独活香豆素对乳胞素诱导的帕金森病模型大鼠血清炎症因子的影响

目的:探讨独活香豆素对帕金森病模型大鼠血清炎症因子的影响。方法:利用乳胞素(Lactacystin)脑黑质致密部注射建立帕金森病(PD)大鼠模型,于第7、14、21、28天进行阿扑吗啡(APO)检测,根据大鼠行为学异常程度,应用分层随机法将模型复制的大鼠随机分为模型对照组、吐温80组、独活香豆素组、独活颗粒剂组、独活复方颗粒剂组、塞来昔布组、美多芭组7组。另设假手术组和正常对照组,假手术组脑黑质致密部注射等量生理盐水。正常对照组、假手术组、模型对照组用生理盐水灌胃,其他组大鼠同时间予以等体积相应药物灌胃,共10周。给药后第14、28、42、56、70天分别进行APO检测,观察记录其旋转行为异常、旋转方向、旋转圈数。在进行最后一次APO检测后的次日,每组随机取8只大鼠釆用ELISA方法检测其血清中IL-1α、IL-1β、IL-6及TNF-α的含量。结果:独活香豆素能改善PD模型大鼠行为学异常,降低血清IL-1α、IL-1β、IL-6、TNF-α炎症因子的异常升高。结论:独活香豆素有可能是通过降低大鼠血清IL-1α、IL-1β、IL-6、TNF-α炎症因子的表达,对PD起到保护作用。     

独活和独活香豆素对帕金森病模型大鼠脑黑质CHOP和Caspase12表达的影响

目的:通过观察独活及独活香豆素对乳胞素(Lactacystin)诱导的帕金森病(PD)模型大鼠脑黑质CHOP和Caspase12表达水平的影响,探讨其与内质网应激的关系。方法:利用乳胞素(Lactacystin)脑黑质致密部注射建立PD大鼠模型,于第7、14、21、28天进行阿扑吗啡(APO)检测,根据大鼠行为学异常程度,应用分层随机法将模型复制的大鼠随机分为模型对照组、吐温80组、独活香豆素组、独活颗粒剂组、独活复方颗粒剂组、塞来昔布组、美多芭组七组。另设假手术组和正常对照组,假手术组脑黑质致密部注射等量生理盐水。正常对照组、假手术组、模型对照组用生理盐水灌胃,其他组大鼠同时间予以等体积相应药物灌胃,共10周。给药后第14、28、42、56、70天分别进行APO检测,观察记录其旋转行为异常、旋转方向、旋转圈数。在进行最后一次APO检测后的次日,过量麻醉处死大鼠,断头,取左侧脑黑质,采用RT-PCR、Western-blot法,对大鼠脑黑质CHOP、Caspase12 mRNA及蛋白表达水平进行检测。结果:应用Lactacystin诱导的PD模型大鼠脑黑质CHOP和Caspase12的表达明显上调;予以药物干预后,独活香豆素、独活颗粒剂、独活复方颗粒剂、美多芭、塞来昔布组大鼠脑黑质CHOP和Caspase12的表达均有下降,以独活香豆素和或独活颗粒剂组最为显著。结论:独活和独活香豆素可能是通过抑制内质网应激对PD起到保护作用。     

