差别PCR及在癌相关基因扩增和缺失研究中的进展

基因的扩增与缺失是癌基因等活化、抑制基因等失活的常见机制之一，差别－ｄ－ＰＣＲ为上述遗传学改变了提供了简便并较敏感的非同位数技术，本文简述了近年严ｄ－ＰＣＲ方法学和用于肿瘤研究的进展。     

一种检测肿瘤癌基因扩增的新技术一差别PCR技术

一种检测肿瘤癌基因扩增的新技术一差别ＰＣＲ技术方刚，于泽平，刘复坤（南京军区总医院肿瘤室，南京２１０００２）差别ＰＣＲ技术，快速、敏感无同位素污染，该技术的检测原理是在一定的ＰＣＲ反应条件下，ＰＣＲ产物的量与ＰＣＲ模板的拷贝数是正相关，反映了模板拷贝...     

差异PCR技术检测乳腺癌C—erbB2癌基因扩增的研究

为探讨癌基因扩增在乳腺癌中的临床意义，应用差异ＰＣＲ技术检测Ｃ－ｅｒｂＢ２基因在７５例人乳腺癌中扩增情况。结果：３４．７％的乳腺癌存在该基因扩增，且以ＥＲ阴性或腋淋巴结转移〉３枚者明显，而与其它因素关系不大。通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交对原样本再次检测，结果与上述基本一致，并发现一例基因重排，表明应用差异ＰＣＲ技术检测Ｃ－ｅｒｂＢ２ｘ扩增具有快速，简单，可靠，无放射性污染，有助于乳腺癌预后及转移潜     

差异PCR技术检测乳腺癌C－erbB_2癌基因扩增的研究

为探讨癌基因扩增在乳腺癌中的临床意义，应用差异ＰＣＲ技术检测Ｃ－ｅｒｂＢ２基因在７５例人乳腺癌中扩增情况。结果：３４．７％（２６／７５）的乳腺癌存在该基因扩增，且以ＥＲ阴性或腋淋巴结转移＞３枚者明显，而与其它因素关系不大。通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交对原样本再次检测，结果与上述基本一致，并发现一例基因重排。表明应用差异ＰＣＲ技术检测Ｃ－ｅｒｂＢ２扩增具有快速、简单、可靠、无放射性污染，有助于乳腺癌预后及转移潜力之判断，临床应用价值较大。     

从人外周血淋巴细胞扩增抗体可变区基因的3种方法

介绍了从人外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）以传统方法提取总ＲＮＡ再行反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）、以Ｔｒｉｚｏｌ Ｒｅａｇｅｎｔ提取ＲＮＡ再行ＲＴ－ＰＣＲ以及细胞内直接ＲＴ－ＰＣＲ等３种方法扩增人抗体可变区（Ｖ区）基因的方法并作了比较。３种方法均扩增出了人抗体ＶＨ、Ｖκ、Ｖλ基因，从方法的简便及结果的可靠等方面综合考虑，作者推荐以Ｔｒｉｚｏｌ Ｒｅａｇｅｎｔ提取ＲＮＡ再行ＲＴ－ＰＣＲ扩增的方法。     

应用逆转录PCR技术检测细胞因子基因表达

逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）可以快速、灵敏地检测表达很低或只有几个细胞表达折细胞因子ｍＲＮＡ。这项技术又叫细胞因子ｍＲＮＡ扩增测定技术（即ＭＡｐｐｉｎｇ）。可同时测定各种细胞中多种细胞因子ｍＲＮＡ。操作过程包括ＲＮＡ分离、ｍＲＮＡ逆转录为ｃＤＮＡ，ＰＣＲ扩增、产物检测等。根据定量细胞因子ｍＲＮＡ原理和方法的不同，可分为半定量ＰＣＲ法、竞争性定量ＰＣＲ法、内参标定量ＰＣＲ法、ＨＰＬＣ－ＰＣＲ法以及酶     

套叠式（Nested）PCR检测乳汁中HBV－DNA

本文应用Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ技术，检测了５２例血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性（ＰＣＲ检测）产妇和１５例血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阴性（ＰＣＲ检测）产妇乳汁中的ＨＢＶ－ＤＮＡ。结果表明：５２例阳性产妇乳汁中ＨＢＶ－ＤＮＡ经第一次扩增后，１２例ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性。经第二次扩增后，４０例阳性（阳性率７６．９％）；１５例阴性产妇乳汁中ＨＢＶ－ＤＮＡ经两次扩增后均为阴性。作者认为，Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ技术是检测血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性产妇乳汁是否排泌ＨＢＶ的简便、灵敏、特异的方法。乳汁中含有ＨＢＶ应停止哺乳。     

荧光PCR在植入前诊断中的应用

荧光ＰＣＲ（Ｆ－ＰＣＲ）已被用于单个细胞的性别、囊性纤维化的诊断和ＤＮＡ指纹图谱分析。Ｆ－ＰＣＲ也已用于等位基因的丢失和扩增的研究，这种现象在单个细胞分析中普遍存在。近来，Ｆ－ＰＣＲ手段已用于：①ＤＮＡ指纹图谱的改进；②三倍体的检测；③与其它技术的比...     

