地甘口服液对辐射损伤小鼠细胞周期及凋亡相关基因的影响

目的　探讨中药复方地甘口服液对辐射损伤小鼠骨髓细胞周期素基因 (cyclinD1)及凋亡相关基因 (bcl 2和bax)mRNA表达的作用。方法　建立辐射损伤模型 (一次性用直线加速器给予6 0Gy的X射线照射 ) ,喂饲小剂量 10 0 %和大剂量 2 0 0 %的地甘口服液每次 0 2ml 10g小鼠 ,每日 2次。第 9天用原位杂交法检测小鼠骨髓单个核细胞cyclinD1、bcl 2和baxmRNA的表达。结果　地甘口服液组与对照组比骨髓细胞促凋亡基因baxmRNA表达显著减少 (P <0 0 1) ,而cyclinD1和bcl 2m RNA的表达显著增强 (P <0 0 1)。结论　中药复方地甘口服液抗辐射损伤可能是通过上调细胞周期素基因cyclinD1和bcl 2的表达及降低baxmRNA的表达 ,从而促进造血细胞的增生和提高机体免疫力 ,达到保护机体的目的 ,为临床用药提供理论指导     

甲氨蝶呤对妊娠小鼠滋养细胞bcl-2/bax表达的影响

目的探讨甲氨蝶呤（MTX）促进滋养细胞凋亡、抑制滋养细胞增生的机制。方法建立正常妊娠小鼠模型、MTX妊娠小鼠模型,运用免疫组化方法检测两组小鼠孕13 d滋养细胞bax、bcl-2的蛋白表达;同时运用原位细胞凋亡（TUNEL）检测两组小鼠孕13 d的滋养细胞凋亡情况。结果与正常妊娠模型小鼠相比,MTX妊娠模型小鼠滋养细胞bax蛋白表达较强（P〈0.01）,bcl-2蛋白表达减弱（P〈0.01）;MTX妊娠模型小鼠滋养细胞凋亡指数明显高于正常妊娠模型小鼠（P〈0.01）。结论 MTX抑制滋养细胞增生、促进滋养细胞凋亡,可能是通过调节bax、bcl-2蛋白的表达实现的。     

Bcl-2及 Bax 蛋白在胃癌组织中的表达及意义

目的探讨凋亡抑制基因(bcl-2 )及凋亡促进基因(bax)的表达与胃癌生物学行为的关系.方法应用免疫组化 LSAB 法,分别检测胃癌组60例和正常对照组24例胃组织的 bcl-2及 bax 表达水平.用阳性切片作阳性对照,以 PBS 代替一抗作阴性对照.结果bcl-2在胃癌组的表达阳性率为86.7%,对照组为20.8%,两组间比较差异显著(P＜0.05);bcl-2 及 bax 蛋白的表达与胃癌的组织学类型及预后相关,而与胃癌的分期、淋巴结是否转移等无关.结论bcl-2及 bax 蛋白参与了胃癌的发生及发展;bcl-2蛋白的表达对胃癌的预后判定有一定意义.     

术前区域性动脉灌注化疗对晚期乳腺癌细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的 探讨术前区域性动脉灌注化疗对晚期乳腺癌细胞凋亡及其相关基因表达的影响.方法 将56例晚期乳腺癌患者随机分为治疗组(术前动脉灌注化疗)和对照组(未行术前化疗),各28例.利用TUNEL法检测两组的癌细胞凋亡情况,运用免疫组化方法检测两组bcl-2、bax基因的表达状况.结果 乳腺癌细胞凋亡指数(AI)治疗组为7.28%±2.68%,对照组为4.21%±1.87%;bcl-2基因的表达,治疗组为0.68±0.06,对照组为2.24±0.36;bax基因的表达,治疗组为0.72±0.06,对照组为0.38±0.04.上述指标两组间比较均有显著性差异(P＜0.05).结论 术前区域性动脉灌注化疗能诱导肿瘤细胞凋亡,而术前化疗后肿瘤细胞AI上升与化疗的疗效有关;术前化疗可影响乳腺癌细胞凋亡相关基因的表达,bcl-2/bax在诱导细胞凋亡中起重要作用,可作为预测化疗效果的指标.     