独活寄生汤对膝骨关节炎模型大鼠PERK/Bip信号通路的影响

目的:基于蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/免疫球蛋白结合蛋白(Bip)信号通路探讨独活寄生汤缓解膝骨关节炎的可能机制。方法:采用寒冷刺激法建立膝骨性关节炎模型,将大鼠随机分为空白组,模型组,塞来昔布组(0.021 g·kg~(-1))和独活寄生汤低、中、高剂量组(8.37,16.72,33.48 g·kg~(-1)),空白组和模型组给予等体积的生理盐水,记录各组大鼠膝关节直径变化。采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠膝关节软骨病理形态变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β),透明质酸(HA)的表达;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western bolt)检测软骨中PERK,Bip,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)mRNA和蛋白的表达。结果:与模型组比较,塞来昔布组和独活寄生汤高剂量组大鼠膝关节红肿明显改善,且关节直径均显著的减小(P0.01),塞来昔布组和独活寄生汤高剂量组大鼠膝关节软骨局部裂隙缺损有明显好转。与空白组比较,模型组大鼠TNF-α,IL-1β和HA表达水平显著升高(P0.01),大鼠软骨中PERK,Bip,Caspase-9的mRNA和蛋白表达水平明显升高(P0.05,P0.01);与模型组比较,塞来昔布组和独活寄生汤高剂量组大鼠血清中TNF-α,IL-1β和HA表达明显下降(P0.05,P0.01),塞来昔布组和独活寄生汤高剂量组大鼠软骨中PERK,Bip,Caspase-9的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05,P0.01)。结论:独活寄生汤能缓解膝骨关节炎模型大鼠的症状,其机制可能与调节大鼠软骨中PERK/Bip信号通路有关。     

急性肺损伤大鼠肺组织TNF-α和IL-1β的表达及塞来昔布对其影响

目的初步探讨塞来昔布对急性肺损伤大鼠肺组织TNF-α和IL-1β表达的影响。方法将60只大鼠随机分为正常对照组、模型组、治疗组、药物对照组,每组15只,模型组和治疗组采用尾静脉注射LPS(5 mg/kg)建立急性肺损伤模型,后者在模型建立30 min后予塞来昔布灌胃,正常对照组和药物对照组在相同时间点分别予生理盐水和塞来昔布灌胃。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹(western blot)方法分别检测4组大鼠肺组织COX-2蛋白及TNF-α、IL-1βmRNA和蛋白的表达。结果模型组和正常对照组COX-2蛋白及TNF-α、IL-1βmRNA和蛋白表达比较均有显著性差异(P均<0.05);治疗组TNF-α、IL-1βmRNA和蛋白表达明显降低,与模型组均有显著性差异(P均<0.05)。结论选择性COX-2抑制剂塞来昔布可使急性肺损伤大鼠炎症反应减轻。     

骨灵膏及其拆方对骨关节炎模型大鼠炎性细胞因子与聚蛋白多糖酶的影响

目的探讨骨灵膏及其拆方制剂抗骨关节炎软骨损伤的可能作用机制。方法 60只SD大鼠随机分为骨灵膏组、骨膏组、灵膏组、塞来昔布组、模型组及正常组,每组10只。除正常组外其余各组采用寒冷刺激结合石膏固定的方法建立骨关节炎模型,造模成功后骨灵膏组、骨膏组及灵膏组分别给予骨灵膏、骨膏及灵膏生药量33.31g/(kg·d)灌胃给药,塞来昔布组给予塞来昔布20.83 mg/(kg·d)灌胃,模型组和正常组给予等量生理盐水灌胃,8周后检测膝关节软骨组织聚蛋白多糖酶4(ADAMTs-4)、聚蛋白多糖酶5(ADAMTs-5)蛋白表达,检测膝关节滑膜和血清白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、前列腺素E-2(PGE_2)、环氧合酶2(COX-2)、γ干扰素(IFN-γ)的含量。结果与正常组比较,模型组大鼠血清与滑膜IL-1β、TNF-α、PGE_2、COX-2、IFN-γ的含量均显著增加(P0.01)。与模型组比较,骨灵膏组血清与滑膜IL-1β、TNF-α、PGE_2、COX-2、IFN-γ含量明显降低(P0.01)。与骨灵膏组比较,骨膏组血清IL-1β、TNF-α、COX-2、IFN-γ含量和滑膜IL-1β、COX-2、PGE_2、TNF-α、IFN-γ含量升高(P0.05或P0.01),灵膏组血清和滑膜IL-1β、TNF-α、COX-2、PGE_2、IFN-γ含量升高(P0.05或P0.01),塞来昔布组血清IL-1β、TNF-α、PGE_2、IFN-γ含量和滑膜IL-1β、PGE_2含量亦升高(P0.01)。各组大鼠膝关节软骨组织ADAMTs-4、ADAMTs-5均有表达,其中模型组表达最显著,骨灵膏组ADAMTs-4、ADAMTs-5蛋白表达最低。结论骨灵膏可能通过降低血清及滑膜中炎性细胞因子,进而阻止局部关节软骨聚蛋白多糖酶合成,从而减轻了骨关节炎软骨损伤,并且作用明显优于其拆方制剂及塞来昔布。     

