基因芯片技术对结核分枝杆菌耐药性检测的临床应用

目的评价基因芯片技术对结核分枝杆菌耐药性检测的效果。方法选取我院结核科2014年3月至2016年3月收治的涂片阳性的肺结核住院患者238例,取其痰标本,分别用基因芯片、传统的罗氏培养和药敏试验3种方法进行结核分枝杆菌的异烟肼耐药性检测和利福平耐药性检测;把罗氏培养和药敏试验的结果作为金标准,评价基因芯片技术的临床应用价值。结果基因芯片技术检测涂片阳性患者痰标本异烟肼耐药的情况与金标准无显著差异(P>0.05);利福平耐药的情况与金标准相比也无明显差异(P>0.05)。结论基因芯片能够快速、准确地检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药情况,是一种值得推广的临床实验室检测方法。     

高特异性基因芯片法检测结核分枝杆菌的临床应用评价

目的探讨结核分枝杆菌基因芯片法直接检测在结核病临床诊断中的应用价值。方法应用基因芯片法检测76例结核病临床确诊病例和96例非结核病患者痰液、骨脓、胸腹水、脑脊液等标本中的结核分枝杆菌DNA,并对基因芯片的影响因素如标本的液化和样本浓度等进行探讨。结果标本液化对基因芯片法的检测结果影响较大,而样本浓度对检测结果影响不大。结论基因芯片法直接检测结核分枝杆菌具有简便快速,灵敏度高,特异性好等特点,可以作为临床结核病诊断的重要检测手段。     

结核分枝杆菌耐多药性基因芯片联合检测

目的 利用基因芯片技术检测结核分枝杆菌(MTB)对链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)、利福平(RFP)和异烟肼(INH)等4种抗生素的耐药性.方法 应用基因芯片法联合检测300株MTB临床分离株的SM、EMB、RFP和INH耐药性,并与BACTEC960法检测结果进行比较,将结果不相符的菌株进行测序,并比较结果.结果 基因芯片法测定300株MTB临床分离株,SM敏感188株、耐药112株,以rpsL43、88位aag突变为agg为主;EMB敏感251株,耐药49株,以embB 306位atg突变为gtg为主;RFP敏感211株,耐药89株,以ropB 516位aag突变为gag为主;INH敏感210株,90株,以KatG 315位gtg突变为gag为主;基因芯片法检测SM、EMB、RFP和INH耐药的敏感性、特异性分别为81.1%,99%;60.0%,100%;72.0%,98%;75.0%,99%;2种测定方法结果不相符菌株中,基因测序结果显示,基因芯片法检测点突变具有高度特异性.结论 基因芯片法联合检测MTB对SM、EMB、RFP和INH的耐药性,快速且特异性高,可作为MTB临床检测耐药性的快速筛选方法.     

鄞州区结核分枝杆菌耐药性研究

目的了解鄞州区肺结核患者结核分枝杆菌的耐药水平,为本区的结核病诊治提供参考依据。方法对鄞州区疾病预防控制中心2008—2009年收集的结核分枝杆菌用WHO推荐的比例法进行异烟肼(H)、利福平(R)、链霉素(S)和乙胺丁醇(E)的耐药性检测。结果 299例初复治患者的痰培养分离的结核分枝杆菌,总耐药率为30.77%,初始耐药率和获得性耐药率分别为27.48%和54.05%;耐多药率为6.69%,其中初始和获得性耐多药率分别为4.20%和24.32%。4种抗结核药物的耐药率由高到低分别为异烟肼(19.40%)、链霉素(16.05%)、利福平(9.36%)和乙胺丁醇(6.02%)。不同性别、年龄、户籍的耐药率差异无统计学意义。结论鄞州区结核病耐药形势依然严峻,应继续加强结核病的防治工作。     

