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1.
一种快速mRNA差异显示技术及用于分离辐射诱导转录子 总被引:6,自引:0,他引:6
介绍一种从不同类型细胞或不同生长状态细胞中分离差异表达基因的快速mRNA差异显示技术。其特点是不用 位素标记操作简便,在普通琼脂糖凝胶电泳中就能分辨差异显示的cDNA带,便于DNA回收和进一步重组克隆。用此方法成功地分离到电离辐射诱导转录子。 相似文献
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同型半胱氨酸/半胱氨酸诱导血管平滑肌细胞中的新cDNA 总被引:16,自引:0,他引:16
同型半胱氨酸/半胱氨酸是体内的含硫氨基酸,近年来提出它们可以诱导血管平滑肌细胞的增殖,是心血管病的一个新的独立的危险因子.但其机制尚不了解,本研究目的在于克隆同型半胱氨酸/半胱氨酸诱导的新基因.应用差异显示即RNAmapping的方法,从半胱氨酸诱导的大鼠血管平滑肌细胞中,寻找有差异的条带,克隆新的cDNA.结果分离出7种上调和4种下调cDNA,并且发现其中有4个是至今尚未发现的新的cDNA.应用Northernblot分析,这4个新的mRNA其长度分别为5.0、2.0、1.8和2.2kb.它们可能在血管平滑肌细胞增殖和心血管病的发病中具有重要意义. 相似文献
3.
用显微分光光度术测定不同发育时期蚕豆子叶淀粉质体DNA含量 总被引:4,自引:0,他引:4
叙述了用显微光度术在亚细胞水平上测量蚕豆子叶细胞中淀粉质体Feulgen-DNA含量,显示了在不同发育时期蚕豆子叶细胞中的淀粉体DNA含量的动态变化。随着发育时期的递增,淀粉体DNA拷贝数不断地增长。生长中期的淀粉体DNA含量平均数为2.14(任意单位),到了成熟期淀粉体DNA平均含量增长到10.12(任意单位)。在成熟期,子叶细胞中的淀粉体DNA含量比生长中期增长了9.6倍。通过生物统计分析,在 相似文献
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喉癌差异表达cDNA序列的分离与初步鉴定 总被引:12,自引:0,他引:12
分离和克隆人喉癌中新的相关基因将有助于提示喉癌的易感性与癌变机制。运用mRNA差异显示法对2例成人喉癌组织及配对癌旁正常组织的基因表达进行研究,分离到35个差异显示片段;用反向Northern点杂交筛选到6个差异片段,经克隆、测序和匹配分析,得12条不同cDNA序列,其中4条为新基因序列,另外8条与已知基因高度同源。将12条cDNA序列固定在膜上,用来自喉癌和配对正常组织的总cDNA探针与其杂交和 相似文献
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λDNA导入引起小麦染色体变异的研究 总被引:5,自引:0,他引:5
小麦种子从萌动至2叶期,用λDNA进行浸滴处理,D1代出现花粉母细胞染色体变异的植株占观察株的73.3%,染色体变异的细胞占观察细胞数的28.3%。主要有染色体落后、单价体、染色体桥、多价体、染色体多极分离,染色体螺旋化不同步,异常二分体和卤分体及微核等类型,随世代增进,染色体行为趋于稳定,但不同个体间存在的较大差异。这种复杂的染色体变异可能是外源DNA在受体整合过程中的细胞学反应。 相似文献
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大豆单染色体的显微分离及体外扩增 总被引:18,自引:0,他引:18
采用玻璃针分离法,通过显微操作器成功地分离到大豆(GlycinemaxL.)单染色体。将分离到的两条大豆染色体分别放入两个0.5mLEppendorf管中,经Sau3A酶切,并在染色体DNA片段两端加上Sau3A人工接头后,进行两轮PCR扩增,得到0.3~3kb之间的DNA片段。Southern杂交表明,这些大豆单染色体扩增片段与大豆基因组DNA之间有同源性,从而证明两条单染色体DNA确实已被成功地扩增了,同时表明两条不同的大豆单染色体扩增产物存在一定的差异。在常规的倒置显微镜下对小型染色体进行了显微分离,为小型单染色体DNA的体外扩增及微克隆奠定了基础。 相似文献
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为建立鸭乙型肝炎病毒LJ-76的转染细胞系,将LJ-76病毒DNA插入到pUC19的EcoRⅠ位点上,分离得到含有双拷贝LJ-76DNA的重组质粒.通过磷酸钙沉淀方法,将经CsCl等密度离心纯化的LJ-76DNA双体导入到人肝癌细胞BEL7402中.收集转染细胞的培养液进行蔗糖密度梯度离心,所得沉淀经检测发现含有LJ-76DNA并具有特异性DHBV内源性DNA多聚酶活性;对上述样品通过DotEIA检测DHBV核心抗原及表面抗原结果为阳性.Southernblot分析表明转染细胞内存在病毒DNA复制中间体cccDNA、ssDNA和rcDNA,而cccDNA被认为是复制活动较为活跃的标志.电镜观察转染细胞的上清发现有病毒颗粒的存在. 相似文献
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董关木 《微生物学免疫学进展》1994,(4)