急性白血病患儿脑脊液PCR扩增HCMV—DNA的研究

应用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）扩增和洋地黄深针杂交的方法，对５３例急性白血病（ＡＬ）患儿脑脊液（ＣＳＦ）样本进行了检测，经过ＰＣＲ扩增，可见明显的人巨细胞病毒ＤＮＡ（ＨＣＭＶ－ＤＮＡ）４００ｂｐ扩增带，经洋地黄探针特异性杂交鉴定，ＡＬ患儿ＣＳＦ标本ＰＣＲ扩增产生的ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性检出率为８３．０２％。本实验为ＡＬ病人ＣＳＦ的ＨＣＭＶ检测提供了一个简便方法。     

用PCR技术检测牙龈炎组织中IL—1α的表达

为了检测牙龈炎组织中ＩＬ－１的表达，设计合成了扩增人ＩＬ－１α基因的引物，用ＲＴ－ＰＣＲ技术从牙龈炎组织ＲＮＡ中扩增了ＩＬ－１α基因，而正常牙龈中扩增不到该产物，将扩增片隆后进行了部分序列的测定，结果表明ＰＣＲ方法可以简便，快速，特异，灵敏地检出炎症组织中ＩＬ－１的表达，这对于牙龈炎发病机理及治疗的研究具有重要意义。     

p53、c-erbB-2、PCNA和EGFR在膀胱癌中过表达及其意义

目的：研究癌基因和抑癌基因蛋白产物在膀胱移行细胞癌中异常表达与病理分级、临床分期、复发和预后的关系。方法：应用免疫组化Ｓ－Ｐ法检查１１７例膀胱移行细胞癌组织中ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＰＣＮＡ和ＥＧＦＲ的表达水平。结果：１１７例膀胱移行细胞癌中ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＰＣＮＡ和ＥＧＦＲ阳性表达率分别为４７．０％、２９．９％、５３．８％和４８．７％。ｐ５３和ＰＣＮＡ阳性表达产物定位于肿瘤细胞核内，ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性表达产物定位于细胞膜上，ＥＧＦＲ阳性表达产物定位于细胞膜或细胞浆内。结果表明ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＰＣＮＡ和ＥＧＦＲ异常表达与膀胱癌的分级、分期、复发及术后生存率等之间有统计学意义。结论：ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＰＣＮＡ和ＥＧＦＲ异常表达有助于评估膀胱癌预后，多基因异常表达作为预后评价指标更有意义。     

PCR技术用于我国新疆皮肤利什曼病病原体SSUrDNA的扩增及其同源性研究

本文采用引物Ｒ２２２和Ｒ３３３，对来自我国新疆克拉玛依地区的１２份皮肤利什曼病（ＣＬ）患者的皮肤病变组织标本进行ＰＣＲ扩增。结果显示１２例ＣＬ患者病变组织均出现预期的３９７ｂｐ的阳性扩增区带。同时用地高辛标记的Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａＳＳＵｒＤＮＡ扩增产物探针进行斑点杂交及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交。斑点杂交结果显示：Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａＳＳＵｒＤＮＡ扩增产物探针只与１２例ＣＬ患者的ＣＬ－ＰＣＲ－ＡＰ出现阳性杂交信号，与Ｌ．ｔｕｒａｎｉｃａ、Ｌ．ｉｎｆａｎｔｕｍ无阳性杂交信号，上述探针与１２例ＣＬ患者的ＣＬ－ＰＣＲ－ＡＰＳｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交均出现阳性杂交区带。以上结果证实Ｌ．ｔｒｏｐｉｃａ与我国新疆克拉玛依地区皮肤利氏曼病病原体ＳＳＵｒＤＮＡＰＣＲ扩增产物存在同源关系     

用PCR技术检测牙龈炎组织中IL－Iα的表达

为了检测牙龈炎组织中ＩＬ－１的表达，设计合成了扩增人ＩＬ－Ｉａ基因的引物，用ＲＴ－ＰＣＲ技术从牙龈炎组织ＲＮＡ中扩增了ＩＬ－Ｉα基因，而正常牙龈中扩增不到该产物。将扩增片段克隆后进行了部分序列的测定，结果表明ＰＣＲ方法可以简便，快速，特异，灵敏地检出炎症组织中ＩＬ－１的表达，这对于牙龈炎发病机理及治疗的研究具有重要意义。     

