人肺腺癌A549细胞株中HSP70多肽复合物的分离与纯化

目的:探讨肺腺癌细胞中热休克蛋白70多肽复合物分离及纯化的方法.方法:采用裂解液裂解、超声破碎、ConA-Sepharose亲和层析、ADP-agarose亲和层析结合DEAE阴离子交换层析方法,从体外培养的热休克(43℃)处理后的人肺腺癌细胞株A549中分离纯化HSP70多肽复合物,通过SDS-PAGE电泳、Western-blot检测获得蛋白.结果:获得蛋白的相对分子质量约为70 000,能与抗HSP70特异单抗结合.结论:采用ConA-Sepharose亲和层析、ADP-agarose亲和层析结合DEAE阴离子交换层析从肺腺癌细胞株A549中可获得高纯度的HSP70多肽复合物,为进一步研究以HSP70多肽复合物为基础的肺癌免疫治疗提供了依据.     

人肾癌组织中热休克蛋白70的纯化与鉴定分析

目的探讨人肾癌组织中热休克蛋白70纯化的有效方法，并进行鉴定分析。方法应用两次亲和层析和离子交换层析获得目的蛋白，经电泳和Western-blot定性分析，应用改良的Bradford法定量分析。结果经过二次亲和层析和Mono Q柱的分离后，得到纯度较高的分子量约为70kDa的蛋白质，经免疫印迹分析证实该蛋白质即为HSP70。与其他方法相比HSP70的纯度更高，获得率接近。结论该文所述方法是一种简单有效的纯化肿瘤组织中HSP70的方法。     

快速蛋白液相色谱系统纯化和分析小鼠肝癌细胞热休克蛋白70例的研究

目的：应用快速蛋白液相色谱（FRLC）系统建立分离和纯化615系小鼠肝癌细胞Hcaf细胞膜上热休克蛋白（HSP70）的分离方法。方法：用经43℃热处理8h的Hcaf细胞制备裂解液,用ConA-Sepharose4B和MonoQ柱进行连续分离,所得蛋白经电泳及Western-blot进行蛋白分子量及性质鉴定。结果：纯化蛋白经鉴定分子量70000的HSP70。结论：用此层析法经FRLP可分离纯度较高的HSP70。     

肺癌组织中HSP70-1+190(G/C)多态性对HSP70-1mRNA及HSP70蛋白表达的影响

目的：探讨热休克蛋白70(HSP70)-1+190(G/C)位点基因多态性对肺癌组织中HSP70-1 mRNA及HSP70蛋白表达的影响。方法：应用PCR-RFLP技术检测46例肺癌及相应癌旁正常组织中HSP70-1+190(G/C)位点多态性,RT-PCR法检测HSP70-1 mRNA水平,Western b1ot测...     

肝癌及癌旁肝组织中P_(53)蛋白及热休克蛋白70的表达及意义

目的 :探讨 P53 蛋白、热休克蛋白 (HSP) 70在肝细胞癌及癌旁肝组织中的表达及其相互间的关系。方法 :应用 DAKO Envision免疫组化方法检测 70例肝细胞癌组织及5 0例癌旁肝组织中 P53 蛋白及 HSP70的表达。结果 :肝细胞癌组织中 P53 蛋白和 HSP70的阳性表达率分别为 3 1 .43 %(2 2 /70 ) ,80 %(5 6 /70 ) ,P53 为核性表达 ,HSP70为核和 (或 )浆性表达。癌旁肝组织中 P53 全部阴性表达 ,HSP70的阳性表达率为 92 %(46 /5 0 ) ,全部为胞浆性表达。统计分析提示 P53 蛋白及 HSP70与肝癌的发生及肝癌组织学分级有关。 P53 蛋白核阳性表达者 HSP70全部有核阳性表达 ,提示 P53 蛋白与 HSP70的表达有关联性。结论 :抑癌基因 P53 参与了人类肝癌的发生 ,且与肿瘤进展有关 ,HSP70参与了 P53 蛋白在肿瘤发生发展过程中的作用。     