应用基因芯片技术检测结核分枝杆菌耐药基因

目的应用基因芯片快速检测结核分枝杆菌耐利福平rpoB基因突变和耐异烟肼katG、inhA基因突变,建立一种新的分子药敏试验方法。方法根据结核分枝杆菌rpoB、katG、inhA基因序列设计探针并制作DNA芯片,PCR掺入法荧光标记,结核分枝杆菌基因突变位点的目的片断与DNA芯片杂交,同时以传统药敏试验和DNA测序法为对照。结果 70株结核分枝杆菌临床分离株中,20株药物敏感株芯片杂交结果与标准株完全相同;30株耐RIF临床分离株均检测到rpoB基因突变;50株异烟肼耐药株中有41株检测到katG基因突变,9株检测到inhA基因突变,与测序结果完全一致。结论用DNA芯片可快速、特异地检测出大多数结核分枝杆菌分离株的rpoB、katG、inhA基因突变,可用于临床耐药性的检测,指导临床用药。     

非结核分枝杆菌耐药性的观察

近年来，结核病的发病率有上升趋势，难治、复治性结核有所增加。在难治、复治性结核病人中，有部分是非结核分枝杆菌引起的非结核分枝杆菌病，常常被人们疏忽。我们对我院1986—1996年的86例非结核分枝杆菌的耐药性进行了观察，现将结果报告如下：一、材料与方法1．标本来源均     

利用基因芯片检测结核分支杆菌及其利福平耐药性的研究

目的 探讨结核杆菌耐利福平(RFP)检测基因芯片在结核病诊断及其耐药性检测中的应用价值。方法 采用结核杆菌耐RFP芯片对35株RFP耐药的临床分离菌株，102例肺结核患者、27例非结核病的其他患者的痰标本中的结核杆菌及其RFP耐药性进行了检测，基因芯片检测结果与痰涂片、细菌培养及结核杆菌标准化药敏试验结果比较。结果结核杆菌耐RFP检测芯片检测35株耐药株，有33株判定为RFP耐药株，与传统药敏试验结果的符合率为94．29％。对27份其他患者的痰液标本进行结核杆菌检测，特异性为92．59％。对102份结核患者痰标本中结核杆菌进行检测，痰涂片法阳性率35．29％(36／102)，细菌培养法阳性率28．43％(29／102)，基因芯片法阳性率77．45％(79／102)。传统的药敏试验报告102份痰标本仅29份培养出结核分支杆菌，其中8份RFP耐药株，而基因芯片法检测102份痰标本中发现20份耐RFP结核杆菌。主要基因突变位点为531、526和516。结论 采用结核杆菌耐RFP检测芯片检测结核杆菌及RFP耐药性具有快速简便、特异性高的特点。     

临床分离结核分枝杆菌耐药性分析

目的：分析临床分离结核分枝杆菌的耐药特点。方法：用改良罗氏培养基间接药敏实验绝对浓度法检测结核分枝杆菌的耐药情况。结果：结核分枝杆菌总耐药率79．6％，耐多药率为58．2％。其中初治耐药率60．5％，初治耐多药率34.2％，复治耐药率91.7％，复治耐多药率80．0％。结论：耐药结核分枝杆菌感染是临床治疗结核病的一个严重问题。分析临床分离结核分枝杆菌菌株的耐药特点，对控制结核病传染及指导临床合理用药具有重要意义。     

