外源性转化生长因子β1抗体对胶原瘢痕及神经再生的修复作用

目的：通过神经吻合口局部应用外源性转化生长因子β1的特异性抗体，阻断其诱导局部炎症反应和细胞外基质沉积的作用，以期达到预防或减少神经瘢痕的产生，提高神经修复。方法：实验于2003—04／2005—04在山西医科大学外科实验室完成。选用SD大鼠48只，随机分为转化生长因子β1抗体组和生理盐水对照组，各24只。两组大鼠坐骨神经切断后行神经外膜小间隙缝合，转化生长因子β1抗体组采用微量加样器于神经吻合口间隙内注射质量浓度为50mg／L的Anti-外源性转化生长因子β1溶液0．1mL；生理盐水对照组注射等量生理盐水，逐层缝合伤口。分别于术后4，12周取材，按照Petersen分级标准对皮肤、肌肉、筋膜和神经组织与周围组织粘连的程度进行评估。结果：实验纳入大鼠48只，全部进入结果分析。瘢痕成分的评估：①两组术后大体观察：术后两组大鼠皮肤及肌肉、筋膜愈合良好，均未发生伤口进开、进裂、感染现象。转化生长因子β1抗体组术后12周神经吻合口与周围组织粘连明显减轻，优于生理盐水对照组。②两组术后12周神经组织切片Masson染色结果：转化生长因子B1抗体组神经吻合口远端神经轴索增生活跃．胶原纤维形成较少．以神经外膜为主；生理盐水对照组神经吻合口远端神经纤维生长排列紊乱，连续性差，被胶原纤维包裹，胶原沉积较多，神经外膜肥厚。④术后12周两组Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维含量灰度值测量结果比较：转化生长因子β1抗体组Ⅰ型胶原纤维含量明显低于生理盐水对照组[（41．112&;#177;11．065），（49．561&;#177;8．097），P〈0．05]，而Ⅲ型胶原纤维含量基本相似[（34．223&;#177;7．130）．（32．284&;#177;5．497），P〉0．05]。神经再生功能的评估：①术后12周两组坐骨神经功能指数比较：转化生长因子β1抗体组明显高于生理盐水对照组[（-19．090&;#177;22．493），（-28．660&;#177;22．649），P〈0．05]。②两组术后12周电生理学检查结果：转化生长因子β1抗体组神经传导速度明显优于生理盐水对照组[（29．603&;#177;3．972），（16．215&;#177;4．619）m／s，P〈0．05]。③两组术后周围神经纤维的镀银染色及周围神经髓鞘染色结果：转化生长因子β1抗体组髓鞘厚度和再生神经纤维的直径均优于生理盐水对照组[（1．36&;#177;0．23），（0．93&;#177;0．48）；（9．40&;#177;0．86），（7．99&;#177;0．36）μm；P均〈0．05]。结论：周围神经损伤后神经端或对端的吻合治疗中，局部应用外源性转化生长因子β1抗体，能够抑制或减少局部神经胶原瘢痕的产生，从而有效促进大鼠周围神经功能的恢复。     

周围神经损伤修复中感觉神经元内转化生长因子β1变化的作用

目的：观察大鼠坐骨神经损伤后背根神经节内转化生长因子β1(TGF．β1)表达的变化，探讨。TGF-β1在周围神经损伤修复过程中所起的作用。方法：实验于2001-08／2002一05在第四军医大学西京医院全军骨科研究所实验室完成。35只雄性SD大鼠，造成右侧坐骨神经挤压伤。分别于正常及术后1，3，5，7，14，21d取材，行组织学、免疫组织化学观察。结果：免疫组织化学染色结果，神经挤压后TGF-β1表达逐渐升高，5d时达到高峰，以后TGF-β1表达的量有所减少。结论：TGF-β1参与周围神经挤压伤后的病理生理改变，在损伤神经修复过程中具有一定的作用。     

