高压氧对小鼠皮肤移植术后脾T淋巴细胞及其表面粘附分子变化的研究

目的：探讨环孢素Ａ 和高压氧对同种异体小鼠皮肤移植排斥反应的影响。方法：采用免疫荧光染色技术和流式细胞仪,观察不同处理因素对小鼠脾淋巴细胞ＣＤ＋３ 、ＣＤ＋４ 、ＣＤ＋８ 细胞百分率及Ｔ 淋巴细胞表面粘附分子ＬＦＡ－ １（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８） 表达的影响。结果：高压氧组、环孢素Ａ 组、高压氧＋ 环孢素Ａ 组与对照组比较有显著差异（ Ｐ＜ ０－０１） ,且环孢素Ａ＋ 高压氧组与环孢素Ａ 组、高压氧组比较也有显著差异。结论：高压氧和环孢素Ａ 均能抑制小鼠移植排斥反应,且二者联合应用效果更显著。     

小鼠皮肤移植耐受诱导及微嵌合体检测

目的　探求简便易行、安全有效、有临床应用前景的移植耐受诱导方法，研究微嵌合体的形成情况及其与移植耐受的关系。方法　雄性ＢＡＬＢ／ｃ 和雌性Ｃ５７ＢＬ／６ 小鼠作为皮肤移植的供体和受体，移植前对受体小鼠单独或联合应用５Ｇｙ（５００ｒａｄ ，１Ｇｙ ＝ １００ｒａｄ） 全身照射，０ ．１ ｍｌ 抗淋巴细胞血清注射，３ ×１０７ 供体骨髓细胞静脉输注，１５０ｍｇ／ｋｇ 体重环磷酰胺腹腔注射。应用多聚酶链式反应（ＰＣＲ） 检测微嵌合体的形成。结果　单纯照射不能延长移植物的存活，也没有微嵌合体形成，而其它各实验组的皮肤移植物存活时间均较对照组明显延长，混合淋巴细胞反应和迟发型超敏反应也表现为供者特异性的降低，多种组织的微嵌合体检查均呈阳性。结论　采用比较温和的非照射的预处理方法，也可获得一定程度的免疫耐受，达到延长移植物存活的目的；移植前输注供体骨髓细胞能够促进微嵌合体的形成及移植物的存活。     

高压氧对脑缺血再灌注小鼠明胶酶、一氧化氮合酶及血脑屏障的影响

目的:通过检测脑缺血再灌注小鼠明胶酶A(MMP－2)、明胶酶B(MMP－9)及一氧化氮合酶(NOS)活性,探讨高压氧(HBO)对脑缺血再灌注小鼠明胶酶、NOS及血脑屏障(BBB)通透性的影响。方法:复制脑缺血再灌注模型,并于再灌注期间经0.25MPaHBO治疗5次,采用明胶酶谱分析法及比色法,检测脑组织海马区明胶酶及NOS的活性,同时经尾静脉注射2%伊文思兰(EB),检测脑组织EB含量。结果:脑缺血再灌注后明胶酶(A、B)活性增加,HBO+脑缺血再灌注组明胶酶B(MMP－9)活性明显低于脑缺血再灌注组;而HBO对明胶酶A(MMP－2)作用不显著。脑缺血再灌注后NOS活性增加,HBO+脑缺血再灌注组NOS含量显著低于脑缺血再灌注组(P＜0.01)。脑组织EB含量以再灌注4h最高,11h、23h、48h、72h脑组织EB含量逐渐减少。高压氧+脑缺血再灌注组脑组织EB含量明显低于脑缺血再灌注组(P＜0.05,P＜0.01)。结论:高压氧具有降低脑缺血再灌注小鼠明胶酶B及NOS活性,降低血脑屏障的通透性的作用。     