人食管癌组织中热休克蛋白70和糖调节蛋白94的表达

为探讨人食管癌组织中热休克蛋白 70 (HSP70 )和糖调节蛋白 94( grp94)的表达及意义 ,采用SABC法检测人食管癌组织HSP70和grp94的表达 ,镜下观察HSP70和 grp94在癌组织及癌旁组织中的表达特点。结果 :92 .6%( 5 0 /5 4)食管癌组织中存在HSP70的表达 ,癌细胞存在胞质、胞核表达强度及部位的差异 ;而 grp94的表达阳性率为70 .4% ( 3 8/5 4) ,以胞质表达为主 ,而癌旁组织表达较少。提示 :人食管癌组织存在HSP70和 grp94的表达异质性 ,呈现了胞质、胞核的表达差异 ,HSP70和 grp94在人食管癌组织的表达特点为以后肿瘤抗原肽肿瘤疫苗的提取和实验奠定了基础。     

热休克蛋白在肺腺癌细胞及组织中的表达

目的:探讨热休克蛋白(heat shock proteins, HSPs)在肺腺癌A549细胞及组织中的表达情况.方法:分别以正常人支气管上皮(human bronchial epithelium,HBE)细胞和正常肺组织为对照,采用免疫印迹及RT-PCR的方法,从细胞水平和组织水平观察HSP86,HSP70及aB晶状体蛋白在肺腺癌A549细胞及组织中的表达情况.结果:与HBE细胞及正常肺组织比较,A549细胞及癌组织中HSP86,HSP70及aB晶状体蛋白的mRNA与蛋白质表达均显著增加(P＜0.05),其中以HSP70的增加最为显著(P＜0.01).结论:肺腺癌细胞及组织中HSPs的表达量高于HBE细胞及正常肺组织,其中以HSP70的增加最为显著.     

热休克蛋白70与肿瘤相关性研究进展

热休克蛋白70(heat shock prote in HSP70)是一组重要的应激蛋白,它在肿瘤,特别是恶性肿瘤中常有高表达,它能与癌基因、抑癌基因产物结合,具有抗肿瘤细胞凋亡作用。目前认为HSP70参与肿瘤免疫应答过程,肿瘤组织中提取的HSP70-肽复合物具有肿瘤特异性免疫原性,可诱导产生特异性抗肿瘤免疫效应,HSP70-肽复合物作为肿瘤疫苗具有很好的临床应用前景。     

人热休克蛋白70基因在大肠杆菌中的表达及纯化

目的:构建人热休克蛋白70(HSP70)的原核表达载体,诱导其表达并纯化.方法:应用PCR技术从人胆管癌组织中扩增出HSP 70基因片段,经T-A克隆连接到末端经平滑处理后的pMD18-T Simple质粒并测序.利用双酶切技术构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-HSP 70,并转化大肠杆菌JM 109,经IPTG诱导后表达得到HSP70融合蛋白.应用Glutathione-Sepharose4B亲和层析柱提纯融合蛋白,用生物素化凝血酶分离并纯化目的蛋白,最后行Wsetern blot鉴定.结果:PCR扩增结果与预计目的基因大小一致;序列分析与GeneBank中收录完全一致;重组表达载体pGEX-4T-1-HSP 70构建成功;Western blot结果显示目的蛋白可以与兔抗人的HSP70单克隆抗体特异性结合.结论:HSP 70编码序列已经成功克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,并在大肠杆菌JM 109中获得表达.     