转化生长因子β1中和抗体对转化生长因子β诱导肌腱胶原和术后粘连的影响

背景:研究表明,转化生长因子β1在肌腱损伤愈合过程中增加了肌腱细胞胶原的合成和术后粘连的形成.目的:观察转化生长因子β1抗体对转化生长因子β诱导的肌腱细胞胶原产生及术后粘连形成的影响.设计、时间及地点:随机分组观察实验,于2005-09/2006-06在同济医学院实验动物中心完成.材料:选择2-5月龄新西兰大白兔,体质量3.5～4.5 kg.转化生长因子由美国SantaCruz B iotechnology公司提供.方法:取兔屈指肌腱分离肌腱成纤维细胞、腱外膜细胞和腱内膜细胞,将细胞随机分成2组,实验组加入1 μg/L转化生长因子β后,再加入0.1,0.5,1.0mg/L转化生长因子β1中和抗体,对照组不添加任何试剂,酶联免疫吸附实验测定Ⅰ型胶原.取84只兔行中趾屈指肌腱切断吻合术,将其中36只兔随机分成3组,腱鞘内分别注入生理盐水、1.0,2.0 mg/L转化生长因子β1中和抗体,4,8周后取出肌腱行肌腱粘连检测、生物力学测定、组织学观察和扫描电镜观察;余48只兔随机分成2组,腱鞘内分别注入生理盐水和1.0mg/L转化生长因子β1中和抗体,1,2,4,8周后取出肌腱,原位杂交方法测定肌腱转化生长因子β1和Ⅰ型胶原mRNA的表达.主要观察指标:各组兔肌腱细胞胶原产生及术后粘连情况.结果:酶联免疫吸附实验显示,转化生长因子β1能明显提高肌腱细胞Ⅰ型胶原的产生;转化生长因子β1抗体能降低3种细胞Ⅰ型胶原的产生,随抗体质量浓度增加,Ⅰ型胶原水平逐渐降低,且呈剂量依赖性;术后4,8周,与1.0,2.0mg/L转化生长因子β1组比较,生理盐水组屈趾肌腱滑动距离较短,模拟主动屈曲度明显受限(P<0.05),最大抗断裂载荷各组间比较差异无显著性意义(P>0.05).扫描电镜和组织学观察结果显示,术后4,8周生理盐水组胶原纤维排列紊乱,1.0,2.0 mg/L转化生长因子β1组胶原纤维排列整齐.原位杂交结果显示,术后各时间点1.0 mg/L转化生长因子β1组转化生长因子β1和Ⅰ型胶原mRNA表达均低于生理盐水组(P<0.05).结论:转化生长因子β1抗体能有效抑制转化生长因子β1在肌腱损伤修复中的作用,减少粘连形成.     

周围神经损伤修复中感觉神经元内转化生长因子β1变化的作用

目的:观察大鼠坐骨神经损伤后背根神经节内转化生长因子β1(TGF-β1)表达的变化,探讨TGF-β1在周围神经损伤修复过程中所起的作用。方法:实验于2001-08/2002-05在第四军医大学西京医院全军骨科研究所实验室完成。35只雄性SD大鼠,造成右侧坐骨神经挤压伤。分别于正常及术后1,3,5,7,14,21d取材,行组织学、免疫组织化学观察。结果:免疫组织化学染色结果,神经挤压后TGF-β1表达逐渐升高,5d时达到高峰,以后TGF-β1表达的量有所减少。结论:TGF-β1参与周围神经挤压伤后的病理生理改变,在损伤神经修复过程中具有一定的作用。     

转化生长因子β对造血细胞的作用

转化生长因子β(TGF-β)是一类具有多种生物学活性的多效细胞因子,它可调节多种细胞的增殖、分化,在造血中起着重要的调节作用。本文就其在造血调节中对造血祖细胞、造血成熟细胞以及白血病细胞的调节作用作一综述。     

转化生长因子β1对培养的瘢痕成纤维细胞挛缩功能的作用

目的研究转化生长因子β1(TGF-β1)对瘢痕成纤维细胞诱导肌动蛋白(α-actin)和粘连蛋白(FN)表达的作用,探讨TGF-β1与烧伤瘢痕挛缩的关系.方法采用细胞培养、ELISA法、免疫组化、图像分析技术,观察在不同TGF-β1含量作用下,瘢痕成纤维细胞α-actin和FN表达的情况.结果不同含量TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞表达α-actin和FN的作用不同,以10～50 μg/L的TGF-β1作用最有效;与对照组相比,实验组的成纤维细胞表达更明显,差异均有显著性意义.结论TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞α-actin和FN的表达增加可能与烧伤瘢痕挛缩有关.     

转化生长因子β1对培养的瘢痕成纤维细胞挛缩功能的作用

目的：研究转化生长因子β1(TGF-β1)对瘢痕成纤维细胞诱导肌动蛋白(α-actin)和粘连蛋白(FN)表达的作用，探讨TGF-β1与烧伤瘢痕挛缩的关系。方法：采用细胞培养、ELISA法、免疫组化、图像分析技术，观察在不同TGF-β1含量作用下，瘢痕成纤维细胞α-actin和FN表达的情况。结果：不同含量TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞表达α-actin和FN的作用不同，以10～50M／L的TGF-β1作用最有效；与对照组相比，实验组的成纤维细胞表达更明显，差异均有显著性意义。结论：TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞α-actin和FN的表达增加可能与烧伤瘢痕挛缩有关。     

哮喘患儿转化生长因子β1测定及临床意义

转化生长因子 β1(ＴＧＦ β1)可拮抗淋巴细胞的许多反应 ,是免疫应答的关闭信号 ,同时可刺激某些类型细胞生长 ,它是一种多功能的细胞因子[1] 。支气管哮喘属于Ⅰ型超敏反应 ,自身免疫功能的紊乱导致疾病的反复发作 ,为了解ＴＧＦ β1在哮喘发病中的作用 ,我们选择了哮喘发作期和缓解期患儿进行了研究。1　材料和方法1.1　研究对象和方法　支气管哮喘患儿共 5 5例 ,其中急性发作期 35例 ,缓解期 2 0例 ,所有患儿均根据文献[2 ] 确诊 ,缓解期患儿在试验前二周没使用过相关药物 ,发作期患儿在给予药物治疗前采集血样 ,正常对照儿童 30例 ,为…     

