肾综合征出血热病毒感染人体上皮细胞和血管内皮细胞的原位…

为研究肾综合征出血热患者体内病毒感染，作者应用原位分子杂交技术检测了陕西，上海，江西，沈阳和广州等地共３９例尸检组织中病毒ＲＮＡ的定位和分布。病毒ＲＮＡ主要定位于细胞胞头，呈颗粒状或全浆阳性，分布于体内１６种所检测的脏器中，主要脏器中病毒ＲＮＡ的阳性检出率由高到低依次为肝，肾，肺，胃，肠，心，脾，睾丸 脑，肾上腺和胰腺肠。     

原位分子杂交和免疫组化检测呼吸系统流行性出血热病毒感染和…

应用原位分子杂交和免疫组化分别检测了流行性出热（ＥＨＦ）尸检支气管和肺组织中的病毒ＲＮＡ，病毒抗原和免疫复合物（ＩＣ）。结果，病毒ＲＮＡ、抗原和ＩＣ的阴性率分别为６３．１％（１２／１９），７８．９％（１５／１９），和８１．８％（９／１１），阳性者主要为休克期病例。病毒ＲＮＡ和病毒抗原定位于胞浆中，分布于呼吸道粘膜上皮和腺上皮，软骨细胞，肺泡上皮，肺泡壁和血管内皮；部分病例的肺泡内渗出的白细胞和红细     

肾综合征出血热患者外周血循环内皮细胞的检测及临床意义

目的 探讨肾综合征出血热(HFRS)患者循环内皮细胞(CEC)数量变化的临床意义.方法 共纳入72例HFRS患者及30例健康对照者,利用Percoll密度梯度离心法分离外周血CEC进行检测.数据行t检验.结果 HFRS患者发热期CEC数量(单位为细胞数/0.9 μL)为23.36±11.53,低血压休克期为48.25±18.40,少尿期为17.38±7.38,多尿期为4.56±1.58,恢复期为4.02±1.39,对照组为3.33±2.06,发热期、低血压休克期、少尿期明显高于多尿期、恢复期和健康对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);HFRS发热期各型(轻型、中型、重型和危重型)患者CEC数量与健康对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01),发热期各型之间CEC数量随着病情加重逐渐增多,各型之间比较差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 HFRS患者外周血CEC数量呈动态变化,与病情发展及轻重相关,HFRS患者外周血CEC的早期检测可作为早期诊断、早期预测病情轻重的可靠指标.     

肾综合征出血热10年病情变化比较

目的探讨肾综合征出血热（HFRS）流行病学规律、临床表现和病原学变化特点，为临床早期诊断和早期治疗提供依据，方法采用回顾性分析方法．收集哈尔滨医科大学第一临床医学院感染科1995年和2005年HFRS住院患者的病历资料，比较不同年份的病例在性别，发病年龄、职业分布、发病区域、发病季节、临床分型方面的差异，并分析产生差异的原因。结果1995年和2005年．HFRS流行方式仍然是散发，高发人群以男性青壮年为主。1995年HFRS发病高峰为冬季，11、12月份发病例数为全年病例的65．33％（49／75）；2005年HFRS发病时间发生了变化，冬季发病仅占31．48％（34／108），春夏季病例增加，3—6月份发病病例数为全年病例的43．52％（47／108），比较两年各月发病例数，差异有统计学意义（Х^2=30．88，P〈0．01）；2005年发病人群中农民所占的比例下降，由1995年的81.33％下降勾2005年的55．56%，差异有统计学意义（Х^2=13．13，P〈0．01）；同1995年相比，2005年病例重型和危重型减少．轻型和不典型增多，差异有统计学意义（Х^2=28．24，P〈0．01）；结论黑龙江省部分地区HFRS病例出现了春夏季发病增多．农民发病比例下降，轻型和不典型病例增多，提示黑龙江省部分HFRS病例为家鼠型病毒感染     