人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)抗3'─叠氮─3'─脱氧胸腺嘧啶(AZT)抗药株经体外感染C8166淋巴细胞在高浓度AZT条件下筛选获得,并暂命名为HIV─1─R株。该抗药株与HTLV─ⅢB株相比,在同一感染复数(M01)病毒量感染C8166细胞,经不同浓度的AZT处理后,其复制的病毒量和对AZT的敏感性有显著的差异,抗药株感染C8166细胞,加AZT处理后,分离细胞DNA作PCR扩增后分析,特异性病毒的DNA量比敏感株高100倍以上,显示其抗药性作用点在病毒逆转录DNA前。 相似文献
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牵牛属生殖细胞和精细胞中细胞器DNA的研究 总被引:1,自引:1,他引:0
用DAPI荧光技术观察了大花牵牛( Pharbitis lim bata Lindl.)和圆叶牵牛(P. purpurea(L.) Voight)生殖细胞的细胞质DNA及其在精细胞形成过程中的动态。牵牛属这两个种的生殖细胞均为细长形,具有大量细胞器DNA。刚形成的一对精细胞大多数一端钝,另一端呈尾状。较后期的精细胞多呈凸透镜状。生殖细胞分裂形成的一对精细胞多是同型的,也有的表现为异型。精细胞的核多偏于细胞的一端。在细胞质中有大量细胞器DNA分布。精细胞中的细胞器DNA 荧光点在大小及荧光强度上有所不同,可能代表线粒体和质体这两种不同的细胞器DNA。大花牵牛与圆叶牵牛之间,无论是生殖细胞或精细胞在细胞形状和细胞质DNA 分布状况上基本相似。一个明显的差异是,后者的细胞质DNA 荧光点体积较小和荧光弱。研究表明,精细胞存在具有DNA 的细胞器,为牵牛花细胞质具有双亲遗传或父系遗传的潜能提供了细胞学证据。本文还对研究的两个种的精细胞存在同型和异型的现象,以及精细胞在核质比率上的特点与质体双亲遗传的关系进行了讨论 相似文献
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本文对mRNA差异展示法进行了改良.利用一组随机引物与来源于mRNA翻译起始位点区域的引物组合进行RT-PCR,使差异展示的片段来源于蛋白编码区,并对差异展示的条件进行了优化.应用此法对人鼻咽上皮与软腭口腔粘膜上皮的基因表达进行了比较研究,得到了10个在鼻咽上皮特异表达的cDNA片段,并对其中的5个片段进行了亚克隆和序列分析.通过与GeneBank数据库中的序列进行同源性比较,确定其中两个片段为未知新序列,Northern杂交证实其中一个片段NES1为鼻咽上皮特异性表达片段. 相似文献
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Identification of genes regulated by muscarinic acetylcholine receptors: application of an improved and statistically comprehensive mRNA differential display technique 总被引:18,自引:0,他引:18
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von der Kammer H Albrecht C Mayhaus M Hoffmann B Stanke G Nitsch RM 《Nucleic acids research》1999,27(10):2211-2218
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Tetsuhiro Moriya Kazuko Kita Shigeru Sugaya Chieko Wano Nobuo Suzuki 《Biological Sciences in Space》2002,16(1):12-17
A major issue in radiation and space biology is whether gene expression levels are altered in cells exposed to gravity-changing stress. In the present study, genes up- or down-regulated in radiation-sensitive human RSa cells cultured under gravity-changing conditions, were identified using a PCR-based mRNA differential display method. Exposure of cells to gravity-changing stress was performed by free-fall with a drop-shaft facility or by an airplane-conducted parabolic flight. Among the candidates for gravity-changing stress-responsive genes obtained by the differential display analysis, the lactate