榄香烯体外增强人脑胶质瘤U251细胞对γ射线敏感性的研究

目的 探讨榄香烯体外增强人脑胶质瘤U251细胞对γ射线敏感性的机制研究。方法 人脑胶质瘤U251细胞分为4组：空白组、加药组（榄香烯治疗）、放射组（单独γ射线照射）和联合组（榄香烯联合γ射线照射），应用克隆形成计数法，绘制细胞放射生存曲线，计算增敏比，流式细胞仪（FCM）检测细胞周期，电镜观察不同方法处理的U251细胞超微结构的改变，逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）检测c-myc和bcl-2基因的表达。结果 榄香烯增强γ射线对U251细胞株抑制率，呈剂量的依赖性，榄香烯增强U251细胞对γ射线敏感的比值为1．38，FCM检测榄香烯增强γ射线对U251细胞的阻滞作用，导致G2／M期细胞比例明显升高，联合组细胞电镜下见细胞核分裂；RT-PCR证实榄香烯增强γ射线对U251细胞c-myc和bcl-2基因表达的抑制作用。结论 榄香烯对U251细胞有放射增敏作用，其作用机制可能与下调bcl-2和c-myc基因表达有关，诱导U251细胞凋亡和对细胞G2／M期阻滞有关。     

人脑胶质瘤U251耐药细胞株的建立及耐药相关蛋白的筛选

我们通过模拟模拟临床给药方法。以阿霉素为诱导剂，建立理想的多药耐药细胞模型。并对已建立的耐药细胞株进行了多药耐药基因1（MDR-1）编码蛋白P-gp以及其它的耐药基因表达的蛋白如多药耐药蛋白耐药相关蛋白（MRP）、肺耐药蛋白（LRP）、谷光甘肽转移酶，π（GST-π）和DNA拓扑异构酶Ⅱ（TOPOⅡ）进行了定量研究，为阐明胶质瘤多药耐药机制并逆转耐药奠定基础。     

泌尿系肿瘤的多药耐药与逆转

肿瘤对化疗药物耐药是肿瘤难以治愈的主要原因，本文概述了泌尿系肿瘤多药耐药的机制，Ｐ－糖蛋白在正常组织，泌尿系肿瘤中的表达，并对多药耐药逆转研究的现状做了介绍。     

反义核酸逆转人肝癌细胞株多药耐药性的效应

化疗是原发性肝癌晚期病人和术后肝癌复发的主要治疗手段之一，但是肝癌病人对多数化疗药物易产生多药耐药性(multidrug resistance，MDR)，导致化疗失败。本研究利用反义RNA技术采用重组腺病毒AdEasy系统，构建了携带反义多药耐药基因片段的重组腺病毒，观察反义核酸对MDR的逆转效应，报告如下。     

中药逆转肝癌多药耐药的研究进展

1943年,耶鲁大学的Gilman等首次将氮芥用于淋巴瘤的治疗,揭开了现代肿瘤化疗的序幕。近年来随着新的化疗药物和剂型的不断问世,化疗已成为肿瘤治疗的主要方法之一。然而化疗在肝癌治疗中的作用十分有限,主要原因之一就是多药耐药（multi-drug resistance,MDR）。MDR是指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物产生抗药性的同时对其他结构和作用机理不同的抗肿瘤药物也产生交叉抗药性。多药耐药的形成机制相当复杂,主要同P-糖蛋白（P-gP）、多药耐药相关蛋白（MRP）、肺耐药相关蛋白（LRP）、     

