格尔德霉素对肿瘤坏死因子诱导的PC-3M细胞中c-FLIP表达上调的影响

目的:探讨热休克蛋白90抑制剂格尔德霉素(Geldanamycin,GA)对TNF-α诱导的前列腺肿瘤细胞PC-3M中白介素-1β转换酶抑制蛋白(c-FLIP)上调的影响及意义。方法:分别用TNF-α和GA TNF-α处理PC-3M细胞,用免疫细胞化学法测c-FLIP蛋白水平表达差异,采用RT-PCR测c-FLIP mRNA水平的表达差异。结果:使用TNF-α处理6小时后PC-3M细胞c-FLIP在蛋白及mRNA表达水平明显上调,而使用热休克蛋白90抑制剂GA预处理18小时后,能明显抑制TNF-α诱导的c-FLIP表达上调。结论:热休克蛋白90抑制剂能有效抑制TNF诱导的c-FLIP表达上调。     

FOXN2在前列腺癌组织的表达及对前列腺癌细胞生物学的影响

探讨双头框蛋白N2（FOXN2）在前列腺癌（PCa）组织中的表达以及对PCa细胞生物学的影响。方法 选取宜宾市第二人民医院50例接受手术治疗的PCa患者的标本及癌旁组织,通过RT-qPCR实验和Western blot实验分别检测PCa组织和癌旁组织中的FOXN2 mRNA及蛋白的表达水平,并分析PCa组织中FOXN2与患者临床病理特征的相关性。通过RT-qPCR实验检测正常前列腺细胞RWPE-1、PCa细胞PC-3、DU145、LNCaP中FOXN2 mRNA的表达水平。选取PC-3细胞为研究对象,分为FOXN2过表达组、空载体对照组以及对照组,分别通过MTT实验、流式细胞实验、Transwell实验以及Western blot实验检测各组细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭情况以及相关蛋白Bax、CyclinD1、MMP-2的表达量。结果 与癌旁组织相比,FOXN2的mRNA和蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,与TCGA数据库中结果一致。FOXN2低表达与PCa患者淋巴转移、TNM分期以及Gleason评分有关（P=0.003、0.005、0.002）。与人正常前列腺细胞RWPE-1相比,FOXN2在PCa细胞PC-3、DU145、LNCaP中均呈现低表达（P<0.05）,其中PC-3细胞中表达量最低。与对照组和空载体对照组相比,FOXN2过表达组的PC-3细胞在作用24 、48 、72 h后增殖能力显著下降（F=290.400、57.735、113.014,P<0.05）,CyclinD1蛋白表达水平显著下降（P<0.05）;PC-3细胞的凋亡率显著升高（P<0.05）,Bax蛋白表达水平显著升高（P<0.05）;PC-3细胞的迁移和侵袭能力显著下降（P<0.05）,MMP-2蛋白表达水平显著下降（P<0.05）。结论 FOXN2在PCa组织及细胞中低表达,过表达FOXN2可抑制PCa细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡。     

趋化因子受体4在前列腺癌中的表达及其与转移的相关性研究

目的：研究趋化因子受体4（CXCR4）在前列腺癌（PCa）组织中的表达及其与患者血清PSA水平的相关性，探讨CXCR4在PCa转移中的作用。方法：采用EnVision免疫组织化学染色方法检测40例PCa组织（包括15例转移和25例未转移PCa组织）及配对癌旁组织和10例正常前列腺组织中CXCR4的表达情况，统计分析PCa与癌旁和正常组织CXCR4的表达差异，以及CXCR4表达与血清PSA水平及转移的相关性。结果：CXCR4蛋白在PCa中高表达，其阳性表达率为82．5％（33／40）；癌旁组织表达较低，阳性表达率为37．5％（15／40）；而正常前列腺组织中未见CXCR4表达（0／10）。与癌旁及正常组织相比，PCa组织表达CXCR4显著增高，差异有统计学意义（P〈O．01）；而癌旁组织与正常组织CXCR4表达差异则无统计学意义（P〉O．05）。PCa中CXCR4表达与癌转移特征的相关性差异具有统计学意义（P〈O．05），不同血清PSA水平的癌组织CXCR4表达差异则无统计学意义（P〉0．05）。结论：CXCR4在PCa组织尤其在转移性PCa组织中高表达。CXCR4可能是一个独立的，较有效的转移预测指标，可为临床判断预后提供参考。研究结果为进一步研究CXCR4／SDF1与转移性PCa的关系奠定了基础。     

