短发夹核糖核酸沉默EZH2基因对人脑胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨短发夹核糖核酸（sh RNA）对高表达EZH2的人胶质瘤细胞株U251增殖和侵袭的影响。方法构建针对EZH2的sh RNA重组质粒,采用电穿孔的方法转染至U251细胞中,分为对照组、control-sh RNAGFP空载体转染组和EZH2-sh RNA重组质粒转染组。分别通过逆转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测各组细胞EZH2基因和蛋白的表达,以噻唑蓝法测各组细胞的增殖活性,蛋白质印迹法检测各组细胞的EZH2蛋白表达水平;Transwell小室检测细胞侵袭力。结果对照组、control-sh RNA-GFP空载体转染组、EZH2-sh RNA重组质粒转染组U251细胞EZH2基因的表达分别为1.13±0.05、1.15±0.05、0.19±0.02,U251细胞EZH2蛋白的表达分别为1.03±0.03、0.97±0.06、0.20±0.02,转染后24 h细胞增殖能力分别为100.00%±9.31%、100.03%±9.35%、60.13%±3.15%,转染后48 h细胞增殖能力分别为100.00%±9.13%、99.58%±9.27%、53.01%±3.14%,重组质粒转染组较另两组均明显下降,差异有统计学意义（P〈0.05）;重组质粒转染组转染48 h后细胞磷酸化蛋白激酶B和磷酸化叉头框蛋白O1水平降低、细胞周期蛋白D1表达减少、p27蛋白表达增多,差异有统计学意义（P〈0.05）。Transwell小室侵袭实验显示侵袭至Transwell小室滤膜下表面的细胞数在EZH2-sh RNA重组质粒转染组[（46.00±2.82）个]低于对照组[（60.67±5.71）个]和control-sh RNA-GFP空载体转染组[（61.00±2.48）个],差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 EZH2基因沉默能有效抑制人胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力,为深入研究EZH2在胶质瘤中作用提供了研究基础。     

MicroRNA-664对人脑胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探究microRNA-664(miR-664)对人脑胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法采用Lipofectamine 2000脂质体法将miR-664模拟剂(miR-664 mimics)、miR-664抑制剂(miR-664 inhibitor)转染至人脑胶质瘤细胞U251中,并设置相应对照组(miR-NC、anti-NC);采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-664的表达,MTT法检测各组细胞增殖情况,划痕实验及Tanswell小室法检测各组细胞迁移、侵袭能力,Western blotting法检测各组细胞中核蛋白(Ki67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及MMP-9的表达。结果与miR-NC相比,转染miR-664 mimics后明显上调U251细胞中miR-664的表达,并促进U251细胞增殖、迁移和侵袭能力,并显著上调细胞中Ki67、PCNA、MMP-2及MMP-9的表达(P 0. 05);与anti-NC相比,转染miR-664 inhibitor后明显下调U251细胞中miR-664的表达,并抑制U251细胞增殖、迁移和侵袭能力,并显著下调细胞中Ki67、PCNA、MMP-2及MMP-9的表达(P 0. 05)。结论 miR-664可能通过上调Ki67、PCNA、MMP-2及MMP-9的表达,促进人脑胶质瘤细胞U251细胞的增殖、迁移和侵袭,可作为潜在的肿瘤标志物。     

