磷脂酰肌醇3激酶／丝氨酸-苏氨酸激酶信号通路与肾脏疾病

磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kimase,PI3K)/丝氨酸-苏氨酸激酶(v-akt murine thymoma viral oncogene homolog,Akt)通路是真核细胞关键的信号转导通路,在细胞凋亡、代谢、增殖及分化等生命活动中发挥着重要功能.近年来发现此通路与肾脏疾病关系密切,它在糖尿病肾病(DN)、狼疮性肾炎、多囊肾、肾脏缺血再灌注损伤等疾病的发病机制、诊断及治疗等方面的作用日益受到重视.     

磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路与高血压

综述磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的构成、转导途径及其在高血压及相关靶器官损害中的作用机制,并阐述基于PI3K/Akt信号通路高血压的中医药治疗进展,旨在为高血压的临床诊疗提供新的思路和治疗靶点。     

阿霉素诱导磷脂酰肌醇3′-激酶丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶FKHRL1通路对胃癌细胞化疗耐药性的影响

目的探讨阿霉素在胃癌细胞中诱导PI3′K/Akt/FKHRL1通路的激活,对胃癌细胞SGC-7901化疗效果的影响及两者的关系。方法2004-01~2005-09武汉大学人民医院消化内科采用MTT比色法检测胃癌细胞的生存率,Western印迹法检测FKHRL1磷酸化表达水平,同时观察PI3′K/Akt抑制剂wortmannin对阿霉素诱导的上述变化的影响。结果阿霉素抑制胃癌细胞SGC-7901的生长,呈时间依赖性的诱导FKHRL1磷酸化。wortmannin可明显增强阿霉素的细胞生长抑制作用,同时下调阿霉素诱导的磷酸化FKHRL1表达。结论阿霉素可能是通过激活SGC-7901细胞的PI3′K/Akt通路,呈时间依赖性诱导FKHRL1磷酸化,从而影响胃癌细胞的化疗耐药性。wortmannin可以阻断PI3′K/Akt/FKHRL1通路而提高胃癌的化疗敏感性。     

阿霉素诱导磷脂酰肌醇3''''-激酶丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶FKHRL1通路对胃癌细胞化疗耐药性的影响

目的探讨阿霉素在胃癌细胞中诱导PI3'K/Akt/FKHRL1通路的激活,对胃癌细胞SGC-7901化疗效果的影响及两者的关系.方法 2004-01～2005-09武汉大学人民医院消化内科采用MTT比色法检测胃癌细胞的生存率,Western印迹法检测FKHRL1磷酸化表达水平,同时观察PI3'K/Akt抑制剂wortmannin对阿霉素诱导的上述变化的影响.结果阿霉素抑制胃癌细胞SGC-7901的生长,呈时间依赖性的诱导FKHRL1磷酸化.wortmannin可明显增强阿霉素的细胞生长抑制作用,同时下调阿霉素诱导的磷酸化FKHRL1表达.结论阿霉素可能是通过激活SGC-7901细胞的PI3′K/Akt通路,呈时间依赖性诱导FKHRL1磷酸化,从而影响胃癌细胞的化疗耐药性.wortmannin可以阻断PI3'K/Akt/FKHRL1通路而提高胃癌的化疗敏感性.     

血小板活化与磷脂酰肌醇3激酶信号通路

<正> 血小板活化是复杂的过程。多种黏附蛋白和受体及血小板聚集激动剂参与其中,并在血小板活化、聚集反应扩大和血栓形成过程中起着重要作用。磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路是体内重要的细胞信号通路,在细胞的动员、迁移、分化和抗凋亡中具有重要的作用。近年的研究发现,PI3K/Akt信号通路与血小板活化     

慢性阻塞性肺疾病大鼠磷脂酰肌醇-3激酶、蛋白激酶B及γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表达研究

