薏苡仁酯对顺铂抑制人鼻咽癌细胞增殖的加强作用①

目的探讨薏苡仁酯(coixenolide, CXL)对顺铂(DDP)抑制人鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖的影响。方法采用微量细胞克隆形成法检测CNE-2Z对药物的敏感性。结果DDP呈剂量依赖性抑制CNE-2Z的增殖,ID     

口虾蛄总生物碱对人鼻咽癌CNE-2Z细胞周期与凋亡的影响

提取口虾蛄总生物碱并观察其对人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖、凋亡的影响。方法 酸提碱沉法处理口虾蛄,沉淀部分以乙酸乙酯萃取;不同浓度的口虾蛄总生物碱处理CNE-2Z细胞,CCK-8法、平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测细胞周期分布的影响;蛋白免疫印迹实验检测Caspase8蛋白表达的变化。结果 口虾蛄总生物碱能明显抑制CNE-2Z细胞的增殖,降低克隆形成能力,使细胞周期阻滞于S期;Caspase8蛋白表达水平随着口虾蛄总生物碱浓度增高而降低,有一定的剂量依赖。结论 口虾蛄总生物碱抗CNE-2Z细胞的作用可能通过抑制细胞增殖、诱导细胞周期阻滞及细胞凋亡等发生。     

黄连及其主要成分小檗碱对人鼻咽癌CNE-2Z生长的抑制作用

目的观察黄连及其主要成分小檗碱对人鼻咽癌细胞CNE-2Z的增殖和细胞周期的作用。方法MTT法、凋亡检测试剂盒检测不同浓度黄连以及小檗碱对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z生长抑制作用以及凋亡;流式细胞仪检测细胞周期的改变;裸鼠实验进行进一步的体内实验。结果黄连及其小檗碱能够抑制CNE-2Z细胞增殖,且随药物浓度增加抑制效应增强,呈现浓度依赖性,不同浓度的黄连和小檗碱分别处理细胞24,48,72h时,抑制率随浓度的增加和时间的延长而增加,其IC50黄连分别为(13.70±2.46)μg/ml,(10.02±3.41)μg/ml、(8.94±2.45)μg/ml,小檗碱分别为(3.59±1.24)μg/ml,(2.84±1.02)μg/ml,(1.47±0.45)μg/ml,各IC50间的差异有非常显著性(P<0.01)。不同浓度黄连和小檗碱作用细胞24h后,G0/G1期细胞明显下降,S期细胞明显升高(P<0.05,P<0.01)。两者对CNE-2Z细胞周期具有阻滞作用,可以阻滞在S期。动物实验显示肿瘤体积减小,差异有显著性。结论黄连及其主要成分小檗碱对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z具有增殖抑制作用,该抑制作用具有剂量和时间依赖性;一定剂量的黄连和小檗碱可能通过阻滞CNE-2Z于S期而抑制其增殖;对鼻咽癌细胞接种的裸鼠肿瘤体积有抑制作用。     

蝎毒抗癌多肽对CNE-2Z细胞生长周期移行和p53表达的影响

目的观察蝎毒抗癌多肽(APBMV)对CNE-2Z细胞生长周期和p53表达的影响.方法采用流式细胞仪双标法.结果APBMV处理CNE-2Z细胞48h后,进入S期的细胞明显减少,处于G1期和G2期的细胞明显增多,APBMV16mg/L处理CNE-2Z细胞48h后,G1期、S期和G2期细胞的百分比分别为59.7%、32.3%和7.9%,空白对照组的百分比分别为53.3%、45.2%和1.5%,二者比较差异有显著性(P<0.01或P<0.001).空白对照组CNE-2Z细胞P53蛋白24h和48h表达量处于较高水平(27.23±0.93)和(31.67±1.75),经APBMV处理24h或48h后,P53蛋白表达量明显下降,与空白对照组相比差异有显著性(P<0.01).结论APBMV能够阻止CNE-2Z细胞周期的移行,并抑制抑癌基因p53的表达.     