成年小鼠皮肤移植耐受诱导的实验研究

静脉注射ＢａＩｂ／ｃ小鼠（Ｈ－２￣ｄ）脾细胞和骨髓细胞，４８小时后，腹腔注射环磷酰胺和抗胸腺细胞血清，可诱导Ｂ６小鼠（Ｈ－２￣ｂ）对ＢａＩｂ／ｃ小鼠皮肤移植的长期耐受（＞８０天）．耐受Ｂ６小鼠可正常排斥无关品系ＣＢＡ／Ｊ小鼠（Ｈ－２￣ｋ）的皮肤，显示了耐受的特异性。上述诱导方案可导致受体小鼠脾细胞对ＣｏｎＡ、ＬＰＳ诱导的增植反应的抑制，但这种全身性免疫抑制可在短期内恢复，而供体特异性的同种异型反应，如ＭＬＲ和ＤＴＨ则不能恢复。     

环孢素A对小鼠气管移植模型中气管上皮细胞的影响

背景：气管上皮的再生及完整性对预防肺移植后闭塞性细支气管炎起着最为关键的作用。 目的：观察环孢素A对小鼠气管异位移植模型中移植气管上皮细胞增殖的影响。 方法：将BALB/c小鼠气管异位移植到C57BL/6小鼠颈背部皮下,建立异位气管移植模型,将受体小鼠随机分组：实验组腹腔注射环孢素A 25 mg/(kg•d),对照组不注射环孢素A。 结果与结论：移植气管病理检查显示,环孢素A具有延缓上皮细胞剥离、减少淋巴细胞浸润以及延缓纤维化过程的作用,但最终仍无法阻止移植物管腔闭塞的发生。上皮细胞定量分析显示,环孢素A可以延缓上皮纤毛细胞下降幅度,延缓上皮细胞增殖高峰期,加快上皮细胞凋亡高峰期。细胞因子检测显示,环孢素A对白细胞介素4分泌具有促进作用,对干扰素γ分泌具有早期促进,中晚期抑制作用。     

同种小鼠皮肤移植时的肿瘤坏死因子水平

ｐ＜０．０１二、红毛五加水提物对血清ＴＮＦ－α的影响ＡＨ各组在延长皮片存活时间同时，血清中ＴＮＦ－α水平随剂量增加而升高，在１．５、３．０、６．０ｇ／ｋｇ剂量时，ＴＮＦ－α水平与ＮＳ组比较，未见显著性差异（ｐ＞０．０５），但是，ＡＨ各组血清ＴＮＦ－α水平与Ａｚａ组比较，有显著性差异（ｐ＜０．０１），结果见表２。表２ＤＢＡ／２受体小鼠血清肿瘤坏死因子变化（ｎｇ／ｍｌ）注：与Ａｚａ组比较，＊ｐ＜０．０１，与ＮＳ组比较ｐ＞０．０５讨论肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）是一种重要的免疫调节因子，可由巨噬细胞、单核细胞、ＮＫ细胞等非特异性免疫细胞产生，个有广泛的生物学效应，并且在器官移植中已开始引起人们的注意［３］。对中药进行筛选，发掘具有免疫抑制作用的药物用于临床，减少器官移植排斥反应是器官移植领域的重要研究内容之一。实验动物皮肤移植模型操作简便，易于观察，是初筛免疫排斥抑制剂的有效方法。Ａｚａ在延长移植皮片存活时间时，血清中ＴＮＦ－α水平明显低于ＮＳ组（ｐ＜０．０１），可见，降低血清ＴＮＦ－α水平与延长皮片存活时间有关。然而，在本实验中，ＡＨ各组在延长皮片存活时间时，一方面，ＴＮＦ－α水平未见降低，另一方面，从ＡＨ量──     

茴香霉素对小鼠同种异基因皮肤移植的影响

目的: 阐明茴香霉素对淋巴细胞反应性的影响以及在皮肤移植中抑制排斥反应的作用.方法: 用MTT法检测茴香霉素刺激下淋巴细胞在单向或双向混合淋巴细胞反应中的反应性.C57BL/6小鼠作为供体, BALB/c小鼠作为受体.手术前3 d分别给3组BALB/c小鼠皮下注射生理盐水、环胞霉素A以及茴香霉素, 手术当天继续注射至术后第7天.环胞霉素A及茴香霉素的注射剂量分别为: 20 mg/kg、 12.5 mg/kg.结果: 在剂量10.0 μg/L时, 茴香霉素能抑制单向或双向混合淋巴细胞反应中淋巴细胞的反应性(P均＜0.01); 茴香霉素组移植皮肤的存活时间明显高于环胞霉素A组以及对照组.结论: 茴香霉素能明显抑制淋巴细胞的反应性; 并且能明显延长受体对皮肤移植物的耐受时间, 可能为移植免疫排斥的治疗提供新的途径.     

