阿托伐他汀减轻博莱霉素诱导大鼠实验性肺纤维化

目的 评价阿托伐他汀对大鼠实验性肺纤维化的作用。方法 大鼠随机分为对照（C）组,模型2、4和6周（M2、M4、M6）组及阿托伐他汀干预2、4和6周（A2、A4、A6）组,博莱霉素制备肺纤维化模型。评价大体标本、病理、肺系数、肺组织羟脯胺酸含量、动脉血气分析、肺泡炎、肺纤维化程度。结果 M2、M4、A2、A4组肺系数较C组显著增高（P<0.05）。各M、A组肺泡炎积分均较C组显著升高（P<0.05）。A4、A6组肺纤维化程度较同期M组显著减轻（P<0.01）。各M、A组肺组织羟脯胺酸显著高于C组（P<0.05）,A4组低于M4组（P<0.05）。各M组PaO2较C组下降,以M2组明显（P<0.01）,各A组较M组PaO2均有不同程度的升高（P<0.01或0.05）。结论 阿托伐他汀可减轻大鼠实验性肺纤维化,保护作用可能与疗程有关。     

大黄酸通过抑制miR-21而干预TGF-β1/Smad通路并减轻博莱霉素所致大鼠肺纤维化

目的:观察大黄酸(rhein,RH)对博莱霉素所致肺纤维化大鼠微小RNA-21(miR-21)表达以及转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad通路的影响。方法:博莱霉素一次性气管内注射复制大鼠肺纤维化模型,随机分为RH低、中、高剂量组及模型(model)组;正常对照组大鼠气管内注射生理盐水。用药28 d后,HE染色观察各组大鼠肺组织形态学的变化;测定肺系数、肺组织羟脯氨酸含量;real-time PCR检测肺组织中miR-21和TGF-β1/Smad7m RNA表达;Western blot法分析TGF-β1和Smad7蛋白的表达。结果:与model组相比,RH用药组大鼠的肺泡炎及肺纤维化程度有明显降低,肺系数及肺组织羟脯氨酸含量也显著减少,肺组织中miR-21表达下降,TGF-β1的m RNA和蛋白表达水平也明显下降,Smad7的mRNA及蛋白表达水平明显增高(P0.05)。结论:RH抗肺纤维化的作用可能与抑制miR-21的表达,从而干预TGF-β1/Smad信号通路,减少细胞外基质沉积有关。     

博莱霉素致肺纤维化中TGF-β1表达

25只大鼠随机分为正常对照组和灌注博莱霉素实验组。在 3d ,7d ,14d ,30d分别取肺组织 ,以免疫组织化学技术测定TGF β1蛋白表达。结果显示未经博莱霉素处理正常对照组大鼠的少数细支气管粘膜上皮细胞的胞浆有TGF β1蛋白弱表达 ;博莱霉素处理大鼠的支气管、细支气管粘膜上皮细胞则TGF β1表达更明显和范围更广 ;特别是在 3～ 7d肺泡腔和间质中出现大量的TGF β1强阳性的肺泡巨噬细胞 ,14～ 30d时在肺泡腔和间质中只有少量TGF β1阳性的肺泡巨噬细胞。提示TGF β1蛋白表达阳性的肺泡巨噬细胞在急性肺泡炎期明显增加 ,对肺纤维化的发生和发展可能起重要的作用     