枸杞皂苷通过调控Suv39H1/JAK2/STAT3通路对鼻咽癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的　探究枸杞皂苷介导Suv39H1/JAK2/STAT3通路对鼻咽癌CNE-2细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法　将人鼻咽癌CNE-2细胞株分为枸杞皂苷干预组（5,10,50 μmol/L枸杞皂苷）及对照组,采用CCK-8检测不同浓度枸杞皂苷作用0,24,48和72 h时CNE-2细胞增殖率,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测枸杞皂苷干预48 h后CNE-2细胞凋亡率,Transwell小室实验检测CNE-2细胞侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）与蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测组蛋白甲基化酶Suv39H1的表达水平;采用qRT-PCR和Western blot分别检测Suv39H1在鼻咽癌组织和癌旁组织,以及鼻咽癌细胞系（HONE1,C666-1,CNE-1和CNE-2）和人鼻咽癌上皮细胞（NP69）中的表达差异;构建Suv39H1过表达载体（pcDNA-Suv39H1）以及针对Suv39H1的小干扰RNA（Suv39H1 siRNA）,分别转染于CNE-2细胞,检测细胞增殖、侵袭和凋亡;将pcDNA-Suv39H1载体转染于50 μmol/L枸杞皂苷干预的细胞中,分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡。Western blot检测JAK2/STAT3通路相关蛋白p-JAK2和p-STAT3的表达。结果　与对照组相比,枸杞皂苷干预鼻咽癌CNE-2细胞呈剂量依赖性降低细胞增殖（F=12.030,P=0.002 5）和侵袭（F=4.807,P=0.031 5）,增加细胞凋亡率（F=5.232,P=0.026 1）,抑制Suv39H1蛋白表达（F=14.64,P=0.001 3）;与正常组织和NP69细胞相比,鼻咽癌组织和HONE1,C666-1,CNE-1,CNE-2细胞中Suv39H1表达水平显著升高（P<0.01）;转染pcDNA-Suv39H1组细胞增殖、侵袭率增强、凋亡率降低;转染Suv39H1 siRNA组细胞增殖、侵袭率降低,凋亡率升高,差异与对照组相比具有统计学意义（P<0.01） ;与50 μmol/L枸杞皂苷干预组相比,转染pcDNA-Suv39H1组细胞增殖、侵袭率增加、凋亡率降低,p-JAK2和p-STAT3蛋白表达升高（P<0.01）。结论　枸杞皂苷通过下调Suv39H1/JAK2/STAT3通路抑制鼻咽癌CNE-2细胞增殖、侵袭,促进凋亡。     

干扰NETO2通过调控JAK2/STAT3信号通路抑制肺腺癌细胞增殖和转移能力

目的 研究神经纤毛及唾样蛋白2(NETO2)在肺腺癌中的表达及临床意义,并探讨NETO2对肺腺癌细胞增殖和转移能力的作用及其机制。方法 采用免疫组化检测NETO2在肺腺癌组织中的表达水平,并分析NETO2的表达与肺腺癌患者临床病理参数及预后的关系。培养肺腺癌细胞A549,随机分为对照组(si-NC组)和实验组(si-NETO2-1组、si-NETO2-2组),分别转染NC siRNA和NETO2 siRNA-1、NETO2 siRNA-2,Western blot检测各组细胞中NETO2蛋白的表达水平;MTS实验和平板克隆实验检测各组细胞的增殖能力;Transwell实验检测各组细胞的转移能力;Western blot检测各组细胞中JAK2/STAT3信号通路蛋白JAK2、pJAK2、STAT3和pSTAT3蛋白表达。结果 免疫组化结果显示,与癌旁组织相比,NETO2在肺腺癌组织中的表达增加(P<0.05),NETO2高表达与肺腺癌患者肿瘤T分期、淋巴结转移和TNM分期均相关(P<0.05),与NETO2低表达的肺腺癌患者相比,NETO2高表达的肺腺癌患者生存预后较差;与s...     

