哈萨克族原发性高血压患者血浆EPCsCD34+水平及其相关性研究

目的:探讨血浆内皮祖细胞(EPCs)CD34+水平与新疆哈萨克族(哈族)原发性高血压病患者血压、血脂、血糖、肥胖等的相关性.方法:选取新疆哈族原发性高血压患者87为观察组,哈族健康对照组79例,测量血压(BP)、身高、体重、腰围(WC)、臀围(HC),抽取空腹静脉血测定血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),计算体重指数(BMI)腰臀比(WHR).结果:①原发性高血压组血浆EPCs CD34+水平明显低于对照组(p<0.01)②原发性高血压组血浆EPCs CD34+水平与收缩压、舒张压、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、血糖、体重指数呈显著负相关.对照组血浆EPCs CD34+水平与收缩压、舒张压、总胆固醇、甘油三酯、体重指数呈负相关.③多元回归分析显示在原发性高血压组中收缩压、甘油三酯是影响血浆EPCs CD34+水平的独立因素,在对照组中总胆固醇、体重指数是影响血浆EPCs CD34+水平水平的独立因素.结论:哈族原发性高血压患者血浆EPCs CD34+水平与血压水平存在一定的相关性.     

哈萨克族原发性高血压患者血浆CGRP水平及其相关性研究

目的:探讨血浆降钙素基因相关肽(CGRP)水平与新疆哈萨克族(哈族)原发性高血压病患者血压、血脂、血糖、肥胖等的相关性。方法:选取新疆哈族原发性高血压患者52例为观察组,哈族健康对照组48例,测量血压(BP)、身高、体重、腰围(WC)、臀围(HC),抽取空腹静脉血测定血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),计算体重指数(BMI)腰臀比(WHR)。结果:①原发性高血压组血浆CGRP水平明显低于对照组,差异有统计学意义(p<0.01);②原发性高血压组血浆CGRP水平与SBP、LDL-C和TG呈显著负相关(p<0.01);对照组血浆CGRP水平与SBP和LDL-C呈显著负相关(p<0.01)。结论:哈族原发性高血压患者血浆CGRP水平与血压、血脂存在相关性。     

β-ME和BHA体外诱导入胎肝CD34^＋细胞向神经组织细胞分化研究

目的：建立巯基乙醇(β-mercaptoethanol,β-ME)和丁羟回醚(butylated hydroxyanisole,BHA)体外诱导入胎肝(fetal liver,FL)干细胞向神经细胞分化模型。方法：采用MACS试剂盒分离人胚胎肝CD34^ 细胞,以DMEM 10％胎牛血清培养液培养;第五代细胞待细胞融合达80％后,用DMEM 10％胎牛血清 1mmol／Lβ-ME 0．2mmol／L BHA诱导24h,PBS洗涤。然后在无血清培养基中培养5h～5d。用免疫细胞化学方法分析诱导前后的细胞表型特点。结果：经β-ME BHA诱导处理后,细胞表现神经元样细胞形态,表达神经组织细胞特异蛋白,如neustin、NeuN、NF-M、TuJ-1和NSE。统计显示81％细胞NeuN染色阳性,75％细胞TuJ-1染色阳性,47％染色NF-M阳性,90％染色NSE阳性。结论：β-ME和BHA能够诱导体外培养的人FL CD34^ 细胞分化为具有神经细胞特异性抗原和成分的神经样细胞;胚胎肝细胞具有向神经组织分化的潜能。     

低氧对CD34^＋造血干／祖细胞增殖分化及其对细胞因子依赖性的影响

To elucidate the effects of hypoxia on the proliferation and differentiation of CD34(+) hematopoietic stem/progenitor cells and their response to cytokines, the cells were isolated from umbilical cord blood by using a high-gradient magnetic cell sorting system (MACS). Mononuclear cells (MNC) and CD34(+) cells were incubated in severe hypoxia (1% oxygen) culture system, and the colony forming cells and antigen expression were studied by colony forming assays and FACS analysis. The results showed that incubation in severe hypoxia increased the number of erythroid bursts (BFU-E) (324.8+/-41.4/10(4) cells) generated from CD34(+) cells (191.2+/-34.5/10(4) cells in the control group, P<0.01). Severe hypoxia also enhanced the maintenance and cloning efficiency of BFU-E in a liquid culture system without growth factors, the number of BFU-E (152.4+/-22.6/10(4)cells) was much bigger than that in the control group (74.2+/-9.3/10(4) cells, P<0.01). In cultures incubated in hypoxia, the percentage of CD34(+) cells was significantly higher (2.5+/-1.2-fold, P<0.05) than in those incubated in air. BFU-E cloning efficiency of MNC was not significantly affected by hypoxia. The above results show that hypoxia enhances the maintenance of erythroid progenitor cells generated from CD34(+) hematopoietic stem/progenitor cells, no matter growth factors are present or not. These positive effects of hypoxia did not occur for the other progenitors.     

