原核表达的血管抑素K (1-3)蛋白对脑胶质瘤的生长抑制作用

目的获得具有抗血管生成活性的 angiostatin K(1-3)[AK(1-3)]基因的原核表达蛋白,应用该蛋白治疗裸鼠皮下人脑胶质瘤.方法构建和鉴定 pDH-AK(1-3)载体并在大肠杆菌DH5α内表达,诱导后用 SDS-PAGE分析、经亲和层析纯化后行Western Blot鉴定,以人脐带静脉血管内皮细胞抑制实验和鸡胚绒毛膜尿囊膜实验验证其生物学活性,应用AK (1-3) 蛋白治疗裸鼠皮下人脑胶质瘤.结果获得抑制人脐带静脉血管内皮细胞生长活性的AK(1-3) 原核表达蛋白(Mr为35×103),其蛋白总量占菌体总蛋白的12 %,该纯化表达蛋白5 mg·kg-1·次-1和10 mg·kg-1·次-1组均可抑制裸鼠皮下人脑胶质瘤生长,抑瘤率分别为34.5%和64.6%.结论该实验为应用抗血管生成药物治疗人脑胶质瘤等实体瘤研究奠定了初步基础.     

重组人血管抑素基因K(1-3)腺病毒载体的构建

目的 构建携带血管抑素（angiostatin，AG）基因K（1—3）重组复制缺陷型腺病毒表达载体。方法 将人血管抑素K（1—3）cDNA插入穿梭载体pShuttle产生重组质粒pShttle-AG（K1—3），经双酶切与骨架载体pAdeno—X重组产生pAdeno-X—AG（K1—3），转染293细胞制备重组腺病毒。结果 对pShuttle—AG（K1—3）进行酶切鉴定及测序证实插入片断为AG（K1—3）。PCR鉴定pAdeno—X—AG（K1—3），扩增出318bp特异性片断。线性pAdeno—X—AG（K1—3）转染293细胞，成功包装出重组腺病毒。结论 成功构建了携带人anglostatin（K1—3）重组腺病毒栽体，可在体外表达具有生物学活性的人angiostatin（K1—3），为进一步研究奠定了基础。     

局部分泌的血管抑素K（1—3）蛋白抑制人脑胶质瘤生长的实验研究

目的 探讨局部分泌血管抑素Ｋ（１￣３）蛋白〔ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ Ｋ（１￣３）,ＡＫ（１￣３）〕治疗人脑胶质瘤的可行性。方法 构建ＡＫ（１￣３０基因的真核表达载体ｐｃＤＮＡ－ＳＡＫ（１￣３）,经脂质体法将该载体转染入人脑胶质瘤细胞ＳＨＧ４４、行Ｇ４１８筛选。用电镜和流式细胞仪测定转染细胞的生物学性状,以内皮细胞抑制实验和免疫荧光实验检测该细胞表达的ＡＫ（１￣３）蛋白。应用裸鼠皮下致瘤性实验,结合     

细胞因子基因在人脑胶质瘤中的表达及意义

目的：探讨细胞因子在脑胶质瘤发生及发展中的作用。方法：采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法测定５种细胞因子基因在人脑胶质瘤中的表达。结果：介导液免疫的细胞因子（ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－１０）基因呈优势表达，而介导细胞免疫的细胞因子（ＩＬ－２、ＩＦＮγ）基因呈劣势表达。结论：两类细胞因子在人脑胶质瘤中的漂移可能是造成脑胶质瘤患者细胞免疫功能低下的原因之一。     

LMO3基因在人脑胶质瘤组织中的表达及意义

目的 观察LMO3基闪在人脑胶质瘤组织中的表达与临床病理特征的关系.方法 用半定量方法检测44例人脑胶质瘤组织与12例正常脑组织中经逆转录-聚合酶链式反应扩增后的LMO3基因表达.结果 LMO3基因在胶质瘤、正常脑组织中均有表达,在低分化胶质瘤中(Ⅲ～Ⅳ级16例)的表达高于高分化胶质瘤(Ⅰ～Ⅱ级28例,P<0.05);在高分化胶质瘤组和低分化胶质瘤组的表达均高于正常脑组织组(12例,P<0.05).结论 LMO3基因的表达水平与胶质瘤的分化程度相关.     