目的通过观察COPD大鼠中磷脂酰肌醇-3激酶（phosphoinositide-3 kinases,P13K）、蛋白激酶B（protein kinaseB,PKB）与γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（gamma glutamylcysteine synthetase,γ-GCS）的表达,研究P13K、PKB通路和rGCS的关系及其在COPD中可能的参与机制。方法30只健康雄性Wistar大鼠随机分COPD组和对照组。采用每日熏香烟和两次气管内注入脂多糖法制作COPD大鼠模型。检测大鼠肺组织中7-GCS活性,原位杂交检测肺组织中rGCSmRNA的表达,免疫组织化学分析肺组织中P13K、PKB与γ-GCS蛋白水平。结果COPD组大鼠肺组织中γ-GCS差异（P〈0．01）。P13K、PKB与γ-GCS免疫组织化学在COPD组可见肺泡、支气管活性明显高于对照组,组间差异有统计学意义（P〈0．01）。原位杂交示COPD组大鼠支气管,肺泡上皮细胞与小动脉平滑肌细胞7-GCSmRNA广泛表达,与对照组有显著性壁细胞及小血管平滑肌细胞胞浆中皆有蛋白阳性信号表达;图象定量分析示大鼠COPD组P13K、PKB与γ-GCS蛋白表达显著高于对照组（P〈0．01）。直线相关分析得出P13K、p—PKB蛋白表达与γ-GCS活性、mRNA及蛋白表达呈正相关。结论COPD大鼠肺组织7-GCS蛋白和mRNA表达增高,P13K、p-PKB蛋白也有相应高表达,提示P13K、PKB和γ-GCS可能在COPD的发病机制中发挥作用,且可能参与了γ-GCS的信号转导通路。     

阿霉素诱导磷脂酰肌醇3′-激酶 丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶FKHRL1通路对胃癌细胞化疗耐药性的影响

目的探讨阿霉素在胃癌细胞中诱导PI3′K／Akt／FKHRL1通路的激活，对胃癌细胞SGC-7901化疗效果的影响及两者的关系。方法2004-01-2005-09武汉大学人民医院消化内科采用MTT比色法检测胃癌细胞的生存率，Western印迹法检测FKHRL1磷酸化表达水平，同时观察PI3′K／Akt抑制剂wortmannin对阿霉素诱导的上述变化的影响。结果阿霉素抑制胃癌细胞SGC-7901的生长，呈时间依赖性的诱导FKHRL1磷酸化。wortmannin可明显增强阿霉素的细胞生长抑制作用，同时下调阿霉素诱导的磷酸化FKHRL1表达。结论阿霉素可能是通过激活SGC-7901细胞的PI3′K／Akt通路，呈时间依赖性诱导FKHRL1磷酸化。从而影响胃癌细胞的化疗耐药性。wortmannin可以阻断PI3′K／Akt／FKHRL1通路而提高胃癌的化疗敏感性。     

磷脂酰肌醇-3-激酶/丝-苏氨酸蛋白激酶在帕妥珠单抗耐药机制中的作用

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/丝-苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)在帕妥珠单抗耐药机制中的作用。方法建立人乳腺癌细胞株Hs578T耐帕妥珠单抗的耐药亚株Hs-Her,(FISH)法分析耐药细胞株Her表型;MTT法检测帕妥珠单抗对Hs578T和Hs-Her细胞增殖的抑制情况;流式细胞术检测帕妥珠单抗干预后细胞凋亡情况;PI3K/Akt抑制剂干预细胞后Western印迹检测细胞P-Akt蛋白表达情况。结果本实验建立的耐药亚株Hs-Her基因表达FISH检测呈强阳性;0.1~100 mg/L浓度帕妥珠单抗干预72 h后,Hs578T和Hs-Her细胞体外增殖均受到抑制,且随帕妥珠单抗浓度的增加而提升,其中Hs578T的IC50值明显低于Hs-Her(P<0.01);10 mg/L的帕妥珠单抗干预后Hs578T细胞凋亡率明显高于Hs-Her细胞(P<0.01)。预先经PI3K/Akt抑制剂处理后再加入帕妥珠单抗,Hs578T和Hs-Her细胞均发生明显凋亡,差异无统计学意义(P>0.05)。Western印迹检测显示,帕妥珠单抗可有效抑制Hs578T细胞Akt蛋白磷酸化,却无法抑制Hs-Her细胞Akt蛋白磷酸化;PI3K/Akt信号通路抑制剂可同时抑制Hs578T和Hs-Her细胞的Akt蛋白磷酸化。结论帕妥珠单抗耐药细胞Hs-Her存在Akt蛋白磷酸化,PI3K/Akt抑制剂可明显抑制帕妥珠单抗耐药细胞Akt蛋白磷酸化;PI3K/Akt信号通路与帕妥珠单抗耐药性存在明确相关性。     