CXCR2在胰腺导管细胞癌中的表达及意义

目的:探讨CXC趋化因子受体2(CXCR2)在胰腺导管细胞癌中的表达以及与其发生、发展的关系。方法:采用RT-PCR法、Western blot免疫印迹法检测50例胰腺导管细胞癌组织及癌旁组织和30例正常胰腺组织中CXCR2的表达水平,分析其与胰腺导管细胞癌生物学特性的关系。结果:胰腺导管细胞癌组织、癌旁组织和正常胰腺组织中CXCR2 mRNA和蛋白的表达分别为1.13±0.25、0.79±0.18、0.78±0.14和1.75±0.21、1.01±0.15、0.96±0.20,同癌旁组织和正常胰腺组织比较,胰腺导管细胞腺癌组织中CXCR2 mRNA和蛋白的表达明显升高(P0.05)。同正常胰腺组织相比,癌旁组织中CXCR2mRNA和蛋白表达无明显升高(P0.05)。CXCR2 mRNA和蛋白表达与肿瘤分化程度、淋巴转移和TMN分期密切相关,差异有统计学意义(P0.05)。结论:CXCR2在胰腺导管细胞癌中高表达,与胰腺导管细胞癌发生、迁移、侵袭和转移等恶性生物学行为相关。     

水通道蛋白1和3在小鼠前列腺组织的表达及意义

目的:揭示水通道蛋白(AQP)在小鼠前列腺组织的表达及意义,为深入研究前列腺正常及某些病理状态下AQPs表达调控及生理功能奠定基础。方法:取小鼠前列腺组织,采用RT-PCR方法检测AQP 0~4mRNA在前列腺组织的表达,同时应用Western印迹和免疫组化研究AQP1及AQP3在前列腺组织的定位表达。结果:RT-PCR显示前列腺组织中有AQP1、3 mRNA表达,而未见AQP0、2、4 mRNA的表达。Western印迹结果显示在正常前列腺组织中表达相对分子质量为28 000的AQP1蛋白,以及相对分子质量分别为35 000和27 000的糖基化和非糖基化AQP3蛋白。免疫荧光和免疫组化结果表明小鼠前列腺近管腔处分泌细胞的胞内囊泡及细胞膜均可见较强的AQP1蛋白表达;而在前列腺基质上皮细胞有AQP3的表达。结论:AQP1和AQP3基因在前列腺分泌上皮细胞表达,提示AQP1和AQP3可能通过促进前列腺上皮细胞对水的渗透,在前列腺液分泌过程中发挥重要的生理作用。     

基质金属蛋白酶抑制剂RECK基因在前列腺细胞株中的表达及意义

目的:探讨RECK基因及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA在不同前列腺细胞株BPH-1、DU-145、LNCaP及PC-3中的表达差异及其意义。方法:应用RT-PCR检测4种不同前列腺细胞株(BPH-1、DU-145、LNCaP及PC-3)中RECK及MMP-9 mRNA的表达;应用W estern印迹法检测不同前列腺细胞株中RECK蛋白的表达。结果:前列腺癌细胞株DU-145、LNCaP及PC-3中RECKmRNA的表达较良性前列腺增生细胞株BPH-1中明显降低(P<0.01),MMP-9 mRNA表达则明显升高。DU-145、LNCaP及PC-3细胞株中RECK蛋白的表达较BPH-1的表达明显降低。结论:RECK基因在前列腺癌中的表达量明显下降,而MMP-9的表达量明显升高,RECK基因可能是一种抑癌基因,其抑癌作用可能与其抑制MMP-9的表达有关。     