人脑胶质瘤干细胞增殖和分化过程中NOTCH-1信号通路的调控

背景:研究发现NOTCH-1信号通路在神经干细胞或种经前体细胞的自我更新、增殖及分化中起重要作用.目的:探讨NOTCH-1信号通路在人脑胶质瘤干细胞增殖和分化过程中的调控作用.设计、时间及地点:开放性实验,于2005-01/2007 03在解放军第三军医大学新桥医院完成.材料:人脑胶质瘤组织、正常成人脑组织由解放军第三军医大学新桥医院神经外科提供.U251胶质瘤细胞株由解放军第三军医大学新桥医院神经外科吕胜青副教授惠赠:CHG-5胶质瘤细胞株由解放军第三军医大学西南医院病理研究所卞修武教授、姚晓红博士惠赠.方法:取人脑胶质瘤组织、正常成人脑组织、U251及CHG-5胶质瘤细胞株,采用免疫磁珠法分选获得CD133+脑胶质瘤干细胞,加入DMEM/F12无血清培养基进行增殖培养,形成细胞克隆后,加入含体积分数为10%胎牛血清的培养液,2 h后行抗CD133和抗巢蛋白免疫荧光双标染色.主要观察指标:人脑胶质瘤十细胞的生长和鉴定,采用WST-8法、免疫组化实验、流式细胞仪、免疫荧光双标实验检测NOTCH-1信号通路蛋白的表达.结果:在无血清培养基中,细胞呈悬浮生长,培养24～48 h可见单个细胞开始分裂生长,形成肿瘤球,将肿瘤球转入含胎牛血清的培养基后,4 h周边细胞伸出突起并逐渐分化,24 h后肿瘤球迁移出的细胞增多,形成单细胞层.肿瘤球能同时表达干细胞标志物CDl33和巢蛋白,CD133脑胶质瘤干细胞核浆比例达2/3～3/4,突起少,胞浆中线粒体等细胞器较少,核糖体丰富,未见胶质丝等分化结构,符合干细胞超微结构特点.NOTCH-1蛋白在人脑胶质瘤组织中的表达明显强于正常成人脑组织(P＜0.01),在CDl33+U251及CHG-5胶质瘤细胞中有很强的表达,在GFAP+和MAP2+U251及CHG+5胶质瘤细胞中的表达强弱不等,在MBP+U251及CHG-5胶质瘤细胞中早弱表达或不表达.在脑胶质瘤干细胞增殖过程中能检测到较强的NOTCH-1信号通路关键基因NOTCH-1,CBF-1,HES-1 mRNA及NO和TChH-1,HES-1蛋白表达;而在细胞分化时NOTCH-1信号通路关键基因NOTCH-1,CBF-1,HES-1 mRNA和HES-1蛋白表达逐渐减弱.结论:NOTCH-1信号通路的关键蛋白分子NOTCH-1在人脑胶质瘤组织和胶质瘤细胞株中均有表达,而在正常成人脑组织中仅微弱表达.NOTCH-1信号通路关键基因NOTCH-1和HES-1的表达强弱可能参与了胶质瘤干细胞增殖和分化的调控.     

miR-21靶向调控PTEN/PI3K/AKT通路对骨肉瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的 检测微小核糖核酸（micro RNA, miR）-21在人正常骨细胞hFOB1.19与人骨肉瘤细胞系U2OS,Saos-2和MG-63中的表达,并探讨miR-21对骨肉瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法 实时荧光定量PCR法(real-time fluorescent quantitative PCR, qRT-PCR)检测人正常骨细胞hFOB1.19与人骨肉瘤细胞系U2OS,Saos-2和MG-63中miR-21的表达。选择MG-63细胞随机分为3组,利用脂质体2000分别转染空白对照（control）、阴性对照miR-21-NC及抑制剂组（miR-21-inhibitor）,再通过qRT-PCR法验证转染后MG-63细胞中miR-21表达。CCK-8法检测MG-63细胞增殖能力变化;流式细胞技术检测抑制miR-21表达对MG-63细胞凋亡的影响;Transwell实验检测对MG-63细胞侵袭能力的影响以及采用Western blot检测抑制miR-21表达对MG-63细胞中PTEN,PI3K,AKT及p-AKT蛋白表达的影响。结果 人骨肉瘤细胞系Saos-2,U2OS和MG-...     

