mTOR/P70S6K 信号通路在宫颈癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨 mTOR/ P70S6K 信号通路在宫颈癌组织中的表达水平及其相关临床诊断、治疗意义。方法收集2012年1月—2014年1月手术切除或进行活检的正常宫颈组织65例,宫颈癌组织、癌旁组织各85例,提取组织中的 mRNA,应用 RT-PCR 的方法来检测3种组织中 mTOR 和 P70S6K mRNA 的表达水平,并进行分析。结果宫颈癌组织中 mTOR、P70S6K mRNA 的表达明显高于癌旁组织及正常组织(P <0．05),mTOR、P70S6K mRNA 水平在宫颈癌组织、癌旁组织及正常组织中均呈正相关(P <0．05)。结论 mTOR 信号通路在宫颈癌组织中处于活化状态,其在宫颈癌的发生发展以及向其他部位转移中具有重要作用,是一个诊断和治疗的分子靶点。     

葛根素经p53/GLIPR1途径调节膀胱癌UMUC-3细胞增殖及侵袭的机制研究

摘要：目的:探讨葛根素经p53/GLIPR1途径调节膀胱癌UMUC-3细胞增殖及侵袭的机制。方法:设膀胱癌UMUC-3细胞组、氟尿嘧啶组(80. 0μg·ml-1)、葛根素低、高剂量组(剂量分别为60. 0μg·ml-1、120. 0μg·ml-1),置于CO2培养箱（37℃、5%CO2、2%O2、93%N2）培养72 h。细胞培养结束后,测定各组UMUC-3细胞增殖水平、侵袭能力、凋亡率水平以及p53、GLIPR1基因蛋白水平。结果:氟尿嘧啶组、葛根素低、高剂量组吸光度（A）值、存活率水平、克隆形成数目、穿膜数、p53 m RNA、蛋白水平低于UMUC-3细胞组（P<0. 05）,凋亡率、GLIPR1 m RNA、蛋白水平高于UMUC-3细胞组（P<0. 05）;葛根素低剂量组A值、存活率水平、克隆形成数目、穿膜数、p53 m RNA、蛋白水平高于氟尿嘧啶组（P<0. 05）,凋亡率、GLIPR1 m RNA、蛋白水平低于氟尿嘧啶组（P<0. 05）;葛根素高剂量组A值、存活率水平、克隆形成数目、穿膜数、p53 m RNA、蛋白水平低于氟尿嘧啶组（P<0. 05）,凋亡率、GLIPR1 m RNA、蛋白水平高于氟尿嘧啶组（P<0. 05）。结论:葛根素通过抑制p53 m RNA、蛋白的表达,促进GLIPR1 m RNA、蛋白的表达进而抑制膀胱癌细胞的增殖及侵袭,促进膀胱癌细胞的凋亡。     

mTOR/P70S6K信号通路在宫颈癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨m TOR/P70S6K信号通路在宫颈癌组织中的表达水平及其相关临床诊断、治疗意义。方法收集2012年1月—2014年1月手术切除或进行活检的正常宫颈组织65例,宫颈癌组织、癌旁组织各85例,提取组织中的mRNA,应用RT-PCR的方法来检测3种组织中m TOR和P70S6K mRNA的表达水平,并进行分析。结果宫颈癌组织中m TOR、P70S6K mRNA的表达明显高于癌旁组织及正常组织(P<0.05),m TOR、P70S6K mRNA水平在宫颈癌组织、癌旁组织及正常组织中均呈正相关(P<0.05)。结论 m TOR信号通路在宫颈癌组织中处于活化状态,其在宫颈癌的发生发展以及向其他部位转移中具有重要作用,是一个诊断和治疗的分子靶点。     

