慢病毒介导MIM-B基因小干扰RNA增强索拉非尼对差异表达pERK人肝癌细胞的体外增殖抑制作用

目的 观察转移消失蛋白B(MIM-B)小干扰RNA(LV-siMTSS1)联用索拉非尼对差异表达磷酸化胞外信号调节激酶(pERK)肝癌(HCC)增殖的影响.方法 构建LV-siMTSS1,检测MIM-B、pERK蛋白表达.用LV-siMTSS1(1.0×107～36.0×107U/nl)、索拉非尼(0.01～30.0μmoL/L)干预细胞,计算IC50.结果 高转移潜能HCC高表达MIM-B.高转移潜能MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3、HCCLM6相对表达pERK(0.371、0.636、0.949、1.112)与低转移潜能Hep3B、HLE、SMMC7721(0.115、0.130、0.188)比较差异有统计学意义(P＜0.05).前者对索拉非尼敏感性(IC50为13.5、12.4、10.2、8.8 μmoL/L)强于后者(IC50为26.4、20.5、18.9 μmol/L,P＜0.05);LV-siMTSS1增敏索拉非尼药效在低表达pERK的Hep3B中最显著.结论 LV-siMTSS1显著增强低表达pERK的HCC对索拉非尼药物敏感性.

Abstract：

Objective To observe in vitro effect of sorafenib combined with lentivirus-mediated small RNA interference targeting the gene of missing in metastasis B ( MIM-B,LV-siMTSS1 ) on proliferation of human hepatocellular carcinoma (HCC) cells with differential phospgorylated extracellular signalregulated kinase (pERK) expression.Methods The expression of MIM-B and pERK was detected in HCC cell lines with differential metastatic potentials.The siRNA targeting MIM-B gene was cloned to one lentivirus work vector.Work vector and three package plasmids were co-transfected into 293T cells with the help of lipefeetamine 2000 ( named LV-siMTSS1 ).The cultured cell lines were intervened by LV-siMTSS1 ( 1.0 × 107-36.0 × 107) U/ml and (or) sorafenib (0.01-30.0) μmol/L in vitro.Cellular activity was determined by Cell Counting Kit-8 to calculate IC50.Results The basal pERK and MIM-B levels were increased stepwise in cell lines in accordance with their metastatic potential.There was statistically significant difference in the pERK expression was made between the cell lines of MHCC97L,MHCC97H,HCCLM3 and HCCLM6 (0.371,0.636,0.949 and 1.112) with higher metastatic potential and those of Hep3B,HLE and SMMC7721 (0.115,0.130 and 0.188) with lower one (P＜0.05).Cells with higher pERK expression were more sensitivity ( IC50,13.5,12.4,10.2 and 8.8 μmol/L) than those with lower pERK expression ( IC50,26.4,20.5 and 18.9 μmol/L) to Sorafenib ( P＜0.05 ).Cells transfected with LV-siMTSS1 were sensitivity to Sorafenib,which was most significant in Hep3B cell line with lower pERK expression.Conclusion Transfection with LV-siMTSS1 reinforced the inhibitory effect of Sorafenib on HCC cell proliferation,especially for cells with lower pERK expression.     

胞外信号调节激酶信号通路在大鼠慢性吗啡耐受形成中的作用

目的 探讨胞外信号调节激酶(ERK)信号通路在慢性吗啡耐受形成中的作用.方法 鞘内置管成功的雄性SD大鼠30只,体重300～350 g,随机分为3组(n=10).置管后7 d开始给药,对照组(C组)鞘内注射0.4%二甲基亚砜10μl,慢性吗啡耐受组(M组)给予吗啡10μg,ERK上游激酶抑制剂+吗啡组(P组)于给予吗啡前30 min给予丝裂原激活蛋白激酶激酶抑制剂PD98059 10μg,2次/d,连续7 d.每天第1次给药后30 min及最后一次给药后1 d时测定甩尾潜伏期,并计算最大镇痛效应百分比.最后一次测定甩尾潜伏期后取脊髓L3-5节段,采用Western blot法和免疫荧光法测定脊髓背角μ受体和磷酸化ERK1/2(p-ERK/1/2)的表达水平.结果 M组和P组随着给药时间的延长,形成了吗啡耐受,而P组吗啡耐受程度轻于M组(P＜0.05).与C组比较,M组脊髓背角μ受体表达下调,p-ERK1/2表达上调(P＜0.01).与M组比较,P组脊髓背角μ受体表达上调,p-ERK1/2表达下调(P＜0.01).结论 ERK信号通路参与了大鼠慢性吗啡耐受的形成.     

