参芍口服液对2型糖尿病心肌病大鼠心肌Toll样受体4表达的影响

目的 通过观察参芍口服液对2型糖尿病大鼠心肌组织Toll样受体4(TLR4)和核因子-κB(NF-κB)表达的影响,探讨其保护机制.方法 将30只Wistar雄性大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,每组10只.模型组和治疗组采用高脂饲耪喂养加小剂量链脲佐茼素(25mg/kg)腹腔注射的方法制作2型糖尿病心肌病大鼠模型,治疗组给予250mg·kg-1·d-1参芍口服液干预.采用左心室插管对大鼠心功能进行评估,免疫组织化学法和免疫印迹法检测心肌组织的TLR4和NF-κB蛋白表达.结果 心功能检测中,模型组较对照组,左室舒张未期压(LVEDP)明显升高,左室收缩压(LVSP)和左室压力上升或下降最大速度(士dP/dtmax)降低(P＜0.05).治疗组较模型组LVEDP降低,LVSP和土dP/dtmax升高(P＜0.05);免疫组织化学和免疫印迹显示,模型组较对照组TLR4和NF-κB蛋白表达量明显升高(P＜0.05),治疗组较模型组TLR4和NF-κB蛋白表达量明显降低(P＜0.05).结论 参芍口服液能有效改善2型糖尿病心肌病大鼠的心功能,其心肌保护作用可能与调控TLR4及其下游炎性因子水平有关.     

白芍总苷对糖尿病大鼠肾组织TLR2、TLR4/NF-κB信号通路调节的影响

目的研究白芍总苷(TGP)对糖尿病大鼠肾组织中Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κB(NF-κB-p-p65)表达的影响。方法将链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型随机分为模型组、TGP组(50、100、200mg/kg.d),正常大鼠为对照组,8周后免疫组化法检测肾组织中TLR2、TLR4、NF-κB-p-p65的表达。结果模型组大鼠尿白蛋白排泄率(AER)明显高于对照组(P<0.01),TGP(50、100、200 mg/kg.d)给药8周后大鼠AER水平明显低于模型组(P<0.05,P<0.01)。模型组大鼠肾组织中TLR2、TLR4与NF-κB-p-p65表达明显高于对照组(P<0.01),TGP(50、100、200 mg/kg.d)给药8周肾小球TLR2表达与模型组相比差异无显著性,肾小管-间质TLR2表达明显低于模型组(P<0.01),TGP(50、100、200 mg/kg.d)给药8周肾小球与肾小管-间质TLR4、NF-κB-p-p65表达明显低于模型组(P<0.05,P<0.01)。结论 TGP可显著改善糖尿病大鼠早期肾脏损害,其机制与部分抑制糖尿病大鼠肾组织中TLR2、TLR4/NF-κB信号通路有关。     

Regulation of total glucosides of paeony TLR2,4/NF-κB signal pathway in the kidney from diabetic rats

目的 研究白芍总苷(TGP)对糖尿病大鼠肾组织中Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κB(NF-κB-p-p65)表达的影响.方法 将链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型随机分为模型组、TGP组(50、100、200 mg/kg·d),正常大鼠为对照组,8周后免疫组化法检测肾组织中TLR2、TLR4、NF-κB-p-p65的表达.结果 模型组大鼠尿白蛋白排泄率(AER)明显高于对照组(P＜0.01),TGP(50、100、200 mg/kg·d)给药8周后大鼠AER水平明显低于模型组(P＜0.05,P＜0.01).模型组大鼠肾组织中TLR2、TLR4与NF-κB-p-p65表达明显高于对照组(P＜0.01),TGP(50、100、200 mg/kg·d)给药8周肾小球TLR2表达与模型组相比差异无显著性,肾小管-间质TLR2表达明显低于模型组(P＜0.01),TGP(50、100、200 mg/kg·d)给药8周肾小球与肾小管-间质TLR4、NF-κB-p-p65表达明显低于模型组(P＜0.05,P＜0.01).结论 TGP可显著改善糖尿病大鼠早期肾脏损害,其机制与部分抑制糖尿病大鼠肾组织中TLR2、TLR4/NF-κB信号通路有关.     