雷帕霉素通过mTORC1/p70S6K通路调控大鼠系膜细胞增殖及细胞周期的机制研究

为了探究雷帕霉素对大鼠系膜细胞增殖、细胞周期的影响及其作用机制,将大鼠系膜细胞(HBZY-1)分为以下6组:对照组(control)、血小板衍生生长因子(platelet derived growth factor, PDGF) 20 ng·mL-1组、PDGF+雷帕霉素1、10、100和1 000 nmol·L-1组; MTT法和流式细胞术检测雷帕霉素(1、10、100、1 000 nmol·L-1)作用后对细胞增殖和周期的影响; Western blot法检测周期蛋白D1 (cyclin D1)、周期蛋白E (cyclin E)、周期素依赖性蛋白激酶2(cyclin-dependent kinase 2, CDK2)、周期素依赖性蛋白激酶4 (cyclin-dependent kinase 4, CDK4)、p70S6K/p-p70S6K和p27的蛋白表达; Real-time-PCR法检测p27 mRNA。结果显示,雷帕霉素能显著抑制PDGF刺激系膜细胞(glomerular mesangial cells, MCs)引起的增殖,且呈剂量及时间依赖性,但随着浓度增加(1～1 00...     

粉防己甲素抑制人结肠癌细胞增殖与Wnt/β-catenin信号的关系研究

目的研究粉防己甲素(tetrandrine,Tet)对人结肠癌细胞增殖的抑制作用及可能的机制。方法采用结晶紫染色和流式细胞分析检测Tet对HCT116细胞增殖的抑制作用;利用流式细胞术分析和Annexin-V EGFP染色检测Tet对HCT116细胞凋亡的影响;利用萤光素酶报告质粒法检测Tet对Wnt/β-catenin信号转导的影响;采用Western blot检测Tet对HCT116细胞内β-catenin蛋白水平的影响。结果与对照组相比,Tet能抑制HCT116细胞增殖,在5μmol·L-1时已明显抑制细胞增殖(P<0.05);流式分析和Annexin-V EGFP免疫荧光染色检测结果均显示,Tet能明显诱导HCT116细胞凋亡;与对照组相比,Tet处理组LEF/TCF4和Myc/Max报告质粒萤光素酶活性降低,并且Tet处理组细胞内β-catenin蛋白水平也明显下降。结论 Tet能抑制HCT116细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与Tet通过降低细胞内β-catenin蛋白水平,抑制Wnt/β-catenin信号转导有关。     

胃癌组织中雷帕霉素靶蛋白/70 ku核糖体蛋白S6激酶信号通路的表达及临床意义

目的 分析雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、70 ku核糖体蛋白S6激酶（P70S6K）的表达水平与胃癌常见临床病理因素的关系.方法 采用逆转录聚合酶链反应技术,蛋白质印迹技术（Western-blot）检测32例胃癌患者癌组织、癌旁胃组织以及22例非胃癌患者胃组织中磷酸化雷帕霉素靶蛋白（mTOR）及磷酸化70 ku核酸体蛋白S6激酶（P70S6）K mRNA和蛋白水平的表达情况.结果 p-mTOR mRNA在胃癌组织中的表达水平（0.61±0.11）明显高于癌旁胃组织（0.43±0.10）及非胃癌胃组织（0.39 ±0.07）,p-P70S6KmRNA在胃癌组织中的表达水平（0.63 ±0.13）亦明显高于癌旁胃组织（0.45 ±0.14）及非胃癌胃组织（0.44±0.15）,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;mTOR mRNA和P70S6K mRNA在胃癌组织中的表达呈正相关（r=0.521,P=0.033）;Western-blot检测结果也证实p-mTOR及p-P70S6K在胃癌组织中的表达高于癌旁胃组织及非胃癌胃组织;mTOR及P70S6K mRNA在胃癌组织中的表达水平与病理分期、淋巴结转移等明显相关,而与肿瘤直径、性别等无明显关系.结论 mTOR/P70S6K信号通路在胃癌组织中过度表达可能是胃癌发生的重要机制之一.     