基因芯片技术在雅安市结核分枝杆菌耐药检测中的应用

目的评价基因芯片技术在雅安市结核分枝杆菌耐药检测工作中的应用价值。方法收集2016-06/2018-11雅安市结核病可疑患者痰培养分离株190株进行基因芯片菌种鉴定、耐药检测和比例法药敏试验。以比例法药物敏感试验为金标准,分析基因芯片技术检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼和耐多药诊断的敏感度、特异度、正确指数。采用McNemar检验比较两方法有无差异;采用Kappa检验比较两方法的一致性。两方法有差异的部分样本用基因测序的方法进行比对。结果基因芯片技术进行菌种鉴定,190株分离株中,有186株为结核分枝杆菌,4株为非结核分枝杆菌。以传统比例法药敏试验为金标准,186株结核分枝杆菌对利福平检测的敏感度和特异度为90.0%和96.6%,正确指数为0.866;对异烟肼检测的敏感度和特异度分别为89.5%和99.4%,正确指数为0.889;对耐多药的敏感度和特异度分别75.0%和99.4%,正确指数0.744。两种检测方法比较差异均无统计学意义(McNemar检验,P值分别为0.125、1.000和1.000)。两种检测方法具有较高的一致性(Kappa值分别为0.701、0.910、0.792)。基因芯片技术检测利福平耐药相关rpoB基因突变率最高的位点为531;异烟肼耐药相关katG基因主要突变位点为315。结论基因芯片技术与比例法药敏试验具有较好的一致性,灵敏度高、特异性好,是一种值得推广的耐药结核病诊断方法,在地市级结核病检测中具有重要的应用价值。     

反向斑点杂交技术在结核分枝杆菌耐药性检测中的应用研究

目的利用反向斑点杂交技术，建立结核分枝杆菌对利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）耐药相关基因突变的快速检测方法。方法根据结核分枝杆菌标准株H37Rv序列，自行设计针对rpoB、katG、inhA、rpsL和embB基因中常见耐药突变区的系列寡核苷酸探针，制成膜芯片，并对64例结核分枝杆菌临床株的基因突变情况进行检测。结果在36株RFP耐药菌中，有32株被检出在rpoB基因上发生突变，突变检出率为88．89％（32／36）；在39株INH耐药菌中，有30株被检出在katG或inhA基因上发生基因突变或缺失，检出率为76．92％（30／39）；在34株SM耐药菌中，有25株被检出在rpsL基因分析部位发生突变，检出率为73．5％（25／34）；在32株EMB耐’药菌中，有19株在embB基因分析部位发生突变，检出率为59．4％（19／32）。膜芯片检出的突变与基因测序结果一致。结论用膜芯片检测结核分枝杆菌对利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）四种主要一线抗结核药的耐药性，具有较高的特异性和敏感性，可作为常规药敏方法的补充，用于指导开展早期、有效的临床化疗。     

结核分枝杆菌耐药性检测技术研究进展

结核病是由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）感染引起的一种危害人类健康的慢性传染病,是我国面临的重要公共卫生问题之一。近年来,结核病在我国总体呈现稳步上升的态势,疾病负担日益增加。MTB耐药,尤其是多重耐药、广泛耐药,是结核病临床治疗面临的主要问题,MTB耐药性检测已成为结核病临床治疗、监测的关键性问题。目前MTB耐药检测方法主要有表型检测、分子检测以及新型检测技术。本研究对现有MTB耐药性检测的技术方法进行综述,为结核分枝杆菌耐药性检测新型技术的开发提供参考。     

基因芯片检测系统在分枝杆菌属鉴定及耐药性分析的临床应用

目的探讨基因芯片检测系统在分枝杆菌属鉴定及耐药性分析的临床应用价值,以及不同类型标本检出率的差异。方法应用基因芯片技术,对患者的痰液、脓液、胸腹水、脑脊液等标本进行分枝杆菌属DNA检测,进一步对结核分枝杆菌阳性标本进行耐药性分析。结果 900份临床样本的鉴定结果总阳性率为10.6%,洗肉水、穿刺物、脓液等阳性率较高;进一步对40份结核阳性标本进行耐利福平基因rpoB及耐异烟肼kat Gi、nhA基因检测,共有9例检测到了突变的耐药基因。结论基因芯片检测系统可以直接进行分枝杆菌属鉴定及耐药性分析,适用于不同类型标本,简便快速,灵敏度高,特异性好。     

1191株结核分枝杆菌耐药性情况分析

目的 分析结核病人的耐药情况,预防工作及临床治疗提供科学依据.方法 采用绝对浓度法进行结核分枝杆菌药物耐受性测定.结果 1 191株结核分枝杆菌的耐药率为45.8％,原发耐药率为30.8％,获得型耐药率为75.5％,总耐多药率为26.1％.结论 广泛有效的实施DOTS-PLUS策略是控制耐药的关键,耐药监测为耐药结核病防治提供了科学依据.     

