应用endostatin蛋白治疗裸鼠SHG44脑胶质瘤的实验

目的　克隆小鼠内皮抑素 (endostatin)基因 ,检测其表达蛋白生物学活性 ,应用该蛋白治疗裸鼠 SHG44脑胶质瘤 .方法　从小鼠胶原 c DNA用 PCR法克隆 endostatin基因 ,重组入 p UC19,测序后构建非融合表达载体 p DH- En-dostatin,使其在 DH5 α内经温度诱导表达 ,纯化该表达蛋白并用鸡胚绒毛膜尿囊膜实验和内皮细胞抑制实验检测其活性 .经荷瘤裸鼠皮下注射该蛋白治疗其脑内胶质瘤 .结果　成功获得 endostatin基因 ,测序正确 .诱导表达蛋白 Mr为2 0× 10 3 ,具有抑制血管生成的活性 .该蛋白可抑制荷瘤裸鼠脑内胶质瘤生长 .结论　 endostatin基因的表达和初步应用 ,为采用抗血管生成方法治疗脑胶质瘤等实体瘤研究奠定了实验基础 .     

多药耐药基因与脑胶质瘤

脑胶质瘤是最常见的颅内肿瘤 ,约占颅内肿瘤的 40 % .由于其呈浸润性生长 ,与周围正常脑组织无明显边界 ,手术很难做到全切除。因此 ,脑胶质瘤的术后化疗具有极其重要的意义。然而各类肿瘤细胞对化疗药物产生抗药性又极大地降低了化疗药物的效果。目前 ,研究发现肿瘤细胞产生耐药原因极其复杂 [1 ] ,最常见的是多药耐药 (MDR)现象 ,即肿瘤细胞一旦对一种化疗药物产生耐药 ,则对其他结构及功能不同的化疗药物也产生交叉耐药。关于脑胶质瘤多药耐药性的研究将有助于阐明胶质瘤抗药性的产生及化疗效果差的可能机制 ,并探讨其抗药性的逆转机制…     

Survivin和Fhit基因与脑胶质瘤的研究进展

Survivin是细胞凋亡蛋白抑制因子,而脆性组氨酸三联体基因(FHIT)在人类许多恶性肿瘤组织以及多种恶性肿瘤细胞系中存在异常,Survivin及Fhit基因在肿瘤中的表达呈负相关。本文就Survivin和Fhit基因脑胶质瘤中的研究进展作一综述。     

小鼠脑内胶质瘤模型的建立

&&小鼠脑内胶质瘤模型的建立@吕彦恩 @周晓平 @洪波 @王文仲&&胶质瘤;;动物模型&&     

脑胶质瘤放射敏感性基因研究的进展

脑胶质瘤是颅内常见的恶性肿瘤之一.在脑胶质瘤的综合治疗方法中,放射治疗与手术治疗一样占有重要地位.脑胶质瘤对放射线的敏感程度直接影响放射治疗疗效.脑胶质瘤内在的放射敏感性基因及其引起的细胞凋亡、细胞周期的变化和放射线导致的DNA损伤修复等,都与脑胶质瘤的放射敏感性密切相关.与细胞凋亡相关基因和DNA修复相关基因相关的脑胶质瘤放射敏感性基因,正逐渐成为人们研究的热点,还有其他的一些脑胶质瘤放射敏感性基因也受到人们的关注.现就脑胶质瘤放射敏感性基因研究的现状和进展作一综述.     

小鼠endostatin基因的克隆、表达及表达产物的活性鉴定

目的 克隆并表达小鼠endostatin基因,并初步检测其血管生长抑制功能,为胶质瘤的基因治疗探索新的途径。方法 从小鼠肝组织用RT-PCR法扩增endostatin基因,重组人pUC19质粒,经测序证实无误后,重组人表达载体pDH,经温度诱导表达,并用鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）实验检测表达产物活性。结果 从小鼠肝组织中成功扩增到endo-statin基因,测序与报道序列一致,重组进pDH后经温度诱导表达,在SDS-PAGE电泳上得到一条新的蛋白表达带。分子质量为20ku,纯化后的蛋白能明显抑制CAM的血管生长。结论 成功构建了小鼠endostatincDNA的重组克隆pDH-Endo,并在大肠杆菌中获得高效表达。在CAM实验中表明纯化后的蛋白具有明显血管抑制作用。为利用endostatin进行脑胶质瘤等实验 全瘤的基因治疗奠定了实验基础。     