DD3 mRNA在前列腺癌组织中定量表达分析

目的:探讨DD3基因在前列腺组织中表达的临床意义。方法:用荧光定量RT-PCR方法对21例前列腺癌(PCa)组织、27例非前列腺部位的肿瘤组织、39例良性前列腺增生(BPH)组织和15例正常前列腺组织中的DD3的表达进行了定量分析,用ROC曲线对DD3 mRNA诊断PCa的性能进行了分析。结果:27例非前列腺组织中均未检测到DD3基因的表达。DD3在PCa组、BPH组和正常前列腺组表达量的中位数分别为7.2×106、2.5×104、1.5×104拷贝/mg组织。PCa组较BPH组和正常前列腺组DD3的表达量显著增高(P<0.01),而BPH组和正常前列腺组间则差异无显著性(P>0.05)。DD3表达量与临床分期和分化程度之间均无明显相关性。DD3 mRNA曲线下面积(AUC-ROC)为0.937(95%CI:0.879～0.995)。当临界值为1.4×105拷贝/mg组织时,灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、阳性拟然比(+LR)、阴性拟然比(-LR)分别为90.5%、85.0%、86.7%、76.0%、94.3%、6.03和0.11。结论:DD3 mRNA的表达仅限于前列腺组织,具有良好的组织特异性。DD3 mRNA表达在PCa组织中显著升高,在正常前列腺和BPH组织中差异无显著性。DD3 mRNA可作为PCa诊断的良好标志物,在PCa早期诊断、微转移诊断、预后判断、指导治疗等方面也具有潜在的应用价值。     

趋化因子受体4联合P504S或P63在良、恶性前列腺疾病鉴别诊断中的应用

目的:评价趋化因子受体4(CXCR4)联合P504S或P63蛋白在前列腺良、恶性疾病诊断和鉴别诊断中的应用价值,为前列腺疾病的诊断、鉴别诊断提供理论依据。方法:采用EnVision两步免疫组织化学方法,检测40例未经任何抗癌治疗的前列腺癌(PCa)和30例良性前列腺增生(BPH)石蜡标本中P504S、CXCR4和P63蛋白的表达情况,结合临床分析CXCR4与PCa转移特征相关性。结果:在40例PCa中,CXCR4蛋白表达阳性率为82.5%(33/40),P504S阳性率为92.5%(37/40),P63蛋白表达阳性率为5%(2/40)。30例BPH组织中,P63表达均为阳性,P504S阳性率为3.3%(1/30),而CXCR4阳性率16.7%(5/30)。P504S联合P63对PCa的诊断正确率要高于CXCR4+P63和P504S+CXCR4。PCa中CXCR4表达与癌转移特征相关性具有统计学差异(P<0.05)。结论:P504S、CXCR4及P63对良、恶性前列腺病变的诊断及鉴别诊断都有一定的参考作用。虽然CXCR4单独应用于诊断特异性差,诊断准确率相对较低,但CXCR4联合P504S或P63诊断准确率高,对前列腺疾病的良、恶性鉴别诊断有重要临床应用价值。     

位于8q24的NOV和WISP-1基因在前列腺癌的表达

目的 探讨定位于8q24的CCN家族成员NOV基因和WISP-1基因在前列腺癌的表达.方法 采用半定量的RT-PCR方法和免疫组化法分析37例前列腺癌组织和10例正常前列腺组织中NOV和WISP-1的mRNA和蛋白的表达.结果 37例前列腺癌组织和10例正常前列腺组织中均检测到NOV mRNA表达,前列腺癌的表达水平显著高于正常前列腺组织(P<0.05),而且T3,T4期前列腺癌的表达水平显著高于T1,T2期前列腺癌(P<0.05).在37例前列腺癌中有24例(64.7%)检测到WISP-1的mRNA表达,而正常前列腺组织中均为阴性,差异具统计学意义(P<0.05).免疫组化研究显示前列腺癌组织的NOV蛋白染色强度明显高于正常前列腺组织(P<0.05).正常前列腺组织和前列腺癌组织均未检测到WISP-1蛋白.结论 NOV基因在前列腺癌的发生发展过程中起着重要作用.     

