凝胶组成对小麦SSCP技术的影响

SSCP技术易受凝胶浓度、丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例和添加物等诸多因素的影响.本研究探讨了凝胶中丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例、凝胶浓度和添加物等.结果显示:凝胶中丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为29∶1、凝胶浓度为12%、凝胶中不添加蔗糖和甘油为最佳的凝胶组成,单链DNA条带清晰,杂带少,容易观察.     

微卫星PCR聚丙烯酰胺凝胶银染法影响因素的分析研究

 微卫星PCR结合聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的DNA检测方法。此法分离小于500bP的DNA片段效果很好，分辨率极高，只相差1bp的片段也能分开，且可容纳相对大量的DNA。再结合银染法使该方法得到了广大科研工作着的青睐，本研究通过多方面摸索对该方法进行了总结和改良。     

两种检测扁桃基因组RAPD扩增产物方法的比较分析

通过2;(w/v)的琼脂糖凝胶和8;(w/v)的聚丙烯酰胺凝胶电泳对扁桃品种基因组DNA的RAPD检测.结果表明:8;(w/v)聚丙烯酰胺凝胶优于2;(w/v)琼脂糖凝胶,主要表现在,8;聚丙烯酰胺凝胶对长度相差100 bp以下的DNA分子的分离较2;的琼脂糖凝胶电泳效果好;且8;聚丙烯酰胺凝胶的分辨范围广,在线性DNA分子(0.1～2.0 kb)范围内也能得到很好的分离效果;用8;的聚丙烯酰胺凝胶分离扁桃品种基因组DNA的RAPD扩增结果,表现出在扁桃品种间DNA水平上差异大,运用此方法提高了扁桃品种的鉴别能力.     

四种蚂蚁酯酶同工酶分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对膜翅目蚁科4种蚂蚁的酯酶同工酶进行了比较研究。经比较分析发现4种蚂蚁的酯酶同工酶酶谱带清晰、稳定性好、差异显著,显示出各自的特征酶带,可以用它作为遗传标志反映种群基因结构的变化和种内、种间的亲缘关系。     

分离LDH和酯酶同工酶的聚丙烯酰胺凝胶制备和LDH活性与反应时间关系的探讨

用正交试验方法,考察了聚丙烯酰胺凝胶电泳分离乳酸脱氢酶同工酶和酯酶同工酶的分离胶制备的三因素(丙烯酰胺浓度、丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺、缓冲液PH)、三水平,即L_9(3~3),采用综合评分法衡量电泳结果,经方差分析选出分离胶制备的最佳条件:乳酸脱氢同工酶,Acr=7.5％、C=2.6％,Acr/Bis=37.5、分离胶缓冲液PH8.9;酯酶同工酶,Acr=7.0％、C=2.3％。Acr/Bis=42.5分离胶缓冲液PH8.9。乳酸脱氢酶同工酶的活性与反应时间呈“S”型曲线关系。     

小麦醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的改进及应用

在国际种子检验协会(ISTA)及国家农作物种子检验规程(GB/T3543—1995)颁布的小麦种子醇溶蛋白PAGE电泳技术鉴定品种的标准程序基础上,对溶液的配制、凝胶浓度、电泳方式等影响电泳效果的主要因素进行了研究和改良,使其操作更加简单快捷、凝胶质量好、剥胶容易、分辨率高,比原方法更具可操作性。     

低温胁迫对小麦品种过氧化物酶的影响

新发现小麦材料SCREEM具有较强的抗寒性,为了充分了解该材料抗寒能力,以另外4个不同抗寒类型的小麦品种为对照,对其大田条件下的旗叶和幼穗进行过氧化物酶(POD)的酶活性测定和POD同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE);并对其水培幼苗设置了25℃、0℃、-10℃和-20℃4个温度参数的胁迫,测定了各温度条件下的POD酶活性,也进行了POD同工酶PAGE.酶活测定和PAGE结果表明:①相同的大田条件和试验条件下,各品种(系)幼穗的酶活力要大于旗叶叶片的酶活力;幼穗的POD同工酶PAGE谱带要比旗叶叶片的同工酶谱带丰富:两个冬性材料京冬8号和SCREEM分别在幼穗和叶片有较高的酶活力.②4种温度条件下25℃时的酶活力较强,0℃次之,-10℃和-20℃较低,且-10℃和-20℃下的酶活力基本一样;在各温度条件下,冬性品种京冬8号和SCREEM均表现出较强的酶活力,但没有特殊的同工酶谱带.     