整合素连接激酶经磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路促进胃癌细胞增殖和迁移

目的探讨整合素连接激酶(ILK)对胃癌细胞增殖、侵袭的影响及相关机制。方法利用基因转染建立过表达ILK基因的HGC-27及KATOⅢ胃癌细胞株;细胞计数试剂(CCK)8和Transwell实验研究上调ILK基因表达对HGC-27及KATOⅢ细胞增殖和迁移能力的作用;Western印迹实验检测上调ILK基因表达是否可影响HGC-27及KATOⅢ细胞Akt及p-Akt蛋白的表达。结果上调ILK基因表达可显著促进HGC-27及KATOⅢ细胞的增殖和迁移能力;上调ILK基因表达可明显上调HGC-27及KATOⅢ细胞p-Akt蛋白水平。结论 ILK经磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路参与及影响胃癌细胞的致癌潜能。     

磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路在肝胆恶性肿瘤发生发展中的作用

磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/m TOR)信号通路参与调节细胞代谢、生长、增殖、血管生成等多种重要生物过程,其高度激活的状态与多种恶性肿瘤的发生、发展相关。对PI3K/Akt/m TOR信号通路及m TOR蛋白进行了简单的介绍,并阐述了其在肝细胞癌、胆管细胞癌、胆管癌及胆囊癌发生发展中的作用机制,进一步简述了m TOR抑制剂在肝胆恶性肿瘤治疗中的作用。认为PI3K/Akt/m TOR信号通路为晚期肝胆恶性肿瘤提供了新的治疗靶点,新型m TOR抑制剂的不断研发将为晚期肝胆恶性肿瘤患者带来新的希望。     

替罗非班通过磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路对氧糖剥夺心肌细胞的干预作用

目的 探讨替罗非班对氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)心肌细胞的干预作用,并探索其相关机制.方法 H9C2细胞被分为正常组、模型组、替罗非班组、抑制剂组、替罗非班+抑制剂组.建立OGD细胞模型,以MTT曲线确定最终的实验浓度和作用时间为替罗非班100 nmol/L,作用时间为24 ...     

替米沙坦通过磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶途径改善内皮祖细胞的功能活性

目的 研究替米沙坦对内皮祖细胞增殖、迁移、黏附等生物学活性的影响并探讨其可能机制.方法 利用密度梯度离心法分离、培养人外周血单个核细胞,经FITC-UEA-I和Dil-acLDL双染色鉴定为正在分化的内皮祖细胞.将分离、培养的内皮祖细胞分为对照组、替米沙坦组(0.1 μmol/L、1μmol/L、10μmol/L)、过氧化体增殖物激活型受体γ抑制剂(GW9662)干预组和磷脂酰肌醇-3-羟基激酶抑制剂(Ly294002)干预组.采用MTT比色法、Transwell小室、细胞计数法观察各组内皮祖细胞增殖、迁移、黏附能力的变化情况.同时采用免疫蛋白印迹法观察替米沙坦处理内皮祖细胞后丝苏氨酸蛋白激酶及磷酸化丝苏氨酸蛋白激酶的表达情况.结果 与对照组相比,替米沙坦组内皮祖细胞增殖、迁移、黏附能力显著提高,且在不同浓度组间呈剂量依赖性增强,而在过氧化体增殖物激活型受体γ抑制剂干预组和磷脂酰肌醇-3-羟基激酶抑制剂干预组,内皮祖细胞功能活性的改善受到明显的抑制.免疫蛋白印迹检测显示,相比于对照组,替米沙坦组磷酸化丝苏氨酸蛋白激酶的表达水平明显增高,而在过氧化体增殖物激活型受体γ抑制剂干预组磷酸化丝苏氨酸蛋白激酶的表达相比于对照组未见明显增高.结论 替米沙坦具有促进内皮祖细胞增殖、迁移、黏附等功能的作用,其主要机制可能与过氧化体增殖物激活型受体γ介导的磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶信号通路激活有关.     

磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路对CD40介导胃癌细胞侵袭与转移的研究

目的 探讨可溶性CD40配体(sCD40L)联合磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(P13K/Akt)信号通路特异性阻断剂LY294002对胃癌AGS细胞体外增殖及侵袭、转移的影响;初步探讨其可能的作用机制.方法 将细胞分成对照组(仅加入含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液)、LY294002组(20μmol/L)、sCD40L组(2μg/ml)和LY294002+sCD40L组.四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度sCD401,及联合LY294002对细胞增殖的影响;Transwell实验和划痕实验分析细胞侵袭、转移能力的改变;Western印迹检测细胞P13K、p-Akt、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的变化.结果 LY294002作用后细胞生存率为65.7%,sCD40L作用后为70.1%,LY294002+sCD40L组生存率为41.3 0A,差异有统计学意义(P<0.05).LY294002+sCD40L组细胞的划痕愈合速度较sCD40L和LY294002组明显减慢.LY294002+sCD40L组平均每个视野的细胞数较sCD40L和LY294002组明显减少.与对照组相比,sCD40L使P13K、p-Akt、VEGF蛋白表达升高,与LY294002联合作用后,P13K,p-Akt、VEGF蛋白表达明显降低.结论 阻断P13K/Akt信号途径可显著增强sCD40L对人胃癌AGS细胞增殖及侵袭、转移的抑制作用,为胃癌的生物治疗提供一种新的方法.     

运动预适应激活磷脂酰肌醇 3‐激酶／蛋白激酶 B信号通路的心脏保护作用机制

力竭运动可引起运动性心脏损伤,而运动预适应产生运动性心脏保护作用。在运动预适应对心脏的保护机制中,磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路的激活在抑制心肌细胞凋亡的过程中发挥重要作用。通过干预激活PI3K-Akt信号通路,研究其对心肌细胞的影响,可为运动预适应的心脏保护作用提供理论依据。     