肝卵圆细胞对肝纤维化大鼠细胞外信号调节蛋白和丝裂原激活蛋白激酶的影响

目的 观察肝卵圆细胞(hepatic oval cell,HOC)对肝纤维化(hepatofibrosis,HF)大鼠肝组织中细胞外信号调节蛋白(extracellular regulated protein kinases,ERK)和丝裂原激活蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,P38MAPK)信号通路蛋白的影响.方法 SD大鼠以高脂低蛋白饲养、饮用10%乙醇,皮下注射40%CCl4,隔4 d注射一次,连续8周制备HF模型.HF大鼠采用胶原酶原位灌注法分离,percall纯化原代HOC.HOC悬液0.5 ml(1×109个细胞)经门静脉植入8周HF大鼠的肝脏内,分别于8、15、30d处死大鼠,HE和Masson染色观察HF病理组织学变化,Western blot 法检测肝组织ERK与P38MAPK信号通路蛋白的表达,同时检测ALB、FGF-3、c-kit、HNF-1α、PCNA表达.结果 病理组织学显示,HOC处理组大鼠HF被部分逆转,肝组织胶原纤维增生程度明显减轻,肝组织Ras、ERK、p-ERK、c-fos、c-jun、STAT3、ALB、FGF-3、PCNA蛋白表达显著下降(分别F=91.88,36.28,54.66,93.07,64.76,58.49,52.63,20.45,27.03,均P＜0.05),而HNF-α1和c-kit表达上调(分别F=18.63,25.99,均P＜0.05).结论 HOC抑制HF活化的ERK信号通路而改善肝纤维化程度,在HOC存在条件下p-P38并不激活c-fos、c-jun、STAT3、5表达,c-kit和HNF-1α表达增加,而肝组织结构损害程度明显减轻,肝纤维化程度明显改善.

Abstract：

Objective To observe the influence of hepatic oval cell (HOC) on the expression ERK and P38MAPK signaling pathway protein in liver tissue of murine experimental hepatofibrosis (HF).Method SD rats were fed with 10% ethanol and food with high-fat and low-protein, and were injected subcutaneously with carbontetrachloride once every four days for 8 weeks to establish hepatic fibrosis. HOGs were isolated from male HF rats by collagenase porfusion of the liver. HF rats at 8th week were transplanted with 0. 5 ml HOC suspension medium at a density of 1 × 109 cell /ml via portal vein, and the rats were sacrificed at 8th, 15th, 30th day respectively. Histopathologic changes of liver tissues were observed by HE and Masson. The expression of ERK and P38MAPK signaling pathway protein were determined by Western blotting. Result Hepatofibrosis was reversed and the degree of hyperplasia fibrilcollagen in hepatic fibrosis rats decreased significantly by HOC transplantion. HOC down-regulated the protein expression of Ras, ERK,p-ERK, c-fos, c-jun, STAT3, ALB, FGF-3, PCNA ( F = 91.88,36.28,54.66,93.07,64.76,58.49,52.63,20.45 ,27.03, all P ＜ 0.05 ), up-regulated the protein expression level of HNF-α1, PDGF-Rβ significantly in liver tissues(F = 18.63,25.99,P ＜0.05). Conclusions HOC improves the degree of hepatofibrosis through inhibiting hyperplasia of collagen fibril in liver tissue of hepatofibrosis rats. With the presence of HOC the expression of c-fos,c-jun,STAT3,5 was not activated by p-P38MAPK. The expression of c-kit and HNF-1α increased and that liver tissue injury alleviated, and hepatofibrosis was improved.     