脑胶质瘤的基因治疗

1992年 ,美国ＮＩＨ批准了第 1个运用腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶 /丙氧鸟苷 (ＨＳＶ -ｔｋ/ＧＣＶ)系统治疗脑胶质瘤的临床方案 ,随后在全球掀起了肿瘤基因治疗的热潮。到目前为止 ,世界上已有 2 3 2项基因治疗临床试验方案获批准 ,其中 1 0 5项为肿瘤基因治疗 ,而脑肿瘤基因治疗又是肿瘤基因治疗中的热点 ,占 1 6项 (包括我国 1项 ) ,其中 1 4项针对恶性脑胶质瘤 ,另两项针对脑膜肉瘤和颅内转移癌。目前 ,脑肿瘤的基因治疗在全世界已进行了 2 0 0 0多例的临床试验。虽然其效果还不尽人意 ,然而 ,随着研究的进展 ,方法的逐渐…     

脑胶质瘤的综合治疗

原发性颅内胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤，其中，大多数为星形细胞瘤。国内学者采用Kenlohan氏分类法将星形细胞瘤分为Ⅰ～Ⅳ级；国外学者则通常将其分为3种类型：低度恶性星形细胞瘤、间变性细胞瘤和多形性胶质母细胞瘤，并能较好地判断胶质瘤患者的预后。多形胶质母细胞瘤的2年生存率仅为5％，而间变性星形细胞瘤可达50％。     

大鼠C6脑胶质瘤动物实验模型的建立

目的 为脑胶质瘤的基础理论、临床治疗和药效学研究提供简便、经济、实用的大鼠C6脑胶质瘤动物实验模型。方法 采用自制大鼠脑固定架，固定后，于脑靶点接种C6胶质瘤细胞。观察动物行为状态和生存期，并对脑肿瘤进行形态学，细胞学和分子生物学相关指标的检测。结果 接种C6胶质瘤细胞后，动物进食量减少，体重下降，有的动物出现眶周出血，眼球突出，自身旋转，癫痫发作，偏瘫等症状，大约在2至3周内，动物大多死亡，病理解剖显示颅内肿瘤形成。结论 该方法建立的脑胶质瘤具有与人脑胶质瘤相似的特性，肿瘤形成时间短，存活期较稳定，可供脑胶质瘤基础理论、实验治疗和药效学研究的需要。     

C6脑胶质细胞瘤的在体实验研究

目的　建立大鼠C6脑胶质瘤模型 ,寻找简易判定颅内肿瘤大小的可靠指标。方法　应用立体定向法 ,将 1%琼脂糖含 1× 10 6C6瘤细胞悬液 10 μl注入大鼠右脑尾状核并行一般观察和MRI检查。在接种后第 10、15、2 0、2 5天和自然死亡前 ,对大鼠做主动脉多聚甲醛灌注固定 ,对脑组织和肿瘤标本进行大体观察和HE染色。结果　 5 0只接种大鼠均有颅内肿瘤生长 (10 0 % ) ,远处和颅外转移率为 0 % - 4 %。结论　成功建立大鼠C6脑胶质瘤模型 ,接种后大鼠的生存时间可作为判定颅内肿瘤生长大小的指标。     

Development of a rat C6 brain tumor model

Objective To establish rat C6 brain- tumor models and find a simple reliable index to judg e tumor volume. Methods C6 cell suspension (10 μl) containing 10 g/L agarose and 1×10［6］ cells was i njected into the right caudate nucleus of the rat brain by a stereotaxic method . After implantation, rats were observed and given MRI scans. Rats were perfus ed with paraformaldehyde trans- aorta at the 10th, 15th, 20th and 25th day and b efore natural death. All brains, lungs, spinal cords and tumors were sectioned and inspected. Tumor- containing samples were prepared histologically by hemato xylin and eosin (HE) stains. Results Fifty implanted rats had 100% yield of intracerebral growth, with distant metast asis of 0% to 4%. Conclusion A rat C6 brain- tumor model was successfully established. Rat survival time is correlated with tumor volume and may be useful as an index of tumor size .     

