黄曲霉素M1间接竞争ELISA的建立及其在牛奶中的应用

利用高特异性单克隆抗体,建立黄曲霉素M1的间接竞争ELISA检测方法。棋盘法优化了包被抗原及酶标抗体的最佳稀释倍数。包被抗原和酶标抗体的最佳工作浓度分别为1∶15000和1∶2000。该方法的线性范围为(0.1—8.1)ng·mL-1。除了与黄曲霉素B1的交叉反应为35%外,与黄曲霉素B2、黄曲霉素G1及黄曲霉素G2的交叉反应均小于1%。在牛奶实际样品检测的回收率均大于70%,而且检测过程在10min以内即可完成。该方法灵敏度高,特异性强,而且操作简单,适合多样本的快速筛查,为黄曲霉素M1的高效检测提供了一个良好的选择。     

表皮生长因子效应评价细胞模型的建立

为了筛选表皮生长因子(EGF)信号通路的未知调控分子,利用人正常乳腺上皮细胞系MCF10A建立了EGF效应评价模型,包括细胞增殖、迁移以及细胞周期的进程等。结果显示,EGF能有效促进MCF10A细胞的增殖。饥饿同步化后,EGF能促进细胞从G1期进入S期,开始DNA的合成。此外,Transwell实验显示EGF能明显促进MCF10A细胞的迁移。     

正常人口腔粘膜中表皮生长因子及其受体的表达

目的：研究人口腔粘膜中表皮生长因子（EGF）及其受体（EGF－R）的分布状态,方法：采用免疫组织化学方法,结果：EGF主要分布于口腔上皮底层细胞中,并随细胞向上分化而逐渐减少,其免疫染色出现在细胞浆中,EGF－R也主要在基底层细胞表达,除存在于细胞浆外,在细胞核中亦见表达,结论：表皮生长因子及其受体对口腔上皮细胞生长,分化的调节有重要作用,但EGF－R在细胞核中的表达,其作用尚需深入研究。     

软骨藻酸多克隆抗体的制备及间接竞争ELISA检测法的建立

软骨藻酸(Domoic Acid,DA)是记忆缺失性贝毒(Amnesic Shellfish Poisoning,ASP)的主要成分,能在鱼类、贝类富集,通过食物链的传递作用对人产生毒性作用.DA是小分子半抗原,运用活泼酯法将DA与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)提高偶联效率,通过紫外-可见分光光度法和聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)检测鉴定,成功制备偶联比为44∶1的完全免疫抗原DA-KLH和偶联比为16∶1的包被抗原DA-BSA;用DA-KLH免疫小鼠后获得高达210 000 units/m L效价的抗血清,并通过不断优化间接竞争ELISA(ic-ELISA)检测DA的条件,确定各项最佳工作质量浓度及条件,最后成功绘制100 ng/m L～10μg/m L范围内的DA检测标准曲线.通过优化ic-ELISA检测方法成功实现了快速定量检测DA,这对水产品藻毒素检测试剂盒的开发具有指导意义,也为建立赤潮毒素监督体系提供了良好的实验基础.     

基于丝网印刷技术的电化学酶联免疫吸附

为研究基于丝网印刷技术的电化学酶联免疫吸附(ELISA)的效果,在塑料基板上印刷96孔电极单元,形成标准96孔ELISA检测板,建立电化学检测与ELISA实验的关联,检测板每孔底部为独立电化学单元,由碳电极、对电极和银参比电极组成,形成双面印刷基板,基板通过96×3针式镀金特定连接器连接至恒电位仪。结果表明,96孔三电极电化学丝网印刷电化学阵列作为ELISA检测是可行的,多通道恒电位仪可同时测量8个孔数据。     

肝再生中表皮生长因子（EGF）及其受体的作用

肝细胞在正常情况下很少分裂，但在肝损伤后会表现出强大的再生能力。肝细胞的生长和增殖受到众多因子的影响，其中表皮生长因子（Epidermal Growth Factor，EGF）是一种强有丝分裂原，它与受体EGFR结合后能诱导组织细胞的增殖、分化、成熟，是目前已知的能够促进肝脏再生的一个主生长因子。现就表皮生长因子对肝再生的作用做一综述。     