肾综合征出血热病毒感染途径的实验研究

为进一步研究肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）感染和传播途径，选用９６只敏感的，ＮＩＨ系无胸腺裸鼠为实验动物，用ＨＦＲＳＶ通过５种途径８种方式，进行了动物实验感染研究，并以实验动物感染后发病症状，全征和脑，肺组织中病毒抗原检查及组织培养为客观指标，实验结果表明，皮肤划痕途径感染率为８５．０％呼吸道为７５．０％，直接接触为１５．０％，２只感染病毒的孕鼠，所产１２只仔鼠全部感染，２０只消化道途径（灌胃方     

原位分子杂交和免疫组化检测呼吸系统流行性出血热病毒感染和免疫复合物的分布

应用原位分子杂交和免疫组化分别检测了流行性出血热（ＥＨＦ）尸检支气管和肺组织中的病毒ＲＮＡ，病毒抗原和免疫复合物（ＩＣ）。结果，病毒ＲＮＡ、抗原和ＩＣ的阳性率分别为６３．１％（１２／１９），７８．９％（１５／１９），和８１．８％（９／１１），阳性者主要为休克期病例。病毒ＲＮＡ和病毒抗原定位于胞浆中，分布于呼吸道粘膜上皮和腺上皮，软骨细胞，肺泡上皮，肺泡壁和血管内皮；部分病例的肺泡内渗出的白细胞和红细胞及水肿液中也出现阳性。ＩＣ分布于肺胞壁，肺泡腔内渗出的白细胞，红细胞和水肿液。结果提示：呼吸系统的上皮细胞可能是病毒感染的靶细胞，而除此之外的病毒ＲＮＡ，抗原可能是以ＩＣ形式存在。     

肾综合征出血热重型患者G1基因的变异

目的：探讨武汉地区肾综合征出血热重型患者感染的汉坦病毒M片段G1基因变异的情况。方法：用RT－PCR对34份肾综合征出血热患者发病1周内血清中的汉坦病毒G1基因扩增，并选取7份重型，1份轻型及1份中型患者的PCR产物测序，分别与标准株HV114和R22株相应序列比较。结果：1．Ⅰ型重型患者G1区在151－210位核苷酸有意义突变的频率很高，而轻型患者则无此改变。2．Ⅱ型重型患者G1区549位，552位和692位核苷酸变异引起编码氨基酸的改变相同，中型患者无此特点，结论：这些核苷酸变异可能与病毒毒力增强有关，从而引起临床重症表现。     

2013年云南省肾综合征出血热监测分析

目的监测2013年云南省肾综合征出血热(HFRS)人间疫情和宿主动物,分析流行病学特点,为制定防治策略提供科学依据。方法居民区用鼠笼法、野外用鼠夹法,进行鼠密度监测,采集人血清以及宿主动物肺脏组织,用免疫荧光法进行汉坦病毒(HV)抗原或抗体检查,采用Spss 17.0软件分析数据。结果 2013年云南省共报告HFRS病例95例,其中实验室诊断81例,临床诊断14例,发病率0.20/10万;发病季节以5月和12月为主,发病人群以中老年男性农民为主;泸西县、祥云县和大姚县3个监测点秋季人群HV阳性率分别为14.15%、16.00%和3.00%,差异有统计学意义(χ2=8.37,P0.05);3个监测点共捕获12种424只小兽,其中居民区褐家鼠为优势鼠种,野外大绒鼠和高山姬鼠为优势鼠种,宿主动物HV阳性率为13.21%(56/424),阳性宿主动物为褐家鼠、黄胸鼠、大绒鼠、高山姬鼠、中华姬鼠、锡金小鼠、短尾鼩和灰麝鼩。结论滇西地区为HFRS主要发病地区,秋季居民区HFRS的防控更为重要,监测点广泛存在以褐家鼠为主要传染源的家鼠型HFRS疫源地,还存在以高山姬鼠和中华姬鼠为主要传染源的野鼠型HFRS疫源地,食虫动物短尾鼩和灰麝鼩也发现HV感染。     