热休克蛋白27在肺癌中的表达及其临床意义

目的 通过观察肺癌中热休克蛋白27(HSP27)的表达,探讨HSP27表达与肺癌增殖和转移的关系,并分析其意义.方法 采用免疫组织化学SP法检测63例肺癌组织、21例肺良性病变、22例正常肺组织标本中HSP27蛋白的表达水平,分析其与肺癌临床病理因素之间关系.结果 HSP27蛋白的阳性表达主要定位在细胞质内,少数也可见胞膜着色.HSP27蛋白在肺良性肿瘤及正常肝组织中未见表达,而在恶性肿瘤中的阳性表达率为63.5%(40/63),与前两者相比差异有显著性(P<0.05).HSP27的表达与肺癌的临床转移、细胞的分化程度相关,而与年龄和肿瘤的大小无明显相关性.结论 HSP27在肺癌组织中有广泛表达,HSP27在临床有转移和病理细胞分化低的组织中表达增高,HSP27与肺癌的发生、恶性程度及转移有关,在肺癌的预后判断中具有重要意义.     

乌司他丁对脓毒症急性肺损伤大鼠热休克蛋白70表达的影响

目的研究热休克蛋白(HSP)70在脓毒症急性肺损伤(ALI)大鼠中的表达变化及应用乌司他丁(UTI)进行干预,并探讨作用机制。方法 39只Wistar大鼠分为假手术(sham)组(9只)、ALI组(15只)和UTI组(15只)。大鼠盲肠结扎穿孔术后6、12、24 h分别处死大鼠。检测血气分析、肺组织湿/干重比(W/D),光镜下观察肺组织形态学变化,应用实时荧光定量-聚合酶链反应(realtime-PCR)测定肺组织HSP70 mRNA的表达。结果与ALI组比较,UTI组PaO2显著改善(P<0.05),肺W/D比值降低(P<0.05),苏木精-伊红染色显示肺组织损伤减轻。各时间点肺组织HSP70 mRNA表达明显上升(P<0.05)。结论 HSP70在脓毒症ALI大鼠中的表达上调,UTI可能通过上调HSP70的表达改善脓毒症肺组织的损伤。     

结核分支杆菌HSP70原核表达载体的构建和表达及蛋白纯化

目的：构建结核分支杆菌HSP70原核表达载体并诱导其表达和纯化及鉴定目的蛋白。方法：利用PCR技术从牛型结核分支杆菌基因组中扩增出Mtb HSP70 DNA序列，构建重组质粒pGEM-Mtb HSP70，经酶切、PCR和测序鉴定后，将Mtb HSP70基因亚克隆到原核表达质粒PQE30，构建重组表达质粒PQE30-Mtb HSP70，在大肠杆菌M15中诱导表达。用镍凝胶亲和层析的方法纯化目的蛋白，Western blotting杂交鉴定纯化蛋白。结果：经测序证实，获得的目的基因与GenBank中公布的结核杆菌Mtb HSP70基因序列一致。构建的原核表达载体PQE30-Mtb HSP70在大肠杆菌M15中经1 mmol•L^-1 IPTG诱导后表达出相对分子质量约为70 400的蛋白，镍柱纯化后经抗组氨酸单克隆抗体进行Western blotting,在相对分子质量约70 400处可见特异性着色带。结论：成功构建原核表达载体PQE30-Mtb HSP70，并成功诱导Mtb HSP70蛋白的 表达，通过镍凝胶亲和层析法获得纯度较高的Mtb HSP70蛋白。     

小鼠肺腺癌热休克蛋白70-抗原肽复合物的纯化

目的　探索肿瘤热休克蛋白 70抗原肽复合物 (HCA70 )分离、纯化的方法。方法　采用低渗、反复冻融匀浆、ADP -Agarose亲和层析结合DEAE离子交换层析 ,从体外培养的小鼠肺腺癌细胞 (LA - 795)中纯化HAC70 ;通过SDS -PAGE电泳、Westernblot检测、小鼠移植瘤动物实验证实所获得蛋白是否为HAC70。结果　获得蛋白分子量为 70kD左右 ,与抗HSP70特异单抗结合 ,用此蛋白主动免疫的小鼠可抵抗LA795细胞的攻击 ,获得了高纯度的HAC70。结论　采用ADP -Agarose亲和层析结合DEAE离子交换层析可获得高纯度的HAC70。     