血管内皮生长因子在人脑胶质瘤中的表达及意义

目的：研究人脑胶质瘤中血管内皮生长因子（VEGF）的表达及意义。方法：采用免疫组化SABC法检测63例人脑胶质瘤组织中VEGF的表达。结果：63例中50例VEGF染色阳性，阳性率79．4％，VEGF的表达与胶质瘤的恶性程度及肿瘤复发相关（P＜0．01），而与患者的性别、年龄、肿瘤生长部位及肿瘤大小无关（P＞0．05）。结论：VEGF的表达与胶质瘤的恶性程度及复发相关，可作为一项有意义的预后指标。     

血管内皮生长因子在人脑胶质瘤中的表达及意义

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)表达与人脑胶质瘤发生发展的关系，为肿瘤的抗血管治疗提供理论依据。方法 采用免疫组化的方法检测64例人脑胶质瘤和6例正常脑组织中VEGF的表达。结果 VEGF蛋白主要分布在Ⅲ，Ⅳ级胶质瘤组织的瘤细胞和血管内皮细胞，Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤呈低水平表达，正常脑组织不表达。VEGF在人脑胶质细胞瘤Ⅳ级中的阳性表达率为80．95％。结论 VEGF可能通过参与诱发胶质瘤血管的生成，对胶质瘤的演进过程起促进作用。     

原位杂交检测EGFR和c-erbB-2基因在人脑胶质瘤中的表达

目的：探讨表皮生长因子受体（EGFR）和c-erbB-2基因表达与人脑胶质瘤发生发展的关系。方法：采用原位杂交方法检测52例人脑胶质瘤、2株人脑胶质瘤细胞系及8例正常人脑组织中EGFR和c-erbB-2基因mRNA的表达。结果：EGFRmRNA阳性率在高恶性度（Ⅲ～Ⅳ级）胶质瘤为79．2％,低恶性度（Ⅰ～Ⅱ级）胶质瘤为50．0％,二差异显（P＜0．05）;c-erbB-mRNA阳性率在高恶性胶质瘤为83．3％,低恶性度胶质瘤为71．4％,二无显差别（P＞0．05）;EGFR和c-erbB-2mRNA表达均随胶质瘤恶性程度增高而增强（P＜0．01）。EGFR和c-erbB-2mRNA在2株人脑胶持瘤细胞系中均有表达,在8例正常人脑组织中均无表达。EGFR和c-erbB-mRNA表达结果密切相关（P＜0．05）。结论：EGFR和c-erbB-2基因在人脑胶质中普遍表达,且随胶质瘤恶性程度增高而表达增强,EGFR和c-erbB-2基因共表达在人脑胶质瘤发生发展过程中发挥重要作用。     

细胞因子基因在人脑胶质瘤中的表达及意义

目的探讨细胞因子在脑胶质瘤发生及发展中的作用。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定5种细胞因子基因在人脑胶质瘤中的表达。结果介导体液免疫的细胞因子(IL-4、IL-6、IL-10)基因呈优势表达，而介导细胞免疫的细胞因子(IL-2、IFNγ)基因呈劣势表达。结论两类细胞因子在人脑胶质瘤中的漂移可能是造成脑胶质瘤患者细胞免疫功能低下的原因之一。     

人血管抑素cDNA在酿酒酵母中的表达和分泌

目的：在酿酒酵母中表达和分泌人血管抑素。方法：应用ＤＮＡ重组技术构建重组质粒;质粒ＤＮＡ转化酵母用醋酸锂法;以纤溶酶原抗血清为第一抗体,采用ＥＬＩＳＡ方法检测表达产物。结果：将ＭＦα１信号肽和人血管抑素融合基因序列插入酵母表达载体ｐＭＡ９１的Ｂｇ１Ⅱ位点,构建了重组表达质粒ｐＭＡＡ２,转化酿酒酵母ＧＲＦ１８后获得工程菌ＧＲＦ１８（ｐＭＡＡ２）,其培养上清液ＥＬＩＳＡ分析阳性。结论：人血管抑素在ＧＲ     