自贡市肺结核患者结核分枝杆菌耐药性分析

目的 分析自贡市2010-04/2011-08检出肺结核病例结核分枝杆菌的耐药性,为预防及临床治疗提供科学依据.方法 通过将全市6个区县结核病监测点纳入的初、复治涂阳肺结核患者,采用比例法对异烟肼(H)、利福平(R)、乙胺丁醇(E)、链霉素(S)4种药物进行敏感性检测.结果 调查符合要求对象232例,总耐药47例(20.26％),其中单耐药15例(6.47％),多耐药7例(3.02％),耐多药25例(10.78％),复治组耐药率和耐多药率明显高于初治组(P＜0.05);耐药患者中耐单药顺位依次为H＞R＞S＞E,复治组REP耐药率明显高于初组(P＜0.05).结论 自贡市耐多药结核病防治工作形势依然严峻,耐多药结核病防治工作将是今后结核病防治工作的重点;既往治疗史是发生耐药结核病最重要的因素;制定合理个体化治疗方案,有助于合理用药、降低耐药率,使病例尽早康复.     

BACTEC™ MGIT™ 320液体快速培养在检测结核分枝杆菌及耐药性中的应用

目的评价BACTEC™MGIT™320液体培养在快速检测结核分枝杆菌及耐药性的应用效果.方法 收集500例患者痰标本进行液体培养,并与涂片抗酸和固体罗氏培养法进行阳性检出率比较.结果 在三种方法中,液体培养结核分枝杆菌结果阳性检出率最高,为33.6%(168/500).在385份抗酸染色阴性标本中,用液体和固体培养检出率分别为16.9%(65/385),9.9%(38/385).液体培养阳性及药敏出结果时间平均10.7天,7天,固体为35天,28天.上述数据差异有统计学意义(P<0.05).液体和固体两种方法检测耐药结果符合率均大于98.4%,污染率差异有统计学意义(P<0.05).结论 液体培养法检测结核分枝杆菌,阳性检出率高,有时间优势,且对涂阴的患者更有效.     

结核分枝杆菌临床分离株耐药性分析

[目的]了解肺结核分枝杆菌耐药性特点,为临床用药提供参考。[方法]收集2003年9月～2006年5月门诊痰菌阳性标本,获取培养阳性标本136份,采用绝对浓度间接法试验对全部培养阳性标本进行4种抗结核药物(RFP、INH、SM、EMB)的耐药性测定。[结果]总耐药率62.5%(85),初始耐药率47.1%(40),初始耐多药率31.8%(27),获得性耐药率88.2%(45),获得性耐多药率58.8%(30)。耐药顺序为RFP﹥INH﹥SM﹥EMB,耐药率分别为:51.5%,48.5%,26.5%,19.9%。[结论]本地结核菌耐药率远远高于全国平均耐药率(46%),因此应加强抗结核药物的耐药性监测,根据药敏结果选择有效化疗方案,彻底治疗结核病人。     

基因芯片法与线性探针法对痰标本中结核分枝杆菌检测的应用价值

目的探讨基因芯片法与线性探针法检测痰标本中结核分枝杆菌(MTB)的应用价值。方法海南医学院第二附属医院2018年3—7月门诊和住院的106例疑似肺结核患者纳入研究,采用基因芯片法、线性探针法对患者送检的痰进行检测,并与改良罗氏培养法进行比较;以比例法药敏试验为金标准,分析上述两种方法检测利福平和异烟肼耐药性的效能。结果对106份痰标本进行改良罗氏培养,阳性率为52.83%(56/106),经鉴定其中46份标本为MTB阳性。基因芯片法和线性探针法分别检出MTB46、53株,基因芯片法、线性探针法与改良罗氏培养法检测MTB结果比较,差异均无统计学意义(均P0.05)。基因芯片法、线性探针法与比例法检测MTB对利福平的耐药性比较,差异均无统计学意义,且具有较好一致性(均P0.05,均Kappa0.75)。对利福平的耐药性检测,基因芯片法的灵敏度、特异度分别为84.62%、90.00%,线性探针法分别为84.62%、85.00%。基因芯片法、线性探针法与比例法检测MTB对异烟肼的耐药性比较,差异均无统计学意义,但一致性一般(均P0.05、均Kappa0.75)。对异烟肼的耐药性检测,基因芯片法的灵敏度、特异度分别为69.23%(18/26)、95.00%(19/20),线性探针法分别为65.38%(17/26)、85.00%(17/20)。结论基因芯片法和线性探针法均可准确、快速地从大部分疑似结核病患者的痰标本中鉴定出MTB,也适用于利福平和异烟肼耐药结果的快速检测,从而指导临床用药,值得临床推广。     