移植前诱导抗独特型抗体对小鼠皮肤排斥反应的抑制作用

目的 探讨抗独特型抗体诱导对异品系小鼠皮肤移植排斥反应的影响。方法 以C57BL／6小鼠脾细胞免疫Balb/c小鼠制备抗同种异品系抗体（Ab1),将Ab1与KLH交联后，免疫Balb/c小鼠诱导产生抗独特型多克隆抗体（Ab2),并以之为受体，观察Ab2对小鼠皮肤移植排斥反应的影响。结果Ab1交联KLH加弗氏佐剂免疫可有效地诱导抗独特型抗体（Ab2)产生。与对照组相比较，Ab2诱导组小鼠移植物存活时间明显延长。结论 移要有在受体体内诱导产生以移植物抗原为模拟抗原的抗独特型抗体，可对移植排斥反应产生有效的抑制作用。     

免疫抑制状态下小鼠MD-1表达的影响因素及其在皮肤移植中的效应

目的 探讨免疫抑制状态下小鼠MD-1表达的影响因素及在皮肤移植中的效应。方法采用小鼠同种皮肤移植模型，以环孢霉素A（CsA）、他克莫司（FK506）、霉酚酸酯（MMF）或雷帕霉素（SRL）为免疫抑制手段。结果CsA和MMF能抑制脾细胞的MD-1表达和增殖反应强度，下调血清IL-2水平和上调IL-10水平，并显著延长皮肤移植物平均存活时间（MST）；FK506对IL-10水平无明显影响；而SRL对MD-1表达及IL-2与IL-10水平均无明显影响。MD-1表达水平与脾细胞增殖反应强度和血清IL-2水平呈极显著正相关，和IL-10水平呈极显著负相关。结论CsA、FK506和MMF能抑制小鼠MD-1的表达，其作用与血清IL-2水平下调有关。在免疫抑制状态下，MD-1表达下调与同种皮肤移植物存活时间延长有关，而其表达上调对排斥反应的发生具有一定的指示作用。     

高压氧抗小鼠同种皮肤移植排斥反应的实验研究

目的：探讨高压氧抗移植排斥反应机理。方法：Ｃ５７ＢＬ／６小鼠接受ＢＡＬＢ／ｃ小鼠移植皮片后，在９９２％Ｏ２，０２５ｍＰａ条件下每天１ｈ直至皮片排斥。动态观察移植局部Ｔ细胞及亚群，ＩＬ－２Ｒ（α）阳性细胞浸润情况以及混合淋巴细胞培养（ＭＬＣ）、细胞杀伤活性（ＬＭＣ）等。结果：高压氧组小鼠移植皮片存活时间明显延长；移植局部Ｔｈｙ－１，Ｌ３Ｔ４，Ｌｙｔ－２及ＩＬ－２Ｒ（α）阳性细胞浸润明显减少，ＭＬＣ及ＬＭＣ均降低。结论：高压氧可通过抑制移植局部Ｔ淋巴细胞浸润及ＩＬ－２Ｒ表达以及Ｈ－２诱导的增殖反应及杀伤活性，从而抑制移植排斥反应。     