熊果酸诱导鼻咽癌细胞株CNE-2Z凋亡的实验研究

目的:探讨熊果酸诱导人鼻咽癌细胞CNE-2Z凋亡的作用机制.方法:用不同浓度的熊果酸处理CNE-2Z细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色检测熊果酸对CNE-2Z细胞的增殖抑制效应;流式细胞术分析细胞周期和凋亡率;应用免疫组织化学SP法检测凋亡相关基因bcl-2,bax和cox-2表达的变化;Western blot检测CNE-2Z细胞内caspase 3的表达.结果:熊果酸对CNE-2Z细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用,并呈浓度依赖性;流式细胞术分析表明S期细胞数减少,细胞主要阻滞在G0/G1期;免疫组织化学检测显示在凋亡过程中bax表达上调,bcl-2、cox-2表达下调;Western blot检测CNE-2Z细胞中caspase 3表达增强.结论:熊果酸在体外对CNE-2Z细胞有诱导凋亡的作用,其作用机制可能是通过促进caspase 3的活化和bax的表达上调、bcl-2、cox-2的表达下调来实现.     

薏苡仁酯对平阳霉素抑制人鼻咽癌细胞增殖的增效作用

目的 :探讨薏苡仁酯 (Coixenolide,CXL)对平阳霉素 (Pingyangmycin,PYM)抑制人鼻咽癌细胞 CNE- 2 Z增殖的影响。方法 :采用微量细胞克隆形成法检测 CNE- 2 Z对药物的敏感性。结果 :PYM呈剂量依赖性抑制 CNE- 2 Z的增殖 ,ID5 0 =10 - 5 .976 ± 10 - 6 .75 4 mol/L。加入 CXL10 - 7mol/L 和 10 - 6 mol/L均可使 PYM的量效曲线左移 ,ID5 0 降至 10 - 6 .31 5 ±10 - 7.0 5 6 mol/L 和 10 - 6 .71 7± 10 - 7.42 0 mol/L。CXL 还能使 PYM的时效曲线左移 ,缩短该药的作用时间。未发现 CXL 能增强 PYM的急性毒性作用。结论 :CXL选择性地增强 PYM的细胞毒性作用。     

黄连及其主要成分小檗碱对人鼻咽癌细胞CNE-2Z生长的抑制作用

[摘要] 目的 观察黄连及其主要成分小檗碱对人鼻咽癌细胞CNE-2Z的增殖和细胞周期的作用。方法 MTT法、凋亡检测试剂盒检测不同浓度黄连以及小檗碱对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z生长抑制作用以及凋亡;流式细胞仪检测细胞周期的改变;裸鼠实验进行进一步的体内实验。结果 黄连及其小檗碱能够抑制CNE-2Z细胞增殖,且随药物浓度增加抑制效应增强,呈现浓度依赖性,不同浓度的黄连和小檗碱分别处理细胞24,48,72 h 时,抑制率随浓度的增加和时间的延长而增加,其IC50黄连分别为(13.70±2.46) ug/ml、(10.02±3.41) ug/ml、(8.94±2.45) ug/ml,小檗碱分别为(3.59±1.24) ug/ml、(2.84±1.02) ug/ml、(1.47±0.45) ug/ml,各IC50间的差异有非常显著性(p<0.01)。不同浓度黄连和小檗碱作用细胞24 h 后,G0/G1期细胞明显下降,S期细胞明显升高(p<0.05,p<0.01)。两者对CNE-2Z 细胞周期具有阻滞作用,可以阻滞在S期。动物实验显示肿瘤体积减小,具有统计学意义。结论 黄连及其主要成分小檗碱对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z具有增殖抑制作用,该抑制作用具有剂量和时间依赖性;一定剂量的黄连和小檗碱可能通过阻滞CNE-2Z于S期而抑制其增殖;对鼻烟癌细胞接种的裸鼠肿瘤体积有抑制作用。 [关键词] 黄连 小檗碱 鼻咽肿瘤 细胞增殖     