硫化氢活化ERK抵抗内质网应激诱导的心肌细胞凋亡

目的探讨硫化氢(H2S)对心肌的保护作用是否通过激活细胞外信号调节激酶(ERK)通路来抵抗心肌缺血诱导的内质网应激所致的心肌细胞凋亡。方法 60只雄性SD大鼠随机分为对照组、ISO模型组、NaHS+ISO组及PD98059阻断组,每组各15只。对照组大鼠注射等体积生理盐水;ISO模型组大鼠第1、2天腹腔注射生理盐水,第3、4天注射完生理盐水30min后背部皮下分别注射10mg/kg和5mg/kg的ISO;NaHS+ISO组大鼠腹腔注射NaHS 14μmol/kg,1次/d,连续2d后,改为2次/d,连续2d,并在后2d的第1次注射30min后,于背部皮下分别注射10mg/kg和5mg/kg的ISO,1次/d;PD98059阻断组大鼠在上述NaHS+ISO组大鼠处理基础上,于注射ISO之前经尾静脉注射MEK/ERK抑制剂PD98059(4mg/kg),1次/d,连续2d。每组最后一次注射ISO并禁食12h后,检测心电图、心功能指标;测定血浆中H2S浓度变化;TTC染色测定心肌梗死面积;TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数(AI);免疫组织化学方法检测心肌中GRP78、CHOP及ERK磷酸化(p-ERK)蛋白的表达。结果 ISO模型组大鼠血浆的H2S含量明显低于对照组(P<0.01);14μmol/kg NaHS可以显著改善心肌缺血引起的心功能改变,而PD98059阻断组可以逆转NaHS的心肌保护作用;与ISO模型组相比,NaHS+ISO组大鼠心肌组织中GRP78、CHOP的表达明显减少(均P<0.05),pERK表达明显增多(P<0.01),AI、心肌梗死面积明显减小(均P<0.05);与NaHS+ISO组相比,PD98059阻断组大鼠心肌组织中GRP78、CHOP的表达、AI、梗死面积均显著增加(均P<0.05),心功能明显降低(P<0.05),而p-ERK无表达。相关分析显示大鼠心肌细胞CHOP表达、AI与p-ERK的表达呈负相关(P<0.01)。结论内源性H2S浓度的降低及内质网应激可能参与急性缺血心肌损伤的发生与发展,H2S对缺血损伤的心肌保护作用机制可能与其激活ERK进而抑制内质网应激诱导的心肌细胞凋亡有关。     

红花黄色素调节NF-κB/NLRP3信号通路对心肌梗死大鼠心肌细胞焦亡和炎性损伤的影响

目的:探究红花黄色素(CY)调节核因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对心肌梗死(MI)大鼠心肌细胞焦亡和炎性损伤的影响。方法:通过冠状动脉左前降支结扎法建立大鼠MI模型。并将72只SPF级雄性大鼠分为：对照组(Control组)、假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、低剂量CY组(CY-L组,20mg/kg)、高剂量CY组(CY-H组,40mg/kg)和高剂量CY+NF-κB激活剂组(CY-H+LPS组,CY 40mg/kg+LPS 10mg/kg),每组12只。造模后腹腔注射给药,1次/d,共28d。给药结束后对各组大鼠进行超声心电图检查,检测心功能变化情况。2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)-伊文斯蓝(EB)法和免疫荧光法检测各组大鼠心肌梗死面积和心肌细胞焦亡比例。苏木素伊红(HE)和马松(Masson)染色观察心肌组织病理学变化。试剂盒检测大鼠心肌中白细胞介素(IL)-1β、IL-18和乳酸脱氢酶(LDH)水平。Western Blot检测心肌组织中NF-κB、NLRP3、cleaved-caspase1、胃泌素D-N(GSDMD-N...     