独活寄生汤联合塞来昔布对膝关节骨性关节炎患者膝关节液IL-1β、TNF-α及MMP-3的影响

目的观察独活寄生汤联合塞来昔布对膝关节骨性关节炎患者膝关节液中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及基质金属蛋白酶(MMP-3)的影响。方法将80例膝关节骨性关节炎患者随机分为治疗组和对照组,对照组给予塞来昔布治疗,治疗组在对照组治疗基础上联合独活寄生汤治疗。结果治疗3个疗程后,治疗组总有效率为98%,对照组为52%,2组相比差异有统计学意义(P0.05);治疗后2组关节液中IL-1β、TNF-α和MMP-3含量均显著下降(P均0.05),且治疗组各指标含量下降程度均高于对照组(P均0.05)。结论独活寄生汤联合塞来昔布治疗膝关节骨性关节炎疗效好,其作用机制可能与降低膝关节液中IL-1β、TNF-α及MMP-3含量相关,值得进一步研究。     

基于LXRs/NF-κB信号通路对A型滑膜细胞的调控探讨壮骨健膝方的作用机制北大核心CSCD

目的观察壮骨健膝方含药血清对脂多糖(LPS)诱导的兔A型滑膜细胞肝X受体(LXRs)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨壮骨健膝方治疗膝骨关节炎(KOA)滑膜炎症的机制。方法制备壮骨健膝方含药血清并采用超高效液相色谱质谱联用技术(UPLC-MS/MS)进行质量控制(龙胆苦苷885 ng/mL、阿魏酸185 ng/mL)。将兔A型滑膜细胞随机分为空白组和LPS组,LPS组经LPS诱导后建立炎症细胞模型,模型鉴定成功后随机分为模型组、壮骨健膝方组、LXRα抑制剂组、核受体辅助抑制因子(N-CoR)抑制剂组,分别予以10%空白血清、10%含药血清、10%含药血清+LXRα抑制剂、10%含药血清+N-CoR抑制剂,空白组予10%空白血清干预。干预24 h后,收集各组细胞及上清液,Western Blot、RT-qPCR检测各组细胞中LXRα、N-CoR、P50、P65蛋白及m RNA的表达,ELISA检测各组上清液中IL-1β、TNF-α、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)及MMP-13含量。结果与空白组比较,模型组P50、P65蛋白与mRNA表达及IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13含量均升高(P<0.01),LXRα、N-CoR蛋白与mRNA表达下降(P<0.01)。与模型组比较,壮骨健膝方组P50和P65蛋白与mRNA表达及IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13含量均降低(P<0.01),LXRα、N-CoR蛋白与mRNA表达升高(P<0.01);LXRα抑制剂组及N-CoR抑制剂组P50、P65蛋白与mRNA表达及IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13含量均降低(P<0.01,P<0.05)。与壮骨健膝方组比较,LXRα抑制剂组及N-CoR抑制剂组LXRα、N-CoR蛋白及mRNA表达下降(P<0.01),P50、P65蛋白及mRNA表达升高(P<0.01,P<0.05),两组IL-1β、TNF-α、MMP-3及MMP-13含量升高(P<0.01,P<0.05)。结论壮骨健膝方可通过上调LXRα和N-CoR蛋白及mRNA表达,下调P50、P65蛋白及mRNA表达,从而抑制LXRs/NF-κB信号通路的传导,减少下游炎症相关指标IL-1β、TNF-α、MMP-3及MMP-13的分泌,最终达到控制膝骨关节炎滑膜炎症反应的作用。     