细胞外信号调节激酶对人血管平滑肌细胞的作用及其机制

目的观察磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)对离体培养的平滑肌细胞增殖、凋亡和表型改变的影响。方法培养人大隐静脉平滑肌细胞,实验组培养液中加入PD98059对磷酸化ERK进行阻断后,观测平滑肌细胞的增殖活性,凋亡细胞所占比例以及细胞表型,并与对照组比较。结果实验组与对照组相比,细胞增殖活性明显低于对照组(P<0.01),电镜和荧光染色测定凋亡细胞所占比例明显高于对照组(P<0.01),电镜检测合成型细胞所占比例明显低于对照组(P<0.01),收缩型细胞所占比例较对照组明显为高(P<0.01),α肌动蛋白免疫荧光化学检测显示处理组荧光表达强于对照组。结论对离体培养的人大隐静脉平滑肌细胞磷酸化ERK进行阻断后,平滑肌细胞的增殖受抑,凋亡增加,细胞由合成型向收缩型转变。     

细胞外信号调节激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶的表达水平对人精子活动力的影响

目的:比较细胞外信号调节激酶(ERK)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)的磷酸化和蛋白表达水平在正常精子和弱精子症患者精子中的差异,旨在探讨ERK和P38MAPK表达水平与精子活动力的相关性。方法:收集正常精液(精子浓度≥20×106/ml,a级精子≥25%或a+b级精子≥50%)和弱精子症患者精液(精子浓度≥20×106/ml,a级精子<25%或a+b级精子≤40%)各20份,洗涤后提取精子总蛋白,采用Western印迹方法分别检测ERK、P38MAPK的磷酸化和蛋白表达水平。结果:ERK和P38MAPK在正常精子和弱精子症患者精子中均有表达,ERK、P38MAPK蛋白表达水平和P38MAPK磷酸化水平在弱精子症患者组显著升高(P<0.05),而两组间ERK磷酸化水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:人精子ERK、P38MAPK蛋白表达水平和P38MAPK磷酸化水平升高可能是精子活动力低下的原因之一。     

细胞外信号调节激酶在血管瘤组织中的表达及活性

目的:探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)及其活性形式磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)在血管瘤组织中的蛋白表达及其意义。方法:应用免疫组织化学SP法,检测23例增生期血管瘤组织及19例退化期血管瘤组织ERK1/2和p-ERK1/2的蛋白表达。结果:增生期血管瘤组织与退化期血管瘤组织ERK1/2的蛋白表达无统计学差异(Z=-0.305,P>0.05);增生期血管瘤组织p-ERK1/2的蛋白表达显著高于退化期血管瘤组织的表达(Z=-4.271,P<0.01)结论:增生期血管瘤组织p-ERK1/2呈高表达,血管瘤的增生与ERK通路的激活有关。     

索拉非尼抑制人肝癌细胞耐药蛋白表达及其与氟尿嘧啶联用抑制裸鼠移植瘤生长的研究

目的 观察索拉非尼对人肝癌高转移细胞HCCLM3多药耐药蛋白表达的抑制作用及其与5-氟尿嘧啶(5-Fu)联用的协同效应.方法 使用索拉非尼和/或5-Fu对HCCLM3细胞进行干预后,应用免疫细胞化学方法、Western blot法分别检测细胞中磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)及耐药蛋白渗透性糖蛋白(P-gp)和拓扑异构酶2A(TOP-2α)的表达;将HCCLM3细胞接种于裸鼠皮下,并进行药物干预治疗,通过观察肿瘤体积的变化,评估药物对肿瘤生长的抑制作用.细胞实验及裸鼠实验均设置对照组(C)、索拉非尼组(S)、5-Fu组(F)、索拉非尼与5-Fu联用组(SF).结果 各组细胞的pERK、P-gp及TOP-2α表达分别为:C组(0.061 ±0.026、0.076±0.033、0.075±0.022)、S组(0.024±0.011、0.027±0.006、0.025±0.024)、F组(0.080±0.036、0.047±0.005、0.059±0.025)、SF组(0.027±0.015、0.022±0.019、0.038±0.020).与C组比较,S组和SF组的pERK、P-gp、TOP-2α的表达明显下降(P＜0.05).各组裸鼠皮下瘤体积(cm3)分别为:C组(5.292±1.523)、S组(1.620 ±0.784)、SF组(1.1100.402)、F组(4.327±1.709).与C组比较,S组和SF组裸鼠的肿瘤体积明显缩小(P＜0.05).结论 索拉非尼单独或与5-Fu联用能明显抑制HCCLM3细胞中pERK、P-gp、TOP-2α蛋白的表达及裸鼠皮下瘤的生长.     