灵芝酸C2调控S6K/SREBPs信号通路对肝细胞脂代谢的影响及机制研究

目的:研究灵芝酸C2(GAC2)的体外降脂作用,并基于核糖体S6蛋白激酶(S6K)/固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)信号通路探讨其可能机制。方法:以人肝细胞HL-7702为对象,采用MTT法考察低、中、高剂量(5、10、20μmol/L,下同)GAC2作用后细胞的相对活力;以洛伐他汀为阳性对照,采用酶联免疫吸附测定法检测低、中、高剂量GAC2作用后细胞中胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)的含量,并采用尼罗红染色法观察细胞内的脂质堆积情况;转染SREBPs报告基因质粒后,以25-羟基胆固醇(25-HC)为阳性对照,采用荧光素酶报告基因法检测低、中、高剂量GAC2作用后细胞中SREBPs荧光素酶的相对活性;以25-HC为阳性对照,采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测中、高剂量GAC2作用后细胞中SREBPs及其下游基因mRNA的表达情况;以SREBPs抑制剂(25-HC)、S6K抑制剂(雷帕霉素)为参照,采用Western blotting法检测细胞中SREBP-1、SREBP-2的表达情况[以成熟SREBPs(n-SREBPs)表示]以及磷酸化S6K与S6K的相对表达量比值(p-S6K...     

苦参碱调控mTOR/p70S6K信号通路对大鼠心肌肥厚的保护作用

目的:研究苦参碱对异丙肾上腺素致大鼠心肌肥厚的保护作用及其对mTOR/p70S6K信号通路的调控。方法:大鼠皮下注射异丙肾上腺素建立慢性病理性心肌肥厚模型,将大鼠随机分为正常对照组、异丙肾上腺素(ISO)模型组、苦参碱(50,100,200 mg·kg^-1·d^-1)+ISO组和单用苦参碱(200 mg·kg^-1·d^-1)组。HE染色观察心肌病理变化;Western blot检测左心室组织中mTOR/p70S6K信号通路相关蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,ISO模型组大鼠的心肌细胞肥大、排列紊乱,可见不同程度的纤维化、间质水肿和炎细胞浸润;苦参碱(50,100,200 mg·kg^-1·d^-1)可减轻大鼠心肌细胞肥大、纤维化、间质水肿和炎细胞浸润等ISO致心肌组织病理学结构的异常改变。与正常对照组相比,ISO模型组心肌组织内p-mTOR、p-p70S6K和p70S6K的表达显著增加;苦参碱(50,100,200 mg·kg^-1)可逆转ISO致大鼠心肌组织中p70S6K表达的上调,同时下调mTOR Ser2448和p70S6K Thr389位点的磷酸化水平,且呈剂量依赖性;mTOR表达在各组之间均无差异;单用苦参碱组与正常对照组比较无显著性差异。结论:苦参碱具有抑制ISO致大鼠心肌肥厚的作用,其机制与抑制mTOR/p70S6K信号通路有关。     

PI3K/Akt信号通路抑制剂对人胃癌细胞增殖及相关基因表达的影响

目的 研究磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路抑制剂渥曼青霉素对人胃癌细胞增殖、细胞周期与凋亡的影响以及相关基因蛋白激酶B(pAkt)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)、S期激酶相关蛋白2(Skp2)及P27kip1蛋白表达的影响.方法 分别用不同浓度渥曼青霉素处理处于对数生长阶段的BGC823细胞12、24、48 h,利用MTT实验检测其对胃癌细胞增殖的影响,胃癌细胞凋亡及细胞周期的检测采用流式细胞术,Western-blotting检测p-Akt、p-AMPK、Skp2及P27kip1蛋白的表达变化.结果 渥曼青霉素可明显抑制BGC823细胞的增殖,在一定范围内具有时间和浓度依赖性.20 mmol/L渥曼青霉素作用细胞24 h时,细胞生长周期阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率为(44.44±3.17)％;Western blot检测显示,pAkt、pAMPK及Skp2蛋白表达随着药物浓度的增加而减少,P27kip1蛋白表达随着药物浓度增加而增加.结论 PI3K/Akt信号通路抑制剂渥曼青霉素能够明显下调胃癌细胞的增殖活性,导致胃癌细胞周期被阻滞于G0/G1期并诱导细胞发生凋亡,进一步研究证实PI3K/Akt信号通路介导的Skp2及P27kip1蛋白调控在凋亡过程中发挥重要作用.     