联合应用angiostatinK(1-3)和endostatin裸DNA对人脑胶质瘤生长的抑制作用

目的 :探讨联合应用angiostatinK(1 3) {ASK(1 3) }和endostatin(ES)裸DNA对人脑胶质瘤生长的影响和作用特点 .方法 :在 1 5只裸鼠皮下接种SHG4 4人脑胶质瘤细胞并分A ,B和C组 (n =5 ) ;在接种后第 1 2日 ,A组 :给予瘤体内注射 2 0 μL脂质体包裹的各 5 μg的 pcDNA S ASK (1 3)和pcDNA S ES质粒 ;B组 :瘤体内注射 2 0 μL脂质体包裹的 1 0μgpcDNA 3.1质粒 ;C组 :瘤体内注射 2 0 μL无菌生理盐水 ;3d后重复注射 1次 .每日定时观察肿瘤生长情况 .4 0d后处死裸鼠 ,检测和计算肿瘤体积、坏死率、血管数和抑瘤率 .结果 :A ,B和C组肿瘤的终体积分别是 4 .4 1 6± 1 .88cm3 ,8.0 34± 1 .85cm3 和 8.0 5 6± 1 .91cm3 ,A组抑瘤率为 4 6 .8% ;A ,B和C组肿瘤的平均坏死率分别为 39.1 2± 7.35 % ,9.1 7± 7.89%和 9.2 1± 7.4 8% ,A与B或C组比较差异显著 (P <0 .0 1 ) ,B ,C组比较差异不显著 (P >0 .0 5 ) .3组的血管计数分别为 3.92± 1 .89,1 1 .8± 2 .0 4和 1 2 .0± 2 .2 1 ,A与B或C组比较差异显著 (P <0 .0 1 ) ,B ,C组比较差异不显著 (P >0 .0 5 ) .结论 :联合应用ASK(1 3)和ES裸DNA可抑制胶质瘤的血管生成、导致其坏死增加 ,进而抑制肿瘤生长 .其作用机制有待深入研究 ,该实验为胶质瘤的抗血管生成     

Angiostatin K(1-3) gene for treatment of human gliomas: an experimental study

Objective To discuss the feasibility of gene therapy of human glioma by antiangiogenesis method.
Methods Angiostatin K(1-3) cDNA with secretive signal was inserted into the polylinker s ites of eukaryotic expression vector pcDNA3 to construct pcDNA-SAK(1-3).The vector was transfected into human SHG44 glioma cells by lipofectamine and the po sitive clone was screened by G418.The biological characteristics of glioma cel ls were examined by electronmicroscope and flow cytometry.The activity of angi ostatin K(1-3) protein expressed by SHG44 cells was examined by the bovine micr a ngium endotheliocyte inhibition assay and immunofluorescence assay.When SHG44 cells were implanted into the strata subcutaneum of nude mice, tumor necrosis an d micrangium were calculated immunohistochemically and electronmicroscopically f or determining their charac-teristics and validity in gene therapy of human glio ma by antiangiogenesis method.
Results The eukaryotic expression vector pcDNA-SAK(1-3) was successfully constructed and transfected into glioma cells.The cells expressed angiostatin K(1-3) prote i n, and their tumorigenesis and angiogenesis in nude mice were greatly reduced.
Conclusion Angiostatin K(1-3) gene is feasible to treat human glioma.This experiment lay s a foundation for gene therapy of the other solid tumors by antiangiogenesis method.     