细胞外信号调节激酶通路在乙肝病毒X基因改变肝癌细胞化疗敏感性中的作用

目的 观察细胞外信号调节激酶(ERK)信号传导通路在乙肝病毒X基因(HBx)改变肝癌细胞HepG2对顺铂敏感性中的作用.方法 采用聚合酶链反应(PCR)法从pCP10质粒中扩增482 bp HBx的开放读码框(ORF),构建表达载体pcDNA3-HBx并进行酶切及测序鉴定.应用脂质体将其转染HepG2,50 mg/L G418筛选阳性克隆,抽提mRNA,逆转录(RT)-PCR鉴定是否稳定表达HBx.Western blot法检测转染前后44×103及42×103磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)的表达.噻唑蓝(MTT)法检测转染空脂质体组、空载体组HepG2、HBx+ HepG2对2 mg/L顺铂敏感性的差异,以及顺铂联合ERK通路特异性抑制剂PD98059对HBx+HepG2抑制率的改变.结果 从pCP10中扩增得到482 bp HBx-ORF片段.将其与pcDNA3连接后经酶切及测序鉴定,成功构建HBx-ORF表达载体.从G418抗性细胞克隆中成功扩增出482 bp HBx-ORF,表明转染后的HepG2细胞稳定表达目的片段.经Western blot及灰度扫描鉴定,HBx+细胞中p-ERK蛋白表达是空脂质体组的1.97倍,是空载体组的1.67倍.MTT法检测2 mg/L顺铂作用24 h,对HBx+ HepG2的抑制率为19.56％,明显低于对空脂质体组和空载体组HepG2的抑制率(35.21％和30.18％).而先以100 μmol/L PD98059孵育2h的HBx+ HepG2,顺铂对其抑制率上升至31.20％,与未加PD98059时比较有显著提高(P＜0.05).结论 ERK信号传导通路的激活在抑制HBx+的肝癌细胞的化疗敏感性方面起重要作用,对该通路的特异性抑制有助于提高HBx+肝癌的化疗效果.     

应激激素肾上腺素激活ERK1/2促进人肝癌细胞生长

目的 探讨应激激素肾上腺素(EPI)对人肝癌细胞生长的影响及其作用机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot等方法,分析EPI对人肝癌HepG2和MHCC97H细胞生长的影响,与α1-/β2-肾上腺素受体(α1-/β2-ARs)、腺苷环化酶/蛋白激酶A(AC/PKA)、促分裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶1/2(MAPK/ERK1/2)和磷脂酸激醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT/PKB)的关系.结果癌细胞增殖与EPI的作用呈剂量和时间依赖关系(P<0.05),10μmol/L EPI作用24～48 h时其增殖能力最强[HepG2/(215±4)%和MHCC97H/(207±10)%],而正常肝细胞L-02的变化不明显(P>0.05).在HepG2和MHCC97H细胞中,α1-AR蛋白表达仅为L-02的30%和34%,而β2-AR蛋白表达上升至331%和309%.β2-AR阻滞剂ICI 118551可抑制EPI的促增殖作用.β-AR激动剂异丙肾上腺素(ISO,10μmol/L)具有类似EPI的促进增殖作用,其作用可分别被ICI118551和MEK抑制剂U0126显著抑制,被PKA抑制剂H-89和PI3K抑制剂LY294002部分抑制.ISO孵育15 min～8 h,在HepG2中p-ERK1/2蛋白水平上升3.49/3.02倍,在MHCC97H中上升3.15/2.73倍,该作用可被ICI 118551和U0126所阻断.结论 人肝癌HepG2和MHCC97H细胞过表达β2-AR,EPI通过β2-AR激活ERK1/2依赖性和非依赖性信号通路促进癌细胞的生长,其中MAPK/ERK1/2信号通路可能起主要作用.     