桃红四物汤含药血清对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞TNF-α、MCP-1和IL-1β表达的影响

目的:研究桃红四物汤含药血清对脂多糖(LPS)诱导刺激下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用。方法:SD大鼠灌胃给予桃红四物汤提取液(生药1.75 g·m L-1),每天2次,按10 m L·kg-1连续给药3d后,制备桃红四物汤含药血清。MTT法检测桃红四物汤含药血清(终浓度为5%、10%和15%)预处理对LPS诱导细胞生存率减少的作用;real-time RT-PCR检测TNF-α、MCP-1和IL-1βmRNA表达情况;Western Blot方法检测MCP-1和NFκB蛋白表达;检测活性氧(ROS)含量,研究桃红四物汤含药血清对HUVEC抗氧化能力的影响。结果:与空白血清对照组比较,经LPS(1μg·m L-1)刺激后细胞ROS含量明显增高而生存率显著降低,同时细胞炎性因子TNF-α、MCP-1和IL-1βmRNA表达增高;含药血清组可显著提高HUVECs活力、降低ROS含量和TNF-α、MCP-1和IL-1βmRNA表达。结论:桃红四物汤含药血清对LPS诱导的HUVECs损伤有显著地保护作用。     

绞股蓝总皂苷干预光老化人皮肤角质形成细胞炎症分泌因子的研究

目的:研究绞股蓝总皂苷对光老化人皮肤角质形成细胞分泌炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达的影响。方法:选取10只大鼠,随机分为2组,每组5只,分别设为空白血清组、绞股蓝总皂苷含药血清组,分别用以制备空白大鼠血清和绞股蓝含药血清。应用UVB人工照射方法制备光老化人皮肤角质形成细胞模型,用含绞股蓝总皂苷的大鼠血清进行干预,12h后采用ELISA方法检测各组细胞培养上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α的水平。结果:与空白对照组比较,UV模型组细胞IL-1β、IL-6和TNF-α表达显著上调(P<0.01);与UV模型组比较,绞股蓝总皂苷含药血清组细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α表达均显著下调(P<0.01);与空白血清组比较,绞股蓝总皂苷含药血清组细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α表达均显著下调(P<0.01)。结论:绞股蓝总皂苷可抑制UV辐射人皮肤角质细胞分泌炎症因子,抑制皮肤光老化。     

脂多糖干预时间与小胶质细胞生成IL-1β和TNF-α时效关系的研究

目的以原代培养的大鼠皮质小胶质细胞为研究对象,观察脂多糖(LPS)处理小胶质细胞时间与小胶质细胞生成白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的时效关系,寻找能够使小胶质细胞产生大量IL-1β、TNF-α的LPS最佳干预时间,为建立最佳小胶质细胞炎症模型提供依据。方法培养原代大鼠皮质小胶质细胞,随机分为10组,5组为LPS组,以含LPS(终浓度为100 ng/m L)的无血清胶质细胞培养液分别孵育1 h、3 h、6h、12 h、24 h;每个LPS组均设平行对照,对照组用无血清胶质细胞培养液孵育,孵育时间同LPS组。孵育结束后,ELISA方法检测各组培养液中IL-1β和TNF-α蛋白含量,RT-PCR方法检测小胶质细胞中IL-1βmRNA和TNF-αmRNA表达水平。结果孵育原代小胶质细胞1 h、3 h、6 h、12 h、24 h后,LPS组培养液中IL-1β和TNF-α蛋白含量及小胶质细胞中IL-1βmRNA和TNF-αmRNA表达水平均明显高于对照组(P均0.05);LPS组培养液中IL-1β和TNF-α蛋白含量及小胶质细胞中IL-1βmRNA和TNF-αmRNA表达水平随着处理时间延长逐渐上升,IL-1β在3 h达到高峰,TNF-α在6h时达到高峰,二者在6 h均处于较高水平,以后随时间延长逐渐下降,相邻LPS处理组间比较差异均有统计学意义(P均0.05)。结论 LPS能够刺激小胶质细胞大量产生IL-1β和TNF-α,这种效应与LPS刺激时间相关,在刺激6 h时IL-1β和TNF-α均处于较高水平,LPS刺激6 h时是理想的小胶质细胞炎症模型。     