淀粉样β蛋白片段25～35下调大鼠海马PI3K/Akt/p70S6K信号传导通路

目的 探讨阿尔茨海默病（AD）的淀粉样β蛋白(Aβ)的沉积是否损害神经细胞存活的信号传导通路。方法 实验分为生理盐水对照组；Aβ_25-35组；Aβ_25-35 +布洛芬组；Aβ_25-35+布洛芬+LY294002组；Aβ_25-35+LY294002组。大鼠分别灌胃给予布洛芬7.5或15 mg·kg^-1，每日1次，连续3周后，左侧脑室内注射Aβ_25-35（10 μL, 1 mmol·L^-1，之后继续灌胃给予布洛芬1周。PI3K特异性阻断剂LY294002（5 μL, 4 mmol·L^-1在注射Aβ_25-35前1 h左侧脑室内注射。注射Aβ_25-35后1周，取海马CA1区，Western免疫印迹法观察P53, Bax, FasL, Bcl-2, Akt和p70S6K的蛋白表达水平。应用半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3活性测定试剂盒分析caspase 3活性变化，RT-PCR方法观察p70s6k mRNA表达水平。结果 脑室内注射Aβ_25-35可引起大鼠海马CA1区磷酸化Akt/PKB和磷酸化p70S6K表达明显降低，分别从对照组1.32±0.14和0.769±0.028下降到0.69±0.08和0.479±0.032。同时,海马CA1区促凋亡蛋白P53, Bax和FasL表达及caspase 3活性明显增加，抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显降低。预先注射LY294002可使caspase 3活性较单独注射Aβ_25-35组进一步增加。给Aβ_25-35前后连续给予布洛芬4周可明显对抗Aβ_25-35引起的上述变化。LY294002可明显减弱布洛芬上调磷酸化Akt/PKB和磷酸化p70S6K表达的作用。结论 Aβ_25-35引起抗凋亡通路PI3K/Akt/p70S6K下调可能参与AD的神经元损伤。布洛芬具有较好的对抗作用，这可能与上调PI3K/Akt/p70S6K通路中的一些蛋白有关。     

结肠癌中ID1上调OCT4信号通路的机制研究

DNA结合抑制蛋白-1(inhibitor of DNAbinding 1,ID1)在结肠癌、肺癌和乳腺癌等多种肿瘤组织中异常高表达,并与肿瘤恶性进展及患者不良预后密切相关.已有研究发现,ID1在结肠癌中可以维持肿瘤细胞干细胞样特性,介导肿瘤干细胞耐药,但其分子生物学机制并未被完全阐明.通过免疫印迹、基因集富集分析、双...     

青蒿琥酯诱导人结肠癌细胞凋亡与Wnt/β-catenin信号通路的关系研究

目的研究青蒿琥酯(ART)对人结肠癌Lovo细胞增殖的影响和可能的分子机制。方法采用噻唑蓝实验(MTT)检测ART对Lovo细胞的增殖抑制作用,用流式细胞术和电镜检测ART对细胞凋亡的影响,荧光素酶报告质粒检测ART对Wnt/β-catenin通路中TCF4/LEF转录活性的影响,Western blot检测ART对细胞内β-catenin、GSK-3β、cMyc以及凋亡相关蛋白caspase-3表达的影响。结果与对照组相比,ART能抑制Lovo细胞增殖,72 h、320μmol·L~(-1)ART的细胞抑制率高达(78.99±1.95)%(F=898.301,P=0.000)。ART能诱导细胞凋亡,24 h、160μmol·L~(-1)ART的细胞早期凋亡率达到(19.00±0.05)%,同时电镜观察到细胞凋亡的形态学表现。ART能降低TCF4/LEF报告质粒的荧光素酶活性,24 h、160μmol·L~(-1)ART可使TCF4/LEF报告质粒的荧光素酶活性降至(0.36±0.30)%(F=470.954,P<0.01);ART处理48 h后,GSK-3β和caspase-3呈浓度依赖性升高(P<0.01),而β-catenin和c-Myc蛋白水平呈药物浓度依赖性降低(P<0.01)。结论青蒿琥酯能明显抑制结肠癌Lovo细胞增殖,并促进其凋亡,可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关。     

