡是骨关节炎发生的重要病理学特征，本文主要通过对骨关节炎中软骨细胞凋亡可能通过的线粒体途径、死亡受体途径、内质网应激反应性凋亡途径等信号传导通路作一综述，为今后中西医治疗骨关节炎提供一个新的思路。     

miR-195-5p靶向HMBOX1调控胃癌细胞增殖迁移侵袭及凋亡的机制

目的探讨miR-195-5p在胃癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡中的作用与机制。方法运用qRT-PCR法检测正常胃上皮细胞(GES)-1、胃癌细胞N87、 SGC-7901、HGC-27中miR-195-5p、含有1的同源框(HMBOX1)的表达;将miR-NC组(转染miR-NC)、miR-195-5p组(转染miR-195-5p mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-HMBOX1组(转染si-HMBOX1)、miR-195-5p+pcDNA组(共转染miR-195-5p mimics和pcDNA)、miR-195-5p+pcDNA-HMBOX1组(共转染miR-195-5p mimics和pcDNA-HMBOX1)转染至HGC-27;Western印迹检测细胞中HMBOX1、survivin、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2的蛋白表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞迁移侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞荧光活性。结果相比于正常胃上皮GES-1细胞,胃癌细胞N87、 SGC-7901、HGC-27中miR-195-5p表达显著降低,HMBOX1表达显著升高;过表达miR-195-5p或敲减HMBOX1均可抑制HGC-27细胞增殖、迁移侵袭及促凋亡,下调survivin、MMP2、MMP9、Bcl-2,上调P21、Bcl-2相关X蛋白(Bax);miR-195-5p可靶向HMBOX1;过表达HMBOX1可恢复miR-195-5p对胃癌细胞的作用。结论 miR-195-5p能抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡,机制与靶向HMBOX1相关,将可为胃癌的诊断及治疗提供依据。     

miR-19a靶向PTEN调控肝癌细胞增殖、凋亡的实验研究

目的 研究miR-19a靶向第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)调控肝癌细胞增殖、凋亡的作用.方法 培养肝细胞癌细胞株HepG2、人正常肝细胞株HL-7702,采用qRT-PCR检测miR-19a的表达量,Western blotting检测PTEN的表达量;HepG2细胞分组后转染miR-19a mi...     

MiR497HG靶向miR-588调控肺癌细胞增殖、迁移侵袭和凋亡的机制研究

目的研究MiR497HG对肺癌细胞增殖、迁移侵袭及凋亡的影响,并探讨其机制。方法运用RT-PCR法检测永生化正常肺上皮细胞BEAS-2 B、肺癌细胞NCI-H1975、NCI-H460、A549中MiR497HG、miR-588的表达;将blank组(不做任何处理)、si-NC组(转染si-NC)、si-MiR497HG组(转染si-MiR497HG)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-588组(转染anti-miR-588)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-588组(转染miR-588 mimics)、si-MiR497HG+anti-miR-NC组(共转染si-MiR497HG和anti-miR-NC)、si-MiR497HG+anti-miR-588组(共转染si-MiR497HG和anti-miR-588),均用脂质体法转染至NCI-H1975细胞;MTT法检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞的迁移侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中MiR497HG与miR-588的结合力。结果与永生化正常肺上皮细胞BEAS-2 B相比,肺癌细胞NCI-H1975、NCI-H460、A549中MiR497HG表达显著升高,miR-588表达显著降低(P0.05);抑制MiR497HG或过表达miR-588均可抑制NCI-H1975细胞的增殖、迁移侵袭,促进凋亡;miR-588可抑制野生型MiR497HG细胞的荧光活性,且可负向调控MiR497HG的表达;过表达MiR497HG可逆转miR-588对肺癌细胞的增殖、迁移侵袭抑制和凋亡促进作用。结论长链非编码RNA MiR497HG可促进肺癌细胞增殖、迁移侵袭,抑制凋亡,其机制可能与靶向抑制miR-588有关,将可为肺癌的治疗提供新靶点。     

miR-181b-5p靶向PDCD4基因调控高糖诱导血管内皮细胞增殖和凋亡的机制

目的研究miR-181b-5p和程序性细胞死亡因子(PDCD)4在高糖诱导的血管内皮细胞中的表达及其对增殖和凋亡的影响。方法运用qRT-PCR和Western印迹检测高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中miR-181b-5p和PDCD4的表达。用脂质体法将miR-181b-5p mimic和PDCD4 siRNA转染至HUVEC,MTT法、流式细胞仪检测高糖诱导HUVEC的增殖和凋亡。Targetscan在线分析网站预测和双荧光素酶报告基因实验验证miR-181b-5p和PDCD4的靶向关系。共转染miR-181b-5p mimic和pcDNA-PDCD4至HUVEC,MTT法、流式细胞仪检测高糖诱导HUVEC的增殖和凋亡。结果与5 mmol/L葡萄糖干预的HUVEC相比,高糖诱导的细胞中miR-181b-5p表达显著上调、PDCD4表达显著下调(P0.01,P0.001)。过表达miR-181b-5p、低表达PDCD4均可促进高糖诱导的HUVEC增殖、抑制其凋亡。Targetscan在线预测、双荧光素酶报告基因实验和Western印迹结果显示,miR-181b-5p能够靶向调控PDCD4的表达。上调PDCD4的表达可逆转miR-181b-5p对高糖诱导的HUVEC促进增殖和抑制其凋亡的作用。结论过表达miR-181b-5p可促进高糖诱导的HUVEC增殖,抑制其凋亡,其机制可能与miR-181b-5p靶向调控PDCD4有关。     