口虾蛄抗鼻咽癌活性成分的筛选及其对细胞周期的影响

目的筛选口虾蛄乙醇提取物抗鼻咽癌活性成分,并探讨其对细胞周期的影响。方法采用系统溶剂法,对口虾蛄乙醇提取物进行分离,以MTT法筛选出对人低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞作用最明显的活性成分,然后应用流式细胞术进一步检测其对细胞周期的影响。结果3种提取物对CNE-2Z细胞均有不同程度的抑制作用,且呈明显的剂量依赖性,作用48小时后的乙酸乙酯提取物IC50（239μg/ml）明显低于其余2种（正丁醇提取物IC50：833μg/ml,石油醚提取物：1550μg/ml）;流式细胞术检测结果显示,随着乙酸乙酯提取物浓度的增加,G1期和G2/M期细胞所占的百分比逐渐降低,S期细胞所占百分比逐渐增加（P〈0.01）。结论口虾蛄抗鼻咽癌活性成分主要存在于乙酸乙酯提取物中,其作用机制可能与引起细胞周期阻滞于S期有关。     

黄芩苷对人鼻咽癌CNE-2Z细胞生长的抑制作用

目的 研究黄芩苷对人鼻咽癌CNE-2Z细胞的抑制作用及可能机制。方法 用倒置显微镜观察细胞形态学改变和计数法测定生长曲线;用MTT比色法检测给药后鼻咽癌细胞的增殖抑制情况;采用流式细胞术和PI/Hoechst33258荧光双染法检测凋亡。结果 黄芩苷作用后,癌细胞生长延缓并萎缩,胞质粗糙,有大量颗粒状物堆积,而且药物浓度越大,形态学改变越明显;黄芩苷对CNE-2Z细胞的增殖和生长有显著的抑制作用并呈明显的时间-剂量依赖关系;流式细胞仪和荧光双染法结果提示黄芩苷可诱导CNE-2Z细胞凋亡。结论 黄芩苷能抑制CNE-2Z细胞的增殖效应,其机制可能与诱导细胞凋亡和引起细胞周期阻滞于G2/M期有关。     

血管生成抑制剂TNP-470对人恶性胶质瘤细胞系SHG-44及其移植瘤生长的影响

目的：观察TNP－470对人恶性胶质瘤细胞系SHG－44体内和体外生长的影响。方法：采用MTT法、软琼脂克隆法、流式细胞仪、光镜和透射电镜技术观察SHG－44细胞体内外增殖、克隆形成、细胞周期和形态学变化及异种移植瘤生长情况。结果：20－2000ng/mlTNP－470可显著抑制SHG－44细胞体外增殖,克隆形成率显著降低,G0／G1期细胞明显增多,S、G2／M期细胞减少。彩和30mg/kg体重TNP－470隔日皮下注射后,移植瘤体积缩小、重量显著减轻,组织出现明显调亡细胞和坏死。结论：TNP－470对SHG-44细胞的生长抑制作用与其调控细胞周期和诱导细胞凋亡相关,提示TNP－470作为一种血管生成抑制剂对胶质瘤细胞生长也具有直接抑制作用。     