淀粉样β蛋白片段25~35下调大鼠海马PI3K/Akt/p70S6K信号传导通路(英文)

目的探讨阿尔茨海默病(AD)的淀粉样β蛋白(Aβ)的沉积是否损害神经细胞存活的信号传导通路。方法实验分为生理盐水对照组;Aβ25-35组;Aβ25-35+布洛芬组;Aβ25-35+布洛芬+LY294002组;Aβ25-35+LY294002组。大鼠分别灌胃给予布洛芬7.5或15 mg.kg-1,每日1次,连续3周后,左侧脑室内注射Aβ25-35(10 μL, 1 mmol.L-1),之后继续灌胃给予布洛芬1周。PI3K特异性阻断剂LY294002 (5 μL, 4 mmol.L-1)在注射Aβ25 -35前1 h左侧脑室内注射。注射Aβ25-35后1周,取海马CA1区,Western免疫印迹法观察P53,Bax, FasL, Bcl-2, Akt和p70S6K的蛋白表达水平。应用半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3活性测定试剂盒分析caspase 3活性变化,RT-PCR方法观察p70s6k mRNA表达水平。结果脑室内注射Aβ25-35可引起大鼠海马CA1区磷酸化Akt/PKB和磷酸化p70S6K表达明显降低,分别从对照组1.32±0.14和0.769±0.028下降到0.69±0.08和0.479±0.032。同时,海马CA1区促凋亡蛋白P53, Bax和FasL表达及caspase 3活性明显增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显降低。预先注射LY294002可使caspase 3活性较单独注射Aβ25-35组进一步增加。给Aβ25-35前后连续给予布洛芬4周可明显对抗Aβ25-35引起的上述变化。LY294002可明显减弱布洛芬上调磷酸化Akt/PKB和磷酸化p70S6K表达的作用。结论 Aβ25-35引起抗凋亡通路PI3K/Akt/p70S6K下调可能参与AD的神经元损伤。布洛芬具有较好的对抗作用,这可能与上调PI3K/Akt/p70S6K通路中的一些蛋白有关。     

原发性胆囊癌组织中mTOR/p70S6K信号通路的表达及其临床病理学意义

目的探讨mTOR/p70S6K信号通路在原发性胆囊癌组织中的表达和临床意义。方法随机选取原发性胆囊癌患者86例,慢性胆囊炎患者15例,采用SABC免疫组化方法,检测胆囊癌组织和慢性胆囊炎症组织中mTOR及p70S6K蛋白的表达情况。并分析其与原发性胆囊癌组织临床病理学特征之间的关系。结果mTOR及p70S6K蛋白在原发性胆囊癌组织中的阳性表达率分别为77.91%（67/86）及80.23%（69/86）,显著高于两者在慢性胆囊炎组织中的阳性表达率。两者在原发性胆囊癌组织中的表达呈正相关（r=0.791,P〈0.01）。mTOR及p70S6K蛋白的阳性表达率与胆囊癌组织的分化程度、Nevin分期和淋巴结转移密切相关（均P〈0.05）,而与肿瘤直径、患者性别无明显关系。结论mTOR/p70S6K信号通路的特异性激活可能在原发性胆囊癌的发生、浸润、转移中起重要作用。     