环氧化酶2 mRNA在前列腺癌组织中的表达

目的:探讨环氧化酶2(COX-2)mRNA在前列腺癌(PCa)组织中的表达及其意义。方法:采用RT-PCR方法检测32例PCa组织中COX-2 mRNA的表达并测定COX-2/GAPDH的比值,7例正常前列腺组织作为对照。结果:7例正常前列腺组织无COX-2 mRNA表达。COX-2/GAPDH与PCa G leason评分、分期呈正相关(P均<0.05)。结论:COX-2在PCa的发生发展中起重要的正性调节因子的作用。COX-2与PCa的恶性程度和进展有关,可作为判断PCa预后的指标。     

携带报告基因EGFP的CXCR4 RNA干扰质粒的构建及生物活性的鉴定

目的构建携带报告基因EGFP的CXCR4RNA干扰质粒,证实其高效抑制靶基因表达的生物活性。方法设计有发夹状结构的两条DNA序列,用PCR扩增CXCR4特异性小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA),转入带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和启动子U6的pGensil-1质粒,转化DH5a菌株,提取质粒行酶切及测序鉴定。重组质粒转染PC-3m细胞株,检测绿色荧光蛋白表达及对细胞CXCR4表达的抑制情况。结果成功构建了CXCR4靶向的RNA干扰质粒pGensil-1/siCXCR4,在靶细胞可同时表达siRNA及绿色荧光蛋白。结论pGensil-1/siCXCR4质粒的成功构建对利用基因干扰技术治疗前列腺癌转移方面的研究奠定了一定的实验基础。     

Expression of estrogen receptor (ER-alpha and ER-beta) mRNA in human prostate cancer.

OBJECTIVE: The distribution of the two estrogen receptors (ER-alpha, ER-beta) in human prostate tissue have not been fully clarified, so the present study investigated the mRNA expression of the receptors to explain the broad spectrum of estrogen activity in prostate cancer. MATERIALS AND METHODS: Four human prostate cancer cell lines (LNCap, JCA-1, DU-145 and PC-3) and 24 pairs of untreated prostate cancer tissue and noncancerous tissue from resected prostate glands were subjected to RT-PCR testing. RESULTS: Both LNCap and JCA-1 expressed the mRNA of both receptors, but DU-145 and PC-3 only expressed ER-beta mRNA. In the human prostate tissue samples, 20 of the 24 prostate cancer tissues expressed ER-alpha, and 23 of the 24 expressed ER-beta. Of the 24 noncancer tissues, 14 expressed ER-alpha mRNA and 17 expressed ER-beta mRNA. The incidence of ER-beta mRNA expression between the paired cancer and noncancer tissues was statistically significantly different (p<0.05). CONCLUSIONS: A higher incidence of ER-beta mRNA expression in untreated prostate cancer tissues was observed. Furthermore, the absence of ER-alpha mRNA and the presence of ER-beta mRNA expression in hormone-independent and/or untreated prostate cancer cells leads to a tentative speculation of the mechanism of the hormone refractory feature of prostate cancer.     

