Kluyveromyces fragilis LFS-8611 β-D-半乳糖苷酶的摇瓶培养条件

脆壁克鲁维酵母(Kluyveromyces fragilisLFS-8611合成的β-D-半乳糖苷酶具有较高的催化半乳糖基转移反应活力，脆壁克鲁维酵母(K，fragilis)LFS-8611细胞生长和β-D-半乳糖苷酶的合成同步，该茵株生长和产酶的最适碳源为半乳糖，乳糖次之；最适氮源为蛋白胨F403；最适培养条件为：发酵培养基的初始PH值为7，0，摇床的转速为200r／min，培养基中碳源和氮源质量浓度对茵体生物量和β-D-半乳糖苷酶活力有重要影响，以12mg／mL乳糖为碳源，16mg／mL蛋白胨(F403)为氮源，在最适培养条件下培养32h后，茵体生物量和β-D-半乳糖苷酶活力分别为7，56g／L和18，83U／mL。     

米曲霉β-半乳糖苷酶的纯化与性质研究

以40％饱和度的硫酸铵溶液去除杂蛋白，用80％饱和度的硫酸铵和75％的丙酮纯化米曲霉β-半乳糖苷酶，其比活力为147．7U／mg，回收率为38．1％。该酶最适反应温度和pH分别为50～55℃和4．0～6．0，作用于乳糖的米氏常数Km为16．7mmol／L，最大反应速度Vmax为5．56μmol／min。     

发芽咖啡豆α-半乳糖苷酶的化学修饰

从发芽咖啡豆中提取α-半乳糖苷酶,在一定浓度条件下,化学修饰剂对发芽咖啡豆α-半乳糖苷酶的化学修饰结果显示:色氨酸是α-半乳糖苷酶活性中心的必需氨基酸,-SH、-COOH和组氨酸对α-半乳糖苷酶的活性有影响,精氨酸、赖氨酸和-S-S-不是α-半乳糖苷酶活性中心的必需基团。邹氏作图法显示α-半乳糖苷酶活性中心的必需色氨酸数目为1。     

耐热β-半乳糖苷酶基因bgαB在枯草芽孢杆菌中的整合表达

来源于嗜热脂肪芽胞杆菌Bacillus stearothermophilus的耐热β-半乳糖苷酶基因bgαB被克隆到大肠杆菌—枯草芽胞杆菌穿梭质粒pMA5中，然后将外源基因及其表达调控序列亚克隆到枯草芽胞杆菌整合栽体pSAS144中，转化Bacillus subtilis受体菌BD170，在5μg／mL的氯霉素抗性平板上筛选抗性转化子，经摇瓶发酵后，得到耐热乳糖酶的比酶活为0．32U／mg，是出发菌株比酶活的2倍。     

产α-半乳糖苷酶菌株的筛选、酶学特性和固定化研究

为解决目前工业用α-半乳糖苷酶耗能大、成本高的难题,研究泡菜汁中筛选出产α-半乳糖苷酶的菌株,而后对其进行紫外诱变和亚硝酸钠进一步诱变,并在不同温度和不同p H下测定α-半乳糖苷酶酶活力。结果表明:获得一株酶活高达36.9 U/m L的α-半乳糖苷酶菌株,该菌株所产α-半乳糖苷酶的最适反应温度为50℃,最适p H为5.5。利用4%海藻酸钠做为固定剂对α-半乳糖苷酶进行固定化,可以使酶活保持在70%左右,此α-半乳糖苷酶高产菌株的发现及其酶学特性的研究为α-半乳糖苷酶的工业化应用奠定了基础。     

酸性β-半乳糖苷酶基因密码子优化及高效表达

选用酵母偏好密码子,设计合成一种酸性β-半乳糖苷酶基因,并研究其在毕赤酵母中的高效表达。优化后,密码子适应指数(CAI)由原来的0.61提升到0.85。在基因的5'端融合编码α信号肽序列,在3'端融合编码6个组氨酸标签序列,并在N端编码α信号肽和编码成熟酸性β半乳糖苷酶基因间分别引入编码kex2和Ste13裂解信号序列。基因克隆到pPICZα-A表达载体,构建成分泌型重组酵母表达载体pPICZα-β-Gal。在醇氧化酶(AOX1)启动子调控下,酸性β-半乳糖苷酶得到高效分泌表达,达到508 mg/L,比优化前提高3倍。重组酸性β-半乳糖苷酶具有天然的酸性β半乳糖苷酶相同的酶活性。     