嘉兴市２７７株结核分枝杆菌耐药性监测分析

摘要：目的　了解结核分枝杆菌对一线抗结核药物的耐药性,初步评价嘉兴市近年来结核病的耐药趋势。
方法　对嘉兴市第一医院２００９－２０１１年期间的结核病患者培养阳性菌株进行菌群鉴定及采用比例法对４种
一线抗结核药物异烟肼（Ｈ）、利福平（Ｒ）、链霉素（Ｓ）、乙胺丁醇（Ｅ） 进行药物敏感性测定,用ＳＰＳＳ
１７．０统计软件进行χ
２ 检验,分析结果。结果　本研究共纳入结核分枝杆菌２７７株,总耐药率为２７．０８％,
耐多药率为１１．１９％;初治患者和复治患者耐药率分别为１７．６２％和５６．７２％,耐多药率６．１９％和２６．８７％,
两者差异均有统计学意义（χ
２＝４．９６,犘＝０．０２６;χ
２＝２１．８５,犘＜０．０１）。结论　嘉兴市结核分枝杆菌的
耐药情况依然严峻,尤其复治患者,在制定结核病防控策略时应给予充分重视,加强对复治肺结核患者高
质量的全程监督短程化疗。
关键词：结核分枝杆菌;耐药性;分析
中图分类号：Ｒ３７８．９１＋１　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１４）０６ ０５５０ ０３     

复合PCR-SSCP检测巨噬细胞内结核分枝杆菌耐药性的探讨

[目的]检测结核分枝杆菌耐药性。[方法]复合PCR-SSCP检测分离培养结核菌株及分离分离结核病患者标本中巨噬细胞内TB-DNA的耐药基因变异情况。[结果]PCR检测TB-DNA阳性率为90．8％；复合PCR-SSCP检测分离菌株总耐药率为90．O％(18／20)，其中耐单药、耐2药和耐3药突变率分别为20．0％(4/20)、40．O％(8／20)和30．0％(6／20)。而对PCR扩增到的结核病患者标本中巨噬细胞内TB-DNA的检测总耐药率为72．7％(48／66)；其中耐单药、耐2药和耐3药突变率分别为19．7％(13／66)、36．4％(24／66)和16．7％(11／66)。[结论]复合PCR—SSCP测定分离分纯结核病患者巨噬细胞内TB-DNA及分析其耐药性变异，可为病原、耐药和耐多药结核病诊断的有效方法之一。     

非结核分枝杆菌的耐药性分析及临床意义

目的分析非结核分枝杆菌的感染、耐药情况,为临床合理用药提供科学依据。方法采用快速全自动分枝杆菌培养/药敏检测系统(Bactec MGITsyste)检测标本,阳性标本采用VITEK MS质谱分析仪鉴定。结果2016年-2018年3年共检出非结核分枝杆菌157株,主要来自ICU、呼吸内科、神经内科、血液科,分别占31.2%、22.3%、13.4%、13.4%,居前三位的分别为胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌、脓肿分枝杆菌,对常用的抗结核药物敏感性较低,克拉霉素敏感性较好。结论NTM感染应尽早鉴定菌株并根据药敏结果合理选用抗菌药物,避免更多耐药菌株出现。