125I-神经生长因子对人脑胶质瘤细胞株U251的作用

目的 探讨125I-神经生长因子(125I-NGF)对U251细胞的杀伤能力及作用机制.方法 通过噻唑蓝(MTT)试验检测分别以18.5、37.0、74.0、148.0、296.0、592.0、1184.0、1480.0、1850.0、2590.0、3330.0、3700.0 kBq/ml 125I-NGF处理的U251的吸光度值,选择吸光度值趋于最低时最小125I-NGF浓度为其最低有效浓度.采用平板克隆形成试验,比较分别给予完全培养液、592 kBq/mlNa125I、1 mg/L NGF和592 kBq/ml 125I-NGF溶液处理的各组细胞克隆形成率,评价上述因素处理后U251细胞的增殖能力.采用放射自显影技术观察细胞内银颗粒分布,从而反映125I-NGF进入细胞的能力.并通过彗星试验及微核形成试验观察125I-NGF作用后U251细胞DNA的损伤,有明显彗尾及微核形成者DNA损伤严重.通过流式细胞仪检测125I-NGF作用后U251 G0/G1及S期细胞比例变化.结果 125I-NGF的最低有效浓度为592 kBq/ml,在此浓度下,125I-NGF可以有效进入细胞核内并损伤靶细胞DNA,经125I-NGF处理的胶质瘤细胞克隆形成率(0.02±0.01)较对照组(0.33±0.02)明显降低(P<0.01).125I-NGF作用后S期细胞比例(10.69±0.02)较对照组(35.47±0.02)下降,G0/G1期细胞比例(75.10±0.22)较对照组(53.17±0.03)升高(P<0.01).结论 125I-NGF在U251细胞中可以被转运入细胞核内,并可以有效杀伤靶细胞,其杀伤作用主要针对S期胶质瘤细胞.     

尿系肿瘤的多药耐药与逆转

肿瘤对化疗药物耐药是肿瘤难以治愈的主要原因，本文概述了泌尿系肿瘤多药耐药的机制，Ｐ－糖蛋白在正常组织、泌尿系肿瘤中的表达，并对多药耐药逆转研究的现状做了介绍。     

大肠癌多药耐药逆转的临床研究

目的：探讨环孢霉素A（CsA）联合他莫昔芬（TAM）逆转大肠癌多药耐药的临床疗效。方法：用免疫组织化学技术对大肠癌的P－蛋白表达进行检测，筛选阳性病例同时进行骨髓策小转移测定，选择二者皆为阳性患者作为研究对象，并随机分为两组，比较CsA联合TAM加化疗组与单纯化疗组疗效。结果：在大肠癌中P－蛋白表达阳性率为66．6％（56／84），在p糖蛋白（P-gp）阳性病例中，甲髓微小转移（BMM）阳性率为57．1％（32／56）。CsA联合TMA对逆转大肠癌多药耐药有一定作用，加速转剂组疗效高于不加逆转剂组（P＜0．05），结论：CsA联合TAM对逆转大肠癌多药耐药的临床应用安全，且有一定疗效。     

榄香烯抑制脑胶质瘤细胞增殖的比较研究

目的比较研究榄香烯对胶质瘤细胞和正常神经胶质细胞的不同作用效果。方法采用噻唑蓝(MTT)方法检测榄香烯体外抑制大鼠C6胶质瘤细胞增殖的有效浓度；原代培养SD大鼠星形胶质细胞，比较观察不同浓度榄香烯对于C6胶质瘤细胞和原代星形胶质细胞的作用效果差异。结果榄香烯能显著抑制C6细胞增殖，IC50为19．73～39．75mg／L。体外比较观察，榄香烯作用浓度在80～100mg／L以内，不会引起正常星形胶质细胞的死亡和形态学的改变。然而。当药物浓度达30-40mg／L，C6胶质瘤细胞大部分发生了脱壁和死亡。结论榄香烯的抗肿瘤增殖作用具有一定的特异性。     