IncRNA HOTAIR通过介导JAK2/STAT3通路调节肾上腺肿瘤细胞增殖和凋亡的机制

目的 探究长的非编码RNA( IncRNA )HOX转录反义基因间RNA( HOTAIR )通过介导Janus激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)通路调节肾上腺肿瘤细胞增殖和凋亡的机制.方法 前瞻性分析2019年6月至2020年7月三二O一医院收治的接受肾上腺肿瘤手术切除的60例患者,提取人原发性肿瘤和邻近...     

lncRNA HOTAIR通过介导JAK2/STAT3通路调节肾上腺肿瘤细胞增殖和凋亡的机制

目的探究长的非编码RNA(lncRNA)HOX转录反义基因间RNA(HOTAIR)通过介导Janus激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)通路调节肾上腺肿瘤细胞增殖和凋亡的机制。方法前瞻性分析2019年6月至2020年7月三二〇一医院收治的接受肾上腺肿瘤手术切除的60例患者,提取人原发性肿瘤和邻近的健康组织,并分别作为病理观察组和对照组。将大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株PC12分为对照组(PC12细胞系)、过表达组(lncRNA HOTAIR过表达转染)和敲低组(shRNA lncRNA HOTAIR转染)。RT-PCR检测lncRNA HOTAIR的mRNA的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率;细胞计数试剂盒-8(CCK-8)测定细胞增殖能力;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测促炎因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)]水平;蛋白印迹分析JAK2/STAT3、核因子κB(NF-κB)相关通路蛋白的表达。结果病理观察组较健康对照组lncRNA HOTAIR mRNA表达升高(P<0.05)。转染24 h和48 h后,3组细胞增殖率均显著高于转染12 h(P<0.05);对照组和过表达组细胞增殖能力均随转染时间显著增强(P<0.05);转染24 h和48 h后,过表达组细胞增殖数目较对照组显著升高(P<0.05),敲低组细胞增殖数目较HOTAIR过表达组显著降低(P<0.05)。与对照组相比,过表达组细胞凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,以及JAK2、STAT3、NF-κB(p65)蛋白相对表达量均显著升高(P<0.05),敲低组细胞凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,以及JAK2、STAT3、NF-κB(p65)蛋白相对表达量均显著降低(P<0.05),与过表达组相比,敲低组细胞凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,以及JAK2、STAT3、NF-κB(p65)蛋白相对表达量均显著降低(P<0.05)。结论lncRNA HOTAIR通过上调促炎细胞因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)水平,激活了JAK2/STAT3通路,调节肾上腺肿瘤细胞的增殖和凋亡。     

JAK2/STAT3/HIF-1α信号通路对脑卒中的影响

信号转导和转录激活因子3(STAT3)是信号转导和转录激活因子的一种,其作用体现在细胞信号的交流和基因的转录等方面,Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/STAT3/缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)信号通路对脑卒中的影响极为重要。然而,JAK2/STAT3/HIF-1α信号通路在大脑中所起到的具体作用,尤其是在脑卒中之后是保护或是损害,至今仍无定论。该文阐述JAK2/STAT3/HIF-1α信号通路的激活或抑制在脑卒中(特别是脑缺血再灌注)中所发挥的作用,提出脑卒中急性期抑制JAK2/STAT3/HIF-1α信号通路的表达、康复期激动JAK2/STAT3/HIF-1α信号通路的表达、抑制与激动的结合运用可能是今后对JAK2/STAT3/HIF-1α信号通路的研究方向。     

秦艽对佐剂性关节炎大鼠JAK2/STAT3信号通路的调控作用

目的:研究秦艽醇提物抑制佐剂性关节炎(adjuvantinduced arthritis,AA)大鼠及阻断Janus激酶2-信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路的可能机制。方法:雄性,SD大鼠,48只,随机分为6组,每组8只。除正常组外,采用弗氏完全佐剂诱导AA大鼠模型。致炎第12天后,各组给予相应药物,每日1次,连续16d,处死,对大鼠体质量进行监测,并对大鼠进行关节评分;HE染色,对固定部位踝关节进行病理学观察;酶联免疫吸附实验(ELISA)法测SD大鼠血清中IL-6、IL-10和TNF-α的含量;Western blot法检测磷酸化JAK2(p-JAK2)、磷酸化STAT3(p-STAT3)的相对蛋白表达。结果:与模型组相比,秦艽醇提物(2.5、5、10g/kg)组不仅可减轻大鼠关节病理损伤程度,减少血管翳生成,减轻组织增生,还可明显抑制p-JAK2、p-STAT3蛋白的相对表达。结论:秦艽醇提物对AA大鼠具有较好的抑制作用,可能通过抑制JAK2及STAT3过度激活磷酸化,即抑制p-JAK2、p-STAT3蛋白相对表达水平,进而阻断JAK2/STAT3信号转导通路有关。     