苦参碱通过调节单核吞噬细胞表型偏移改善博莱霉素诱导的肺纤维化

目的:研究苦参碱(matrine,MA)对博菜霉素(bleomycin,BLM)诱导的循环单核细胞和肺泡巨噬细胞表型偏移的调节作用。方法:160只C57BL/6雄性小鼠随机分为生理盐水(NS)组、BLM组、苦参碱干预组(BLM+MA组)及溶剂对照组(BLM+NS组)经口咽吸入法给予BLM(2.5 mg/kg)建立实验性肺纤维化模型,对照组给予等体积NS,BLM+MA组和BLM+NS组分别在术后每天灌胃给予MA(15 mg·kg~(-1)·d~(-1))或等量NS。术后第3、7、14和21天处死小鼠,采用HE染色和Masson染色观察肺组织病理学变化及纤维化程度,采用碱水解法测定肺组织羟脯氨酸的含量,用流式细胞术分别检测循环单核细胞亚群和支气管肺泡灌洗液细胞表型的变化。结果:与对照组相比,MA干预可以明显减轻BLM诱导的小鼠肺组织炎症反应及纤维化程度(P0.05);与NS组相比,BLM组的Ly6C~(hi)单核细胞比例升高,肺泡巨噬细胞表型由M1型向M2型偏移且与炎症反应和纤维化程度呈现一定的相关性;MA干预后可以部分逆转BLM诱导的循环单核细胞和肺泡巨噬细胞的表型偏移。结论:苦参碱可以减轻BLM诱导的急性肺泡炎症和肺纤维化程度,可能是部分通过逆转循环单核细胞和肺泡巨噬细胞表型的偏移而实现的。     

山莨菪碱抑制JAK2/STAT3的磷酸化缓解博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化及病理损伤

目的:探索山莨菪碱(ADM)抑制酪氨酸激酶2/信号传导与转录激活子3(JAK2/STAT3)的磷酸化缓解博莱霉素(BLM)诱导的大鼠肺纤维化(IPF)及病理损伤.方法:将60只SD大鼠随机分为对照组,博莱霉素组,山莨菪碱高、中、低剂量组(剂量依次为1 mg/kg、0.5 mg/kg、0.25 mg/kg,连续干预4周)...     

三氧化二砷对博莱霉素致大鼠肺纤维化的影响及其作用机制

目的:观察三氧化二砷对博莱霉素致大鼠肺纤维化的影响及可能的作用机制。方法:SD大鼠气管内滴注博莱霉素诱导肺纤维化,腹腔内分别注射三氧化二砷(治疗组)、地塞米松(激素组)、生理盐水(模型组)进行干预。各组动物再按造模后开始干预的时间不同分为14d和28d开始干预2个亚组,每个亚组再按观察时间不同分为14d、28d和56d3个观察组。观察大鼠中位生存时间、肺组织羟脯氨酸含量、肺泡炎和肺纤维化程度(HE染色)、肺组织胶原定量分析(Masson染色)等指标来评价药物干预效果,并采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL法)检测肺组织凋亡指数。同时对肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、干扰素-γ(IFN-γ)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)免疫组化染色结果进行定量分析。结果:(1)生存时间观察:造模后14d开始干预的模型组、治疗组和激素组的中位生存时间分别为30d、57d和19d(P0.01);而造模后28d开始干预的各组的中位生存时间为40d、58d和34d(P0.05)。(2)肺纤维化的比较:各治疗组大鼠的羟脯氨酸含量与模型组相比均有下降趋势。各治疗组的肺泡炎和肺纤维化程度均轻于模型组。与模型组相比,各治疗组的胶原面积均小于模型组。(3)肺组织凋亡指数的比较:与模型组相比,14d开始干预并观察14d、28d组和28d开始干预并观察14d组的治疗组大鼠凋亡指数明显升高。(4)14d开始干预的各组的细胞因子比较:各治疗组的肺组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)免疫组化染色的平均光密度均低于相应模型组。治疗组中观察28d和56d小组的肺组织中干扰素-γ(IFN-γ)免疫组化染色的平均光密度均高于模型组。各治疗组的肺组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)免疫组化染色平均光密度与模型组区别不明显。与模型组比较,各治疗组的肺组织中金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)免疫组化染色平均光密度明显降低。结论:三氧化二砷能够减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化,其机制可能与诱导肺组织细胞凋亡增加有关。     