miR-338-3p和MACC1基因在卵巢上皮性癌(EOC)组织中的表达及其意义

 目的 探讨微RNA-338-3p（miR-338-3p）和MET转录调剂因子MACC1在卵巢上皮性癌（epithelial ovariancancer，EOC）组织中的表达及其临床意义。方法 采用实时荧光定量PCR技术检测20例正常卵巢组织、20例卵巢良性上皮性肿瘤组织和65例EOC组织中miR-338-3p和MACC1基因的表达情况，分析二者表达的相关性及其与EOC临床病理指标的关系，Log-rank和Cox回归分析影响EOC患者复发和死亡的危险因素，Kaplan-Meier法分析miR-338-3p和MACC1表达对EOC患者生存的影响。结果 EOC组织中miR-338-3p和MACC1基因的表达分别为0.331±0.038和0.774±0.025，与正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤组织中的表达差异有统计学意义（F=77.916，P<0.001；F=77.945，P<0.001），不同性质卵巢组织中miR-338-3p和MACC1的表达呈明显负相关（r=-0.968，P<0.001）。在EOC中，临床分期越晚、组织级别越高、有淋巴结转移的癌组织中miR-338-3p表达越低、MACC1表达越高。Log-rank单因素分析显示miR-338-3p低表达与EOC患者的复发（P=0.038，HR=4.139，95% CI：1.271~8.078）和死亡（P=0.008，HR=3.007，95% CI：1.217~7.431）相关。与其他患者相比，miR-338-3p低表达且MACC1高表达的EOC患者的总体生存率和无进展生存率最低（χ²=16.960，P=0.001；χ²=18.930，P=0.000）。结论 miR-338-3p低表达和MACC1高表达可能与EOC患者预后不良相关，二者可能共同参与EOC的进展和复发。     

cathepsin B和cystatin C在人脑胶质瘤中的表达及意义

目的探讨半胱蛋白酶抑制剂C(cystatin C)和组织蛋白酶B(cathepsin B)在人脑胶质瘤组织中的表达及意义。方法通过免疫组织化学法检测cystatin C及cathepsin B在57例不同分化程度的脑胶质瘤组织中的表达。结果cystatin C在低分化胶质瘤(III-IV级)中的表达低于高分化者(I～II级),而cathepsin B在低分化胶质瘤中的表达高于高分化者(P<0.05)。cystatin C和cathepsin B在脑胶质瘤中的表达呈负相关(P=0.01)。结论 cystatin C和cathepsin B的表达与人脑胶质瘤病理分级及侵袭性相关。联合检测cystatin C和cathepsin B的表达,可为脑胶质瘤的侵袭性及临床恶性程度评估提供重要信息。     

人防御素-alpha1-3在乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨人防御素-alpha1-3(HNP1-3)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法检测20例乳腺组织及59例乳腺癌组织中HNP1的表达,并结合乳腺癌患者年龄、临床分期、组织学分级、淋巴结转移以及PR/ER/C-erB-2表达进行相关性分析。结果①HNP1-3在正常乳腺组织中为强阳性表达,表达率为95%;②HNP1-3在癌组织中差异表达,在淋巴结转移患者的强阳性表达为45%,而淋巴结未转移患者表达强阳性率81.08%(P0.05),强阳性率在组织学Ⅰ级为85.71%,Ⅱ级72.22%,Ⅲ级45%(P0.05);③HNP1-3在乳腺癌中的表达与肿瘤患者年龄、临床分期、PR/ER/C-erB-2表达无显著差异(P0.05)。结论HNP1-3在乳腺癌的发展过程中起重要作用,其表达水平可能是反映乳腺癌预后的标记。     

人脑胶质瘤组织中MT1-MMP、MMP-2 mRNA的表达

目的 :分析MT1 MMP、MMP 2mRNA的表达与脑胶质瘤恶性程度和侵袭性之间的关系及其意义。方法 :采用原位杂交方法检测 4 2例人脑胶质瘤和 8例正常脑组织中MT1 MMP、MMP 2mRNA的表达。结果 :MT1 MMP、MMP 2mRNA的表达水平与肿瘤的级别呈正相关 (r=0 .875、0 .86 5 ,P <0 .0 1 ) ;Ⅲ～Ⅳ级脑胶质瘤组织与正常脑组织、Ⅰ～Ⅱ级脑胶质瘤组织之间标记指数差异有统计学意义 (P <0 .0 1 ) ;且MT1 MMPmRNA表达与MMP 2mRNA表达呈正相关 (r=0 .882 ,P <0 .0 1 )。结论 :MT1 MMP表达与脑胶质瘤的恶性程度和侵袭性有明显的关系 ;MT1 MMP与MMP 2在脑胶质瘤的侵袭过程中密切相关     