亚低温通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路对肝缺血再灌注损伤大鼠模型的保护作用

目的探讨亚低温预处理肝缺血再灌注损伤(HIRI)大鼠模型的保护作用机理。方法将40只SD大鼠分为4组:假手术(Sham)组、HIRI组、亚低温处理(MH)组和MH+LY294002处理(MH+LY)组,每组10只,分别于肝缺血再灌注3、6、12、24 h后收集大鼠的血清及肝组织标本。采用Western Blot检测大鼠肝组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化Akt(p-Akt,Ser308)蛋白的表达水平。采用TUNEL法和Western Blot检测分析肝组织中细胞凋亡和凋亡相关蛋白的表达水平。采用ELISA试剂盒检测肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)水平。采用全自动生化分析仪检测大鼠血清ALT、AST活性。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验。结果 HIRI组p-PI3K、p-Akt的相对表达水平明显低于Sham组,差异均有统计学意义(q值分别为5. 217、5. 456,P值均0. 01);经亚低温处理后大鼠肝组织中p-PI3K、p-Akt的相对表达水平明显高于HIRI组,差异均有统计学意义(q值分别为10. 434、14. 116,P值均0. 01)。HIRI组、MH组和MH+LY组大鼠再灌注后3、6、12、24 h的血清AST、ALT活性明显高于Sham组,差异均有统计学意义(P值均0. 001)。TUNEL染色结果显示,HIRI组大鼠的细胞凋亡百分比[(42. 25±3. 50)%]明显高于Sham组[(3. 21±0. 5)%],差异均有统计学意义(q=10. 187,P 0. 01);相比于HIRI组,MH组明显下调了细胞凋亡百分比(12. 42±1. 3)%,差异有统计学意义(q=7. 784,P 0. 01),且HIRI组与MH+LY组的细胞凋亡百分比[(38. 19±2. 8)%]比较差异无统计学意义(q=1. 059,P 0. 05)。Western Blot检测结果显示,与Sham组相比,HIRI组中抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显下调,差异有统计学意义(q=2. 101,P 0. 05),促凋亡蛋白Bax、fas和fasl表达明显上调,差异均有统计学意义(q值分别为11. 016、4. 735、10. 201,P值均0. 01),亚低温处理之后可明显下调HIRI对凋亡相关蛋白的调控作用。氧化指标检测结果显示,HIRI组、MH组和MH+LY组大鼠肝组织中SOD、GSH-Px的表达水平均明显低于Sham组,差异均有统计学意义(P值均0. 05),而MDA在HIRI组、MH组和MH+LY组大鼠肝组织中的表达水平均明显高于Sham组,差异均有统计学意义(P值均0. 05); MH组大鼠肝组织中SOD、GSH-Px的表达水平明显高于HIRI组,差异均有统计学意义(q值分别为2. 894、2. 731,P值均0. 05),但MDA的表达水平明显低于HIRI组,差异有统计学意义(q=5. 888,P 0. 05)。此外,亚低温+LY294002处理明显下调了MH组对肝组织中SOD、MDA和GSH-Px表达的调控作用,差异均有统计学意义(q值分别为2. 999、2. 944、2. 620,P值均0. 05)。结论亚低温对HIRI大鼠具有保护作用,其机制可能是通过激活PI3K/Akt通路发挥下调肝细胞凋亡和增强体内抗氧化作用。     

葛根总黄酮上调磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B保护内皮细胞损伤

目的探讨葛根总黄酮(PR)对H_2O_2诱导的内皮细胞氧化损伤保护作用及其可能机制。方法分离培养大鼠主动脉内皮细胞。MTT法检测细胞活力,免疫印迹检测PR对PI3K和AKT蛋白表达的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡情况并进行细胞自噬荧光分析。组间比较采用单因素方差分析。结果与PR+H_2O_2组相比,PR+H_2O_2+LY294002组的A_(570nm)值显著降低[(2.07±0.08)vs(1.69±0.04),0.05]。与对照组相比,H_2O_2组25.47%)和PR+H_2O_2组(13.26%)的细胞凋亡率均显著增加(P0.05);而与H_2O_2组相比,PR+H_2O_2组的细胞凋亡率亦显著降低(25.47%vs 13.26%;P0.05)。与对照组相比,H_2O_2组和PR+H_2O_2组的自噬荧光强度均显著增高(P0.05),PR+H_2O_2组的自噬荧光强度显著低于H_2O_2组(P0.05)。H_2O_2+PR组的PI3K和AKT蛋白表达显著高于对照组(P0.05),PR+H_2O_2+LY294002组的PI3K和AKT蛋白表达显著低于H_2O_2+PR组(P0.05)。结论PR可通过抑制细胞过度自噬和凋亡,促进内皮细胞存活,对H_2O_2诱导的内皮细胞损伤有保护作用,且其作用机制可能与调控PI3K/AKT表达上调相关。     