博莱霉素肺纤维化小鼠血管内皮细胞的研究

目的:研究C57BL/6小鼠肺微小血管内皮细胞血栓调节蛋白(TM)与因子Ⅷ相关抗原(vWf)的分布及博莱霉素(BLM)致肺纤维化过程中,血管内皮细胞亚型的转变。方法:采用双重免疫荧光染色及荧光强度定量分析法。结果:①正常C57BL/6小鼠肺泡毛细血管内皮细胞表面显示多数连续性线样TM荧光而vWf较少阳性,肺微小血管内皮细胞呈现vWf阳性。②BLM组小鼠内皮细胞TM荧光明显弱于正常,而vWf荧光显著强于正常水平。结论:①正常C57BL/6小鼠肺泡毛细血管内皮细胞以TM表达为主型,而非vWf表达为主型。②BLM致肺纤维化过程中,肺血管内皮细胞由以TM表达为主型转变为以vWf表达为主型,两抗原可被认为是内皮细胞损伤的标志物。     

中和IL－17对博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠肺组织Bax／Bcl－2表达的影响

目的：研究中和IL－17 A对博莱霉素（ bleomycin, BLM）诱导的肺纤维化小鼠肺组织Bax／Bcl－2表达的影响。方法将小鼠分别分成生理盐水组、 BLM组、 IL－17 A抗体组和IL－17 A抗体对照组,各30只,利用HE染色、 Masson三色胶原纤维染色检测小鼠肺组织纤维化程度,免疫组化方法检测小鼠肺组织Bax／Bcl－2的表达。结果从生理盐水组、到IL－17 A抗体组、再到BLM组和IL－17 A抗体对照组,小鼠肺组织肺泡炎症程度、肺泡壁的增厚情况以及肺泡壁的纤维化程度逐渐加重,差异有显著性意义（P＜0．01）; BLM组和IL－17 A抗体对照组间无明显差异（P＞0．05）。4组间Bax蛋白、 Bcl－2蛋白的表达也逐渐加重,差异均有统计学意义（ P＜0．01和P＜0．05）。 BLM组与抗体对照组间Bax、 Bcl－2的表达均无显著差异（P＞0．05）。结论 BLM可通过IL－17 A来诱导肺纤维化的形成,肺纤维化时肺实质细胞凋亡增多,而中和IL－17 A可通过调节Bax／Bcl－2的表达来抑制肺组织气道上皮的凋亡、达到抑制肺纤维化的目的。     

吉非替尼抑制博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化

目的:观察吉非替尼对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的抑制作用。方法:将40只SPF级雌性BALB/c小鼠分为4组:对照组(气管滴入生理盐水)、单纯口服吉非替尼组(吉非替尼灌胃200 mg/kg)、纤维化组(气管滴入博莱霉素3 mg/kg)、纤维化吉非替尼干预组(气管滴入博莱霉素+吉非替尼灌胃20 mg/kg)。实验第14 d杀鼠取肺,左肺石蜡切片行HE染色与Masson染色,免疫组化检测总表皮生长因子受体(EGFR)及磷酸化EG-FR;取右肺检测羟脯氨酸含量。结果:纤维化吉非替尼干预组肺病理损伤较纤维化组减轻,气道上皮下胶原沉积及肺羟脯氨酸含量减少(P0.05),气道上皮及肺间质细胞磷酸化EGFR表达评分下降(P0.05)。单纯口服吉非替尼组小鼠气道上皮下未见明显胶原沉积,肺羟脯氨酸含量及磷酸化EGFR表达评分与对照组相比无显著差异(P0.05)。结论:吉非替尼灌胃能显著抑制博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化,大剂量(200 mg/kg)吉非替尼灌胃未引起明显肺纤维化。     