东方小麦高分子量谷蛋白亚基组成分析

采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法,对87份东方小麦(TriticumturanicumJakubz.)的高分子量谷蛋白亚基(HMW-GS)组成检测表明,Glu-A1和Glu-B1分别具有2种和5种不同的亚基类型。在Glu-B1位点上,东方小麦具有其明显的特点,13+16亚基出现频率最高,达60.92%,而这种亚基在普通小麦中属稀有亚基。在Glu-A1位点上,东方小麦与普通小麦、密穗小麦和硬粒小麦相似,null为主要亚基类型。筛选出具有2或7+8优质亚基的材料各9份,其中来自埃塞俄比亚的1份材料CItr14598具有(2,7+8)优质亚基组合,确属品质育种中难得的优异基因资源,可供普通小麦优质育种利用。     

怀孕与非怀孕远东刺猬血清蛋白比较分析

以远东刺猬(Erinaceus amurensis Schrenk)为研究对象,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,比较分析了怀孕与非怀孕远东刺猬个体间血清蛋白的分布和活性.结果表明,非怀孕远东刺猬血清蛋白电泳分离出迁移率为0.009～0.590的20条谱带,怀孕远东北刺猬血清蛋白电泳分离出迁移率为0.005～0.590的2...     

高含水率非离子型水凝胶角膜接触镜材料的合成及性能研究

以丙烯酰胺(AM)和甲基丙烯酸β-羟乙酯(HEMA)为主要原料,采用适宜的制备工艺,得到一种高含水率、非离子型交联共聚水凝胶角膜接触镜材料,对影响其平衡溶胀率的各种因素、透光率、饱和含水率、力学强度等进行了研究.结果表明,所得膜材料的透光率、饱和含水率、力学强度均能很好满足水凝胶角膜接触镜的要求.     

聚丙烯酰胺凝胶电泳检测致病疫霉菌SSR标记方法改良

[目的]改进聚丙烯酰胺凝胶电泳检测致病疫霉菌SSR标记方法。[方法]以2009年在宁夏固原地区采集的马铃薯晚疫病样为试验材料,提取其DNA,PCR扩增,并将其产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。[结果]采用12%聚丙烯凝胶电泳检测引物D13、G11,8%聚丙烯凝胶电泳检测引物PI4B、PI63、SSR4,最后采用0.1%硝酸银染色,取得了比较理想的电泳及染色效果。[结论]该研究建立的适用于致病疫霉菌SSR标记的电泳和染色技术方法具有检测灵敏度高、操作简单、获得的条带清晰等特点,是一种行之有效、简便快捷的检测方法。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳操作注意事项研究

[目的]得到清晰的特异性条带,更好地分析SRAP标记产物。[方法]对聚丙烯酰胺电泳的上样量、电压条件进行了梯度试验,同时就灌胶方式、银染时间、显影剂调配等各步骤的操作进行了详细地探讨。[结果]上样量7μl、电压1 000 V最合适,能得到DNA条带清晰、特异性条带区分效果明显的条带。[结论]为后续电泳操作及分析过程奠定技术基础。     

琼脂糖与聚丙烯酰胺凝胶电泳在SSR鉴定杂交油菜种子纯度中的比较

对3对候选引物SR85、SR332、SR407所扩增的秦优33杂交种及其父母亲本的DNA-SSR片段进行琼脂糖与聚丙烯酰胺凝胶电泳分离.两种电泳检测结果比较表明,(1)利用琼脂糖凝胶电泳分离后,3对候选引物对杂交种所扩增的SSR条带均为父母亲本条带的互补.其中引物SR332所获的两条互补条带的迁移率相差大,电泳图谱能清晰鉴别出父本、母本及杂种植株.引物SR85和SR407杂交种的互补条带迁移率相近,在鉴定中易出现人为误差.(2)利用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后,引物SR332所扩增条带未能区别杂交种与父本植株.引物SR85和SR407对杂交种所扩增的条带均为父母亲本所扩增条带的互补,相互差异显著,条带清晰稳定.可见,琼脂糖与聚丙烯酰胺凝胶电泳都是SSR技术鉴定种子纯度的有效途径,种子纯度分析应根据区别材料的遗传关系和引物分析表现来选择不同的电泳介质.     