COPD患者肺组织中热休克蛋白的表达及意义

目的研究热休克蛋白70（HSP70）在慢性阻塞性肺疾病（COPD）中的表达情况与临床意义。方法通过免疫组化和PCR技术，研究COPD患者肺组织标本中HSP70的表达，以及与肺功能的关系。所有患者分为三组，正常组34例，轻度COPD组33例，中重度COPD组15例。结果82例患者肺组织中，阳性率100%，随着严重程度的不同，表达有逐渐增强的趋势，且在吸烟组的非CODP患者的表达高于非吸烟组。结论HSP70在COPD呈高表达状况，且与肺功能的严重程度和吸烟密切相关，对肺组织的慢性损伤有保护作用。     

热休克蛋白70在急性百草枯中毒大鼠肺脏中的表达

目的检测百草枯(PQ)诱导急性肺损伤(ALI)中肺组织热休克蛋白70(HSP70)的表达情况。方法健康雄性SD大鼠36只,随机分为对照组(n=18),ALI组(n=18)。ALI组用PQ灌胃(200 mg/kg)染毒建立大鼠ALI模型。对照组用等量生理盐水灌胃。采用RT-PCR检测大鼠肺组织HSP70的表达,比色法检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)、伊文蓝(EBD),观察肺组织病理变化。结果 ALI组大鼠肺组织HSP70的表达在染毒后12 h明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),24 h达高峰。MPO及EBD水平显著增高(P<0.01)。肺组织病理检查可见PQ中毒后肺泡壁充血、炎性细胞浸润,并有局灶性出血。结论 HSP70在PQ中毒后的表达增多,可能参与了PQ诱导的ALI后的组织保护作用。     

肿瘤的热休克蛋白90-肽复合物诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞的体外研究

目的探讨肿瘤组织来源的热休克蛋白90-肽复合物(HSP90-PC)诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的作用。方法高压液相色谱法分离纯化肾腺癌患者肿瘤组织HSP90-PC,同时从该患者外周血扩增树突状细胞及T细胞,以提取的HSP90-PC冲击树突状细胞,将致敏的树突状细胞与T细胞混合,流式细胞仪检测特异性CD8^* CTL的增殖情况。结果肿瘤组织来源的HSP90-PC致敏的树突状细胞可显著诱导T细胞增殖生成CD8^* CTL。结论从肿瘤组织中提取的HsP90-PC具有良好的免疫原性,用其致敏的树突状细胞可有效诱导CTL增殖,从而为肿瘤的免疫治疗提供了新的方法和依据。     

热休克蛋白(HSP70)在肺癌中的表达及其临床意义

目的：测定热休克蛋白（heat shock protein HSP）在肺癌组织及正常肺组织中的表达,籍以探讨其在肺癌增殖,分化中的作用。方法：采用S-P免疫组化法,观察HSP70和PCNA在43例非小细胞肺癌（NSCLC）及5例小细胞肺癌（SCLC）中的表达情况。结果：NSCLC中HSP70表达较正常肺组织高：HSP70表达与PCNA表达有正相关关系;有淋结转移组HSP70表达高于无转移组：NSCLC中吸烟组HSP70表达高于不吸烟一。结论：HSP70在NSCLC组织中的高表达与癌细胞的增殖、转移有关,可能是调控肿瘤细胞增殖及凋亡的重要基因,可作入团NSCLC的辅助诊断及判断预后的参考指标。     

血液光量子疗法影响热休克蛋白表达的研究

目的 探讨血光量子疗法对细胞ＨＳＰ７０表达的影响及血液光量子半法治疗作用的机理。方法 利用不同剂量紫外线（ＵＶ）照射体外培养的小鼠巨噬细胞,进行ＨＳＰ７０表达的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析。;并用不同剂量ＵＶ照射大鼠血液后回输进行ＨＳＰ７０合成的Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析。结果 小剂量ＵＶ（３０秒钟）对照后细胞内ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ稍有增多,增大剂量（１分钟）后其表达明显增多;ＵＶ照射血液回输可引起大鼠肺、