89Sr诱发K562癌细胞凋亡及其相关基因表达研究

目的 探讨^89Sr诱发K562癌细胞凋亡放射毒理效应的分子机理。方法 采用分子病理和定量病理技术研究^89Sr内照射诱导的K562癌细胞凋亡，剂量效应关系和重要相关基因bcl-和bax在其中的表达。结果 K562细胞经^89Sr内照射6和24h，提取DNA，琼脂糖凝胶电泳图谱上出现典型的“阶梯状”区带，伴有“拖尾”，而对照组未见“阶梯状”区带，荧光双标记流式细胞仪法定量检测，^89Sr内照射6，9，12，24和48h后，K562细胞凋亡率和坏死率均较对照组有明显升高（P＜0．01），随着^89Sr内照射时间的延长，累积剂量的提高，均无显著变化（P＞0．05），免疫组织化学染色显示，对照组K562细胞中bcl-2和bax蛋白均有表达，bcl-2蛋白表达阳性细胞率82．8％，bax为44.4%,bcl-2/bax比值1.86;^89Sr内照射24h后的K562细胞中，bcl-2蛋白表达阳性细胞率31.4%,bax为38.2%,bcl-2/bax比值0.82，与对照组相比，差异显著（P＜0．05）；RT－PCR显示bcl-2 mRNA在对照组K56细胞中高表达；^89Sr内照射12h后已有明显的下调，24h后则非常显著。结论 ^89Sr内照射K562细胞后，细胞凋亡与细胞坏死并存，且^89Sr诱导K5622细胞的凋亡可能是通过bcl-2 mRNA及其蛋白表达降低，bcl-2/bax比值下降而调控的。     

尾悬吊模拟失重大鼠肺组织细胞凋亡调控基因的研究

为研究尾悬吊模拟失重大鼠肺组织细胞凋亡调控基因的变化，采用尾悬吊模拟失重，分为悬吊7天和21天及相应对照4组，每组10只健康雄性SD，并采用原位杂交技术检测肺组织bcl-2/bax的表达情况。发现7天尾悬吊模拟失重大鼠肺组织bcl-2 mRNA水平明显低于对照组，两者之间差异有显著性意义（P＜0．05），但21天bcl-2 mRNA水平与对照组相比无显著性差异（P＜0．05）；7天尾悬吊模拟失重大鼠肺组织bax mRNA水平明显高于对照组，两者之间差异有显著性意义（P＜0．05），但21天bax mRNA水平与对照组相比亦无显著性差异（P＞0．05）。提示尾悬吊7天模拟失重大鼠肺组织细胞凋亡调控基因存在变化。     

运动预适应下调帕金森小鼠中脑bax/bcl-2 mRNA表达比值

目的:探讨运动预适应是否下调帕金森小鼠中脑细胞bax/bcl-2mRNA表达比值。方法:32只雄性小鼠(8～9周龄)首先随机分为安静组、运动组。运动组连续5周,每天1次中等强度(12米/分,20分钟)跑台训练。然后以上两组再各自随机分成两组,于训练结束后第2天分别注射生理盐水或中等剂量MPTP(30mg/kg×2次)。只有表现典型行为变化的MPTP小鼠被认为是成功帕金森模型小鼠,进入最终分组,分为安静+生理盐水组(Se+Sa)、运动+生理盐水组(E+Sa)、安静+MPTP组(Se+M)、运动+MPTP组(E+M)4组,每组8只。训练结束后第11天处死动物,检测小鼠中脑bax、bcl-2mRNA表达,计算bax/bcl-2mRNA表达比值。结果:E+M组小鼠中脑baxmRNA表达较Se+M组显著降低(P<0.05),E+M组bcl-2mRNA表达较Se+M组显著增加(P<0.05),E+M组bax/bcl-2比值显著小于Se+M组(P<0.05)。结论:运动预适应改变帕金森小鼠中脑黑质细胞凋亡信号分子bcl-2、baxmRNA表达,降低bax/bcl-2mRNA表达比值。     