Loss of CD10 (neutral endopeptidase) is a frequent and early event in human prostate cancer

BACKGROUND: We hypothesized that the aggressive LNCaP-derived androgen-independent cell line, CL1, might differ from LNCaP in their repertoire of cell surface markers and that these differences might typify changes that occur during clinical prostate cancer progression. METHODS: The cell surface marker expression profiles of CL1 and LNCaP were examined using flow cytometry. Markedly differential gene expression was confirmed using RT-PCR and further examined using immunohistochemistry among the prostate cancer cell lines LAPC-4, LNCaP, CL1, CL2, DU145, and PC-3. The expression of the most markedly differentially expressed surface marker, CD10, was further explored in a tissue microarray containing radical prostatectomy samples from 219 hormone na?ve prostate cancer patients. RESULTS: There were marked differences in the expression of CD10, CD13, CD26, CD33, CD44, CD54, CD55, and CD104 between CL1 and LNCaP. Results from both the RT-PCR and immunohistochemistry confirmed the differential expression and found that CD10 demonstrated a pattern of expression in hormone sensitive but not hormone refractory cell lines. When CD10 expression was examined in a tissue microarray, CD10 expression was below the 25th percentile of matched normal prostate tissue in 68% of prostate cancers, below the median expression of matched normal prostate tissue in 86% of cancers, and completely absent in 34% of cancers. Samples of prostatic intraepithelial neoplasia demonstrated CD10 expression that was intermediate between normal prostatic tissue and prostate cancer. Among prostate cancer patients, CD10 expression did not correlate with Gleason score, pathological stage, or biochemical recurrence following radical prostatectomy. CONCLUSIONS: These findings demonstrate that loss or decreased expression of CD10 is an early and frequent event in human prostate cancer and implicates CD10 as a potential therapeutic target for early stage hormone sensitive prostate cancer.     

Omi/HtrA2对前列腺癌细胞的促凋亡作用

目的检测人前列腺癌细胞（PC-3M）中Omi／HtrA2的表达情况，并构建其小干扰RNA（siRNA）表达载体。探讨Omi／HtrA2对PC-3M凋亡的影响。方法以细胞免疫组织化学和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测Omi／HtrA2在前列腺癌细胞系（PC-3M）和正常前列腺细胞中的表达。利用软件辅助设计Omi／HtrA2特异性siRNA序列。体外合成后将其克隆入真核表达载体psiRNA-hHlneo。以脂质体法转染psiRNA-Omi／HtrA2载体至PC-3M中，以RToPCR和Western blot法检测psiRNA-Omi／HtrA2对Omi／HtrA2转录和表达的沉默效应。用噻唑蓝（MTT）比色法和流式细胞法检测siRNA导致Omi／HtrA2基因沉默后。PC-3M细胞凋亡的变化。结果细胞免疫组织化学和RT-PCR均显示Omi／HtrA2在PC3M细胞中高表达。酶切和DNA测序证实合成的siR-NA基因序列正确。并已被准确克隆入psiRNA-hHlneo载体中。psiRNA-Omi／HtrA2载体可特异性抑制PC3M细胞中Omi／HtrA2的表达。转染psiRNA-Omi／HtrA2载体的PC-3M细胞凋亡下调。结论促凋亡因子Omi／HtrA2可导致前列腺癌细胞凋亡，Omi／HtrA2的表达对前列腺癌的发展有重要作用。     

正常前列腺基质细胞抑制前列腺癌细胞系PC-3增殖的体外实验研究

目的 探讨前列腺癌发病的基质－上皮相互作用机制。方法 体外培养前列腺基质细胞和前列腺癌（Pca)细胞系PC－3。分别取已用于培养液作为另一种细胞的条件培养液,观察条件培养液对细胞增殖的影响。用双层软琼脂分析法混合培养前列腺基质细胞和PC－3细胞。用MTT法检测不同浓度TGFβ1对PC－3细胞增殖率的影响。用免疫组化SP法研究基质中平滑肌细胞的比例。用RT－PCR方法检测基质细胞TGFβ1的表达。结果 PC－3细胞的增殖在混合培养时受到抑制。混合培养3周PC－3细胞的增殖率对照组的41％（P＜0．01）。PC－3细胞的增殖在加入TGFβ1后受到抑制,随TGFβ浓度的增加,对PC－3细胞的抑制作用增强。随TGFβ1作用时间的延长,相同浓度的TGFβ1抑制效应更显著（P＜0．01）。前列腺基质细胞表达大量的TGFβ1。结论 前列腺基质细胞可以通过分泌TGFβ1抑制PC－3的增殖。前列腺癌的基质可能存在病变,使癌变的上皮逃脱基质的抑制作用。     