甘草甜素减轻博莱霉素致大鼠肺纤维化

目的探讨甘草甜素减轻博莱霉素致大鼠肺纤维化的机制。方法将大鼠随机分成对照组、博莱霉素致大鼠肺纤维化模型组、地塞米松(DXM)、甘草甜素低、中及高剂量治疗组。注博莱霉素后第28天,连续14 d同一时间段腹腔注射。第15天取左肺下叶供免疫组化检测TGF-β1、IFN-γ表达;右肺下叶供病理组织观察。用ELISA双抗体夹心法测定各组大鼠血清IL-4、IFN-γ含量。结果 (1)模型组大鼠肺组织成纤维细胞反应增强,TGF-β1染色及定量表达增强;而甘草甜素各组、DXM组减轻明显(P<0.01);(2)模型组大鼠血清IL-4含量较高,IFN-γ含量较低;甘草甜素各组及DXM组则相反(P<0.05)。(3)甘草甜素各组、DXM组肺组织IFN-γ染色及定量表达增强,甘草甜素低剂量组较其他组增强(P<0.01)。结论甘草甜素通过降低肺组织TGF-β1表达和血清IL-4含量,上调IFN-γ表达,提高血清IFN-γ含量,从而减轻肺纤维化程度。     

丹皮酚调控miR-21对骨癌痛大鼠的镇痛作用及对MAPK信号通路的影响

目的 探讨丹皮酚(Paeonol)对骨癌痛大鼠的镇痛作用及其可能作用机制.方法 通过左后肢胫骨注射Walker256乳腺癌细胞悬液的方法建立大鼠骨癌痛模型.观察各组大鼠机械缩足反射阈值变化;qPCR检测各组大鼠脊髓处miR-21表达情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠脊髓中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细...     

miR-21及miR-300在膀胱尿路上皮癌中的表达意义分析

目的分析膀胱尿路上皮癌中的miRNA-21及miRNA-300的差异表达,研究miRNA在该疾病中的致病机制。方法选取我院于2015年1月-2018年1月间我院收治的40例膀胱尿路上皮癌患者作为实验组,选取同期收治的20例泌尿系统良性疾病患者作为对照组,采用RT-PCR方法对两组患者血清及尿液标本中的miR-21、miR-300表达含量进行比较。结果尿路上皮癌组中的血清及尿液miR-21、miR-300表达含量明显高于良性疾病组,组间比较差异有统计学意义(P0.05),浸润性膀胱尿路上皮癌组中的血清miR-21表达含量明显高于良性疾病组(P0.05),尿液miR-21及miR-300组间比较差异无统计学意义(P0.05),高级别膀胱尿路上皮癌组中的血清及尿液miR-21、miR-300表达含量明显高于良性疾病组(P0.05)。血清及尿液中的miR-21及miR-300水平在年龄、性别之间差异均无统计学意义(P0.05)。结论 miR-21、miR-300在膀胱尿路上皮癌组织中高表达,其可能对肿瘤的发生、发展及转移有一定影响,进而为膀胱尿路上皮癌的治疗提供一个新的潜在靶点。     

丙戊酸钠减轻博莱霉素致大鼠肺纤维化

目的:探讨丙戊酸钠在博莱霉素诱导的肺纤维化中的作用及机制。方法:42只大鼠随机分为正常对照组、模型组和治疗组。造模采用博来霉素5 mg/kg气管内注射,自造模14 d开始分别采用生理盐水(0.5m L/d)、丙戊酸钠(300 mg·kg-1·d-1)和地塞米松(0.6 mg·kg-1·d-1)腹腔内注射治疗14 d。模型组分别在造模后14和、28 d处死。治疗组在造模后28 d处死。然后通过HE染色、Masson染色、羟脯氨酸(HYP)检测和Western blotting检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的变化,综合分析丙戊酸钠对肺纤维化发展的干预作用。结果:HE染色显示丙戊酸钠治疗组的肺泡结构、肺间质的形态优于生理盐水组和地塞米松治疗组。Masson染色及HYP检测用于衡量肺组织内胶原的分布及含量,可见丙戊酸钠治疗组肺组织内胶原的分布及含量均显著低于地塞米松治疗组及生理盐水组。丙戊酸钠可以降低α-SMA的表达,同时上调上皮标志性蛋白E-cadherin的表达。结论:丙戊酸钠可以通过减少胶原的表达与分布及下调间充质蛋白α-SMA,同时上调上皮蛋白E-cadherin的表达从而减轻博来霉素诱导大鼠肺纤维化。     