Toll样受体3在大鼠急性心肌梗死中的作用机制

目的研究Toll样受体3(TLR3)在大鼠心肌梗死中的表达及作用机制。方法制备TLR3基因敲除大鼠及野生型大鼠,采用球囊结扎冠脉方法制作心肌梗死动物模型。随机分为野生型假手术组(n=15)、野生型心肌梗死组(n=15)、(TLR3-/-)假手术组(n=15)、(TLR3-/-)心肌梗死组(n=15)。检测心肌组织肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白c Tn I含量;通过Western blot法检测Toll样受体3、NF-κB表达。结果与野生型心肌梗死组大鼠比较,(TLR3-/-)心肌梗死组反映心肌损伤的CK-MB、c Tn I减低;NF-κB表达降低;各组间差异均有统计学意义(P0.05)。结论 TLR3基因缺失在急性心肌梗死中具有心脏保护作用,其保护机制与下调NF-κB表达,减轻心肌梗死炎症反应有关。     

栀子苷抑制TLR4/RIP3/NF-κB信号通路对急性胰腺炎大鼠肠损伤的影响

目的 研究栀子苷抑制Toll样受体4(TLR4)/受体相互作用蛋白3(RIP3)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对急性胰腺炎(AP)大鼠肠损伤的影响。方法 以胰管逆行注射牛磺胆酸钠溶液的方法建立AP大鼠模型,随机分为模型组、栀子苷低剂量(40 mg/kg)组、栀子苷高剂量(80 mg/kg)组、栀子苷(80 mg/kg)+脂多糖(LPS,TLR4激活剂,0.4 mg/kg)组4组(每组12只),另取12只大鼠开腹后仅翻转胰腺,不做其他处理,设为假手术组。以栀子苷、LPS分组对大鼠进行干预处理后,检测大鼠疾病活动指数(DAI)和结肠大体形态损伤评分;检测大鼠肠道通透性,比较荧光素异硫氰酸酯(FITC)葡聚糖浓度;HE染色检测大鼠结肠黏膜组织病理损伤,并进行Chiu评分;酶标仪检测大鼠血清D-乳酸、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、二胺氧化酶(DAO)、白细胞介素(IL)-17、IL-1β与IL-6水平;蛋白免疫印迹实验检测大鼠肠黏膜组织TLR4/RIP3/NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果 与假手术组相比,模型组大鼠肠黏膜组织出现病理损伤严重,DAI、结肠大体形态损伤评分、C...     

HMGB1在三叉神经痛中的作用

目的 构造大鼠三叉神经痛(TN)模型探索三叉神经节(TG)内高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达情况及HMGB1对疼痛影响的可能机制。方法 采用眶下神经缩窄术构造大鼠TN模型,分为手术组(CCI组)和空白组(Sham组),机械痛阈检测鉴定模型构建是否成功;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及Western blot检测Sham组及CCI组大鼠术侧TG中HMGB1、Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)mRNA和蛋白表达量;连续两周每天腹腔注射50 mg/kg HMGB1抑制剂甘草酸(GL),以生理盐水(NS)作为对照,分为CCI组、CCI+NS组、CCI+GL组;RT-qPCR及Western blot检测CCI组、CCI+NS组、CCI+GL组大鼠术侧TG中HMGB1,TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达量。结果 大鼠术侧机械阈值持续降低(P<0.05),TN模型构造成功,大鼠眶下神经受到慢性压迫性损伤,术侧TG中的HMGB1、TLR4、NF-κB mRNA及蛋白表达量升高(P<0.05);腹腔注射GL后,术侧TG中的HMGB1、TLR4、NF-κ...     