云南省澜沧江下游地区肾综合征出血热调查

对云南省澜沧江下游地区５个县（市）进行了肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病毒抗原和抗体调查,黄胸鼠（Ｒａｔｔｕｓ ｆｌａｖｉｐｅｃｔｕｓ）肺中ＨＦＲＳ相关抗原带病毒率为３．７３％（３１／８３０）,血清ＨＦＲＳ抗体阳性率为１．３１％（７／５３５）;人血清中ＨＦＲＳ抗体阳性率为２．７６％（１５／５４４）,首次证实该地区存在ＨＦＲＳ自然疫源地。     

原位分子杂交检测上海真厉螨与柏氏禽刺螨体内肾综合症出血热病毒的研究

目的：提供革螨传播肾综合征出血热病毒（HFRSV）的分子生物学证据。方法：用上海真厉螨与柏氏禽刺螨叮咬HFRSV接种乳小鼠，取叮咬后d10及d100以上的上海真厉螨与柏氏禽刺螨冰冻切片，用地高辛标记HFRSVcDNA核酸探针原位分子杂交检测其体内病毒RNA。结果：叮咬野鼠型（76－118株）接种乳小鼠后d10上海真厉螨检出病毒RNA，在细胞浆、细胞核中及核膜上呈细密颗粒状或全浆阳性，见于生殖器官细胞、胃及支囊上皮细胞及脑皮质细胞；叮咬家鼠型（UR株）病毒接种乳小鼠后d12螨亦检出病毒RNA，病毒的细胞组织分布与野鼠型相同；分别检测野鼠型螨31 只和家鼠型23 只, 其中阳性分别为17 只和10 只; 叮咬野鼠型病毒接种乳小鼠后d132, 家鼠型d102螨仍能检出病毒RNA。柏氏禽刺螨叮咬野鼠型病毒接种乳小鼠d10, 检测螨20只, 其中阳性12 只, 病毒RNA 主要分布于生殖器官细胞内。结论: 上海真厉螨与柏氏禽刺螨均可经叮咬获得HFRSV , 上海真厉螨可分别感染野鼠型和家鼠型HFRSV , 野鼠型在螨群体内至少可维持132 d, 家鼠型102 d, 具有贮存两型病毒的作用, 是HFRSV 的适宜媒介和贮存宿主, 在动物宿主间交叉传播两型HFRSV 中起重要作用。     

HFRS不同血清型毒株交叉免疫小鼠抗体介导早死的研究

目的　感染ＨＦＲＳ病毒小鼠被动免疫不同型免疫血清,对抗体介导小鼠早死的研究。方法　用７６－ １１８、Ｒ２２ 、Ｒ２８３株病毒分别免疫小鼠,制备免疫血清。结果　７６－ １１８、Ｒ２２ 毒株免疫血清被动免疫同型毒株感染的小鼠抗体介导早死。用混合型毒株免疫血清被动免疫Ｈａｎｔａａｎ 型和Ｓｅｏｕｌ型毒株感染的小鼠抗体均介导早死。７６－ １１８ 与Ｒ２２ 交叉免疫无早死现象。结论　感染ＨＦＲＳ病毒小鼠输入免疫血清,抗体介导的早死具有ＨＦＲＳ病毒型特异性,与病毒表面抗原决定簇相关,与免疫血清剂量有关     

HFRSV在革螨、恙螨体内生存空间和时间的研究

目的　检测肾综合征出血热病毒 (HFRSV)在革螨、恙螨体内生存空间与时间。方法　采集自然界鼠窝革螨饲养繁殖的子代革螨和鼠体恙螨幼虫、小黑板采集的游离恙螨幼虫及饲养孵化的若虫 ,进行石腊包埋切片 ,接种Vero E6细胞培养 ,应用IFAT检测分别观察HFRSV在螨体内分布和测定不同时期HFRSV的滴度。结果　发现HFRSV多分布于螨体的腹部组织即消化器官 ,前体部分较少 ,个别螨的前足和中足亦可检测到 ;经TCID50 /ml滴度测定以 10 0天为最高 (10 5～ 6)。结论　表明HFRSV在螨体内存在时间较长 ,并可经期传递 ;可作为HFRSV的传播媒介     