C6脑胶质细胞瘤的在体实验研究

目的　建立大鼠C6脑胶质瘤模型,寻找简易判定颅内肿瘤大小的可靠指标.方法　应用立体定向法,将1%琼脂糖含1×106 C6瘤细胞悬液10μl 注入大鼠右脑尾状核并行一般观察和MRI检查.在接种后第10、15、20、25天和自然死亡前,对大鼠做主动脉多聚甲醛灌注固定,对脑组织和肿瘤标本进行大体观察和HE染色.结果　50只接种大鼠均有颅内肿瘤生长（100%）,远处和颅外转移率为0%-4%.结论　成功建立大鼠C6脑胶质瘤模型,接种后大鼠的生存时间可作为判定颅内肿瘤生长大小的指标.     

悬浮法培养C6胶质瘤细胞系和该细胞系中脑肿瘤干细胞的分离

目的研究应用无血清培养基悬浮法培养C6胶质瘤细胞系的方法;并分离该细胞系中的脑肿瘤干细胞,观察其生长方式和分化特征.方法应用培养大鼠神经干细胞的培养基和培养方法,在无血清培养基中采用悬浮法培养大鼠C6胶质瘤细胞系;再将分离获得的悬浮生长的脑肿瘤干细胞接种于含血清培养基,观察其分化;应用有限稀释和单克隆形成实验确定该细胞系中肿瘤干细胞的比例.结果C6胶质瘤细胞系中有约1.18%的肿瘤细胞在无血清培养基中能够存活、增殖,形成自由漂浮的细胞球;这种细胞球具有人脑肿瘤干细胞球的特征,并可连续传代,若重新接种于含血清培养基中可重新贴壁分化,贴壁分化后细胞形态与直接在含血清培养基中培养的C6胶质瘤细胞系无明显差别.结论C6大鼠胶质瘤细胞系中含有比例较低的、具有增殖和分化能力脑肿瘤干细胞(约1.18%),该细胞系可在含生长因子的无血清培养基中悬浮生长,并维持细胞系.     

大鼠脑C6胶质瘤组织的1H磁共振波谱

目的采用高场强高分辨磁共振波谱仪在体观察正常大鼠脑组织及种植C6胶质瘤的代谢及生化改变,以评价高分辨1H磁共振波谱在大鼠脑肿瘤模型中的应用价值. 方法将20只体质量200～250 g左右的Wister大鼠分为两组. 正常组:5只;肿瘤组15只,在右尾状核接种C6细胞. 肿瘤组动态观察MR平扫及动态增强扫描的改变,并于接种C6细胞后15～20 d采用点分辨波谱法(PRESS: point resolved spectroscopy)行1H磁共振波谱检测. 结果正常组脑组织1H波谱可检出N-乙酰门冬氨酸(NAA),胆碱类化合物(Cho),肌酸和磷酸肌酸(Cr+PCr)、谷氨酸和谷胺酰胺(Glu+Gln),脂质(Lip),乳酸(Lac). C6胶质瘤NAA较正常组明显降低,NAA/Cho较正常组明显降低(P<0.01),NAA/Cr较正常组也明显下降(P<0.01),Cho/Cr明显升高(P<0.05),Lac升高. 结论高场强磁共振波谱仪可以准确观察在体大鼠脑组织及C6胶质瘤的1H磁共振波谱. 高分辨1H磁共振波谱的改变早于MRI形态改变,能够对肿瘤的早期代谢及生化改变进行监测.     