微小RNA-152-3p 对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制研究

目的探讨微小RNA(miR)-152-3p对结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法2019年2月至2020年4月,将结肠癌SW480细胞分为miR-152-3p模拟物阴性对照(miR-NC)组、miR-152-3p模拟物(miR-152-3p)组、抑制物(anti-miRNC)组、miR-152-3p抑制物(anti-miR-152-3p)组、阴性对照(si-NC)组、沉默转移相关蛋白2(si-MTA2)组、miR-152-3p模拟物+空载体(miR-152-3p+pcDNA3.1)组、miR-152-3p模拟物+过表达MTA2(miR-152-3p+pcDNA3.1-MTA2)组,均用脂质体法转染至结直肠癌SW480细胞中,另取未转染结直肠癌SW480细胞记为Control组。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-152-3p和MTA2 mRNA的表达水平;蛋白质印迹法测定蛋白的表达;MTT法检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果结肠癌HCT116、SW480及LoVo细胞中miR-152-3p表达分别为0.72±0.04、0.29±0.02、0.49±0.01,人正常结肠上皮细胞NCM460中miR-152-3p表达为1.06±0.12,与正常结肠上皮细胞NCM460相比,结肠癌细胞HCT116、LoVo、SW480中MTA2 mRNA和蛋白较高,miR-152-3p较低(P<0.05);Control组、miR-NC组、miR-152-3p组、si-NC组及si-MTA2组结肠癌SW480细胞吸光度分别为0.92±0.22、0.96±0.17、0.31±0.07、0.99±0.17及0.32±0.09,细胞迁移数分别为(172.00±23.52)个、(169.00±20.66)个、(53.67±12.22)个、(155.67±16.8)个及(54.33±8.74)个,细胞侵袭数分别为(124.67±10.02)个、(122.33±9.45)个、(26.00±5.00)个、(108.33±10.02)个及(42.00±4.00)个,与miR-NC 组相比,miR-152-3p 组SW480细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2及SW480细胞活性、迁移和侵袭数量均较低,周期素依赖激酶抑制剂p21(P21)及上皮钙黏素(E-cadherin)较高(P<0.05);与si-NC组相比,si-MTA2组SW480细胞中cyclin D1、MMP-2及SW480细胞活性、迁移和侵袭数量均较低,P21及E-cadherin较高(P<0.05)。转染miR-152-3p和MTA2野生型表达载体的结肠癌SW480细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。相比miR-152-3p+pcDNA3.1组,miR-152-3p+pcDNA3.1-MTA2组SW480细胞中P21、E-cadherin的表达较低,MTA2、cyclin D1、MMP-2蛋白的表达较高,SW480细胞活性、迁移、侵袭数量较高(P<0.05)。结论miR-152-3p可能通过下调MTA2抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

欧前胡素调节MAPK/mTOR/p70S6K信号通路对急性髓系白血病细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨欧前胡素(IMP)对急性髓系白血病(AML)细胞恶性生物学行为的影响以及对MAPK/mTOR/p70S6K信号通路的调节机制。方法 将人AML细胞HL-60进行培养传代,并分为对照组(未处理组),ERK抑制剂组(PD98059组),IMP低、中、高剂量组,IMP高剂量+ERK激活剂组(IMP高+Cearoin组),每组均设置6个重复。MTT法检测IMP对HL-60细胞的毒性;MTT法、软琼脂克隆形成实验检测HL-60细胞的增殖活性;流式细胞仪术检测HL-60细胞凋亡;Transwell小室检测HL-60细胞迁移和侵袭能力;ELISA检测HL-60细胞培养液中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平;Western blot检测通路相关蛋白及Bcl-2、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达。结果 与未处理组比较,PD98059组和IMP低、中、高剂量组HL-60细胞的存活率、克隆形成数量、迁移和侵袭数量、促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平以及ERK1/2、mTOR、p70S6K磷酸化水平、Bcl-2表达显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、自噬相关蛋白Becl...     