应用逆转录PCR技术检测细胞因子基因表达

逆转录ＰＯＲ（ＲＴ－ＰＵＲ）可以快速、灵敏地检测表达很低或只有几个细胞表达的细胞因子ｍＲＮＡ。这项技术又叫细胞因子ｍＲＮＡ扩增测定技术（即ＭＡｐｐｉｎｇ）。可同时测定各种细胞中多种细胞因子ｍＲＮＡ。操作过程包括ＫＮＡ，分离、ｍＫＮＡ逆转录为ｃＤＮＡ，ＰＣＲ扩增、产物检测等。根据定量细胞因子ｍＲＮＡ原理和方法的不同，可分为半定量ＰＣＲ法、竞争性定量ＰＣＲ法、内参标定量ＰＣＲ法、ＨＰＬ－ＰＣＲ法以及酶联免疫定量ＰＣＲ５种方法。该法由于非常敏感，易产生假阳性结果，一般实验中常设置阴性对照，本文拟就有关问题作一综述。     

p53基因突变、int-2基因扩增与食管癌的关系

ｐ５３基因突变、ｉｎｔ－２基因扩增与食管癌的关系邵根泽任运生张少英温博贵食管癌的发生是一个涉及多基因改变的多步骤过程，ｃ－ｍｙｃ、ＥＧＲＦ、ｉｎｔ－２、ｈｓｔ－１、ＣｙｃｌｉｎＤ等癌基因以及ｐ５３、Ｒｂ、ＡＰＣ、ＭＣＣ、ｐ１６等抑癌基因的异常是食管癌...     

急性白血病患儿脑脊液PCR扩增HCMV－DNA的研究

应用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）扩增和洋地黄探针杂交的方法，对５３例急性白血病（ＡＬ）患儿脑脊液（ＣＳＦ）样本进行了检测。经过ＰＣＲ扩增，可见明显的人巨细胞病毒ＤＮＡ（ＨＣＭＶ－ＤＮＡ）４００ｂｐ扩增带；经洋地黄探针特异性杂交鉴定，ＡＬ患儿ＣＳＦ标本ＰＣＲ扩增产物的ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性检出率为８３．０２％。本实验为ＡＬ病人ＣＳＦ的ＨＣＭＶ检测提供了一个简便方法。     

p53,c—erbB—2,PCNA和EGFR在膀胱癌中过表达及 …

目的：研究癌基因和抑癌基因蛋白产物在膀胱移行细胞癌中异常表达与病理分级、临床分期、复发和预后的关系。方法：应用免疫组化Ｓ－Ｐ法检查１１７例膀胱移行细胞癌组织中ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＰＣＮＡ和ＥＧＦＲ的表达水平。结果：１１７例膀胱移行细胞癌中ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＰＣＮＡ和ＥＧＦＲ阳性表达率分别为４７．０％、２９．９％、５３．８％和４８．７％。ｐ５３和ＰＣＮＡ阳性表达产物定位于肿瘤细胞核内，     

胆管癌的遗传学研究进展

近年来胆管癌的发病率呈逐年上升趋势，与其它肿瘤一样，胆管癌的发生发展与染色体、癌基因及抑癌基因的改变有关。目前遗传学的研究已发现，癌基因ｒａｓ、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｍｅｔ及抑癌基因ｐ５３、ｐ１６、ＤＰＣ４等的突变、缺失或过表达与胆管癌的发生发展密切相关     

尿液DNA提取方法与PCR扩增产物的比较

尿液ＤＮＡ提取方法与ＰＣＲ扩增产物的比较肖莎，郭琳琅，区士欢聚合酶链反应（ＰＣＲ）是近年来建立的一种快速、敏感、特异的体外ＤＮＡ扩增技术。能否获得完整、满意的ＤＮＡ是ＰＣＲ分析的最主要的基本步骤。我们在实际工作中对尿液中的巨细胞病毒ＤＮＡ（ＣＭＶ－Ｄ...     

乳腺癌中c-erbB2基因扩增及p53基因缺失的研究

随着分子生物学技术的广泛应用，人们发现肿瘤的发生、发展及预后与某些相关基因改变有关，其中包括：ｃ－ｅｒｂＢ２扩增和ｐ５３缺失［１，２］。我们分别应用差异ＰＣＲ（ｄＰＣＲ）及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交方法，检测５８例人乳腺癌中ｃ－ｅｒｂＢ２基因扩增及ｐ５３基...