固定化酶催化合成头孢羟氨苄

以7-氨基-3-脱乙酰氧基头孢烷酸(7-ADCA)为母核,对羟基苯甘氨酸甲酯(HPGME)为酰基供体,在磷酸缓冲液体系中,利用固定化青霉素酰化酶催化合成头孢羟氨苄(cefadroxil).通过对头孢羟氨苄酶法合成过程中的影响因素的考察,以选取较佳的合成工艺条件.实验结果表明,在反应温度为25 C,反应体系pH 6.5,7-ADCA,HPGME和固定化酶用量分别为2.5%,7.5%,1.5%的反应条件下,合成反应转化率可达到80.3%.     

微生物柚苷酶的研究进展

柚苷酶是一种具有α-L-鼠李糖苷酶和β-D-葡萄糖苷酶两种酶学活性的酶,在柑橘类产品脱苦、鼠李糖和普鲁宁制备及类固醇的生物转化等方面具有广泛的应用前景。柚苷酶来源广泛,其主要来源为微生物。不同来源柚苷酶的酶学性质往往会存在差异,从而影响其应用领域。系统地从柚苷酶来源、微生物产酶、活力测定、分离纯化与性质、克隆表达、结构、固定化及应用等方面对柚苷酶进行了综述,有助于指导其更好地科学研究和工业化应用。     

微生物酶合成红景天苷的条件优化

通过对菌株Absidiasp.MS1、Absidiasp.MS2、Absidiasp.MS3、Absidiasp.MS4、Absidiasp.MS5和Absidiasp.MS6合成红景天苷能力的比较,确定Absidiasp.MS2为生产红景天苷合成酶的出发菌株。采用菌株Absidiasp.MS2发酵得到粗酶液,以酪醇和葡萄糖为底物合成红景天苷。实验确定该酶促反应最优条件为:酪醇为15g/L,葡萄糖为60g/L,反应温度为45℃,pH值为5.0,反应时间为6h。     

化学－酶法合成胸苷的研究

核苷及其衍生物在抗肿瘤、抗病毒方面具有广泛应用,如何高效绿色合成核苷一直是研究的 重点．现以１－氯－２－脱氧－３’,５’－二－Ｏ－对氯苯甲酰基－Ｄ－核糖（化合物Ⅰ）为起始原料,采用结晶诱导 不对称转化技术合成中间体２－脱氧－α－Ｄ－核糖－１－磷酸二环己胺盐（化合物Ⅲ）,然后以化合物Ⅲ和胸 腺嘧啶作为底物,利用大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）核苷磷酸化酶的催化作用合成胸苷．结果显示： 化学法合成化合物Ⅲ获得较高的收率,可达到８４．９％,纯度为９４．７％;最佳生物酶催化反应条件： 底物浓度为化合物Ⅲ１００ｍｍｏｌ／Ｌ,胸腺嘧啶４００ｍｍｏｌ／Ｌ;菌体量为８０ｇ／Ｌ;缓冲液ｐＨ　８,反应温 度５５℃,反应时间４ｈ,转化率达到６１．８％．最后,采用柱层析法分离得到胸苷,收率和纯度分别为 ４９．７％和９５．３％．该方法具有高选择、高效性及少污染的优点．     

多酶体系催化从1－磷酸葡萄糖和N－乙酰基葡萄糖胺合成N－乙酰基乳糖胺

本文以１－磷酸葡萄糖和Ｎ－乙酰基葡萄糖胺为原料，经过ＵＤＰ－葡萄糖焦磷酸化酶、ＵＤＰ－半乳糖４－异构酶、β１，４－半乳糖基转移酶等多步催化，一系列反应同时进行，最后获得产物Ｎ－乙酰基乳糖胺．     

2-氰甲硫基-1-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-半乳吡喃糖硫基)乙烷的合成

以巯基乙醇为起始原料，经取代、磺酰化后再与已知的2-β-(2，3，4，6)-四-O-乙酰基-β-D-半乳吡喃糖基-2-异硫脲氢溴酸盐作用共3步反应，制得2-氰甲硫基-1-(2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-半乳吡喃糖硫基)乙烷，其结构经IR，^HNMR，MS确证。