125I粒子对前列腺癌PC-3移植瘤bcl-2、bax基因表达和细胞凋亡的影响

目的 探讨125I粒子持续低剂量率照射对前列腺癌PC-3移植瘤bel-2、bax基因表达和细胞凋亡的影响.方法 利用2枚37 MBq 125I粒子模型对前列腺癌PC-3移植瘤裸鼠进行48,96和192 h照射,用免疫组织化学方法分析bcl-2和bax基因表达情况.用原位末端标记(TUNEL)法检测凋亡率.凋亡率和bax/bcl-2比值之间的相关性采用线性相关分析.统计学处理采用SPSS 11.0软件.结果 125I粒子持续低剂量率照射48 h后bcl-2表达下降到4.00±2.00,与对照组比较差异无统计学意义(t=2.500,P=0.067);96和192 h后bcl-2表达分别下降到2.67±1.16和3.00±1.00,与对照组比较差异有统计学意义(t=4.950,3.464;P=0.008,0.026).bax表达分别上升到11.33±2.89,8.67±1.16和8.67±1.16,与对照组比较差异有统计学意义(t=3.334,4.025,5.292;P值分别为0.029,0.016和0.006).125I粒子持续低剂量率照射48 h组PC-3细胞凋亡率为22.3%,与对照组比较差异无统计学意义(P=0.404);照射96和192 h组凋亡率增加到21.7%和30.7%,与对照组比较差异有统计学意义(P=0.016,0.036).各照射组之间凋亡率差异无统计学意义(P＞0.05).125I粒子持续低剂量率照射Pc-3细胞凋亡率和bax/bcl-2比值呈正相关(r=0.784,P=0.012).结论 125I粒子持续低剂量率照射可使PC-3细胞bcl-2表达下降,bax表达上升,诱导凋亡增加,而凋亡率与bax/bcl-2比值呈正相关.125I粒子对肿瘤细胞的抑制可能通过bcl-2、bax途径诱导细胞凋亡而发挥作用.     

蒺藜总皂苷对缺氧复氧损伤心肌细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2与bax表达的影响

目的观察蒺藜总皂苷（GSTT）对培养乳鼠心肌细胞模拟缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2、bax表达的影响。方法利用原代培养的SD乳鼠心肌细胞建立模拟心肌缺血再灌注（M1／R）模型,分正常培养组、模型组和蒺藜总皂苷大、小剂量组。流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率,免疫组化检测心肌细胞凋亡基因bcl-2、bax的表达。结果GSTT大、小剂量组均可显著降低细胞凋亡率（P〈0．05）。GSTT大剂量组可显著上调bcl2表达（P〈0．01）、下调bax表达（P〈0．05）,而GSTT小剂量组可上调bcl—2表达（P〈0．05）,但对bax表达无明显影响。结论GSTT可抑制模拟缺血再灌注损伤心肌细胞的凋亡,其作用可能是通过上调bcl-2、下调bax表达实现的。     