丹参酮ⅡA通过调控NF-κB信号通路对胶质瘤的作用机制分析

目的 分析丹参酮ⅡA通过调控核转录因子(NF)-κB信号通路对胶质瘤的作用机制。方法 体外培养人神经胶质瘤U87细胞,分别加入0、5、10 mg/kg的丹参酮ⅡA培养72 h(即0 mg/kg组、5 mg/kg组、10 mg/kg组),并在培养24、48、72 h时采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwells小室检测细胞迁移和侵袭情况,并比较各组细胞培养72 h后的细胞各炎症因子水平、Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κB(NF-κB)蛋白及mRNA水平。结果 使用不同浓度丹参酮ⅡA对人神经胶质瘤U87细胞处理72 h,随处理时间的延长各组细胞吸光度值均升高,培养24、48和72 h时,5 mg/kg组、10 mg/kg组的细胞吸光度值均低于0 mg/kg组,且10 mg/kg组低于5 mg/kg组,差异均有统计学意义(P<0.05),呈剂量-反应关系。随处理时间的延长各组细胞凋亡率均升高,培养24、48、72 h时,5 mg/kg组、10 mg/kg组的细胞凋亡率均高于0 mg/kg组,且10 mg/kg组高于5 mg/kg组,差异均有统计学意...     

JAK/STAT信号通路与大肠癌及中医药调控

JAK/STAT是人体内重要的信号通路之一,多种细胞因子和生长因子的细胞内信号转导和基因转录过程由其介导;JAK/STAT信号通路参与肿瘤细胞的增殖、分化、血管生成以及机体免疫调节等过程,因此肿瘤的发生发展和其异常表达及活化密切相关。文章初步分析JAK/STAT信号通路与大肠癌之间关联,以及在此基础上中医药对大肠癌的调控作用机制。     

羧肽酶A4活化STAT3促进肝癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探究肿瘤相关基因羧肽酶A4(CPA4)对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其相关分子机制.方法 慢病毒载体构建MHCC97L-CPA4过表达细胞系和MHCC97H-shCPA4敲减细胞系,分别以MHCC97L-vector和MHCC97H-shNC细胞系作为对照.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和weste...     

华蟾素通过miR-106a-5p/STAT3信号通路调控肺癌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的研究华蟾素对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法以0. 15μg/ml华蟾素处理肺癌A549细胞,qRT-PCR和Western blot检测miR-106a-5p和STAT3表达量,MTT和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡。转染miR-106a-5p模拟剂(mimic)和STAT3 siRNA至A549细胞中,检测细胞增殖和凋亡。靶基因预测软件预测miR-106a-5p和STAT3靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测二者靶向关系。转染miR-106a-5p抑制剂(inhibitor)和pc DNA-STAT3至A549细胞中,并用0. 15μg/ml华蟾素处理,检测细胞增殖和凋亡。结果华蟾素处理的A549细胞中,miR-106a-5p上调表达,STAT3下调表达,细胞增殖抑制率和凋亡率显著升高。过表达miR-106a-5p和抑制STAT3的表达,均可提高A549细胞增殖抑制率和凋亡率。双荧光素酶报告基因实验证实miR-106a-5p和STAT3的靶向结合关系。抑制miR-106a-5p或过表达STAT3,可逆转华蟾素对A549细胞的增殖的抑制和凋亡的促进作用。结论华蟾素可抑制A549细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控miR-106a-5p/STAT3信号通路有关,上述结论可为华蟾素治疗肺癌的分子机制提供新依据。     