dehydrogenase A gene (LDH-A) was confirmed by Northern blotting analysis to exhibit increased expression levels. The gravity-changing stress consisted of a combination of microgravity and hypergravity. However, exposure of the cells to hypergravity produced by centrifuge only slightly affected the LDH-A mRNA expression. Thus, LDH-A was found to be a candidate for the genes which play a role in the cellular response to gravity-changing stress, and mainly to microgravity. 相似文献
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RNA isolation from high-phenolic tea leaves and apical buds 总被引:6,自引:0,他引:6
Lakhvir Lal Rashmita Sahoo Rajesh Kumar Gupta Priti Sharma Sanjay Kumar 《Plant Molecular Biology Reporter》2001,19(2):181-181
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Xu Nanfei Johns Barbara Pullman Gerald Cairney John 《Plant Molecular Biology Reporter》1997,15(4):377-391
Performing RNA differential display analysis on small tissue samples is difficult since much RNA, the initial template for the reaction, is lost during conventional isolation procedures. We have developed a rapid method which employs oligo-dT beads to capture mRNA from cell lysates. Subsequent reactions are primed directly from the beads, thus RT and PCR reactions can be completed within a few hours of tissue harvest. This approach allows us to perform differential display on a single pine embryo. We describe strategies for distinguishing classes of co-migrating bands excised from differential display gels and outline a PCR-based method for confirming differential expression of large numbers of cloned bands in cases where RNA quantities are limiting. 相似文献
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降低mRNA差异显示技术假阳性率的一种方法 总被引:17,自引:0,他引:17
为了探讨降低mRNA差异显示技术假阳性率的方法 ,进一步提高此技术的可靠性 ,提取了手术切除肝癌及非癌肝组织成对标本的总RNA ,逆转录获得cDNA片段 ,以mRNA差异显示方法筛选差异表达基因 ,选取较明显的一条差异表达条带 ,行进一步PCR扩增 .分别对PCR产物及其经TA克隆后随机挑选的 6个单克隆质粒DNA进行序列分析 ,并通过GenBank BLAST数据库进行序列的同源性比较 ,以Northern杂交予以来源确认 .自 72 0余条扩增条带中共选出 2 8条差异条带 .序列分析及同源性比较表明 ,所选择条带的PCR产物为一可能的新基因片段 ;而随机选择的 6个TA克隆质粒DNA中 ,有 4个为同一已知基因片段 ,一个为另一已知基因片段 ,一个为一可能的新基因片段 .同源性比较表明 ,PCR产物直接测序所得序列与TA克隆质粒DNA的 6个片段不具同源性 .结果表明 ,mRNA差异显示条带可能由 1条以上分子量相似的片段构成 ,直接对PCR产物行序列分析并以其为探针进行Northern杂交 ,是导致出现假阳性片段的原因之一 .将PCR产物进行TA克隆 ,对单克隆质粒DNA进行序列分析并以其为探针进行Northern杂交 ,可能是解决此问题的一种较好方法 . 相似文献