吗啡对培养大鼠胶质细胞瘤C6细胞增殖的抑制作用

目的:探讨吗啡对神经系统细胞的影响及作用机理.方法:应用基因克隆技术克隆大鼠增殖细胞核抗原(PCNA)的cDNA基因片段,并应用逆转录PCR技术研究了吗啡对大鼠胶质细胞瘤C6细胞PCNA基因表达的影响.结果:0.1、1.0 mg.L-1 吗啡作用于大鼠C6细胞24 h后,PCNA mRNA相对含量明显下降,且剂量越高PCNA mRNA相对含量越低.结论:吗啡对正常生长的大鼠C6细胞的增殖具有一定的抑制作用,其机理可能是通过抑制大鼠C6细胞PCNA的转录过程,使PCNA转录水平降低,从而抑制细胞核酸合成代谢.     

建立大鼠C6脑胶质瘤模型与观察颅内肿瘤生长

建立大鼠Ｃ６脑胶质瘤模型,行一般观察和ＭＲＩ检查以确定颅内肿瘤生长情况,寻找简易判定颅内肿瘤大小的可靠指标。方法体外培养大鼠Ｃ６胶质瘤细胞,应用立体定向法将含１０ｇ．Ｌ＾－１琼脂糖和１＊１０＾６Ｃ６细胞悬液１０μＬ注入大鼠了尾状核。接种后行一般观察和ＭＲＬ检查,对５组接种大鼠分别在第１０,１５,２０,２５日和自然死亡前做主动脉多聚甲醛灌注固定,对脑组织和肿瘤标本进行切片观察和ＨＥ染色。结果５０只接     

小鼠内皮抑素基因的克隆及序列测定

目的 获取小鼠内皮抑素（endostatin)基因并进行序列测定,为今后研究其机制及应用创造条件。方法 以小鼠肝脏总RNA为模板,用RT-PCR法从中扩增endostatin基因,并将所得基因重组入pUC19载体质粒,采用自动测定仪及荧光素标记引物,测定目的基因序列。结果 从小鼠肝组织中成功扩增endostatin基因,莘成功克隆入pUC19载体。经酶切鉴定正确后,命名为pUC-Endo。经测序证实所获基因序列与已知的endostatin基因序列一致。结论 成功构建小鼠endo-statin基因的重组克隆pUC-Endo,为今后利用endostatin进行胶质瘤的抗血管生成治疗研究奠定了实验基础。     

重组人血管内皮抑制素对人脑胶质瘤细胞生长的抑制作用

目的探讨重组人血管内皮抑制素对人脑胶质瘤细胞生长的抑制作用。方法体外培养人脑胶质瘤细胞,设立对照组与重组人血管内皮抑制素实验组（终浓度分别为50、100、150 ng/ml）,采用MTT法来判定该抑制因子对人脑胶质瘤细胞有无抑制作用。结果对照组OD值为0.302±0.012,实验组的OD值分别为0.284±0.006,0.218±0.014,0.175±0.012,P值均〈0.05。结论重组人血管内皮抑制素能够抑制人脑胶质瘤细胞的增殖且呈剂量依赖性。     

2-甲氧基雌二醇对大鼠神经元及C6胶质瘤细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol,2-ME)对大鼠神经元及C6胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法：将神经元及C6胶质瘤细胞分为对照组和实验组,实验组按2-ME浓度不同分为1、5、10、15μmol/L 4个亚组。2-ME作用于大鼠神经元及C6胶质瘤细胞不同时间后,采用MTT法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,并在光镜及电镜下观察其形态学变化。结果：C6胶质瘤细胞经2-ME作用后细胞活性受到抑制,呈现时间变量依赖性,各亚组与对照组差异具有统计学意义(P<0.05)。2-ME可诱导C6胶质瘤细胞凋亡,各亚组与对照组差异具有统计学意义(P<0.05);可使C6胶质瘤细胞G₁及S期细胞减少,G₂期细胞增多,一定范围内呈现剂量依赖性,各亚组与对照组差异具有统计学意义(P<0.05)。神经元经药物作后,各亚组与对照组细胞活性差异无统计学意义。结论：2-ME可抑制C6胶质瘤细胞生长,诱导C6胶质瘤细胞凋亡,而对正常神经元无影响。