黄芪甲甙对急性心肌梗死大鼠早期心功能、炎性相关因子及内皮型一氧化氮合酶信号通路的影响

目的观察黄芪甲甙对急性心肌梗死模型大鼠心脏的保护作用,并探讨其可能的分子机制。方法将45只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组和黄芪甲甙组,每组15只。模型组和黄芪甲甙组大鼠通过永久性结扎大鼠左冠状动脉前降支制作急性心肌梗死模型,假手术组大鼠只穿线不接扎;造模24 h后,黄芪甲甙组大鼠腹腔注射黄芪甲甙20 mg·kg~(-1)·d~(-1),假手术组、模型组大鼠腹腔注射相同体积的羧甲基纤维素钠,每日1次,连续2周。分别于造模前、造模后即刻及给药1、3、7、14 d描记肢体Ⅱ导联心电图,观察ST段变化。给药2周后,检测各组大鼠左心室舒张末期内径(LVDD)、左心室收缩末期内径(LVDS)、左心室舒张末期容积(LVEDV)、左心室收缩末期容积(LVESV)、左心室短轴的缩短率(LVFS)及左心室射血分数(LVEF);应用酶联免疫吸附试验法检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)及核转录因子-κB(NF-κB)水平,并检测血浆一氧化氮(NO)水平;实时荧光定量聚合酶链反应检测各组大鼠心肌组织中Toll样受体(TLR)2、TLR4、核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)1、NOD2及内皮型一氧化氮合酶(e NOS)mRNA的表达。结果造模过程中,假手术组、模型组、黄芪甲甙组大鼠分别死亡0、4、2只。模型组和黄芪甲甙组大鼠造模后即刻及给药后1、3、7、14 d ST段值均显著高于假手术组(P<0.01)。黄芪甲甙组大鼠给药后3、7、14 d ST段值均显著低于模型组(P<0.05)。与假手术组比较,模型组和黄芪甲甙组大鼠LVDD、LVDS显著扩大(P<0.01),LVEDV、LVESV显著增加(P<0.01),LVFS、LVEF显著下降(P<0.01);血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平和心肌组织中TLR2、TLR4、NOD1、NOD2 mRNA水平显著增加(P<0.01);血浆NO水平显著降低(P<0.05)。模型组大鼠血清NF-κB水平高于假手术组(P<0.01),心肌组织中e NOS mRNA表达低于假手术组(P<0.05)。黄芪甲甙组与假手术组大鼠血清NF-κB水平和心肌组织中e NOS mRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,黄芪甲甙组大鼠LVDD、LVDS显著缩小(P<0.05),LVEDV、LVESV显著下降(P<0.05),LVFS、LVEF显著增加(P<0.05);血清IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB水平和心肌组织中TLR2、TLR4、NOD1、NOD2 mRNA表达显著降低(P<0.05);血浆NO水平和心肌组织中e NOS mRNA表达显著升高(P<0.05)。结论黄芪甲甙对急性心肌梗死大鼠心脏具有保护作用,其机制可能与激活e NOS信号系统和抑制TLR信号途径有关。     

肾上腺素受体介导心脏纤维化模型中核转录因子NF-κB的活化

目的:应用非选择性β肾上腺素受体激动剂——异丙基肾上腺素(isoproterenol,ISO)连续皮下注射7d诱导心脏纤维化模型,并观察此模型中炎症调控核转录因子NF-κB的变化.方法:采用10周龄体重为280 ～320 g的SD大鼠,ISO以0.25 mg/(kg·d)剂量连续背部皮下注射7d诱导心脏纤维化模型.心脏组织切片进行苦味酸-天狼猩红染色观察纤维化,以胶原容量分数进行胶原面积定量统计.应用real-time PCR法检测心脏组织中Ⅰ型/Ⅲ型胶原及炎症因子IL-6的mRNA表达.组织切片进行HE染色观察心脏病理变化.免疫组织化学方法检测心脏组织中NF-κB在细胞内的定位,Western blot法检测心脏组织中磷酸化的NF-κB水平.结果:ISO诱导的心脏纤维化模型中天狼猩红染色面积明显大于对照(control,CON)组,且ISO组的胶原容积分数显著高于CON组(12.01±1.64vs.0.95±0.06,P＜0.001);ISO组Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRNA表达显著高于CON组(Ⅰ型胶原:10.51±0.47vs.0.98±0.02,P＜0.001;Ⅲ型胶原:9.58±1.33 vs.1.02±0.02,P＜0.001).ISO组心脏组织中可见细胞核增多、聚集,提示可能炎症细胞浸润,且炎症因子IL-6的mRNA表达水平明显增加(1.64±0.18 vs.1.04±0.07,P ＜0.01).CON组NF-κB主要定位于心肌细胞胞浆中,心肌细胞核中未见NF-κB的定位;ISO组出现明显NF-κB核转位活化,心肌细胞胞浆中的NF-κB较CON组减少,心肌细胞核及间质细胞核均可见明显的NF-κB定位,同时,ISO组心脏组织磷酸化NF-κB的水平明显高于CON组(10.83±2.05vs.1.05±0.27,P＜0.001).结论:连续7d皮下注射ISO可成功诱导心脏纤维化模型,且此模型心脏组织中活化的核转录因子NF-κB增加.     