复方三七饮对博莱霉素致大鼠肺纤维化TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的 探讨复方三七饮(CPNG)对博莱霉素(BLM)致大鼠肺纤维化的干预作用及其机制.方法 雄性SD大鼠60只,随机分为6组:正常组、模型组、醋酸泼尼松组、CPNG大、中、小剂量组[CPNG(H、M、L)],每组10只.经气管内注入BLM(5mg/kg)制备大鼠肺纤维化模型.造模第2天,治疗组分别灌服醋酸泼尼松3.33 mg/(kg ·d)、CPNG大、中、小剂量(100、50、25) mg/(kg·d),正常组和模型组大鼠灌服等体积的蒸馏水,1次/d.28 d后处死大鼠,HE染色和Masson染色进行肺组织病理学观察;碱水法测定肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量;Western blot法检测TGF-β1、Smad2、Smad7蛋白的表达水平.结果 与模型组大鼠比较,肺组织的病理组织学HE和Masson染色显示CPNG能明显减轻大鼠肺泡炎和肺纤维化程度(P＜0.01);CPNG各剂量组大鼠肺组织中HYP降低(P ＜0.01);CPNG各剂量组TGF-β1、Smad2蛋白的表达水平降低(P＜0.01),Smad7蛋白表达水平升高(P＜0.01).结论 复方三七饮对博莱霉素致大鼠肺纤维化具有一定的防治作用,可能与调节TGF-β1/Smads信号通路有关.     

FGF-21和Nrf2对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的影响

目的:研究成纤维细胞生长因子21(FGF-21)对博莱霉素(BLM)诱导的小鼠肺纤维化炎症应答及氧化应激的影响,并探讨其抗肺纤维化的作用机制。方法:建立BLM诱导的小鼠肺纤维化的模型,40只小鼠随机分为对照组、BLM组及FGF-21(1、2及5 mg/kg)+BLM组。Western blot检测I型胶原蛋白(collagen I)、纤连蛋白(fibronectin)和核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达水平。DCFH-DA染色检测活性氧簇(ROS)的生成。ELISA用于测定肺组织炎症因子的表达。试剂盒检测各组小鼠肺组织中的丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性和羟脯氨酸(HYP)含量。结果:FGF-21处理显著降低BLM诱导的肺组织炎症介质肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6的表达水平,减少ROS及MDA的含量,并增加抗氧化酶系统SOD和GPx的活性(P 0. 05)。同时,FGF-21下调BLM诱导的collagen I和fibronectin,并减少TGF-β1及HYP的含量。Nrf2沉默能够逆转FGF-21的抗纤维化作用。结论:FGF-21通过激活Nrf2信号抑制炎症应答进程,减轻氧化损伤,减少细胞外基质沉积,从而缓解BLM诱导的肺纤维化。这可能为肺间质纤维化治疗提供新的靶点。     

博莱霉素诱导小鼠肺间质纤维化造模方式的选择

目的:建立博莱霉素导致肺间质纤维化小鼠动物模型,比较不同给药方式的成模差异。方法:利用8周龄雄性ICR小鼠,①随机分为腹腔给药组(P组)、气管内给药组(I组)、阴性对照组(C组),分别经腹腔注射BLM 40 mg/kg 5次、气管内滴入BLM 5 mg/kg 1次或气管内滴入生理盐水50μl。分别于14、28、40天处死,②小鼠随机分为4组,分别经腹腔注射BLM 40mg/kg3、4、5次或经腹腔给予生理盐水200μl。分别于28、40天处死。观察小鼠体重、咳嗽、挠鼻症状、肺系数及肺组织病理改变。结果:给予博莱霉素后①小鼠的体重均下降并出现咳嗽及挠鼻等呼吸障碍症状;处置后第14、28及40天处死小鼠,计算肺系数,P组较I组肺系数高;处死小鼠后,P组和I组小鼠均形成广泛、稳定的间质纤维化病理改变,P组主要分布在胸膜下及血管周围,而I组主要分布在肺门和支气管周围。P组较I组肺纤维化病理评分高。②不同腹腔给药次数模型小鼠体重变化以5次给药对体重影响最大;计算肺系数以给药5次肺系数变化最大。上述模型均成功建立。通过比较生存率、呼吸困难症状、组织病理变化等指标,选出腹腔给药5次相对于给药3次及4次为更好的造模方式。结论:利用BLM腹腔注射和气管内滴入制备了肺间质纤维化动物模型,纤维化形成的部位存在着一定的差异,腹腔给药5次方法制备肺间质纤维化模型的成功率更佳。     