胰腺癌多药耐药细胞株BxPC-3/ADM的建立及耐药机制的初步探讨

目的 构建胰腺癌多药耐药细胞株BxPC-3/ADM,通过动态监测诱导耐药过程,探讨其耐药的可能机制.方法 逐步增加阿霉素浓度对BxPC-3细胞进行诱导,在不同的阿霉素诱导浓度,MTT法检测细胞对多种化疗药物的耐药指数,RT-PCR和Western印迹法检测细胞MDR1和MRP mRNA和蛋白的表达.结果 成功构建多药耐药细胞株BxPC-3/ADM;在0.05 μg/ml至8 μg/ml阿霉素诱导浓度,细胞对5-Fu、MMC和Gem的耐药指数无明显增加;在16 μg/ml浓度3种化疗药物的耐药指数有较明显上升,同时伴有MDR1 mRNA表达的明显增加;至32 μg/ml 5-Fu和Gem的耐药指数未再有继续上升,而MMC的耐药指数则继续上升,同时MDR1 mRNA表达未再增加,而MRP mRNA表达则明显增加.Western印迹实验显示MDR1和MRP蛋白表达变化与mRNA表达变化趋势一致.结论 MDR1基因在诱导早期的耐药中起主导作用,在后期则和MRP基因协同发挥作用.     

基于Isthmin和RGD基序的复合物对胶质瘤U251的治疗作用

目的 探讨基于Isthmin和BGD基序的复合物对胶质瘤U251的治疗效应.方法 构建Isthmin和RGD基序的复合物,并建立胶质瘤U251移植瘤模型,体内外观察其对U251细胞和血管内皮细胞的影响.结果 该复合物能有效诱导U251细胞的凋亡,抑制肿瘤血管的生成,从而抑制肿瘤的生长和延长荷瘤小鼠的平均生存率.结论 该复合物能同时靶向肿瘤和血管内皮细胞,为胶质瘤的基因治疗提供了较理想的策略.     

阿霉素免疫毫微粒对肝癌细胞多药耐药的逆转

目的 探讨阿霉素免疫毫微粒对多药耐药(multidrug resistance,MDR)的逆转作用.方法 检测载阿霉素的免疫毫微粒对耐阿霉素人肝癌细胞株SMMC-7721/ADM的体外杀伤作用及与SMMC-7721/ADM的结合活性.结果 阿霉素免疫毫微粒具有比普通阿霉素毫微粒更强的体外逆转MDR的功能,与SMMC-7721/ADM紧密结合.结论 阿霉素免疫毫微粒有体外逆转MDR的功能,其原因可能是免疫毫微粒与肿瘤细胞紧密结合,所载药物释放后形成膜内外的药物浓度梯度差而使药物进入细胞内.     

应用热诱导凋亡法制备靶向胶质瘤细胞的树突状细胞疫苗

目的 应用热诱导凋亡U251细胞致敏树突状细胞,观察其诱导特异性细胞毒性T细胞的能力,探讨其对肿瘤细胞的杀伤机制.方法 应用改良Inaba法,从小鼠骨髓细胞中诱导出树突状细胞,应用电镜和流式细胞技术行表型鉴定,然后和经热诱导凋亡的胶质瘤细胞共培养获得树突状细胞疫苗,细胞计数试剂盒( CCK-8)检测疫苗在体外促T细胞增殖和杀伤肿瘤细胞作用,将疫苗经尾静脉注入荷瘤裸鼠体内,检测体内肿瘤生长抑制作用.结果 44℃孵育3h能有效诱导胶质瘤细胞凋亡,凋亡率达(40.10±1.08)％.负载凋亡细胞抗原的树突状细胞在体外能有效促进T细胞增殖,增加干扰素(IFN)-γ的分泌,并随效靶比增加,对胶质瘤细胞的杀伤率增大.体内注射疫苗4周后,治疗组肿瘤体积(301.704±21.659) mm3,空白对照组为(487.116 ±65.975) mm3,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 热诱导凋亡胶质瘤细胞致敏的树突状细胞能在体外有效促进T细胞增殖,诱导特异性细胞毒性T细胞杀伤胶质瘤细胞,有效抑制体内肿瘤生长.     