双歧杆菌对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜上皮细胞Toll样受体2、4及NF-κB基因表达的影响

目的观察双歧杆菌(Bf)活制剂对大鼠溃疡性结肠炎(UC)肠黏膜上皮细胞(IECs)TLR2、TLR4、NF-κB基因表达的影响。方法 60只SPF级SD大鼠随机分3组:空白对照组、模型组、Bf组。模型组和Bf组大鼠建立TNBS诱导的UC模型。造模成功后,Bf组予双歧杆菌活菌制剂灌服,空白对照组及模型组不予任何处理。3周后处死全部大鼠,观察一般情况的变化,分离、提取IECs中的总RNA,RT-PCR法检测TLR2、TLR4的表达,免疫组化法检测TLR4、NF-κB表达。结果①Bf组症状、组织损害均较模型组明显减轻。②模型组TLR2、TLR4、NF-κB表达显著高于Bf组与空白对照组(P<0.01)。结论 UC组大鼠结肠上皮细胞TLR2、TLR4及NF-κB基因高表达,Bf组表达明显降低,推测Bf可通过抑制大鼠肠黏膜细胞TLR2、TLR4、NF-κB的表达而缓解肠道的炎症反应。     

蒲公英甾醇对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的增殖、 迁移和凋亡及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨蒲公英甾醇对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(MH7A)的增殖、迁移和凋亡及TLR4/NF-κB信号通路的影响和机制研究。方法 CCK-8检测蒲公英甾醇的毒性;ELISA法检测MH7A细胞中炎性介质的分泌水平;EDU检测MH7A细胞的增殖能力;Transwell法检测MH7A细胞的迁移能力;细胞流式术检测MH7A细胞的凋亡能力;Western blot法检测MH7A细胞中TLR4、p-NF-κB p65和NF-κB p65蛋白的表达情况。结果 蒲公英甾醇的最佳作用浓度为5、10、15μg/ml;经LPS诱导后,蒲公英甾醇对MH7A细胞炎性因子的分泌量有抑制作用(P<0.05);与LPS组比较,不同浓度的蒲公英甾醇使MH7A细胞的增殖能力和迁移能力下降,凋亡率提高(P均<0.05);Western blot法检测结果显示,与LPS组比较,不同浓度蒲公甾醇使TLR4蛋白表达降低,NF-κB p65的磷酸化程度降低(P均<0.05)。结论 蒲公英甾醇能降低MH7A细胞的增殖能力、迁移能力并诱导其凋亡,可能与其降低TLR4和NF-κB p65的磷酸化程度有关。     