地高辛素标记探针检测HFRS病毒基因研究

本实验用聚合酶链反应与随机引物标记法制备地高辛素标记的肾综合征出血热病毒核酸M、S片段cDNA探针。DNA-RNA斑点杂交结果表明,该探针具有肾综合征出血热病毒的特异性,可检出10pgHFRSV-RNA。实验结果表明：抗原阳性鼠体螨10只组、5只组,抗原阴性鼠体螨10只组,游离螨50只组、10只组,抗原阳性鼠肺50mg、100mg组,所抽提RNA与探针杂交结果呈阳性,而抗原阴性鼠体螨5只组抽提RNA的探针检测结果呈阴性。     

用三维趋势面模型分析预测HFRS的时空动态趋势

目的　探讨三维趋势面模型技术在ＨＦＲＳ时－空动态分析预测中的应用价值。方法　在二维趋势面模型基础,通过加入时间变量ｔ,构造三维趋势面模型。结果　获得三维趋势面模型及其建模方法。结论　该模型不仅可分析ＨＦＲＳ的空间趋势,而且可预测其空间趋势的时间变化特征     

革螨、恙螨体内HFRSV—RNA定位检测方法研究

用地高辛素标记肾综合征出血病毒cDNA分子探针,检测肾综合征出血热病毒在革螨、恙螨体内的分布定位,并对原位分子杂交的步骤进行研究。结果表明：病毒核酸信号呈弥散分布,主要位于卵巢细胞,中肠及支囊细胞。在铺片时,明胶-硫酸铬钾与多聚赖氨酸的效果相似,4%多聚及甲醛的固定效果较好,可有效防止脱片。预杂交中加入Sperm DNA和yeast tRNA,可有效地减少背景染色;42℃杂交16h,显色7h,可得到理想结果。     

血液透析与灌流联合治疗肾综合征出血热合并急性肾功能衰竭

为提高肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）合并急性肾功能衰竭（ＡＲＦ）的治愈率，对４０例危重型ＨＦＲＳ合并ＡＲＦ血浆中分子物质（ＭＭＳ）在３５０ｕ／ｄｌ以上的患者，采用血液灌流及血液透析联合治疗（ＨＰ／ＨＤ）。结果对ＭＭＳ的清除率（５２％）明显高于对照组（２８％），治愈率达到９２．５％亦较对照组（８６．１％）显著提高（Ｐ＜０．０１）。提示：ＨＰ／ＨＤ清除尿素氮、肌酐等小分子同时，能较理想的清除尿毒症主要毒性物质之一ＭＭＳ，从而提高了ＨＦＲＳ合并ＡＲＦ患者的治愈率。     

原位杂交法检测艾滋病尸检组织中病毒核酸

对曾用免疫组织化学方法检测了人免疫缺陷病毒１型（ＨＩＶ－１）抗原的１例艾滋病尸检病例的脑、肝、肾、心、肺、胰、肠、脾、胸腺、淋巴结和兰尾等组织标本，采用地高辛标记的ＨＩＶ－１ｃＤＮＡ探针检测病毒ＲＮＡ。结果发现在脑组织神经胶质细胞和星形细胞，肠上皮细胞以及淋巴结、脾和胸腺的淋巴细胞ＨＩＶ－１ＲＮＡ阳性。     

肾综合征出血热病毒对体外培养人血管内皮细胞形态和ATP酶活性的影响

目的 为研究肾综合征出血热（HFRS）病毒致病株和非致病汉坦病毒株（PHV）对血管内皮细胞（HEC）形态和ATP酶活性的影响。方法 采用化学酶法测定血管内皮细胞总ATP酶、细胞膜Na^ -K^ -ATP酶、线粒体Mg2^＋-ATP酶的;光镜和电子显微镜对细胞的形态改变进行动态观察。结果 HFRS病毒致病株（A9）感染早期HEC的3种酶活性下降不甚明显,中晚期下隆明显（P＜0.05）,相应的细胞超微结构也出现一定程度的改变;非致病不坦病毒株（PHV）对ATP酶活性及超微结构未见明显改变。结论 HFRS病毒致病株感染后HEC的ATP酶活性下降及超微结构变化可能是HFRS患者血管通透性增加、血浆外渗的原因之一。