人造血干／祖细胞多态性的研究：Ⅷ.人正常骨髓CD34^＋造血细胞体视学的特征

人ＣＤ３４＋造血细胞是具有高度自我更新,多向分化及重建长期造血与免疫学功能的独特体细胞。为系统探索ＣＤ３４＋造血细胞的形态,细胞化学及超微结构特征,新近我们设计组合并建立了ＣＩＭＳ－１００ＦＡＣＳ４４０无菌二次分选术,可使所获ＣＤ３４＋５造血的纯度达１００％。     

人CD34^＋和CD34^-细胞在NOD／SCID小鼠体内的造血重建

利用非肥胖糖尿病型重症联合免疫缺陷型(NOD/SCID)小鼠模型,比较了新鲜及培养后的CD34 和CD34-细胞在体内植入及重建造血能力.从新鲜脐血及培养后的单个核细胞(MNC)中分离出CD34 和CD34-细胞,经尾静脉输注入经亚致死剂量照射的NOD/SCID小鼠体内,6周后处死存活的小鼠,取其骨髓、脾脏和外周血细胞,分别进行细胞表型分析、造血集落形成单位和人特异性基因的检测.经检测,输注CD34' 细胞和混合细胞的小鼠,其体内CD45 细胞及人源各系血细胞的含量相近,两者均远远高于输注CD34-细胞的小鼠.输注培养后CD34-细胞的小鼠饲养6周后全部死亡,输注培养后CD34 细胞的小鼠存活率约为66.7%,而输注培养后混合细胞的小鼠全部存活,且在两组存活的小鼠体内均能检测到CD45 细胞及人源各系血细胞.结果表明:无论是新鲜还是培养后的CD34 细胞均具有在NOD/SCID小鼠体内植入和重建造血能力,而CD34-细胞不具有该能力,但CD34-细胞与CD34 细胞同时输注有助于提高小鼠的存活率,说明其对CD34 细胞在小鼠体内发挥植入和造血重建能力有一定的辅助作用.     

吸入糖皮质激素对哮喘患者外周血CD34^＋细胞、IL-5和嗜酸粒细胞的影响

目的：探讨糖皮质激素对支气管哮喘患者外周血CD34＋细胞、白细胞介素-5（IL-5）和嗜酸粒细胞（EOS）的影响.方法：选择哮喘急性发作期患者30例,常规取血测定CD34＋细胞、IL-5和EOS;用吸入治疗2周后,再次取血测定外周血EOS计数、IL-5水平及CD34＋细胞数目.结果：哮喘患者外周血EOS、IL-5及CD34＋细胞数明显高于正常组（P＜0.01）EOS凋亡指数呈显著下降（P＜0.01）.经吸入布地奈德治疗2周后,IL-5、EOS及CD34＋水平均显著降低.EOS凋亡指数呈显著增加,哮喘患者血清IL-5水平与EOS数呈显著正相关（r=0.92,P＜0.01）,与CD34＋细胞数亦呈显著正相关（r=0.90,P＜0.01）.结论：糖皮质激素可能影响CD34＋造血细胞的释放和向外周组织的迁移.     

逆病毒载体介导双耐药基因在脐血CD34^＋细胞中的表达和抗性研究

To explore whether human umbilical cord blood CD34+ cells transduced with human aldehyde dehydrogenase class-1 (ALDH1) and multidrug resistance gene (MDR1) increase resistance to 4-Hyaroxycyclophosphophamide (4-HC) and P-Glycoprotein Effluxed Drugs, a bicistronic Retroviral vector G1Na-ALDH1-IRES-MDR1 was constructed. The vector was transduced into the packaging cell lines GP + E86 and PA317 by LipofectAMINE. Using the medium containing VCR and 4-HC for cloning selection and pingponging supernatant infection between ecotropic producer clone and amphotropic producer clone, we obtained high titer amphotropic PA317 producer clone with the highest titer up to 5.6 x 10(5) CFU/ml. Cord blood CD34+ cells were transfectced repeatedly with supernatant of retrovirus containing human ALDH1 and MDR1cDNA under stimulation of hemopoietie growth factors. PCR, RT-PCR, Southern blot, Northern blot, FACS and MTT method analyses show that dual drug resistance genes have been integrated into the genomic DNA of cord blood CD34+ cells and expressed efficiently. The transgenes recipient cells confered 4- to 7.2-folds stronger resistance to cyclophospsphamede and P-Glycoprotein Effluxes drug in comparison with the nontransduced cells. This study provided a foundation for the application of combination chemotherapy in tumor clinical trial.     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在CD46途径下诱导IL-10生成的研究