RNA干扰逆转人胃癌细胞多药耐药的研究

目的：研究RNA干扰沉默多药耐药（multidrug resistance,MDR）基因对胃癌多药耐药细胞株BGC-823/5-Fu生长的影响。方法：构建靶向MDR1的shRNA干扰质粒转染人胃癌多药耐药细胞株BGC-823/5-FU,噻唑蓝（MTT）法检测耐药细胞对5-Fu的敏感性,实时荧光定量PCR（Real-time-PCR）检测MDR1 mRNA表达的变化,Western blot检测各组细胞P-gp表达的变化,流式细胞术检测细胞周期变化、凋亡情况。结果：与RNAi-control组和normal组相比,RNAi-MDR1组细胞干扰质粒细胞的IC50明显降低,为2.104±0.242（P〈0.05）,敏感性的相对逆转率为76.8%;MDR1 mRNA表达明显下调（P〈0.05）;P-gp的表达水平降低（P〈0.05）;凋亡率明显升高至（5.757±0.684）%。结论：应用RNA干扰有效抑制了MDR1的表达,使P-gp的表达降低,增强了BGC-823/5-Fu细胞对5-Fu的敏感性,为寻找逆转胃癌细胞多药耐药有效方法奠定了基础。     

雌激素受体真核表达质粒对乳腺癌耐药细胞耐药性和细胞增殖的影响

目的　研究雌激素受体 (ER )表达质粒对MCF 7/ADR乳腺癌阿霉素耐药细胞耐药性和细胞增殖的影响。方法　Westernblot法检测MCF 7细胞和MCF 7/ADR细胞ER状态。构建ER的真核细胞表达质粒 pCER ,导入MCF 7/ADR细胞 ,流式细胞仪检测细胞周期分布 ,MTT法检测细胞生长。结果　MCF 7细胞ER为阳性 ,MCF 7/ADR细胞ER为阴性。成功构建真核细胞表达质粒 pCER ,转染MCF 7/ADR细胞 ,获得阳性克隆MTER/ADR。与对照组相比 ,MTER/ADR生长速度增快 ,S期细胞为 17.2 3 % (对照组为 14 .66% ) ,细胞对阿霉素的耐药性下降 ,阿霉素为 3mg/L时对细胞的抑制率为 45 % ,大于对照组细胞的抑制率 (为 2 4% ) ;且雌二醇 (E2 )能增加阿霉素对MTER/ADR细胞生长的抑制作用。结论　MCF 7/ADR乳腺癌耐药细胞的耐药性与其雌激素受体的表达缺失有一定关系。     

逆转mdr1基因导致肿瘤多药耐药性的研究进展

目的 介绍目前mdr1基因导致肿瘤对化疗药物产生多药耐药性的研究进展。方法 采用文献回顾的方式对肿瘤研究中采用的各种方法逆转mdr1基因导致肿瘤多药耐药性的文献进行综述。结果 mdr1基因及其表达产物P-糖蛋白的过度表达是导致肿瘤具有多药耐药性的重要原因，可以从mdr1基因的mRNA和P-糖蛋白两个方面进行有效的逆转肿瘤多药耐药性。结论单一阻抑mdr1基因或P-糖蛋白的表达，以逆转肿瘤多药耐药性的临床试验结果并不满意，多种方法联合应用是今后逆转肿瘤对化疗药物多药耐药性的研究热点。     

短发夹RNA干扰表达质粒逆转人大肠癌细胞LOVO／5-Fu多药耐药的研究

目的：探讨短发夹RNA（shRNA）沉默多药耐药MDR）基因对大肠癌多药耐药细胞株LO-VO/5-Fu生长的影响。方法：构建靶向MDR1的shRNA干扰质粒转染人大肠癌多药耐药细胞株LO-VO/5-Fu,MTT法检测各组细胞对5-Fu的敏感性,流式细胞术检测细胞周期变化、凋亡情况及P-糖蛋白（P-gp）的表达,Realtime-PCR检测各组细胞MDR1 mRNA表达的变化,Western blot检测各组细胞P-gp表达的变化。结果：与对照组质粒组和未转染组相比,转染含shRNA干扰质粒细胞的实验组IC50明显降低,为（2.304±0.232）μmol/L,且差异有统计学意义（P〈0.05）,敏感性的相对逆转率为73.8%;凋亡率明显升高为（5.767±0.694）%（P〈0.05）;MDR1 mRNA表达明显下调（P〈0.05）;P-gp的表达水平降低（P〈0.05）。结论：靶向MDR1的shRNA干扰质粒有效抑制了MDR1的表达,使P-gp的表达降低,从而增强了LOVO/5-Fu细胞对5-Fu的敏感性,有可能为临床上克服大肠癌化疗过程中出现的耐药提供新的作用靶点和治疗途径。     