魟鱼软骨多糖的聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴别

[目的]用聚丙烯酰胺凝胶电泳对魟鱼软骨多糖（RCG）进行定性鉴别。[方法]利用纯化RCG,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。[结果]RCG经纯化,基本实现了多糖的分离;根据聚丙烯酰胺凝胶电泳迁移率,可明显鉴别出魟鱼RCG。[结论]该法重现性较好,简单易行,可用于魟鱼RCG的定性鉴别。     

聚丙烯酰胺凝胶固定化酶法制备麦芽四糖的研究

采用不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAEG)对麦芽四糖淀粉酶粗酶液进行分离纯化,经质谱分析确定了麦芽四糖酶条带,然后切胶回收获得高纯度的麦芽四糖酶。将获得的含有麦芽四糖酶的凝胶制成颗粒通过甲醛链接固定,获得固定化麦芽四糖酶。经薄层色谱和液相色谱分析发现:使用固定化酶生产的麦芽四糖纯度高于粗酶液,尤其是单糖杂质含量显著减少。此外,固定化麦芽四糖酶的比活力升高。     

微卫星DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染技术的探讨

采用PCR一非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、硝酸银染色检测DNA片段。结果表明,该方法检测DNA具有灵敏度高、背景浅、条带清晰等突出特点。聚丙烯酰胺凝胶电泳后采用银染技术分析,方便快捷,易长期保存,且减小了对人体、环境的毒害作用。     

仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系的优化

[目的]优化仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系。[方法]以25份仁用杏和3份食用杏为材料,利用微卫星标记结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术筛选出多态性高、可重复的SSR位点。并比较不同因子对电泳体系的影响,探索仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系。[结果]仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系为：聚丙烯酰胺凝胶的浓度为6%,丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为29∶1,1000V下电泳2～3h,0.1%AgNO3染色15min后显影。[结论]该优化体系为仁用杏资源微卫星标记遗传分析奠定技术基础。     

木薯SSR标记非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳条件的优化

以木薯品种为材料,利用微卫星标记结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术进行木薯重要农艺性状基因的引物筛选。通过比较各因子对电泳体系的影响,建立了一个木薯微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系：TEMED用量为80μL,10％AP用量为1200μL,电泳时间为60～90min。     

仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系的优化

[目的]优化仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系。[方法]以25份仁用杏和3份食用杏为材料,利用微卫星标记结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术筛选出多态性高、可重复的SSR位点。并比较不同因子对电泳体系的影响,探索仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系。[结果]仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系为：聚丙烯酰胺凝胶的浓度为6%,丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为29∶1,1000V下电泳2～3h,0.1%AgNO3染色15min后显影。[结论]该优化体系为仁用杏资源微卫星标记遗传分析奠定了技术基础。     

SSR标记变性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法改进

[目的]改良SSR标记变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术,提高大规模SSR分子标记分析的工作效率。[方法]在利用SSR标记构建中国春/兰考大粒F2群体遗传图谱的基础上,对变性PAGE点样方法进行改进,并对中国春/兰考大粒筛选的122对差异引物进行组合分析。[结果]试验表明,引物扩增条带特异性强、覆盖范围不大即可采用两次点样法分析;两次点样和单次点样的凝胶扩增条带均清晰可辨;分析相同数量的样品,两次点样法较单次点样法节约了41%的试验时间,节约了50%的试剂用量。[结论]两次点样法简化了试验步骤,节约了试验成本,加速了试验进程,更适用于遗传作图。