外源表达miR-34a对H1299细胞辐射敏感性的影响

目的 研究miR-34a对H1299细胞辐射敏感性的影响.方法 采用pre-miR-34a瞬时转染H1299细胞,接受不同剂量(0、2、4、6和8 Gy)γ射线照射后,利用CCK-8试剂盒检测细胞活性.流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,real-time PCR检测miR-34a靶基因bcl-2、bax、CDK4、CDK6及cyclinD1的表达水平.结果 不同剂量(0、2、4、6和8 Gy)γ射线照射后,与阴性对照转染组相比,pre-miR-34a转染组各剂量点细胞活力明显降低(t=-2.39、-3.12、-4.98、-4.03、-3.06,P＜0.05),并与阴性对照转染组的差值呈剂量依赖性的增加.6 Gyγ射线照射后,与阴性对照转染组相比,pre-miR-34a转染组细胞凋亡率明显增加(t=7.06,P＜0.05),细胞G0/G1期阻滞(t =3.94,P＜0.05),S期细胞减少(t=6.23,P＜0.05),bcl-2、CDK4及CDK6明显下调(t=3.39、12.88、6.21,P＜0.05),cyclinD1有下降趋势,但差异无统计学意义,而bax明显上调(t=-4.35,P＜0.05),是阴性对照转染组的1.94倍,bcl-2/bax比值下降.结论 miR-34促进H1299细胞凋亡,诱导细胞G0/G1期阻滞,抑制细胞活性,进而提高H1299细胞的辐射敏感性.     

补充L-赖氨酸对急性力竭运动大鼠肾细胞凋亡及凋亡调控基因蛋白表达的影响

目的:探讨补充L-赖氨酸对急性力竭运动大鼠肾细胞凋亡及凋亡调控基因蛋白表达的影响。方法:成年雄性SD大鼠24只,随机分成3组:安静对照组、运动组和运动给药组。安静对照组不运动,运动组和运动给药组进行一次力竭运动。安静对照组和运动组在力竭运动前均灌胃一次生理盐水,而运动给药组灌胃L-赖氨酸一次。运动后即刻处死大鼠,取肾组织,HE常规染色观察细胞形态,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组织化学法检测bax、bcl-2和p53蛋白表达。结果:与安静对照组相比,运动组和运动给药组大鼠细胞凋亡发生率和凋亡指数显著增加(P<0.01);与运动组相比,运动给药组凋亡指数显著下降(P<0.05)。与安静对照组相比,运动组和运动给药组bax、bcl-2和p53蛋白表达的阳性细胞平均光密度值(MOD)、阳性物质表达面积和阳性指数PI差异显著增高(P<0.01,P<0.05);与运动组相比,运动给药组bax和p53显著降低,bcl-2显著增高(P<0.05)。与安静对照组相比,运动组bcl-2/bax显著降低(P<0.05),运动给药组显著增加(P<0.05);且运动给药组显著高于运动组(P<0.05)。结论:(1)一次力竭运动前补充L-赖氨酸使力竭运动诱导的肾细胞凋亡显著减少;(2)一次力竭运动前补充L-赖氨酸可使p53蛋白表达显著降低,使bcl-2蛋白表达显著增高,并使bcl-2/bax比值增高,从而起到抑制细胞凋亡的作用。     

大鼠脑创伤后bcl-xL和bax mRNA的表达改变

目的探讨脑创伤后bcl-x     

Radiation mitigation effect of cultured mushroom fungus Hirsutella Sinensis (CorImmune) isolated from a Chinese/Tibetan herbal preparation -Cordyceps Sinensis

PURPOSE: This study was carried out to test the hypothesis that the anti-oxidant and growth promoting properties of the cultured mushroom fungus Hirsutella sinensis (CorImmune) of Cordyceps sinensis mitigate radiation injury in mice. MATERIALS AND METHODS: BALB/c mice received total body irradiation (TBI) followed by treatment with CorImmune. The effect of CorImmune on lymphoid tissue, spleen and blood cells as well as survival and hematopoietic recovery was compared to normal saline treated controls. RESULTS: CorImmune administered beginning 2 hours after a lethal dose of TBI significantly improved survival: 55% in the CorImmune group vs. 0% in the saline control (p < 0.0001). It increased normal leukocyte levels in a dose-dependent fashion. Animals treated with sub-lethal TBI and monitored for blood leukocyte recovery exhibited a return to normal baseline 3 weeks after TBI injury. In contrast, only 50% returned to normal baseline in the saline control group (p < 0.01). CorImmune also stimulated immune lymphocyte proliferation by nearly two-fold in a (3)H-thymidine incorporation assay compared to controls (p < 0.01). CONCLUSIONS: CorImmune significantly increased animal survival after a lethal dose of radiation, accelerated leukocyte recovery and stimulated immune lymphocyte proliferation. We conclude that CorImmune is effective as a radiation mitigator when administered after radiation injury.     