目的：炎症抑制因子IL—10在过敏及自身免疫性疾病的发生过程中有着重要意义,补体调节蛋白CD46作为一种新的T细胞活化辅助因子可以诱导CD4^＋T细胞生成IL-10。另外有研究表明,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（CD^4＋CD25^＋Tregs）作为一种重要的免疫抑制细胞可以通过促进周围细胞分泌IL-10,使其抑制作用得到放大。本研究探讨在CD46辅助刺激途径下,CD4^＋CD25^＋Tregs诱导周围CD4^＋CD25^＋T细胞产生IL-10的能力。方法：分离纯化CD4^＋CD25^＋Tregs和CD4^＋CD25^＋T细胞,采用CD3／CD46或CD3／CD28刺激,分别进行单独培养或按1：10的比例共培养,同时以CD4^＋T细胞组作为比较。用氚标记胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）掺入法测定细胞增殖速率,ELISA方法测定各培养组上清IL10的水平。结果：在CD46或CD28刺激下,CD4^＋CD25^＋Tregs／CIM＋CD25^＋T细胞共培养组、CD4^＋T细胞组的几-10水平均显著高于CD4^＋CD25^＋T细胞单独培养组。在CD46刺激下,CD4^＋CD25^＋T细胞组、CD4^＋CD25^＋Tregs／CD4^＋CD25^＋T细胞共培养组、CD4^＋T细胞组IL-10的水平均较CD28刺激下明显增高,各组细胞的增殖能力均较CD28刺激下显著降低。结论：在cD46或CD28刺激下,CD4^＋CD25^＋Tregs均能够诱导CD4^＋CD25^＋T细胞分泌IL-10,CD46作为一种新的T细胞共刺激分子,与传统的CD28分子相比,能够刺激IL-10分泌增加。本文阐述了CD46途径下CD4^＋CD25^＋Tregs诱生IL-10的功能,进一步研究CD46途径下各类免疫细胞的活化反应,对于明确此途径下免疫细胞的功能改变与某些疾病发病机制的关系具有重要意义。     

人骨髓CD34^＋造血细胞体外扩增形成HPP—CFC造血祖细胞的能力

目的和方法：高增殖潜能集落形成细胞（ＨＰＰＣＦＣ）是表达ＣＤ３４＋ＤＲＬｉｎ－的最早期造血祖细胞之一,它在体外的增殖分化能力可反映造血干细胞的某些特征。结果：本文研究了人正常骨髓ＣＤ３４＋造血细胞在体外扩增和形成ＨＰＰＣＦＣ的能力。利用ＣＩＭＳ１００免疫磁性分离术首先获得＞９０％的ＣＤ３４＋造血细胞以富集ＨＰＰＣＦＣ。在含有Ｅｐｏ＋ＧＭＣＳＦ＋ＩＬ３＋ＩＬ６＋ＳＣＦ（简ＥＧＩＩＳ）的无基质液培条件下,ＣＤ３４＋造血细胞在四周内可持续产生单个核细胞和ＨＰＰＣＦＣ,并使其总量最高可达１７７０倍和８倍,以第２和３周为最佳时期,但不同个体ＣＤ３４＋造血细胞的这种能力差别较大。结论：高度纯化的人骨髓ＣＤ３４＋造血细胞能够在含有最佳组合造血生长因子的无基质液培条件下持续扩增,为临床应用提供了重要依据。     

口服卡介菌诱导免疫耐受的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞机制研究

目的：研究口服卡介菌诱导免疫耐受对CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的影响。方法：采用口服MPB制备EAE大鼠模型,随机分为BCG组（0.5mg/kg）和EAE模型组（PBS）,每组各15只,连续经口灌服给药14d,同时选取15只健康大鼠作为对照组。分别于免疫后15d、27d流式细胞术检测外周血、胸腺及脾脏中CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞百分率,ELISA检测血清IL-6、TGF-β、IgE、IgG含量。结果：与EAE模型组相比,免疫后BCG组大鼠外周血、胸腺及脾脏中CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞百分率增加,血清IL-6、TGF-β含量上升,血清IgE、IgG抗体水平下降。结论：口服BCG通过上调淋巴器官中CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞比例,抑制效应性T细胞活性,发挥免疫耐受作用。     