妇科千金片对盆腔炎大鼠TLR2/4-NF-κB信号通路影响的研究

目的：观察妇科千金片对盆腔炎大鼠子宫 Toll 样受体2（ TLR2）、Toll 样受体4（ TLR4）、核转录因子 kappaB （ NF-κB ） mRNA 表达的影响,探讨妇科千金片调控 TLR2/4-NF-κB 信号通路对盆腔炎大鼠的抗炎机制。方法通过子宫注射混合菌液建立盆腔炎大鼠模型,将60只雌性 SD 大鼠随机分为5组,每组12只,即：空白组、假手术组、模型组、妇科千金片组、罗红霉素组,分别予以相应药物干预,运用免疫组化检测子宫组织中 TLR2、TLR4、NF-κB 的灰度值;运用实时荧光定量 PCR 检测子宫组织中 TLR2、TLR4、NF-κB 的 mRNA 表达变化。结果与空白组、假手术组比较,模型组的 TLR2、TLR4、NF-κB 灰度值显著降低（ P＜0.01）, TLR2、TLR4、NF-κBmRNA 的表达均显著升高（ P＜0.01）,表明模型成功;与模型组比较,妇科千金片组、罗红霉素组 TLR2、TLR4、NF-κB 灰度值均显著升高（ P＜0.01）, TLR2、TLR4、NF-κBmRNA 均显著降低（ P＜0.01）。结论妇科千金片对盆腔炎大鼠抗炎的作用机制,可能是通过调控 TLR2/4-NF-κB 炎性介质变化信号通路的传导而实现的。     

推拿对腰间盘突出症大鼠的治疗作用及对TLRs/MyD88信号通路的影响

目的观察推拿对腰椎间盘突出症(LDH)大鼠的治疗作用及对Toll样受体(TLRs)/髓样分化因子(MyD88)信号通路的影响。方法取45只大鼠采用自体髓核移植法建立LDH大鼠模型,造模成功大鼠随机分为模型组、模型+抑制剂组、推拿组、推拿+激活剂组,每组10只,剩余10只为假手术组。模型+抑制剂组给予TLR4抑制剂TAK-242,推拿组施用推拿手法,推拿+激活剂组施用推拿手法并给予TLR4激活剂脂多糖(LPS),模型组、假手术组固定的同时给予生理盐水。测定各组大鼠造模后1、7、14、21 d机械性缩足反射阈值(PWMT)、热刺激缩足反射潜伏期(PWTL);造模21 d处死各组大鼠,观察背根神经节病理变化,并比较背根神经节肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β水平及髓核组织TLR4、MyD88、核转录因子κB(NF-κB)p65 mRNA及蛋白相对表达量。结果与模型组比较,模型+抑制剂组、推拿组7、14、21 d PWMT及PWTL升高(P<0.05),推拿+激活剂组7、14、21 d PWMT及PWTL降低(P<0.05)。HE染色显示,模型组、推拿+激动剂组背根神经节细胞肿胀,形状不规则,有空泡变性,尼氏小体排列不均;推拿组、模型+抑制剂组背根神经节病理形态较模型组有所改善,细胞排列较清晰,存在少数细胞空泡变性,尼氏小体较均匀。与模型组比较,模型+抑制剂组、推拿组背根神经节TNF-α、IL-6、IL-1β水平,髓核组织TLR4、MyD88、NF-κBp65 mRNA及蛋白相对表达量降低,且推拿组低于模型+抑制剂组(P<0.05),推拿+激活剂组背根神经节TNF-α、IL-6、IL-1β水平,髓核组织TLR4、MyD88、NF-κBp65 mRNA及蛋白相对表达量升高(P<0.05)。结论推拿可能通过抑制TLR4/MyD88信号通路发挥消炎止痛作用,改善LDH症状。     