肝移植围术期血浆一氧化氮和一氧化氮合酶活性的变化及意义

目的：动态观察肝移植围术期血浆一氧化氮（NO）水平和一氧化氮合酶（NOS）活性的变化，并探讨其意义。 方法： 30例终末期肝病患者接受原位肝移植术。用放免法、比色法分别测定肝移植围术期5个时点血浆NO2-/NO3-水平和NOS活性，观察其动态变化。同步抽取桡动脉和肺动脉血做血气分析，记录不同时期的PO2、PCO2、SO2、Hb，根据肺内分流标准模型公式计算(Qs/Qt)。并监测围术期心输出量（CO）、心率（HR）、中心静脉压（CVP）、平均动脉压（MABP）、体循环阻力（SVR）。 结果： (1) 无肝前10 min NO2-/NO3-水平明显高于麻醉后术前。无肝期30 min NO2-/NO3-显著低于无肝前10 min。新肝期30 min NO2-/NO3-显著高于麻醉后术前、无肝期30 min。（2）TNOS活性各时点无显著差异。无肝前10 min、新肝30 min时iNOS活性明显高于麻醉后术前。与无肝30 min值比较，新肝期30 min iNOS活性显著升高。（3）MABP在开放下腔静脉后1 min明显下降，CO和CVP在无肝期下降，新肝期增高。SVR在无肝期增高，新肝期明显下降。（4）Qs/Qt在无肝期下降，新肝期30 min升高。 结论： 在肝移植围术期各个时段，NO水平及iNOS活性各不相同。高NO水平可能是新肝期低阻力、肺内分流增加的原因。     

高压氧治疗用于烧伤患者皮瓣移植术后创面愈合治疗效果的Meta分析

目的探讨烧伤创面经皮瓣移植术后应用高压氧治疗创面愈合治疗效果的Meta分析。 方法检索自建库以来至2019年7月25日烧伤患者皮瓣移植术后高压氧治疗的相关文献,数据库包括PubMed、Cochrane library、中国知网、维普中文科技期刊全文数据库、万方医学网、中国生物医学文献数据库等,并提取相关试验数据,纳入Meta分析。由2位研究人员独立按照纳入与排除标准实施文献筛选和数据收集。结局指标：皮片存活率、血氧饱和度、皮温、肿胀消退时间、皮肤红润时间以及皮瓣移植术后HBO的治疗时机。应用Revman 5.3软件进行荟萃分析。 结果纳入研究的12项研究偏倚风险均不确定。其中,对皮瓣移植术后HBO治疗与术后常规治疗的临床对照研究纳入11篇文献,根据不同干预措施分为实验组和对照组。2组皮片成活率比较,差异有统计学意义[RR＝1.30, 95%CI(1.23, 1.37),P<0.0001];2组血氧饱和度比较,差异有统计学意义[MD＝19.94, 95%CI(18.16, 21.72),P<0.0001];2组皮温比较,差异有统计学意义[SMD＝3.27,95%CI (2.66, 3.89),P<0.0001];2组肿胀消退时间比较,差异有统计学意义[MD＝-3.76,95%CI(-4.43, -3.18),P<0.0001];2组皮肤红润时间对比,差异有统计学意义[MD＝-4.56,95%CI(-5.28, -3.84),P<0.0001 ]。对皮瓣移植术后HBO治疗时机的研究共纳入5篇文献,根据术后高压氧治疗开始时间,分为术后立即行高压氧治疗组,术后10～48 h内行高压氧治疗组与术后48 h后行HBO治疗组,3组有效率比较,差异有统计学意义(P<0.00001),术后立即行高压氧治疗组皮瓣存活率高于术后10～48 h内行高压氧治疗组和术后48 h后行HBO治疗组[RR＝1.07、1.23,95%CI(1.01,1.13)、95%CI(1.12,1.25),P＝0.02、<0.0001];术后10～48 h内行高压氧治疗组和术后48 h后行HBO治疗组比较差异有统计学意义[RR＝1.14,95%CI (1.03,1.27),P＝0.01]。 结论烧伤患者皮瓣移植术后应用高压氧治疗,与传统的常规治疗相比,可以提高患者的皮片存活率,增强创面的血氧饱和度,保持创面皮温正常。同时还可以减轻创面红润时间,缩短肿胀时间,改善皮瓣的缺氧状态,增强移植皮瓣的生长活力,改善组织创面微环境。皮瓣移植术后立即内开始使用高压氧治疗,其效果优于24 h内和48 h后使用高压氧治疗。故高压氧辅助治疗可显著提高皮瓣存活率,术后应尽早使用。     