血小板生成素诱导胎肝CD34^＋造血干／祖细胞增殖分化与周期蛋白表达的关系

为了解胚胎时期巨核细胞增殖分化特有的内在机制,本研究观察了在体外培养体系中,胎肝源CD34+造血干/祖细胞在血小板生成素(thrombopoietin,TPO)作用下增殖分化特征与相关周期蛋白B1、D1和D3表达及细胞内水平变化的关系。结果发现(1)经12d培养后,TPO使胎肝源CD34     

纯化自体外周血CD34^＋细胞移植治疗肢体重度缺血的中期疗效

目的探讨纯化CD34^＋细胞移植治疗肢体重度缺血的中期疗效。方法自2009年5月至2011年12月录入30例肢体重度缺血患者,男性29例,女性1例,平均年龄43 ± 12岁（23 - 75岁）,均不具备外科血管重建条件,共治疗31条下肢和4条上肢。G-CSF（5-10μg/kg）动员,第5天采集外周血单个核细胞,分选获得纯化CD34^＋细胞,肢体肌肉局部注射。根据移植细胞数分为3组：低剂量组（105/kg）、中剂量组（5 × 105/kg）和高剂量组（106/kg）。结果随访16 - 48个月,1个月和2个月时Wong-Baker FACES疼痛评分由术前7 ± 2降到3 ± 3（P〈 0.001）和1 ± 2（P〈 0.001）。术后3个月和6个月：最长无痛步行时间由术前的（5 ± 3）min分别延长至（12 ± 6）min（P〈 0.001）和（19 ± 5）min（P〈 0.001）;踝肱指数由术前的0.44 ± 0.20提高至0.62 ± 0.18（P= 0.04）和0.66 ± 0.14（P〈 0.001）;经皮氧分压由术前（26 ± 11）mmHg分别上升至（42 ± 11）mmHg（P 〈 0.001）和（56 ± 12）mmHg（P〈 0.001）。16例溃疡患者愈合11例。Kaplan Meier生存分析法计算16个月保肢率为84﹪（95﹪可信区间为0.63 - 0.94）。3个不同剂量组之间的比较,治疗效果差异无统计学意义,除了1个月时WFPRSC检测结果显示：高剂量组明显优于低、中剂量组。结论纯化自体外周血CD34^＋细胞移植治疗肢体重度缺血性疾病安全、可行,能够较为持久地缓解缺血,挽救肢体,改善患者生活质量。     

人脐血CD44^＋细胞成骨转化的研究

本研究从人脐血中分离可转化为成骨细胞的干细胞成分,为骨组织工程选择理想的种子细胞来源。首先应用干细胞分离系统分离出脐血非CD34^＋细胞,贴壁细胞传代后取3代细胞应用流式细胞仪进行细胞表型检测,并用含1×10^-2mol／L地塞米松、10mol／L β-磷酸甘油钠、50mg／L抗坏血酸的成骨诱导剂培养基,连续培养21～30d。     

阿勒泰地区哈萨克族胆红素、血脂、尿酸水平与冠心病的相关性研究

目的:探讨新疆阿勒泰地区哈萨克族居民胆红素、血脂、尿酸水平与冠心病的相关性.方法:对本院80例哈萨克族冠心病患者胆红素、血脂、尿酸水平进行统计,随机抽取同期40例健康哈萨克族居民的胆红素、血脂、尿酸水平为对照组.结果:冠心病组血清总胆红素、直接胆红素、间接胆红素、高密度脂蛋白胆固醇均显著低于对照组(P＜0.01),冠心病组血清尿酸、甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平均高于对照组(P＜0.01).结论:哈萨克族胆红素、血脂、尿酸水平高低与冠心病有相关性.     

CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞与黑龙江省HIV／AIDS患者病情相关性的研究

目的：比较黑龙江省H1V／AIDS患者与健康对照者（healthy controls,HCs）外周血cD4＋CD25＋F0xP3＋调节性T细胞数量、免疫抑制功能的变化,探讨CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞在HIV／AIDS感染过程中的作用。方法：采用流式细胞仪检测21例HIV／AIDS患者及20例健康对照组的外周血CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞数量的百分比及绝对数量;采用共同培养方法检测HIV／AIDS患者外周血cD4℃D25十FoxP3＋调节性T细胞免疫抑制功能的变化;实时荧光定量聚合酶链反应（RT-FQ-PCR）检测HIV／AIDS患者外周血CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞中FoxP3mRNA的表达。结果：黑龙江省HIV／AIDS患者外周血CD4＋CD25下oxP3＋调节性T细胞比率明显高于HCs（P〈O．01）,而CD4-CD25＋FoxP3＋调节性T细胞的绝对计数显著下降,且与CD4＋T细胞绝对计数成反比;混合淋巴细胞共同培养结果显示,HIV／AIDS患者外周血CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞的抑制功能无明显变化;HIV／AIDS患者外周血CD4＋CD25＋FoxP3＋调节性T细胞的FoxP3mRNA相对表达量无显著变化。结论：黑龙江省HIV／AIDS患者cD4℃D25＋FoxP3＋调节性T细胞的数量变化与病情相关。     