薏苡仁酯对人鼻咽癌细胞生长的抑制作用

采用ＭＴＴ法和活细胞计数法观察薏苡仁酯（Ｃｏｉｘｅｎｏｌｉｄｅ,ＣＸＬ）对人鼻咽癌细胞ＣＮＥ－２Ｚ生长的影响。结果表明ＣＸＬ对ＣＮＥ－２Ｚ的生长呈剂量依赖性抑制,ＩＤ５０为１０－４．９５０ｍｏｌ／Ｌ,相对效力是顺铂（Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ,ＤＤＰ）的１８．６％（在ＩＤ５０水平比较）。时效曲线显示,加药１２ｈ即见效,且随时间的延长而增强,但３６ｈ后抑制作用不再加强。ＣＸＬ还能使ＣＮＥ－２Ｚ的倍增时间（ＴＤ）延长４０．０％,对正常骨髓造血细胞未见毒性作用。以上实验结果提示ＣＸＬ选择性地抑制ＣＮＥ－２Ｚ的生长,其机理可能与肿瘤细胞增殖能力减弱有关。     

薏苡仁酯对人鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤转移的抑制作用

目的：探讨薏苡仁酯（coixenolide,CXL)对实验性鼻咽癌转移的抑制作用。方法：采用裸鼠移植瘤淋巴转移模型观察CXL的药效,MTT法检测该药物对免疫功能的影响。结果：CXL以量效方式抑制人鼻咽癌细胞CNE－2Z的转移,累积ID50为10^-3.282mol/kg,与接种部位“原发瘤”的缩小相一致（累积50=10^-3.387mol/kg)。组织学检查可见,CNE－2Z的侵袭能力降低,与淋巴结转移率下降同步。同时CXL能促进荷瘤小鼠NK细胞活性的恢复。结论：CXL能拮抗CNE－2Z的淋巴道转移,其机理可能与直接抑制及提高免疫力有关。     

鼻咽癌CNE2与放疗抗拒株CNE2R细胞的放化疗敏感性及其CUEDC2表达量比较

目的 比较鼻咽癌CNE2细胞与其放疗抗拒株CNE2R细胞的放化疗敏感性及两者CUE结构域2(CUEDC2)蛋白表达量的差异.方法 裸鼠成瘤法比较CNE2与CNE2R细胞的体内生长情况;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CNE2及CNE2R细胞对顺铂、多西紫杉醇的敏感性;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡;实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测CUEDC2的相对mRNA水平、蛋白质免疫印迹法检测CUEDC2蛋白的表达量.结果 CNE2生长速度快于CNE2R,对多西紫杉醇更敏感(P<0.05).0 Gy、4 Gy、8 Gy照射剂量下,CNE2R的G2/M期阻滞较CNE2明显,但12 Gy照射剂量下,CNE2R的G2/M期阻滞不如CNE2明显(均P<0.05).在8 Gy、12 Gy照射剂量下,CNE2的凋亡率高于CNE2R(P<0.05).CNE2R细胞CUEDC2蛋白相对mRNA扩增水平和蛋白表达量均高于CNE2(P<0.05).结论 放疗抗拒株细胞CNE2R的放化疗敏感性较其亲代细胞CNE2低,CUEDC2蛋白的表达量较CNE2的多.     

一种新型吲哚满酮类化合物对鼻咽癌细胞的作用

目的：研发针对中国南方和东南亚高发恶性肿瘤鼻咽癌的新型靶向抗癌药。方法: 用本课题组合成的一种新型吲哚满酮类化合物IF239处理培养的鼻咽癌细胞系(CNE), 酸性磷酸酶法测定化合物IF239对CNE细胞百分活率的影响; 光学显微镜下观察细胞形态变化和黏附状态的改变; 流式细胞术检测细胞周期时相的改变; Wes tern blot检测细胞周期关键调控分子的变化。结果: IF239对CNE细胞具有强大的杀伤作用, 其抗肿瘤机制可能与抑制细胞黏附和诱导细胞周期阻滞于G₂/M期有关; 而G₂/M期阻滞与IF239上调cyclin B1和细胞周期蛋白依赖激酶1(CDK1)磷酸化水平有关。 结论: IF239对CNE细胞的增殖抑制作用显著, 其作用机制独特, 具有潜在应用前景。     