一氧化氮/诱导型一氧化氮合酶在动脉粥样硬化过程中的作用

 目的：探讨一氧化氮（NO）/诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）过程中的动态变化,分析其对动脉粥样硬化形成过程的影响。方法：将60只SD大鼠随机分成2组：对照组及AS组,每组30只。AS组采用维生素D3腹腔注射联合高脂饲料饲养的方法构建动脉粥样硬化模型。用相关生化方法检测血清各项生化指标：总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖和钙离子,比色法检测血清NO浓度,并对主动脉行HE染色,免疫组化技术检测iNOS蛋白表达,将所得数据进行统计分析,用简单线性相关分析NO与钙离子及动脉粥样硬化指数的相关性。结果：90 d后成功构建了主动脉中膜钙化型动脉粥样硬化模型。血清NO浓度在动脉粥样硬化过程中逐步下降,各组间差异均有统计学意义（均P<0.05）。动脉粥样硬化过程中动脉粥样硬化指数与钙离子呈正相关,与NO呈负相关。在90 d的AS组粥样斑块区免疫组化技术检测到iNOS蛋白表达。结论:在动脉粥样硬化形成过程中,主动脉粥样斑块区iNOS蛋白高表达,但血清NO浓度逐渐降低,NO抗动脉粥样硬化作用减弱。     

叶酸对去卵巢大鼠抗氧化酶、一氧化氮合酶和一氧化氮的影响

 目的: 观察叶酸对去卵巢大鼠抗氧化酶、一氧化氮合酶和一氧化氮的影响。方法: 40只3月龄健康雌性SD大鼠,随机分成5组:假手术组、去卵巢组、二乙基己烯雌酚(0.03 mg·kg^-1·d^-1)组、低剂量(5 mg·kg^-1·d^-1)叶酸组和高剂量(20 mg·kg^-1·d^-1)叶酸组。各组大鼠于术后1周开始灌胃给药,假手术组和去卵巢组给予蒸馏水,10周后,取L₅椎体和右股骨行骨密度(BMD)检测;测定血浆和骨匀浆总抗氧化能力(TAC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、一氧化氮合酶(NOS)和一氧化氮(NO)水平。结果: 与假手术组比较,去卵巢组大鼠L₅椎体和股骨BMD显著降低(P < 0.01),血浆GSH-Px、NO和骨匀浆TAC、GSH-Px、NOS及NO水平明显降低(P < 0.01),MDA浓度升高显著(P < 0.01);与去卵巢组大鼠比较,高剂量叶酸组大鼠L₅椎体和股骨BMD增加(P < 0.01),骨匀浆TAC、GSH-Px、NOS和NO水平升高(P < 0.01),MDA浓度降低(P < 0.01),血浆GSH-Px和NO水平升高。结论: 去卵巢大鼠体内抗氧化酶、NOS和NO水平降低,氧化应激参与了去卵巢大鼠骨质疏松的发生;高剂量叶酸能提升去卵巢大鼠腰椎和股骨BMD,提高其体内抗氧化酶、NOS和NO水平,改善氧化应激,这可能是高剂量叶酸防治去卵巢大鼠骨质疏松的机制之一。     

一氧化氮在实验性肝损伤中的作用

目的：观察３种细胞因子对体外培养大鼠肝细胞产生一氧化氮（ＮＯ）的影响及ＮＯ在实验性肝损伤中的作用。方法与结果：给大鼠注射内毒素后分离肝细胞,培养液中加入细胞因子（γ－ＩＦＮ,ＩＬ－２,ＴＮＦ－α）,上清液中ＮＯ含量增加,两种以上细胞因子联合应用,ＮＯ含量增加更明显;大鼠注射内毒素及Ｌ－精氨酸,血清中ＮＯ含量增加,肝损伤减轻;大鼠给硫代乙酰胺（ＴＡＡ）灌胃,并注射ＮＯ生成抑制剂Ｌ－ＮＮＡ,动物出现嗜     