细胞外信号调节激酶及其上游激酶在人乳腺癌发生发展中的意义

目的　研究人乳腺癌组织、良性肿瘤以及瘤旁乳腺组织中细胞外信号调节激酶 (ERK1、ERK2 )及其上游激酶 (MEK1、MEK2 )的表达 ,以及术前化疗对MEK1、MEK2、ERK1、ERK2蛋白表达的影响。　方法　应用蛋白质印迹法检测 5 6例患者乳腺癌组织、8例乳腺良性肿瘤以及相应瘤旁组织中MEK1、MEK2及ERK1、ERK2蛋白的表达情况 ,其中 16例患者术前接受环磷酰胺 ,表阿霉素加 5 氟脲嘧啶或泰素加表阿霉素方案化疗。应用免疫组织化学方法检测乳腺癌组织及癌旁组织中MEK1、MEK2及ERK1、ERK2蛋白的表达。　结果　 4 0例未行术前化疗的乳腺癌组织中MEK2、ERK1、ERK2蛋白表达水平高于癌旁组织 ,分别为癌旁组织的 4 76、1 4 8和 2 0 9倍 (t值分别为 7 2 4 4 ,5 95 9,3 735 ,P <0 0 1) ;MEK1水平低于相应癌旁组织 (t=2 2 0 6 ,P <0 0 5 ) ;未行术前化疗的乳腺癌组织中MEK2、ERK1、ERK2蛋白表达水平高于乳腺良性肿瘤 (t值分别为 2 932 ,2 0 82 ,2 0 2 1,P <0 0 5 ) ;MEK1水平低于良性肿瘤 (t=2 0 75 ,P <0 0 5 ) ;雌激素受体阴性的乳腺癌中MEK2蛋白表达水平高于雌激素受体阳性的肿瘤 (t=2 4 0 ,P <0 0 5 ) ,MEK1蛋白表达水平低于雌激素受体阳性的肿瘤 (t =2 5 8,P <0 0 1) ;术前化疗的乳腺癌组织中MEK2蛋白表达     

细胞外信号调节蛋白激酶在前列腺上皮内瘤组织中的表达及意义

目的 探讨细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）在前列腺上皮内瘤（PIN）组织中表达的意义。方法 应用免疫组织化学SP法检测12例PIN、11例前列腺癌（PCa)及16例BPH组织标本中ERK的表达。结果 12例PIN标本均有表达,其中6例为高表达;11例PCa组织10例为阳性,但多为弱表达;16例BPH组织12例为阳性,表达也较弱。PIN组织中ERK表达与PCa组和BPH相比ERK在PIN组织中呈高表达,与早期前列腺癌的发生有密切关系。     

乳铁蛋白对骨关节炎软骨细胞增殖活力及细胞外调节蛋白激酶表达的影响

目的 观察人乳铁蛋白(hLF)对人骨关节炎软骨细胞(HACs)增殖活力及细胞外调节蛋白激酶(ERK)基因表达的影响. 方法 噻唑蓝(MTT)比色法检测HACs的增殖力,并选择hLF最佳工作浓度;LIVE/DEAD染色检测HACs的活力;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和免疫细胞化学染色检测磷酸化细胞外调节蛋白激酶( p-ERK )/ERK的表达.结果 MTT检测显示hLF对HACs的增殖促进作用呈剂量-效应关系(P＜0.05),以200 mg/L为最佳药物浓度.LIVE/DEAD染色显示hLF可以显著促进HACs的活力,与空白对照组和无血清培养组比较,差异有统计学意义[(98.53±2.76)％比(89.12 ±6.98)％比(65.37 ±2.08)％,P＜0.05].Real-time PCR检测显示,hLF作用48 h后ERK mRNA相对表达量为(1.589±0.113),与对照组(1.024±0.026)比较差异有统计学意义(P＜0.05).IN Cell Analyzer 2000定量检测,hLF能够显著促进p-ERK/ERK蛋白的表达,较对照组明显增高,差异有统计学意义[(0.887±0.003)比(0.637±0.002),P＜0.05].结论 hLF可明显促进HACs增殖力和活力,其作用机制可能与上调增殖基因p-ERK/ERK表达有关.     

骨桥蛋白在不同转移潜能肝癌细胞系及肝癌组织中表达意义

目的 研究不同转移潜能人肝癌细胞系及其肝癌组织中骨桥蛋白(OPN)表达情况,分析OPN表达与肝癌细胞侵袭转移潜能、肝癌术后复发转移的关系.方法 应用细胞免疫组化、半定量RT-PCR、Western Blot和ELISA检测不同转移潜能人肝癌细胞系SMMC-7721、MHCC97-L和HCCLM6 OPN表达情况.应用组织芯片、免疫组化检测200例肝癌组织中OPN表达.结果 OPN表达水平随着肝癌细胞侵袭转移潜能增加逐渐升高.肝癌组织中OPN表达与病人性别、年龄、血清AFP水平、肿瘤大小、有无包膜、细胞分化以及肝门淋巴结转移无明显相关性.而与肝癌TNM分期、门静脉癌栓和术后复发转移发生有明显相关(P<0.05).术后有复发转移病人的肝癌组织中66%表达OPN,而术后无复发转移病人的肝癌组织中仅37%表达OPN,两者比较差异具有显著性(P<0.05).结论 OPN表达与肝癌细胞细胞系侵袭转移潜能密切相关.肝癌组织中OPN表达可能是预测肝癌术后是否发生复发转移指标.     