黄芪通过抗氧化抑制博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化

目的:研究黄芪对博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠氧化/抗氧化水平的影响,探讨黄芪抗纤维化的可能机制。方法:将36只SPF级雌性昆明小鼠随机分为对照组(生理盐水气管内雾化)、博莱霉素组(博莱霉素3mg/kg气管内雾化)和黄芪治疗组(博莱霉素3 mg/kg气管内雾化后黄芪注射液1.7 g·kg~(-1)·d~(-1)腹腔内注射),实验第14天收集小鼠肺组织及血清标本,取小鼠肺组织行HE和Masson染色;RT-PCR法测小鼠肺组织超氧化物歧化酶(SOD)1/2/3、过氧化氢酶(CAT)、NADPH氧化酶2/4(NOX2/4)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA水平;Western blot法测α-SMA和NOX2/4蛋白表达水平;比色法检测血清丙二醛(MDA)和总抗氧化能力(T-AOC)。结果:博莱霉素组小鼠肺组织病理损伤较正常组明显加重,α-SMA mRNA和蛋白表达,MDA/T-AOC,NOX2、NOX4和SOD3 mRNA表达,以及NOX2蛋白表达较正常组显著上升,黄芪治疗组则显著逆转上述改变;博莱霉素组小鼠NOX4蛋白表达较正常组显著下降,而黄芪治疗组较博莱霉素组显著上升;博莱霉素组和黄芪治疗组小鼠SOD1和CAT mRNA表达均较正常组显著下降;SOD2 mRNA在3个组中表达的差异无统计学显著性。结论:黄芪能够减缓博来霉素诱导的肺纤维化形成,其机制可能与调节氧化/抗氧化平衡有关。     

层黏连蛋白受体1单克隆抗体抑制博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化

目的 研究层黏连蛋白受体1(LAMRl)单克隆抗体(mAb)干预博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化.方法 雄性SD大鼠72只,随机分为LAMRl mAb组(L)、对照组(C)和模型组(M)3组,气管内滴入博莱霉素(5 mg/kg体质量)制备肺纤维化模型.3组分别给予LAMRl mAb、地塞米松、生理盐水3次/周,腹腔注射,于第7、14、28天处死8只大鼠.HE染色观察肺纤维化程度;免疫组化方法检测肺组织中表面活性物质A(SP-A)的含量;ELISA测定血清中羟脯氨酸(Hyp)的含量;PCR方法检测肺组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9)及转化生长因子β1(TGF-β1) mRNA的含量.结果 各时间段,M组肺纤维化程度及Hyp含量均高于C组和L组,SP-A的含量均低于其余两组,M组肺组织的MMP-9和TGF-β1的mRNA的含量明显高于其余两组.结论 LAMRl mAb可明显减轻博莱霉素诱导的肺纤维化程度.     

microRNA-21在肿瘤中异常表达的意义

microRNA(miRNA)是由18～26个核苷酸组成的内源性非编码的单链RNA分子,其通过与mRNA的结合来抑制其翻译过程从而调节相应基因的表达,在人体一系列生物学过程发挥着作用.miR-21在众多肿瘤组织中表达上调,临床试验证实miR-21的表达水平与肿瘤的临床分期,转移,预后存在密切联系,因此miR-21成为了癌症基因治疗的新靶点.