吸入性损伤对小鼠肺组织细胞凋亡的影响

目的探讨细胞凋亡、促凋亡基因和凋亡抑制基因在吸入性损伤发生的作用及意义。方法以小鼠烟雾吸入性损伤为模型，应用RT—PCR和TUNEL技术，观察其损伤后肺组织中Bcl-2和Bax基因mRNA表达及细胞凋亡的变化。结果小鼠烟雾吸入性损伤后肺组织Bcl-2和Bax的表达增加，细胞凋亡指数升高，与对照组相比，差异有非常显著性（P〈0．01）。结论提示细胞凋亡可能参与了吸入性损伤肺组织的病理形成过程。     

32P胶体致人胰腺癌Pc-3移植瘤细胞凋亡及其相关基因表达的研究

目的 观察低剂量^3-P胶体瘤体内注射诱导裸鼠人胰腺癌Pc-3移植瘤细胞凋亡的生物学效应、相关基因的表达及其可能的作用机理。方法建立：BALB／c裸鼠人胰腺癌Pc-3移植瘤动物模型，分别向30只荷瘤鼠瘤块中心注射不同剂量(0．37、0．74、1．48、2．96和5．92MBq)的^32P胶体溶液，对照组注射等体积冷胶体。于注射后24h取出瘤块；通过流式细胞仪、透射电镜及免疫组织化学检测等方法，研究肿瘤组织的细胞凋亡率、细胞坏死率、细胞超微结构改变及Apo2．7、Caspase-3、bcl-2、box相关基因的表达。结果 0．74、1．48和2．96MBq组瘤体内注射后电镜下可见典型的细胞凋亡表现，5．92MBq组细胞则以大量坏死为主。辐射诱导凋亡过程中，bcl-2／bax比值下调，Apoa2.7、Caspase-3蛋白表达均明显增加。结论 ^32P胶体瘤体注射可诱导荷瘤裸鼠人胰腺癌Pc-3肿瘤细胞凋亡；Aao2．7、Caspase-3、bcl-2及bax蛋白参与调控辐射诱导细胞凋亡过程。     

三羟异黄酮对正常和辐射损伤小鼠骨髓造血细胞周期的影响

目的 三羟异黄酮（genistein,GEN）对正常和辐射损伤小鼠骨髓造血细胞（bone marrow hematopoietic cell,BMHC）的细胞周期、增殖能力及bc1-2基因表达的影响,以期阐明其防护放射性造血损伤的分子机制.方法 照射前24h,GEN以160 mg/kg体重剂量给予小鼠灌胃,流式细胞仪观察BMHCs细胞周期及增殖能力变化,RT-PCR及Western blot方法分析BMHCs bcl-2 mRNA和蛋白表达情况.结果 ①GEN可诱导正常小鼠BMHCs细胞周期一过性改变,即给药后1 d,BMHCs增殖抑制,大量细胞阻滞于G0/G1期;给药后2 d,GEN诱导BMHCs由G0/G1期向S期转换,S期细胞明显增多;4d后逐渐恢复正常.②照射前24 h给药,GEN可减少射线导致的BMHCs增殖抑制,使照后阻滞于G0/G1期细胞减少;S期和G2/M期细胞增多,细胞增殖能力较强.同时,GEN预处理组bcl-2 mRNA及蛋白的表达均较高.结论 改变BMHCs细胞周期、降低BMHCs的辐射敏感性、抑制BMHCs凋亡和提高残留BMHCs的增殖分化能力可能是GEN防护放射线造血损伤的分子机制之一.