柠檬黄的ELISA检测方法的建立

利用免疫学基本原理，获取抗柠檬黄的单克隆抗体，以此建立了从食品中检测柠檬黄的间接竞争ELISA．试验表明：OVA—TE最适包被浓度为1μg／mL；酶标抗体最适工作浓度为1：3000；酶标抗体的作用温度和时间分别为37℃，lh；封闭液为1％明胶；底物显色时间为15min；对柠檬黄的最低检出量为26．34ng／mL；抗体的最适稀释倍数为1：12000倍；对该方法进行交叉性试验和重复性试验，结果表明此法是一种特异、灵敏、快速的检测方法，并适合大批量样品检测．     

犬腺病毒2型抗原的制备及间接ELISA的建立

用MDCK细胞增殖犬腺病毒2型弱毒疫苗株,病毒培养上清液经差速离心和酒石酸钾密度梯度离心浓缩、纯化后作为诊断抗原,建立了犬腺病毒2型抗体检测的间接ELISA。确定最佳抗原包被量为0.168μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1:100,作用时间为60 min,羊抗犬酶标抗体稀释倍数为1:2000,作用时间为60 min,底物作用时间为37℃,10 min。判定标准为S/P值≥0.351者判为阳性,S/P值≤0.318者判为阴性。该抗原不与犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬波特氏杆菌等3种犬常见传染病的阳性血清反应,具有良好的特异性;批内、批间重复试验,变异系数小于15%,显示具有较好的重复性;检测血清样品56份,与病毒中和试验结果比对的符合率为93.75%。本研究结果为实现犬腺病毒感染监测,进行犬腺病毒流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。     

人表皮生长因子融合蛋白在大肠杆菌表达的研究

在大肠杆菌中高效表达人表皮生长因子(hEGF)。根据大肠杆菌对密码的偏爱性,构建高效表达EGF融合蛋白的菌株,经离子交换层析和凝胶过滤层析两个步骤使产物得到纯化。融合蛋白表达产量为27%,EGF融合蛋白纯化产物纯度为95%以上,促3T3细胞增殖的活性测定为ED50为4.2ng/mL。在pET 3c:BL21(DE3)大肠杆菌表达系统中,以融合蛋白方式表达人表皮生长因子,表达效率高,纯化路线简单,产量较高,适合产业化生产。     

降低酶联核酸适配体分析方法中非特异性吸附的分析研究

以检测蜂蜜中的四环素残留为例,构建间接竞争酶联核酸适体分析法（ic-ELAA）,就ic-ELAA中非特异性吸附的影响因素进行分析,探讨降低非特异性吸附的措施。结果表明：选择2 μg/mL四环素-牛血清蛋白在10 mmol/L Tris-HCl（pH 8.0）中过夜包被,次日用0.5 g/mL酪蛋白封闭1 h,竞争反应后用6 μg/mL链霉亲和素-辣根过氧化物酶催化颜色反应放大竞争效果,最后采用450 nm和630 nm双波长读数,可得到灵敏度为0.035 ng/mL的竞争曲线。同时,根据长期实验经验,提出其他降低非特异性吸附的注意事项。     

气相内标-标准曲线法测定DLPC中亚油酸

通过大豆醇溶性磷脂与亚油酸在1,3-特异脂肪酶TLIM催化下的酸解反应,制备二亚油酰磷脂酰胆碱(DLPC),衍生化处理后,气相色谱定量分析.为满足实际需求,建立了气相色谱准确定量分析DLPC中亚油酸含量的方法——内标标准曲线法.方法的相对标准偏差(RSD)2.15%,平均回收率在92.7%～105%之间,线性相关系数0.9991,线性范围在2～40mg/mL之间.     

标准曲线法测定汞的局限性

常用的汞分析方法 ,如冷原子吸收分光光度法、原子荧光法、双硫腙分光光度法等均为吸光光度分析法 ,在已颁布的汞标准分析方法中都采用标准曲线法。然而 ,通过对汞质控标样的分析及将多年环境监测的结果经数理统计 ,发现用标准曲线的回归系数来计算样品中汞的测定结果 ,使低含量样品中汞浓度偏高 ,高含量样品中汞浓度偏低 ,若用相应吸收值的标准溶液浓度来计算样品中汞浓度 ,测定结果更准确。     

污水处理中雌酮的定量分析

采用酶联免疫吸附检测(ELISA)试剂盒定量分析了某采用生物脱氮活性污泥工艺的污水厂中的原水、一级处理出水、二级处理出水、尾水和出水口下游受纳河水中的雌酮浓度,分析方法的定量检测限为0.5 ng/L.ELISA分析中增加的凝胶色谱净化步骤可降低E1检测值73.0%的假阳性,使其检测结果平均值从液相色谱一飞行时间质谱联用(HPLC-MS(TOF))的对照分析结果平均值的1.52倍降为1.15倍.ELISA分析检测值的假阳性与水样的污染程度呈正相关.     