mTOR和Survivin在人脑神经胶质瘤中的表达及临床意义

目的探讨m TOR及survivin在不同级别人脑胶质瘤中的表达情况及临床意义。方法采用半定量免疫组化(Envision法)检测35例低级别胶质瘤(Ⅰ、Ⅱ级)、36例高级别胶质瘤(Ⅲ、Ⅳ级)以及10例正常脑组织中m TOR及Survivin的表达情况,并分析m TOR及Survivin的表达情况及相关性。结果与正常脑组织相比,m TOR和Survivin在人脑胶质瘤中的表达均显著增加,在高级别胶质瘤中,两者的阳性表达率显著高于低级别组,m TOR与Survivin的表达呈现相关性(r=0.264,P=0.026<0.05)。结论 m TOR和Survivin在脑胶质瘤中的表达明显增加,m TOR和Survivin可能在神经胶质瘤的发生发展中具有重要的作用。     

CRIP1基因在人卵巢癌中的表达及其临床意义

目的 通过生物信息学分析富含半胱氨酸肠蛋白1(cysteine-rich intestinal protein 1,CRIP1)基因在人卵巢癌中的表达水平及其临床意义.方法 Oncomine数据库分析CRIP1基因在不同类型癌症研究中的表达水平以及在卵巢癌不同病理分型中的表达分布;Kaplan-Meier Plotte...     

人分化抑制因子Id-3基因在大肠埃希菌中的高效表达及其多克隆抗体的制备

目的 在大肠杆菌中表达人Id-3与谷胱甘肽-S转移酶(GST)的融合蛋白,并制备抗人ld-3的多克隆抗体.方法 从乳腺癌组织中提取总RNA,用RT-PCR扩增出Id-3的编码序列,克隆至表达载体pGEX-6P-1中,重组质粒经PCR、酶切、测序鉴定后,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达获得GST-Id-3融合蛋白,SDS-PAGE分析表达产物,Western-Blot检测重组抗原的免疫原性.通过亲和层析法纯化表达的GST-Id-3融合蛋白,并以此为抗原制备多克隆抗体.结果 经PCR、酶切、测序鉴定证明,Id-3基因已正确克隆至pGEX-6P-1中,经IPTG诱导后,表达出相对分子量为39 000 GST-Id-3融合蛋白.ELISA和琼扩试验鉴定所制备的多克隆抗体可以与GST-Id-3融合蛋白发生特异性反应.结论 Id-3基因在大肠杆菌中的成功表达及制备的多克隆抗体,为检测Id-3及其在各种组织中的表达水平提供了一种检测途径,也为分析Id-3分子结构、抗原表住和生物学功能奠定了基础.     

磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3在原发性肝癌中的表达及临床意义

目的 探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(glypican-3,GPC3)在原发性肝癌中的表达及临床意义.方法 采用免疫组化法检测45例手术切除的原发性肝癌及癌旁组织中GPC3的表达水平,比较原发性肝癌不同临床病理特征中GPC3的表达差异,分析GPC3表达与临床和病理因素的相关性.结果 肝癌组织GPC3表达评分[(10.3±2.5)分]显著高于癌旁组织[(3.2±0.8)分],差异有统计学意义(P＜0.05);不同性别、年龄组间GPC3蛋白表达比较,差异无统计学意义(P＞0.05),而不同临床分期、肿瘤直径及有无转移患者比较,差异有统计学意义,GPC3在临床分期晚、肿瘤直径大、分化程度低及远处有转移的患者肝癌组织中表达强度增高(P＜0.05).logistic回归分析显示,PHC患者肝癌组织中GPC3表达与临床分期、肿瘤直径、分化程度及远处有转移等因素紧切相关(OR=0.623～0.960,P＜0.05).结论 GPC3蛋白在肝癌组织中呈高表达状态,对于其病情的诊断及预后评估具有重要价值.