阿司匹林对炎症条件下人血管内皮细胞一氧化氮的产生及诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的影响

目的:探讨炎症时阿司匹林(AS)对内皮细胞一氧化氮(NO)的产生及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达的抑制作用。方法:Griess法测上清液NO^-₂/NO^-₃水平、黄递酶法测NOS活性、常规生化法测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)浓度,染料排除法测细胞活力,RT-PCR技术分析iNOSmRNA水平。结果:白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、γ-干扰素(INF)联用脂多糖(LPS)诱导后上清液中NO^-₂/NO^-₃由(4.27±0.75)μmol/L增加到(9.35±1.25)μmol/L,对内皮细胞造成明显的损伤。但3mmol/LAS组NO生成及NOS活性明显降低,LDH释放率及MDA浓度下降,细胞存活率上升,与NO诱导组相比差异显著。并随AS剂量的增加对NO的抑制及对细胞的保护作用更加明显,但AS对生理水平的NO没有抑制作用。同时发现10mmol/L浓度以下AS对iNOSmRNA表达水平没有影响;但10-20mmol/L的AS则可在转录水平上抑制iNOSmRNA的表达。并观察到水杨酸钠及消炎痛不具有抑制NO产生的作用。结论:AS具有明显抑制IL-1β、TNF-α、γ-INF及LPS诱导NO生成的作用,从而保护血管内皮细胞避免炎症时高浓度NO的损伤。     

Role of nitric oxide in pheromone-mediated intraspecific communication in mice

Nitric oxide is known to take part in the control of sexual and agonistic behaviours. This is usually attributed to its role in neural transmission in the hypothalamus and other structures of the limbic system. However, socio-sexual behaviours in rodents are mainly directed by chemical signals detected by the vomeronasal system, and nitric oxide is abundant in key structures along the vomeronasal pathway. Thus, here we check whether pharmacological treatments interfering with nitrergic transmission could affect socio-sexual behaviour by impairing the processing of chemical signals. Treatment with an inhibitor of nitric oxide synthesis (Nω-Nitro-l-arginine methyl ester hydrochloride, L-NAME, 100 mg/kg) blocks the innate preference displayed by female mice for sexual pheromones contained in male-soiled bedding, with a lower dose of the drug (50 mg/kg) having no effect. Animals treated with the high dose of L-NAME show no reduction of olfactory discrimination of male urine in a habituation-dishabituation test, thus suggesting that the effect of the drug on the preference for male pheromones is not due to an inability to detect male urine. Alternatively, it may result from an alteration in processing the reinforcing value of pheromones as sexual signals. These results add a new piece of evidence to our understanding of the neurochemistry of intraspecific chemical communication in rodents, and suggest that the role of nitric oxide in socio-sexual behaviours should be re-evaluated taking into account the involvement of this neuromodulator in the processing of chemical signals.     

Effect of skin sensitizers on inducible nitric oxide synthase expression and nitric oxide production in skin dendritic cells: role of different immunosuppressive drugs

Nitric oxide (NO) is involved in the pathogenesis of acute and chronic inflammatory conditions, namely in allergic contact dermatitis (ACD). However, the mechanism by which NO acts in ACD remains elusive. The present study focuses on the effects of different contact sensitizers (2,4-dinitrofluorbenzene, 1,4-phenylenediamine, nickel sulfate), the inactive analogue of DNFB, 2,4-dichloronitrobenzene, and two irritants (sodium dodecyl sulphate and benzalkonium chloride) on the expression of the inducible isoform of nitric oxide synthase (iNOS) and NO production in skin dendritic cells. It was also studied the role of different immunosuppressive drugs on iNOS expression and NO production. Only nickel sulfate increased the expression of iNOS and NO production being these effects inhibited by dexamathasone. In contrast, cyclosporin A and sirolimus, two other immunosuppressive drugs tested, did not affect iNOS expression triggered by nickel.