Increased expression of tumor-associated trypsin inhibitor, TATI, in prostate cancer and in androgen-independent 22Rv1 cells

OBJECTIVES: Tumor-associated-trypsin inhibitor (TATI) is frequently coexpressed with trypsinogen in tumors. Recently, we found expression of trypsinogens in prostate cancer. We have now studied whether TATI is also expressed in prostate cancer and if TATI expression is associated with Gleason grade, proliferation, and neuroendocrine differentiation. METHODS: Expression of TATI and prostate-specific antigen (PSA) was studied by immunohistochemistry and in situ hybridization, and that of chromogranin A (CgA) and Ki-67 by immunohistochemistry. Immunofluorometric assays were used to quantify TATI and PSA in serum from prostate cancer patients and in medium of 22Rv1 prostate cancer cells. RESULTS: TATI expression was weak in benign prostatic epithelium and moderate to strong in prostate cancer and high-grade prostatic intraepithelial neoplasia. There was no correlation between TATI and Ki-67 immunostaining in a tissue microarray of 115 prostate cancer cores, but strong expression of TATI was associated with higher Gleason grade (p=0.002) and CgA immunostaining intensity (p=0.012). Serum TATI was elevated in 44% (29 of 66) of patients with prostate cancer, and the levels correlated with serum PSA (p<0.0001, r=0.306). DU145, PC-3, LNCaP, and 22Rv1 cells contained TATI mRNA as determined by RT-PCR, but only 22Rv1 cells produced detectable TATI protein. The synthetic androgen R1881 decreased secretion of TATI from 22Rv1 cells. CONCLUSIONS: We demonstrate for the first time that TATI is expressed in the benign and malignant prostate. Increased TATI protein expression is found in high-grade tumors and in 22Rv1 cells in which it is regulated by androgens.     

Survivin启动子驱动腺病毒介导LRIG1基因治疗前列腺癌的体外实验

目的 由于去势抵抗性前列腺癌（CRPC）缺乏有效治疗方法,因此催生了探索新治疗模式的需求,其中靶向基因治疗可能是治疗CRPC的较理想模式;但是CRPC的靶向性基因治疗尚没有受到应有的关注.本课题拟研究Survivin启动子驱动的重组腺病毒Ad-Surp-LRIGl对前列腺癌细胞株的体外治疗效果.方法 用Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl分别感染人前列腺癌细胞PC-3M及人前列腺上皮细胞CRL-11609 RWPE-1,根据报告基因EGFR表达的不同计算病毒的细胞转染率.MTT法评估Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl对PC-3M细胞生长的抑制作用.结果 当MOI=25时,Ad-Surp-LRIGl在PC-3M细胞中的转染效率为81.24%,在CRL-11609 RWPE-1细胞中转染率为0,在两种细胞内的转染率比较差异有显著性意义（χ2=65.18,P=0.000）;Ad-LRIGl在PC-3M细胞中的转染效率为77.22%,在CRL-11609 RWPE-1细胞中转染率为71.68%,转染率比较差异无显著性意义（χ2=0.051,P=0.802）.Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl在PC-3M细胞中的转染率相比,差异无显著性意义（χ2=0.013,P=0.796）.在常规培养1d 后PBS组的细胞生长速度即开始超过Ad-Surp-LRIGl组和Ad-LRIGl组细胞,4 d 后细胞生长速度差异显著（χ2=15.37,P=0.001）,而Ad-Surp-LRIGl组和Ad-LRIGl组细胞生长速度无明显差异.结论 Ad-Surp-LRIGl能选择性转染人前列腺癌细胞PC-3M,能明显抑制体外前列腺癌细胞的生长.