GM－CSF和IL－3对脐带血CD34~＋细胞植入骨髓基质的促进作用

利用抗ＣＤ３４单克隆抗体吸附磁性微球的方法分离纯化脐带血ＣＤ３４＋细胞，将其种入照射后的成年骨髓基质。比较ｒｈＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３及两者的联合对植入效率的促进作用。结果表明：经２ｈ铺展贴壁后，对照组只有３６％的ＣＤ３４＋细胞植入基质，而生长因子预处理组则有６８—８９．６％的ＣＤ３４＋细胞植入基质。在长期液体培养体系中则显示了植入ＣＤ３４＋细胞多的处理组造血重建快速而持久。表明ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－３预处理将明显提高脐带血移植效率。     

逆转录病毒载体介导MGMT和MDR1基因增强人脐血CD34＋细胞对联合化疗抗性的研究

To explore whether human umbilical cord blood hematopoietic progenitor cells transduced with human O6-methylguanine-DNA-methyltransferase (MGMT) and multidrug resistance gene (MDR1) increase resistance to 1,3-Bis(2-Chloroethy1)-1-Nitrosourea (BCNU) and P-glycoprotein effluxed drugs, the present authors obtained a full length cDNA fragment encoding MGMT from liver tissue of a patient with cholelithiasis by RT-PCR. A bicistronic retroviral vector G1Na-MGMT-IRES-MDR1 cDNA was constructed and transfected the packaging cell lines GP + E86 and PA317 by electric performation method, using the medium containing VCR and BCNU for cloning selection and ping-ponging supernatant infection between ecotropic producer clone and amphotropic producer clone, cord blood CD34+ cells were enriched with a high-gradient magnetic cell sorting system (MACS), and then transfected repeatedly with supernatant of retrovirus containing human MGMT and MDR1cDNA under stimulation of hemapoietic growth factors. PCR, RT-PCR, Southern blot, Northern blot, Western blot, FACS and MTT assay were used to evaluate the transfer and expression of the double genes in cord blood CD34+ cells. The cDNA encoding MGMT was verified by DNA sequencing and the bicistronic retroviral vector was confirmed by restriction endonuclease analysis. The purity of cord blood CD34+ cells was approximately 92% and recover rate was 75%, the highest titer of recombinant amphotropic retrovirus in the supernatant was up to 5.8 x 10(5) cfu/ml. The efficiency of gene transduction was 18% and 20% tested by colony formation and PCR, respectively. No helper virus was found by both nested PCR and rescue assay. The results showed that dual drug resistance genes have been integrated into the genomic DNA of cord blood CD34+ cells and expressed efficiently. The MTT analysis showed a 4.5 to 7.8-fold increase of resistance of transducted cells to BCNU and P-glycoprotein effluxed drug as compared with the nontransduced cells. This study provided a foundation for ameliorating combination chemotherapy toxicity in tumor clinical trial.     

β2-AR基因5’-调控区-654位与-1429位单核苷酸多态性与新疆哈萨克族原发性高血压关系的研究

目的：检测β2-肾上腺素能受体（β2-AR）基因5’-调控区部分序列单核苷酸多态性（SNPs）,并探讨这些SNPs与新疆哈萨克族原发性高血压的关系。方法：应用MALDI-TOFMS方法测定β2-AR基因5’-调控区-654位与-1429位单核苷酸多态性确定SNP类型,并进行基因分型。结果：β2-AR基因5’-调控区-654位与-1429位单核苷酸多态性分别为-654位G→A、-1429位T→A碱基变异。2种SNPs基因型频率在正常人群分布符合Hardy-Weinberg平衡。其中-654位SNPs基因型GG、GA、AA频率在正常血压和高血压人群间的分布没有显著性差异（x2=1.26,df=2,P〉0.05）,位于-1429bp处SNPs基因型在2组人群中分布差异无显著性（x^2=1.85,df=2,P〉0.05）。结论：β2-AR基因-654位与-1429位SNPs可能仅为基因多态性标志。