毛蕊异黄酮抑制肺腺癌细胞增殖和迁移的miR-21/PTEN信号通路机制研究

目的:探讨毛蕊异黄酮(CA)通过调控微RNA-21(miR-21)/人类第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)信号通路对肺腺癌细胞增殖和迁移的抑制作用机制。方法:以人肺腺癌SPC-A1细胞为对象,采用MTT法检测不同剂量CA(5、15、25、50、75、100μg/mL)作用12、24、48、72 h后的细胞增殖情况,并计算细胞存活率、30%细胞生长抑制浓度(IC_(30))和半数抑制浓度(IC_(50));采用Transwell迁移试验检测低、中、高剂量CA(50、75、100μg/m L)作用24 h后的细胞迁移情况,记录染色细胞数并计算细胞迁移抑制率;采用蛋白质印迹法和实时聚合酶链反应法检测低、中、高剂量CA(50、75、100μg/mL)作用24 h后细胞miR-21以及PTEN、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白及其mRNA的表达情况;检测细胞在分别转染miR-21模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)后,CA(75μg/mL)对其miR-21及PETN、VEGF、MMP-9蛋白表达的影响。结果:经50、75、100μg/mL CA作用12、24、48 h,25、50、75、100μg/m L CA作用72 h后,细胞存活率均显著降低(P<0.05或P<0.01);12～72 h各时间点CA的IC_(30)值分别为82.24、50.45、46.34、31.81μg/mL,IC_(50)值分别为108.06、73.35、70.08、49.89μg/mL。与正常对照组比较,CA各剂量组染色细胞数,低剂量组细胞中VEGF蛋白以及中、高剂量组细胞中miR-21,VEGF、MMP-9蛋白及其mRNA的相对表达量均显著减少或降低,且中、高剂量组显著少于或低于低剂量组,高剂量组显著少于或低于中剂量组(P<0.05或P<0.01);CA各剂量组细胞迁移率以及中、高剂量组细胞中PTEN蛋白及其mRNA的相对表达量均显著升高,且中、高剂量组显著高于低剂量组,高剂量组显著高于中剂量组(P<0.05或P<0.01)。转染miR-21 mimic后,miR-21 mimic组细胞miR-21及VEGF、MMP-9蛋白的相对表达量均较正常对照组显著升高,PTEN蛋白的相对表达量显著降低(P<0.01);加入CA干预后,细胞中miR-21及VEGF、MMP-9蛋白的相对表达量均较miR-21 mimic组显著降低,PTEN蛋白的相对表达量均显著升高(P<0.05或P<0.01)。转染miR-21 inhibitor后,miR-21 inhibitor组细胞中miR-21及VEGF、MMP-9蛋白的相对表达量均较正常对照组显著降低,PTEN蛋白的相对表达量显著升高(P<0.05或P<0.01);加入CA干预后,细胞中miR-21及上述蛋白的表达较miR-21 inhibitor组均未见明显变化(P>0.05)。结论:CA可剂量依赖性地抑制肺腺癌SPC-A1细胞的增殖和迁移,且这种作用可能与调控miR-21/PTEN信号通路有关。     

白藜芦醇对高脂所致心肌细胞氧化应激损伤的保护作用及其与AMPK/mTORC1/p70S6K信号通路的相关性

目的探讨白藜芦醇对脂毒性心肌细胞损伤的保护作用及其机制。方法棕榈酸(palmitic acid,PA)刺激H9c2细胞,白藜芦醇预处理后,MTT检测细胞增殖情况;免疫荧光及流式细胞法检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;用试剂盒检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平;免疫印迹法检测AMPK/m TORC1/p70S6K通路蛋白以及凋亡蛋白表达水平。结果 MTT结果示,PA(0. 4 mmol·L~(-1))刺激24、48 h时,心肌细胞存活率出现明显下降;免疫荧光法及流式细胞法显示,与对照组相比,PA(0. 4 mmol·L~(-1))刺激24 h时,ROS及MDA水平明显升高,SOD活性明显降低;免疫印迹法显示,与对照组相比,PA(0. 4 mmol·L~(-1))刺激24 h时,p-AMPK蛋白及Bcl-2蛋白表达降低,p-mTORC1、p-p70S6K、Bax和cleaved caspase-3蛋白表达增高。白藜芦醇预处理,可以明显逆转上述变化。结论白藜芦醇可以明显抵抗高脂所致的心肌细胞氧化应激损伤,可能与AMPK/m TORC1/p70S6K信号通路调控相关。