5-杂氮-2’-脱氧胞苷对鼻咽癌细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的分析5-杂氮-2’-脱氧胞苷（5-aza-2dC）对鼻咽癌细胞株CNEl、CNE2、5-8F、6-10B增殖、凋亡和细胞周期分布的影响。方法用不同浓度5-aza-2dC处理鼻咽癌细胞，MTT实验观察细胞生长曲线，用流式细胞仪检测细胞周期分布情况和凋亡细胞比例。结果5-aza-2dC对4株细胞的增殖均具有抑制作用，CNEl和6-10B细胞的半数抑制剂量低于CNE2和5-8F。药物处理使4株细胞凋亡率呈剂量依赖性增加，CNEl和6-10B细胞对药物敏感性高于CNE2和5-8F。经5-aza-2dC处理后，CNEl、CNE2、6-10B细胞出现不同程度G0／G1期阻滞，而5-8F表现为G0／G1期和G2／M期双期阻滞．CNEl和6-10B细胞对药物敏感性高于CNE2和5-8F。结论5-aza-2dC对CNEl、CNE2、5-8F和6-10B细胞具有抑制增殖、促进凋亡和细胞周期阻滞作用，CNEl和6-10B对药物敏感性高于CNE2和5-8F。     

血卟啉衍生物光动力对两株人鼻咽癌细胞杀伤实验的对比研究

目的 探讨血卟啉衍生物(HpD)光动力学效应(PDT)对体外培养人鼻咽癌细胞株CNE2和C666-1的生物作用.方法 向体外培养的CNE2和C666-1分别加入不同浓度的HpD(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0μg/m)孵育4 h,予波长为630nm的半导体激光进行照射,照射的功率密度为20mW/cm2,照射能量密度分别为2、5、10、20 J/cm2,继续孵育24h,用四唑盐比色法测定细胞存活率.结果 HpD-PDT能有效地杀伤体外培养的人鼻咽癌CNE2和C666-1细胞,其杀伤作用大小与HpD的浓度和激光剂量成正相关(P＜0.01).激光能量为20 J/cm2,HpD的浓度为2.5μg/ml或2.0μg/ml时,其杀伤CNE2、C666-1细胞的作用最明显;HpD-PDT对CNE2和C666-1的半数杀伤度分别为0.7μg/ml、1.2μg/ml,两者存在显著性差异(P＜0.05).相同HpD浓度、激光剂量条件下,C666-1细胞存活率显著高于CNE2(P＜0.05).结论 HpD-PDT对CNE2和C666-1细胞均有杀伤作用,但C666-1细胞对HpD-PDT的敏感性低于CNE2.     