苓桂术甘汤含药血清对脂多糖诱导大鼠心肌细胞IKK/IκB/NF-κB信号通路蛋白表达的影响

目的观察苓桂术甘汤含药血清对脂多糖诱导的大鼠原代心肌细胞IKK/IκB/NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响,探讨其保护心肌细胞的分子机制。方法采用差速贴壁法和化学抑制法分离大鼠原代心肌细胞,分别设正常对照组、模型组、正常血清对照组、苓桂术甘汤含药血清(5%、10%、20%)组。通过脂多糖诱导复制心肌细胞损伤模型,检测含药血清预处理后心肌细胞NF-κBp65、IKK-β、IκB-α和p-IκBα蛋白表达,NF-κBp65核移位情况,TNF-α、IL-1β和IL-6的含量变化。结果与正常对照组比较,模型组和正常血清对照组心肌细胞NF-κBp65、p-IκBα和心肌细胞核内NF-κBp65蛋白表达增加(P0.01),心肌细胞IKK-β、IκB-α蛋白表达降低(P0.01),细胞上清液IL-1β、IL-6和TNF-α含量升高(P0.01);与模型组比较,苓桂术甘汤5%、10%、20%浓度含药血清组心肌细胞NF-κBp65、p-IκBα和心肌细胞核内NF-κBp65蛋白表达降低(P0.05),心肌细胞IKK-β、IκB-α蛋白表达增加(P0.05),细胞上清液IL-1β、IL-6和TNF-α含量降低(P0.05),且干预效应与苓桂术甘汤含药血清呈浓度依赖趋势。结论苓桂术甘汤可调节IKK/IκB/NF-κB信号通路相关蛋白表达,干预下游靶分子的转录调控,有效抑制细胞因子的过度激活。     

β-细辛醚对Aβ_(1-42)诱导PC12细胞炎症因子表达的影响

目的:探讨β-细辛醚对Aβ_(1-42)诱导PC12细胞炎症因子表达的影响。方法:(1)将对数生长期PC12细胞随机分为正常对照组、Aβ_(1-42)3.3μM、Aβ_(1-42)10μM、Aβ_(1-42)30μM。采用实时无标记动态细胞分析技术(Real Time Cell Analusis,RTCA)和MTT法检测各组PC12细胞存活率;Western blotting检测PC12细胞的IL-1β和TNF-α蛋白表达的变化。(2)将对数生长期PC12细胞随机分为正常对照组、Aβ_(1-42)模型组、β-细辛醚18.5μg·mL~(-1)、β-细辛醚55.5μg·mL~(-1)、β-细辛醚166.7μg·mL~(-1)。采用Western blotting检测PC12细胞的IL-1β和TNF-α蛋白表达的变化。结果:(1)3.3μM Aβ_(1-42)能显著增加PC12细胞IL-1β和TNF-α的蛋白表达(P<0.05),对PC12细胞的存活率无显著影响(P>0.05)。(2)与正常对照组相比,Aβ_(1-42)模型组细胞的IL-1β和TNF-α的表达明显增加(P<0.01)。与Aβ_(1-42)模型组相比,β-细辛醚(55.5μg·mL~(-1)、166.7μg·m L~-1)能显著降低PC12细胞IL-1β、TNF-α的表达(P<0.01),β-细辛醚(18.5μg·mL~(-1))能降低PC12细胞IL-1β的表达(P<0.05),但对TNF-α的表达无显著影响(P>0.05)。结论:β-细辛醚可以有效地抑制Aβ_(1-42)诱导的PC12细胞分泌IL-1β、TNF-α的蛋白表达。     