锌指基因1对脑胶质瘤细胞增殖及凋亡能力的影响

目的:研究过锌指基因1(JAZF1)对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡能的影响及其信号通路。方法:体外培养脑胶质瘤细胞株,分为对照组、空载组和过表达组;分别于无血清的RPMI 1640培养基中,加入AdvJAZF1-GFP或空载体Adv-GFP,对照组不予转染腺病毒。MTT法检测细胞活力,使用流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、β-连环蛋白(β-catenin)、腺瘤性结肠息肉病相关基因(APC)、Bax和Bcl-2蛋白表达量。结果:对照组和空载组细胞活力和凋亡率差异无统计学意义(P>0.05),过表达组细胞活力低于其他2组、细胞的凋亡率高于其他2组(均P<0.05);对照组和空载组β-actenin、GSK-3β、APC、Bax和Bcl-2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),过表达组β-actenin、GSK-3β、APC和Bax蛋白表达低于其他2组,Bcl-2蛋白表达高于其他2组(P<0.05)。结论:过表达JAZF1可能可通过作用于Wnt/β-catenin信号通路,调控β-catenin、GSK-3β、B...     

钩吻总碱通过JAK2/STAT3/Survivin通路调控人舌癌细胞株Tca8113增殖、凋亡的作用探讨

目的观察钩吻总碱对人舌癌细胞株Tca8113增殖、凋亡的作用,并探讨其对酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信号传导及转录激活因子3(STAT3)/Survivin通路的调控作用。方法取人舌癌细胞株Tca8113,培养至对数期,分装至6孔板中,分为对照组、A组、B组和C组,每组设置5个复孔。A组、B组和C组分别加入25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L浓度的钩吻总碱处理(20μl),对照组加入等量PBS缓冲液。以倒置显微镜观察72 h后各组细胞形态;以MTT法检测24 h、48 h、72 h后细胞增殖抑制率;以流式细胞仪检测72 h后细胞凋亡率;以RT-PCR检测72 h后JAK2、STAT3、Survivin mRNA相对表达量;以WB检测72 h后IL-6蛋白、JAK2、STAT3、Survivin蛋白表达并计算p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、p-Survivin/Survivin。结果72 h后,倒置显微镜下观察结果显示对照组细胞紧密,轮廓清晰,贴壁生长状态良好;A组细胞有浮起、变圆,B组和C组可见不同程度细胞壁皱缩和细胞碎片,其中C组变化最为明显,B组次之,A组变化最轻;各组24 h、48 h、72 h后增殖抑制率比较差异均有统计学意义(P<0.05),各组增殖抑制率均随时间延长显著增长,且呈时间依赖性和剂量依赖性;各组72 h后细胞凋亡率比较差异有统计学意义(P<0.05),各组凋亡率均随剂量升高显著增高;各组72 h后JAK2、STAT3、Survivin mRNA相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05);各组p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、p-Survivin/Survivin比较差异均有统计学意义(P<0.05),每两组间比较也可见差异具有统计学意义(P<0.05),其中对照组均最高,A组均次之,B组均稍低,C组均最低;各组IL-6蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论钩吻总碱能够呈剂量依赖性抑制人舌癌细胞株Tca8113增殖、促进凋亡,推测与直接调控JAK2/STAT3/Survivin通路,抑制JAK2、STAT3、Survivin蛋白磷酸化有关。     

营养缺乏自噬因子1对人脑胶质瘤U251细胞增殖侵袭能力的影响

目的探讨营养缺乏自噬因子1对人脑胶质瘤U251细胞增殖侵袭能力的影响。方法复苏培养人脑胶质瘤U251细胞,建立转染小干扰RNA(siRNA)的NAF1组(si-NAF1组)、阴性对照组(si-NC组)、未转染siRNA对照组(control组),采用CCK-8实验检测细胞增殖能力、平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力、细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力、Transwell法观察各组细胞侵袭能力变化。结果与control组比较,NAF1-siRNA干预U251细胞后,si-NAF1组NAF1的mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P均<0.05),其增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平降低,细胞增殖能力下降,克隆形成能力明显减弱,迁移能力明显降低,穿过Transwell膜的细胞数量明显减少(P均<0.05)。si-NC组与control组各项结果比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论转染siRNA后NAF1表达下降,进而下调PCNA水平,抑制人脑胶质瘤U251细胞的增殖能力;同时MMP-9蛋白表达水平下降,抑制U251细胞的迁移和侵袭能力。     