白花丹醌对肝纤维化大鼠磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号转导通路的影响

目的 研究白花丹醌对四氯化碳所致肝纤维化大鼠磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B (Akt)信号转导通路的影响.方法 40只雄性SD大鼠分成对照组、模型组、2mg/kg白花丹醌处理组和3mg/kg白花丹醌处理组,每组10只.对照组予0.9％氯化钠溶液2 mL/kg腹腔注射,其余3组均予60％四氯化碳花生油溶液2 mL/kg腹腔注射,均每周3次,共6周.造模后第3周开始,白花丹醌处理组分别给予2 mg/kg和3 mg/kg白花丹醌花生油剂腹腔注射,每周2次,共4周.常规检测大鼠血清ALT、AST、Alb,放射免疫法测定HA和LN,Western印迹检测肝组织中PI3K、Akt和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达量,免疫组织化学法检测p-Akt表达.各组间均数比较采用单因素方差分析.结果 6周后成功建立肝纤维化大鼠模型.模型组大鼠ALT、AST、HA和LN均高于对照组,2mg/kg白花丹醌处理组和3 mg/kg白花丹醌处理组中的ALT、AST、HA和LN水平较模型组下降,差异均有统计学意义(均P＜0.05).各组PI3K、Akt蛋白表达差异均无统计学意义(均P＞0.05);p-Akt蛋白表达主要集中在肝细胞核;对照组、模型组、2 mg/kg白花丹醌处理组和3mg/kg白花丹醌处理组大鼠p-Akt蛋白分别为0.0821±0.0003、0.7374±0.0037、0.3679±0.0332和0.1327±0.0561,模型组表达高于对照组(t=851.302,P＜0.05),白花丹醌处理后下降(t值分别=71.858和28.363,均P＜0.05).结论 白花丹醌具有抗肝纤维化作用.白花丹醌可下调肝纤维化过程中p-Akt的表达,这可能是其抗肝纤维化的机制之一.     

心力衰竭患者心肌细胞外信号调节激酶及磷脂酰肌醇3激酶通路的信号蛋白表达

目的观察充血性心力衰竭(CHF)患者心肌组织细胞外信号调节激酶(ERK)和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)通路的信号蛋白表达.方法通过手术取材,选择因瓣膜性心脏病接受二尖瓣置换术的CHF患者40例,对照组38例(其中8例为意外伤亡的器官损献者).免疫沉淀法检测心肌组织ERK、PI3K蛋白表达及磷酸化, α-骨骼肌蛋白表达.结果CHF患者心肌组织呈典型的重构心肌的病理改变,心肌组织ERK蛋白表达光密度值(A)比值(ERK1/β-actin)、(ERK2/β-actin)、PI3K磷酸化比值(p-PI3K/β-actin)、α-骨骼肌蛋白表达A比值(α-skeletal-actin/β-actin)逐渐增强,且随心功能恶化逐渐增强, CHF组中不同心功能级别者与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05 或P＜0.01).结论ERK及PI3K通路共同参与调节CHF患者心肌重构的病理生理过程.     

TIMP-1抑制大鼠肾小球系膜细胞凋亡与磷脂酰肌醇3激酶/丝/苏氨酸激酶通路的研究

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide-3-kinase,PI3K)/丝/苏氨酸激酶(serine thre-onine kinase,AKT)通路在基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)抑制高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞(rat mesangial cells,RMC)凋亡中的作用和机制。方法(1)脂质体法将正、反义人TIMP-1(hTIMP-1)及空载体转染到大鼠肾小球系膜细胞。(2)Annexin V/PI双染法流式检测系膜细胞凋亡率。(3)Caspase9/Mch6Colorimetric Assay试剂盒检测Caspase9活性。(4)Western blot检测BAD、phospho-BAD、AKT、phospho-AKT蛋白水平。结果与对照组(1·06±0·08)%相比,正义转染组细胞凋亡率降低[(4·51±0·50)%,P<0·05],反义转染组凋亡率显著提高[(24·97±3·64)%,P<0·05],LY294002的加入可部分抵消TIMP-1的抗凋亡作用。TIMP-1的高表达可下调Caspase9活性(0·111±0·064,P<0·05),低表达可上调Caspase9活性(0·461±0·012,P<0·05)。正义TIMP-1能提高细胞phos-pho-BAD、phospho-AKT的蛋白水平,而反义TIMP-1的两种蛋白水平明显减少,且该作用可被LY294002阻断。结论(1)PI3K/AKT通路参与TIMP-1抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡过程。(2)BAD在其中起重要作用。(3)AKT对Caspase9的抑制亦起主要作用。