补肾活血汤对骨性关节炎大鼠炎性因子的影响

目的:探讨补血活血汤对骨性关节炎大鼠炎性因子的影响。方法:建立膝骨性关节炎(Knee Osteoarthritis,KOA大鼠模型,40只大鼠随机分为生理盐水对照组、模型组、补肾活血汤组、塞来昔布组,每组10只。生理盐水对照组只接受生理盐水灌胃,不造模;模型组造模成功后,灌胃等量的生理盐水;补肾活血汤组在造模成功后,连续给予4 mL/d补肾活血汤灌胃;塞来昔布组在造模成功后,连续给予100 mg/d塞来昔布灌胃。连续灌胃28 d。酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent method,ELISA)法检测血清及关节液炎症因子肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor,TNF-α)、白细胞介素(Interleukin)-1β、IL-6。结果:与对照组比较,模型组大鼠血清和关节液中TNF-α、IL-1β、IL-6含量明显升高,有明显差异(P 0.01);与模型组比较,各用药组大鼠血清和关节液中TNF-α、IL-1β、IL-6含量明显降低,有明显差异(P 0.01),但各用药组之间比较无明显差异(P 0.05)。结论:补肾活血汤具有下调KOA大鼠TNF-α、IL-1β、IL-6表达的作用。     

细叶远志皂苷通过Aβ25-35诱导PC12细胞损伤对氧化应激及炎症因子的影响

目的 探讨细叶远志皂苷（Tenuifolin, Ten）对Aβ_25-35诱导PC12细胞氧化应激及炎症因子的影响。方法 根据前期实验结果,20μM Aβ_25-35作用于PC12细胞,建立细胞损伤模型。40μg/ml TEN予以细胞保护作用。实验分为空白组、模型组、TEN组。试剂盒检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）表达水平;Western Blot检测白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF-α）蛋白水平。结果 高与空白组比较,SOD、GSH水平下降,MDA水平升高;细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达升高;与模型组比较,TEN能提高SOD、GSH水平,降低MDA水平;降低细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达水平。结论 TEN能减轻Aβ_25-35诱导PC12细胞的细胞炎性反应及氧化应激,起到细胞保护作用。     

黄连解毒汤对Aβ25-35诱导的HT22细胞NF-κB活化及炎症因子水平的影响

目的:探讨黄连解毒汤对β-淀粉样蛋白25-35(β-amyloid protein 25-35,Aβ_(25-35))诱导的HT22细胞核转录因子-κB(NF-κB)活化及炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β),IL-6,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法:培养HT22细胞,HT22细胞分为空白组、模型组、多奈哌齐组(0.000 9 g·kg-1)和黄连解毒汤低、高剂量组(2.7,8.1 g·kg-1),空白组、模型组加入空白血清,各药物组分别加入含药血清1 h后,模型组和各药物组细胞分别加入Aβ_(25-35)(40μmol·L-1),24 h后运用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测p-NF-κB p65表达水平;免疫荧光法检测分析各组NF-κB p65核移位情况;用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测IL-1β,IL-6,TNF-α蛋白含量及实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测IL-1β,IL-6,TNF-αmRNA的表达情况。结果:与空白组比较,模型组的IL-1β,IL-6,TNF-α蛋白分泌及其mRNA表达增多,NF-κB活化水平增高(P0.05);与模型组比较,黄连解毒汤低、高剂量组及多奈哌齐组的炎性因子及mRNA表达量均减低(P0.05),并且能抑制NF-κB活化。结论:黄连解毒汤可降低Aβ_(25-35)诱导HT22细胞炎症反应,从而减轻Aβ_(25-35)神经毒性作用,作用机制可能与抑制NF-κB活化有关。     