MiR-467b调控JAK/STAT信号通路在脂多糖诱导ATDC5细胞增殖及炎症反应中的作用

目的:探讨miR-467b调控JAK/STAT信号通路在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导ATDC5细胞增殖及炎症反应中的作用。方法:将ATDC5细胞分为4组:对照组、LPS组、NC mimics组、miR-467b mimics组。于转染培养48 h后收集细胞并进行后续实验:采用ELISA检测各组细胞TNF-α、IL-1β水平;采用qRT-PCR法检测各组细胞miR-467b的表达水平;采用MTT法检测各组细胞的增殖能力;采用蛋白质印迹和qRT-PCR法检测各组细胞JAK/STAT信号通路相关基因的蛋白质及mRNA表达水平。结果:与对照组相比,LPS组和NC mimics组ATDC5细胞TNF-α、IL-1β的表达水平均显著升高、miR-467b的表达水平显著降低(P<0.05);MTT实验结果表明:LPS组在24、48、72 h的吸光度值显著降低(P<0.05)。蛋白质印迹结果发现:与对照组相比,LPS组和NC mimics组ATDC5细胞STAT1、STAT3、JAK2、p-STAT1、p-STAT3、p-JAK2蛋白表达水平及STAT1、STAT3、JAK2 mRNA表达水平均显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与NC mimics组相比,miR-467b mimics组TNF-α、IL-1β的表达水平均显著降低而miR-467b的表达水平显著升高(P<0.05);过表达miR-467b后,细胞在24、48、72 h的吸光度值显著升高(P<0.05),而STAT1、STAT3、JAK2、p-STAT1、p-STAT3、p-JAK2蛋白表达水平及STAT1、STAT3、JAK2 mRNA表达水平均显著降低(P<0.05)。结论:LPS刺激ATDC5细胞后可通过激活JAK/STAT3信号通路引起细胞炎性损伤,过表达miR-467b后可抑制JAK/STAT3信号通路的活化,降低ATDC5细胞的炎症水平。     

JAK/STAT信号通路对肠道病毒71型感染的调控作用

目的探讨肠道病毒71型(EV71)与JAK/STAT信号通路的关系。方法 EV71感染人横纹肌肉瘤(RD)细胞和人单核-巨噬细胞系THP-1细胞,用IFN-α2b(1 000 U/m L)刺激1 h,用实时荧光定量PCR(real-time qRT-PCR)法检测EV71感染前后以及感染病毒细胞接受IFN刺激前后4种干扰素刺激基因ISG15、ISG56、OAS1和MXA及STAT1、VP1的mRNA水平变化,观察IFN-α2b(1 000 U/m L)对EV71/VP1的影响,并用western blot分析转录因子STAT1磷酸化水平和EV71/VP1蛋白质表达水平变化。结果 EV71感染RD细胞后,MXA mRNA的相对表达量下调,未见STAT1的磷酸化。而感染THP-1细胞后,MXA、OAS1和ISG56 mRNA的表达水平及STAT1的磷酸化水平均上调。与未感染EV71而经IFN-α2b处理的细胞相比,EV71感染的RD细胞经IFN-α2b处理后ISG15、ISG56、OAS1、MXA的mRNA表达水平及STAT1磷酸化水平下降,并抑制EV71/VP1的mRNA和蛋白质水平的表达。EV71感染的THP-1细胞经IFN-α2b处理后与未感染EV71而经IFN-α2b处理组细胞相比,上述4种干扰素刺激基因的mRNA表达水平及STAT1磷酸化水平明显上调,并抑制EV71/VP1的mRNA和蛋白质水平的表达。结论EV71感染可抑制RD细胞内JAK/STAT信号通路,而对THP-1细胞的影响则相反,提示THP-1细胞在EV71感染的固有免疫应答中发挥作用。