细胞外信号调节激酶在胃癌中的过表达与胃癌的恶性潜能相关

目的 探讨胃癌中细胞外信号调节激酶ERK－1和ERK－2蛋白的表达与活性及其与胃癌临床病理因素的关系。方法 用固定化蛋白质印迹法检测42例胃癌及邻近正常胃粘膜中ERK-1和ERK－2蛋白及磷酸化ERK（P－ERK）的表达;免疫组织化学法分析其在细胞内的定位。结果 胃癌中ERK－1和ERK－2的蛋白表达水平明显高于正常胃粘膜（P＜0．01） ;ERK蛋白表达水平与肿瘤大小及组织学分化无关（P＞0．05）;Ⅲ、Ⅳ期胃癌中ERK－1和ERK－2蛋白表达水平高于Ⅰ、Ⅱ期胃癌（P＜0．05）;有淋巴结转移胃癌中ERK－1和ERK－2蛋白表达水平高于无淋巴结转移胃癌（P＜0．05）;侵犯浆膜胃癌中ERK－1和ERK－2蛋白表达水平高于无浆膜侵犯的胃癌（P＜0．05）;ERK－1与ERK－2蛋白在胃癌中的表达阳性呈正相关（r=0.550,P＜0．01）。ERK－1和ERK－2的蛋白表达水平与P－ERK表达水平一致。ERK蛋白主要表达于细胞浆,胃癌组织中的表达量明显高于癌旁正常胃粘膜。结论 ERK－1和ERK－2蛋白的过表达可能在胃癌的发生发展过程中发挥重要作用,与胃癌TNM分期、浆膜侵犯及淋巴结转移有关。     

胃泌素受体在肝细胞肝癌中的表达

目的 探讨人肝细胞性肝癌(HCC)细胞株和组织中胃泌素受体(GR)的表达和临床病理学意义.方法 免疫组织化学染色方法 检测四种人HCC细胞株和25例人HCC组织中GR的表达.结果 显示在较高一抗浓度下,三种人HCC细胞株可见GR阳性表达,表达强弱为SMMC一7721>HepG2>QGY-7701,在人HCC组织中GR的阳性表达率为56%(14/25).但GR的表达与病人性别、年龄、临床分期、有否乙肝后肝硬化、肿瘤大小均无明显相关性.有脉管癌栓组与无脉管癌栓组显示出GR表达差异有统计学意义.结论 在肝细胞肝癌中存有胃泌素受体表达.是否具有内分泌治疗意义尚须进一步研究.     

表皮黑素细胞专用培养基组分与细胞外信号调节激酶蛋白磷酸化关系初步观察

目的了解表皮黑素细胞专用培养基HU16中维持细胞生长的主要物质人重组碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、FBS和环腺苷酸激动剂与细胞外信号调节激酶(ERK1/2)蛋白磷酸化的关系。方法从环切包皮原代培养人表皮黑素细胞,用western blot检测去bFGF、去FBS以及去环腺苷酸激动剂培养基培养后ERK1/2蛋白磷酸化水平的改变。结果去bFGF和去FBS处理后,表皮黑素细胞ERK1/2蛋白的磷酸化水平明显下降(P0.05),恢复完全培养基培养后0.5h,ERK1/2蛋白的磷酸化水平即重新上升至处理前水平。去环腺苷酸激动剂处理后,ERK1/2蛋白的磷酸化水平无明显改变。结论 HU16培养基中bFGF和FBS的浓度可影响体外培养的人表皮黑素细胞中ERK1/2蛋白的磷酸化水平。     

TACE联合射频消融及索拉非尼治疗巨块型肝细胞癌的回顾性研究

目的:评估经导管肝动脉栓塞化疗(TACE)联合射频消融及索拉非尼在巨块型肝细胞癌治疗中的安全性及疗效。方法:回顾分析2012年1月至2017年12月于中山大学附属第三医院诊治的36例肝细胞癌(直径5～7 cm)患者资料,其中男性33例,女性3例,年龄范围32.0～76.0岁,平均51.8岁。所有患者均接受TACE联合射...