Tempol对心肌肥厚大鼠NF-κB信号通路的影响

目的探讨2,2,6,6-四甲基-4-哌啶醇(tempol)对大鼠心肌肥厚NF-κB信号通路的影响。方法通过腹腔注射异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)(5 mg/kg,每日2次,维持2周)的方法建立大鼠心肌肥厚模型。选择42只SD雄性大鼠随机分为3组:正常对照组,心肌肥厚模型组(ISO+生理盐水组),tempol干预组(ISO+tempol组)。相应药物干预8周后,测定全心重量指数(heart weight index,HWI)和左心室重量指数(left ventricular weight index,LVWI),应用HE染色观察心肌细胞形态及纤维化,Masson染色检测大鼠心肌纤维化情况,应用qRTPCR法分别检测心肌组织中TNF-α、IL-6 mRNA的转录水平,Western blot分别测定大鼠心肌组织IκBα、p-p65、p65蛋白的表达水平。结果与正常对照组比较,模型组的HWI、LVWI增加(P0.05),TNF-α、IL-6 mRNA的转录水平,p-p65/p65的表达均明显增加,NF-κB抑制蛋白IκBα表达减少(P0.05),心肌HE染色见肌纤维增粗、心肌结构紊乱、心肌细胞表面积增大,心肌Masson染色见心肌纤维化加重,心肌间质胶原纤维增加;与模型组比较,tempol组HWI、LVWI减小(P0.05),TNF-α、IL-6 mRNA的转录水平,p-p65/p65的表达均有不同程度降低,IκBα表达增加(P0.05),心肌HE染色见心肌结构紊乱、心肌细胞肥大程度降低,心肌Masson染色见心肌纤维化程度改善,间质胶原纤维减少。结论 Tempol可改善ISO诱导的心肌肥厚,这可能与抑制NF-κB信号通路活性密切相关。     

去肾交感神经术对高血压大鼠左室肥厚及其炎症因子的影响

目的:观察去肾交感神经术对自发性高血压(SHR)大鼠血压、左室肥厚及心肌局部Toll样受体4(TLR4)/核转录因子(NF)-κB炎症通路表达的影响,探讨去肾交感神经术抗心肌重塑作用的可能机制。方法:对SHR大鼠进行肾交感神经切除或假手术处理,并以12周龄的SHR和WKY大鼠做对照。术后1、6周分批处死大鼠,留取心脏组织,称量左室心肌质量并计算左室质量指数(LVMI);免疫组化法观察左室心肌组织TLR4、肿瘤坏死因子(TNF)-α及白介素(IL)-6的变化;Western blot法检测心肌TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白表达水平。结果:SHR大鼠的血压、LVMI及心肌组织TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白表达较WKY大鼠显著升高(P<0.05)。肾交感神经切除1周后,SHR大鼠的血压、LVMI及心肌组织TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白表达较对照组及假手术组大鼠明显减少(P<0.05);6周后,SHR大鼠的血压与对照组及假手术组大鼠差异无统计学意义(P>0.05),但LVMI及TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6较假手术组大鼠降低(P<0.05)。结论:去肾交感神经术能够显著延缓自发性高血压大鼠左室肥厚的进展,其作用机制除与压力负荷的减轻有关外,可能还与心肌局部免疫炎症反应的减弱有关。     

NF-κB在梗阻性黄疸引发的大鼠肝脏损害中的作用

目的探讨NF-κB(核因子-κB)在梗阻性黄疸引发肝脏损害中的作用。方法将30只Wister大鼠随机分为假手术对照组(SH组),梗阻性黄疸组(OJ组),梗阻性黄疸+前列腺素E1治疗组(OJ+PGE1组)。采用胆总管结扎法(CB-DL)建立大鼠梗阻性黄疸模型,术后第7d起OJ+PGE1组应用前列腺素E1注射液0.1μg/(kg·d)腹腔注射治疗14d。其他两组注射同量生理盐水。3组大鼠分别于术后第21 d处死,检测血清胆红素(DBIL)、谷丙转氨酶(ALT)、胆汁酸(TBA)以及血浆内毒素、D-乳酸、TNF-α、IL-6、肝脏NF-κB、Bcl-2(B淋巴细胞瘤-2)、ICAM-1(肝组织细胞间黏附分子-1)的表达,肝细胞上皮凋亡指数,观察肝脏病理组织学改变,并作比较。结果 OJ+PGE1组及OJ组大鼠肝脏各检测指标高于对照组(P0.05),但OJ+PGE1组增高的程度低于OJ组(P0.05),并且病理改变也较轻。结论 NF-κB信号通路在梗阻性黄疸大鼠肝损害中起重要作用,NF-κB参与的炎症反应是梗阻性黄疸引起肝脏损害的重要原因。     