下调miR-205-5p增强3-溴丙酮酸对人鼻咽癌CNE2Z细胞的凋亡诱导作用

目的探讨下调miR-205-5p对3-溴丙酮酸诱导的鼻咽癌CNE2Z细胞凋亡的影响。方法以鼻咽癌CNE2Z细胞株为研究 对象,实验分为4组,分别为对照组、转染组（转染miR-205-5p-mimic或miR-205-5p-inhibitor）、3-溴丙酮酸组（80 μmol/L 3-溴丙 酮酸）、合用组（转染miR-205-5p-mimic或miR-205-5p-inhibitor后合用3-溴丙酮酸）。MTT法检测3-溴丙酮酸和miR-205-5p对 CNE2Z细胞增殖的影响;线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）检测细胞早期凋亡情况;DAPI荧光染色法检测细胞核形态变化以及 细胞晚期凋亡情况;Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率的变化;Western blot检测Bcl-2、Bax、Mcl-1、Bak蛋白的表达。 结果3-溴丙酮酸对CNE2Z 细胞的增殖有明显的抑制作用,并且随着药物浓度和作用时间的增加细胞增殖抑制作用越明 显;80 μmol/L 3-溴丙酮酸处理CNE2Z细胞24、48、72 h的抑制率分别为（45.7±1.21）%、（64.4±2.02）% 、（78.3±1.55）%;转染miR- 205-5p-mimic 后,80 μmol/L 3-溴丙酮酸作用24、48、72 h 的抑制率分别为（27.7±1.04）%、（34.8±2.10）%、（44.3±1.57）%;转染 miR-205-5p-inhibitor后,80 μmol/L 3-溴丙酮酸作用24、48、72 h的抑制率分别为（80.5±0.94）%、（87.9±0.50）%、（93.8±1.16）%。 线粒体膜电位检测结果显示,转染miR-205-5p-inhibitor后3-溴丙酮酸组红绿荧光的相对比例明显降低;DAPI荧光检测结果显 示,转染miR-205-5p-inhibitor后3-溴丙酮酸组的细胞核碎裂及核固缩明显增加;Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法检测结果显示,转 染miR-205-5p-inhibitor 后3-溴丙酮酸组的凋亡率明显高于单独处理组的凋亡率（P<0.01）;Western blot 检测结果显示,转染 miR-205-5p-inhibitor后3-溴丙酮酸组的Bcl-2、Mcl-1蛋白的表达水平明显降低,Bax、Bak蛋白的表达水平明显增高。结论3-溴 丙酮酸能诱导CNE2Z细胞凋亡,转染miR-205-5p-inhibitor 能增强3-溴丙酮酸诱导的细胞凋亡,其机制可能与下调Mcl-1 和 Bcl-2表达,上调Bak和Bax蛋白的表达有关。     

维生素E琥珀酸酯对人鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡影响的实验研究

目的:探讨维生素E琥珀酸酯(Vitamin E Succinate,VES)在体外对人鼻咽癌CNE2细胞的生长抑制作用.方法:以5,10,20,40 mg/L浓度的VES作用于人鼻咽癌CNE2细胞,使用光镜、透射电镜、MTT法、流式细胞仪观察和检测作用24,48,72 h后细胞形态、增殖、凋亡及细胞周期分布情况.结果:...     

蝎毒抗癌多肽对4种人肿瘤细胞系的作用

目的：观察蝎毒抗癌多肽（ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｆｒｏｍＢｕｔｈｕｓＭａｔｅｎｓｉｖｅｎｏｍ,ＡＰＢＭＶ）对人肿瘤细胞生长的抑制作用。方法：采用噻唑蓝（ＭＴＴ）法、台盼蓝拒染法和集落形成观察为指标,丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）为阳性对照药品,以ＡＰＢＭＶ４ｍｇ／Ｌ,８ｍｇ／Ｌ,１２ｍｇ／Ｌ和１６ｍｇ／Ｌ处理４种人肿瘤细胞（人早幼粒白血病细胞株ＨＬ６０、人肝细胞癌细胞株ＳＭＭＣ７７２１、人低分化鼻咽上皮癌细胞株ＣＮＥ２Ｚ和人胃癌细胞株ＭＧＣ８０３）,选用不同的作用时间点,分别观察ＡＰＢＭＶ对上述细胞的影响。结果：ＡＰＢＭＶ对ＨＬ６０、ＳＭＭＣ７７２１、ＣＮＥ２Ｚ和ＭＧＣ８０３细胞均有显著的细胞毒性作用,ＨＬ６０和ＳＭＭＣ７７２１比后两者显示出更好的量效关系（ｒ＝０．９８２８,ｒ＝０．９８６３,Ｐ＝０．０２）。ＡＰＢＭＶ处理ＨＬ６０和ＳＭＭＣ７７２１细胞２４ｈ,４８ｈ和９６ｈ后,两种细胞的生长均受到抑制（Ｐ＜０．０５,Ｐ＜０．０１）,并有显著的剂量效应关系;处理ＳＭＭＣ７７２１细胞２４ｈ,４８ｈ和９６ｈ时ＡＰＢＭＶ的ＩＣ５０分别是１５．８７ｍｇ／Ｌ、１３．０５ｍｇ／