红景天含药血清对肿瘤坏死因子α 诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响

目的探讨红景天含药血清对肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞 （HFLS-RA）增殖的影响。方法制备空白组、模型组、雷公藤多苷组（9.45 mg·kg-1）及红景天低、中、高剂量 组（1.05、2.1、4.2 g·kg-1）大鼠含药血清;体外培养HFLS-RA,以20 ng·mL-1 TNF-α 及10%不同组含药血清对 HFLS-RA 进行干预。采用MTT 法检测各组含药血清对HFLS-RA 细胞的增殖作用;ELISA 法检测细胞上清液 中白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素17（IL-17）、转化生长因子β（TGF-β）、白细胞介素10（IL-10）的含量; PCR 法检测细胞中维甲酸受体相关孤儿受体γt（ROR-γt）、信号转导及转录激活因子3（Stat3）、叉头样转录因 子3（Foxp3）mRNA 表达;Western Blot 法检测细胞中ROR-γt、Stat3、Foxp3 蛋白表达。结果与空白组比较, 模型组培养HFLS-RA 24、48 h 后细胞增殖水平明显升高（P＜0.01）,ROR-γt、Stat3 mRNA 及蛋白表达上调 （P＜0.01）,IL-6、IL-17 水平升高（P＜0.01）,Foxp3 mRNA 及蛋白表达下调（P＜0.01）,TGF-β、IL-10 水平降 低（P＜0.01）。与模型组比较,红景天各剂量组HFLS-RA 细胞增殖水平降低（P＜0.01）,ROR-γt、Stat3 mRNA 及蛋白表达下调（P＜0.05,P＜0.01）,IL-6、IL-17 水平降低（P＜0.01）,Foxp3 mRNA 及蛋白表达上调 （P＜0.01）,TGF-β、IL-10 水平升高（P＜0.01）。结论红景天含药血清可抑制TNF-α 诱导的HFLS-RA 细胞 的异常增殖,其机制可能与下调ROR-γt、Stat3 表达及上调Foxp3 表达有关。     

补肝健腰方对腰椎间盘突出大鼠NF-κB信号通路的影响

目的:观察补肝健腰方对腰椎间盘突出大鼠NF-κB信号通路的影响。方法:取SD大鼠100只,随机分为正常对照组、假手术组、模型对照组、补肝健腰方组、塞来昔布组各20只。补肝健腰方组、塞来昔布组制备大鼠腰椎间盘突出模型成功后分别予补肝健腰方、塞来昔布灌胃。干预前、干预后第1、2、3周,各组随机选取5只大鼠处死,检测核因子κB(NF-κB)mRNA、IκB激酶β(IKK-β)mRNA以及下游产物肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。结果:在干预前,补肝健腰方组、塞来昔布组大鼠腰椎间盘突出局部组织NF-κB mRNA、IKK-βmRNA及TNF-α表达与模型对照组比较,差异无统计学意义(P0.05);干预第1、2、3周,补肝健腰方组大鼠NF-κB mRNA、IKK-βmR NA及TNF-α表达均低于模型对照组(P0.05)。补肝健腰方组大鼠干预第1、2、3周的NF-κB mRNA、IKK-βmRNA及TNF-α表达均低于干预前(P0.05)。结论:补肝健腰方具有调控腰椎间盘突出大鼠NF-κB信号通路的作用,可减少NF-κB mRNA、IKK-βmRNA及TNF-α表达,这可能为其治疗腰椎间盘突出症的作用机制。     