AP-1反义寡聚脱氧核苷酸逆转人膀胱癌耐药细胞多药耐药的实验研究

目的 观察以激活剂蛋白-1(AP-1)位点为靶序列的特异性反义寡聚脱氧核苷酸(a-sODNs)对人膀胱癌耐药细胞株多药耐药性的逆转作用。方法 设计针对谷胱甘肽(GSH)生物合成的限速酶γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因启动子区域AP-1序列的特异性asODNs，用阳离子脂质体包被后转染人膀胱癌细胞株BIU87及其多药耐药(MDR)亚株BIU87／A，然后分别用定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法[以β-肌动蛋白(β-actin)为内参照]、荧光分光光度法、MTT法等检测AP-1-asODNs对两株细胞γ-GCSmRNA表达、细胞内GSH水平及其对6种抗癌药物肿瘤细胞抑制率的变化。结果 AP-1-asODNs转染72h后，BIU87和BIU87／A细胞的γ-GCS mRNA的表达和细胞内GSH的水平均出现下降。同时6种抗癌药物对反义转染后的两株细胞的抑制率大部分都有所提高。结论 γ-GCS特异的AP-1-asODNs可通过降低细胞内的GSH水平增强膀胱癌细胞对化疗的敏感性，逆转肿瘤细胞的耐药。     

热诱导人胶质瘤U251细胞凋亡作用

目的 观察不同加热温度及不同加热时间对人胶质瘤U251细胞凋亡的影响.方法 采用恒温加热(43、44、45℃各1、2、3、4 h)处理细胞,后继续培养12 h.应用Annexin V-FITC/PI双染、瑞氏-姬姆萨染色、PI单染检测细胞凋亡率、凋亡细胞形态学、细胞周期生化学特征的变化情况.结果 随温度升高和诱导时间延长U251细胞凋亡率增加,44℃3 h凋亡率最高达40.10%(P<0.01);光镜下可见凋亡细胞出现膜小泡,凋亡小体;PI单染有凋亡峰及细胞周期改变.结论 44℃热诱导3 h是促使U251细胞凋亡的最佳条件,热诱导凋亡细胞具有典型的形态、生化学特征变化.     

多药耐药基因和多药耐药相关蛋白基因在食管、贲门癌中的表达

目的　探讨多药耐药基因(MDR1)和多药耐药相关蛋白基因(MRP)在食管癌、贲门癌中表达的临床意义。　方法　采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR),对29例食管癌、贲门癌癌组织及癌旁组织中MDR1和MRP的表达进行检测。　结果　癌组织中MDR1阳性率为65.5%,高于癌旁组织中MDR1的阳性率,为37.9%(P<0.05),癌组织MDR1信使核糖核酸(mRNA)表达水平也显著高于癌旁组织(P<0.01);癌组织的MRP阳性率为48.3%,高于癌旁组织(27.6%),但无差异(P>0.05),而癌组织MRPmRNA表达水平与癌旁组织比较则有差异(P<0.05);中、低分化肿瘤的MDR1和MRP表达阳性率增高,两基因的mRNA表达水平显著高于高分化肿瘤(P<0.05)。　结论食管、贲门癌具有内源性多药耐药性;MDR1和MRP表达与食管、贲门癌的组织学类型及TNM分期无关,但可反映其肿瘤组织分化不良的生物学特征