用酶联免疫吸附试验诊断蓝氏贾第鞭毛虫病免疫价值的研究

用蓝氏贾第鞭毛虫纯培养虫株和超声粉碎可溶性虫体部分作为抗原,采用ELISA方法检测人体感染蓝氏贾第鞭毛虫血清免疫抗体并讨论其寄生虫学诊断价值．检测65份成人贾第虫病血清,其中55份IgG和／或IgA阳性,阳性率84．62％．20份10岁以下儿童贾第虫病人血清无1份阳性．结果提示蓝氏贾第鞭毛虫感染产生的体液免疫反应存在有年龄依赖性,酶联免疫吸附试验用于蓝氏贾第鞭毛虫病免疫诊断具有局限性．     

化学发光-酶联免疫高灵敏检测洛美沙星

建立了洛美沙星的化学发光-酶联免疫分析方法。实验对包被抗原的度盘浓度、洛美沙星抗体及辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗的稀释倍数、酶标板的种类等进行了优化。在最佳实验条件下,测得的IC₅₀值为0.22ng／mL, 检测限为0.032ng／mL。该方法具有良好的特异性,在检测的10种代表性的喹诺酮类药物中,仅诺氟沙星和氟罗沙星交叉率高于1％(分别为:6.88％和2.16％)。将该方法应用于脱脂牛奶中添加洛美沙星回收率的测定,批内和批间回收率分别为:88.7％～103.4％和97.8％～107.2％,相应变异系数分别为:6.3％～8.6％和2.4％～8.0％。     

早龄期磨细矿渣混凝土回弹法专用测强曲线的建立

对42组早龄期磨细矿渣混凝土(7d～14d)立方体试件进行了回弹测试和强度试验。在上述试验的基础之上,选取合适的数学模型,经回归分析建立了早龄期磨细矿渣混凝土回弹法的专用测强曲线,曲线表明矿渣混凝土的表面回弹值与其抗压强度之间有着较好的相关性,而且曲线的精度符合回弹法规程中的要求。经工程实践验证了该曲线的测试精度,建议可作为郑州市早龄期磨细矿渣混凝土回弹法的专用测强曲线。     

基于微笑曲线理论的中国建筑业 核心竞争力研究

建国以来,中国建筑业产值一直稳步提高,但低效率、低收益问题仍然没有得到解决。基于拓展服务领域、增加附加价值以提高我国建筑业核心竞争力的思路,从“广义的建筑业”和“广义的建设项目生命周期”出发,构建了建筑业的工程价值体系,并定义了相对附加经济价值这一概念。根据对目前我国建筑业现状的分析结果,研究了建设项目生命周期各个不同阶段附加价值的增值特点,做出了我国不同时期建筑业的微笑曲线,预测了我国建筑业未来的发展方向,最后探讨了提升我国建筑业核心竞争力的上、中、下游和整体发展战略。     

基于Willis定理的瞬心线附加板共轭曲线设计的新思路

首先基于Willis定理提出了不完全齿轮机构的瞬心线附加板设计的一种新思路:使待设计的一对瞬心线附加板K、L开始接触后,其接触点的公法线与两轮中心线的交点由主动轮中心开始逐渐按传动比规律移到两轮的节点.但并不要求P点始终在o1o2上;接着运用微分几何原理给出了该对瞬心线附加板共轭轮廓线的求解方法步骤.     

An FPGA Implementation of GF （p） Elliptic Curve Cryptographic Coprocessor

A GF (p) elliptic curve cryptographic coprocessor is proposed and implemented on Field Programmable Gate Array (FPGA). The focus of the coprocessor is on the most critical, complicated and time-consuming point multiplications. The technique of coordinates conversion and fast multiplication algorithm of two large integers are utilized to avoid frequent inversions and to accelerate the field multiplications used in point multiplications. The characteristic of hardware parallelism is considered in the implementation of point multiplications. The coprocessor implemented on XILINX XC2V3000 computes a point multiplication for an arbitrarypoint on a curve defined over GF(2^192-2^64-1) with the frequency of 10 MHz in 4.40 ms in the average case and 5.74ms in the worst case. At the same circumstance, the coprocessor implemented on XILINX XC2V4000 takes 2.2 ms in the average case and 2.88 ms in the worst case.