红鱼眼不同提取物含药血清对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症的影响

[目的]研究红鱼眼不同极性部位提取物含药血清对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7细胞炎症的影响。[方法]采用噻唑蓝（MTT）法检测红鱼眼不同极性部位提取物含药血清对RAW264.7细胞活力的影响;采用脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞建立炎症模型,采用MTT法检测红鱼眼不同极性部位提取物含药血清对炎症细胞增殖的影响,并用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测细胞上清液中一氧化氮（NO）、白介素1β(1L-1β)、白介素6(1L-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。[结果]在6～12 h培养时间内,除红鱼眼水提取物含药血清外,其余不同极性部位提取物含药血清对RAW264.7细胞活力均无明显影响;与LPS模型组比较,红鱼眼不同极性部位提取物组各培养时间段吸光度（OD）值和细胞存活率明显提高（P<0.01）;LPS刺激细胞后可引起NO、IL-1β、IL-6、TNF-α的高表达（P<0.05或P<0.01）,经红鱼眼不同极性部位提取物含药血清干预后,乙酸乙酯提取物组、石油醚提取物组、水提取物组的NO、IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著下降（P<0....     

加味独活寄生合剂含药血清对兔退变软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的观察加味独活寄生合剂含药血清对兔退变软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法将体外培养的兔关节软骨细胞按随机数表分为6组:空白对照组,模型组,加味独活寄生合剂含药血清低、中、高剂量组及Wnt信号通路阻断剂组,后五组予白介素-1β诱导为退变软骨模型,然后予不同剂量的含药血清及s FRP-3干预。采用流式细胞仪检测细胞生长及周期情况,实时荧光定量PCR检测Wnt/β-catenin mRNA的表达。结果流式细胞仪检测结果显示,与空白对照组比较,模型组及加味独活寄生合剂含药血清低、中、高剂量组细胞生长情况明显减慢。实时荧光定量PCR检测结果显示,与模型组相比,加味独活寄生合剂含药血清低、中、高剂量组β-catenin mRNA均有降低。结论加味独活寄生合剂含药血清对白介素-1β诱导为退变软骨模型有一定的保护作用,其作用机制可能与调控Wnt信号通路有关。     

新风胶囊含药血清对TNF-α诱导的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡和炎症的影响

观察新风胶囊(XFC)含药血清对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞(FLS)凋亡和炎症的影响,探讨XFC治疗RA的作用机制。建立RA-FLS永生化细胞系,制备XFC含药血清,用cell counting kit-8(CCK-8)、酶联免疫吸附法(ELISA)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、免疫荧光、原位末端转移酶标记(TUNEL)法观察XFC含药血清对RA-FLS凋亡和炎症指标的影响。CCK-8结果显示,TNF-α对RA-FLS最佳干预浓度和时间分别为10 ng·mL-1和48 h,XFC对RA-FLS的最佳干预浓度和时间分别为6.48 mg·g^-1和72 h。ELISA结果表明,与RA-FLS组相比,TNF-α+RA-FLS组TNF-α,白细胞介素(IL)-1β,IL-6,IL-8的表达均显著升高,IL-4和IL-10的表达均显著降低(P<0.01);经XFC含药血清干预后,TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-8的表达均显著下降,IL-4和IL-10的表达均显著升高(P<0.01)。RT-qPCR结果表明,与RA-FLS组相比,TNF-α+RA-FLS组Fas、FasL、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、caspase-8、Bax、Bcl-X1 mRNA的表达均显著降低,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA的表达显著升高(P<0.001);经XFC含药血清干预后,Fas,FasL,caspase-3,caspase-8,Bax,Bcl-X1 mRNA的表达均显著升高,Bcl-2 mRNA的表达显著下降(P<0.01)。免疫荧光结果表明,与RA-FLS组相比,TNF-α+RA-FLS组caspase-3和Bax蛋白表达显著降低,Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05);经XFC含药血清干预后,caspase-3和Bax蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。TUNEL结果表明,与RA-FLS组相比,TNF-α+RA-FLS组细胞凋亡减少(P<0.05);经XFC含药血清干预后,细胞凋亡显著增多(P<0.05)。促进RA-FLS凋亡、抑制其炎症反应是XFC治疗RA的作用机制之一。