Toll样受体4、核因子-κb通路在溃疡性结肠炎发病机制中的应用

目的:通过研究Toll样受体4(Toll-like receptor,TLR4)、髓样分化分子88(myeloid differentiation factor,Myd88)、核因子-κb(nuclear factor-κb,NF-κb)在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠模型结肠组织中的表达以及外周血中白细胞介素1(interleukin-1,IL-1)的表达水平,探讨TLR4/NF-κb信号通路在UC发病中的作用。方法:将健康SD大鼠40只随机分为模型组(A组)和正常对照组(B组),每组各20只,运用复合法(三硝基苯磺酸+乙醇)制备细胞免疫反应性UC大鼠模型,造模成功后,进行大体形态损伤评分,HE染色观察大鼠结肠黏膜组织学改变,采用RT-PCR法检测UC各组大鼠结肠黏膜组织中TLR4、Myd88和NF-κb表达,采用ELISA法检测外周血中IL-1的表达。结果:与B组比较,A组大鼠结肠黏膜大体形态评分、组织学损伤评分、结肠黏膜组织中TLR4、Myd88和NF-κb的表达及外周血中IL-1的表达均显著增高(P0.01)。结论:UC大鼠模型中TLR4、Myd88、NF-κb和IL-1的表达明显升高,TLR4可能通过介导NF-κb引发信号通路下游的基因表达,从而导致炎症因子的释放。     

银杏叶提取物对大鼠重症急性胰腺炎肾损伤的保护作用及机制研究

目的探讨银杏叶提取物对大鼠重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)肾损伤的保护作用及相关机制。方法 雌性SD大鼠90只,随机分为假手术组(N组),重症急性胰腺炎模型组(P组),银杏叶提取物治疗组(S组)。P组和S组采用5%牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射方法复制大鼠重症急性胰腺炎模型,于12、244、8 h时间点对各组大鼠肾脏损伤进行大体形态和光镜下观察,测定大鼠血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、肌酐(crea,Cr)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-1,IL-6)的含量,并检测肾脏组织中的Toll样受体4(TLR4)和核因子κB(NF-κB)蛋白表达。结果 各时间点大鼠肾脏组织病理学评分、血清中BUN、Cr、TNF-α和IL-6的含量以及肾脏组织中TLR4和NF-κB的表达P组高于N组,S组低于P组。结论 银杏叶提取物对大鼠SAP肾损伤有保护作用,可能抑制TLR4/NF-κB信号通路中TLR4和NF-κB的活化,从而抑制下游炎症介质的释放来发挥保护作用。     

UC患者PBMC中TLR4、NF-κB水平的变化及其临床意义

目的 探讨溃疡性结肠炎(UC)患者外周血单核细胞(PBMC)中TOLL样受体(TLR)4、NF-κB水平的变化及在UC发病中的可能机制.方法 选取武警浙江省总队医院嘉兴医院消化科2014年1月至2015年1月收治的UC患者30例作为观察组,另选取该院体检科健康体检者10例作为对照组.采用流式细胞仪检测外周血CD14+单核细胞表面TLR4阳性表达率,RT-PCR检测TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB(P65) mRNA表达水平,Western blot检测TLR4、MyD88、NF-κB(P65)蛋白水平.结果 观察组外周血CD14+单核细胞表面TLR4阳性表达率明显高于对照组(P＜0.05);对照组TLR4、MyD88、NF-κB(P65) mRNA及蛋白水平明显低于观察组(P＜0.01);TLR4、MyD88、NF-κB(P65)蛋白水平与UC严重程度呈正相关.结论 UC患者PBMC中TLR4、NF-κB明显增高,临床可通过检测TLR4、NF-κB水平判断UC的发展程度.