miR-124通过靶基因IQGAP1调控甲状腺癌细胞分化、增殖的机制

目的探讨miR-124对甲状腺癌细胞的作用机制。方法通过RT-PCR检测人甲状腺癌细胞K1、BCPAP、TPC-1和人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中miR-124的表达水平。MTT法检测甲状腺癌细胞K1转染miR-124 mimics、mimics control后的细胞存活率。根据靶基因预测软件The miRBase、Target Scan、Pic Tar预测miR-124的靶基因IQGAP1,构建wt-IQGAP1和mut-IQGAP1,采用双荧光素酶活性检测鉴定靶基因的正确性。Western印迹检测转染miR-124 mimics、mimics control后甲状腺癌细胞K1中IQGAP1的表达情况。甲状腺癌细胞K1中转染si IQGAP1和si IQGAP1 control,用MTT检测细胞增殖能力,Western印迹检测细胞中IQGAP1蛋白表达含量。结果甲状腺癌细胞K1、BCPAP、TPC-1中的miR-124的相对表达量与甲状腺细胞相比差异显著(P<0.05),三种甲状腺癌细胞中K1细胞的表达量最低。转染后12 h内,空白组、miR-124 mimics组和mimics control组的甲状腺癌K1细胞的存活数量差异不显著(P>0.05),从转染后12 h开始,miR-124 mimics组与对照组、mimics control组相比,甲状腺癌细胞生长抑制明显。预测miR-124的靶基因可能为IQGAP1,转染miR-124 mimics野生型IQGAP1中荧光素酶活性比突变型IQGAP1中荧光素酶活性显著降低,差异显著(P<0.05)。mimics control和wt-IQGAP1和mut-IQGAP1共转染组比较无明显差异(P>0.05)。转染miR-124 mimics组甲状腺癌K1细胞IQGAP1蛋白明显下降,miR-124负调控IQGAP1的表达。抑制甲状腺癌K1细胞中IQGAP1基因,细胞增殖能力减弱,细胞中IQGAP1蛋白表达减弱。结论 miR-124在甲状腺癌细胞中表达下调,miR-124可以抑制甲状腺癌细胞的增殖分化,其通过负调控靶基因IQGAP1抑制癌细胞增殖分化。     

复元胶囊对大鼠膝骨关节炎模型软骨细胞凋亡及增殖的影响

目的观察复元胶囊对实验性大鼠膝骨关节炎(OA)模型软骨细胞凋亡及细胞核增殖抗原(PCNA)mRNA表达的影响,探讨其治疗骨关节炎的作用机制。方法 48只雄性SD大鼠随机分成正常组、模型组、壮骨关节丸组、复元胶囊组,每组12只。除正常组外,其余各组采用Hulth法建立膝OA动物模型。4 w后,壮骨关节丸组、复元胶囊组分别给与壮骨关节丸、复元胶囊灌胃,而正常组、模型组给予生理盐水。8 w后,通过肉眼观察、Mankin's评分评价复元胶囊治疗OA疗效,透射电镜、原位末端标记法(TUNEL法)检测软骨细胞凋亡,硝酸还原酶法测定关节液中一氧化氮(NO)水平,RT-PCR法检测PCNA mRNA的表达。结果复元胶囊Mankin评分、软骨细胞凋亡指数及关节液中NO水平均低于模型组(P<0.05),而PCNA mRNA的表达高于模型组(P<0.01)。结论复元胶囊能抑制OA软骨细胞的凋亡,促进软骨细胞PCNA的表达,延缓OA软骨退变过程。     

LncRNA NEAT1靶向miR-520b调控口腔鳞癌细胞增殖、凋亡及自噬的分子机制

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)核富集的转录物(NEAT)1对人口腔鳞癌细胞Tca8113增殖、凋亡和自噬的影响,并探讨其机制。方法运用qRT-PCR检测人口腔鳞癌细胞Tca8113、人正常口腔上皮细胞HOEC中NEAT1、短链非编码RNA(miR)-520b的表达;将si-NC组(转染si-NC)、si-NEAT1组(转染si-NEAT1)、miR-520b组(转染miR-520b mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、si-NEAT1+anti-miR-NC组(si-NEAT1和anti-miR-NC共转染)、si-NEAT1+anti-miR-520b组(si-NEAT1和anti-miR-520b共转染),用脂质体法转染至Tca8113细胞;MTT法检测各组细胞的增殖;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;Western印迹检测各组细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与HOEC相比,Tca8113中NEAT1表达显著升高,miR-520b表达显著降低(P0.05);抑制NEAT1、过表达miR-520b均可抑制Tca8113细胞增殖,促进凋亡和自噬。抑制miR-520b可逆转抑制NEAT1对Tca8113细胞的增殖抑制和凋亡、自噬促进作用。结论抑制NEAT1可抑制口腔鳞癌细胞增殖、促进凋亡和自噬,其机制可能与靶向miR-520b有关,将可为口腔鳞癌的靶向治疗提供依据。