反义转化生长因子β1抑制兔耳增生性瘢痕的生物学作用

背景:目前认为转化生长因子β与瘢痕形成关系最密切,是关键的活性分子,可影响瘢痕形成的各个阶段。抑制转化生长因子β的生物学作用,在理论上可减少瘢痕的形成。目的:探讨反义转化生长因子β1脱氧寡核苷酸对增生性瘢痕动物模型伤口愈合中瘢痕生成的抑制作用,观察使用反义转化生长因子β1的有效给药途径。设计:自身对照,动物实验。单位:解放军兰州军区总医院安宁分院整形科。材料:实验于2002-09/2003-07在兰州医学院解剖实验室完成。选择日本大耳白兔20只。方法:在每只兔耳腹侧面沿长轴避开可见血管,作两个1.0cm×2.5cm的长方形全层皮肤缺损创面,创面间隔1.5cm,深达软骨表面,共80个,建立兔耳腹侧面增生性瘢痕模型。待兔耳创面上皮化后(平均20d),在每只白兔左耳每个创面的上皮下用微量注射器局部封闭注射反义转化生长因子β1脱氧寡核苷酸5μL(1g/L),为转化生长因子β1组;右耳每个创面下注射生理盐水5μL,为生理盐水对照组。注药后3,7,11,20,30d5个时相点切取瘢痕组织,每个时相点4只。采用苏木精-伊红染色、Masson染色及转化生长因子β1mRNA、Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的原位杂交组织化学染色。主要观察指标:苏木精-伊红染色、Masson染色和原位杂交组织化学染色结果。结果:纳入动物20只,均进入结果分析。①苏木精-伊红染色显示各组中的右耳增生性瘢痕内均可见有炎性细胞浸润并有明显的白细胞浸润带,而左耳的增生性瘢痕经反义转化生长因子β1干预后虽也有炎性细胞浸润,但未见白细胞浸润带。②Masson染色见右侧耳的增生性瘢痕从伤后3周起均可见蓝染较深的胶原纤维,至第7周时仍可见蓝染的胶原纤维,外形粗大(宽度约为8～10μm),排列杂乱无章。而左耳经反义转化生长因子β1干预的兔耳增生性瘢痕在伤后3周时,虽然亦可见蓝染的胶原纤维,但到第6,7周时胶原纤维蓝染变浅并且纤细(宽度为3～5μm),排列整齐有序。③原位杂交显示转化生长因子β1mRNA、Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA阳性细胞表达率明显降低。结论:反义转化生长因子β1能抑制兔耳增生性瘢痕的增殖过程,使瘢痕组织纤维化程度明显减轻。局部注射裸DNA治疗瘢痕的给药途径是可行的。     

Smad4 siRNA对转化生长因子β诱导Ⅰ型胶原表达的作用

背景:近期研究表明,阻断smad传导通路可能成为一个阻断转化生长因子β引起的肝纤维化的新的靶点.目的:验证Smad4小分子干扰RNA(siRNA)对转化生长因子β诱导的Ⅰ型胶原的作用.设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-09/2008-10在哈尔滨医科大学药学院完成.材料:肝星状细胞HSC-T6体外培养,siRNA和荧光素酶报告基因采用Lipofectamine试剂转染,以含巨细胞病毒-β-半乳糖苷酶质粒作为转染阳性对照.方法:根据不同处理将细胞分为4组,空白对照组;Smad4 siRNA转染组;转化生长因子β处理组:Smad4 siRNA转染后转化生长因子β处理组,将Smad4 siRNA转染入肝星状细胞后行转化生长因子β刺激.各组分别于培养24 h后收集细胞.主要观察指标:利用荧光素酶报告基因法测定Smad结合转写因子(4XSBE)的活性;反转录-聚合酶链反应法检测Ⅰ型胶原mRNA表达的变化;Western印迹分析观察Smad4蛋白、Ⅰ型胶原蛋白的变化.结果:Smad4 siRNA有意义的抑制Smad4蛋白表达;Smad4 siRNA抑制转化生长因子β诱导的4XSBE转录报告基因的活性:Smad4 siRNA从mRNA和蛋白水平有效抑制转化生长因子β激活的Ⅰ型胶原的表达.结论:Smad4 siRNA能够有效地阻断转化生长因子β诱导的Ⅰ型胶原表达.     

Macrophage production of transforming growth factor beta and fibroblast collagen synthesis in chronic pulmonary inflammation

A rat model of bleomycin-induced pulmonary inflammation and fibrosis was used to examine the relationship between collagen synthesis and transforming growth factor beta (TGF-beta) production, and cellular distribution. Total lung TGF-beta was elevated within 2 h of intratracheal bleomycin administration and peaked 7 d later at levels 30-fold higher than controls. This was followed by a gradual decline with lower but persistent levels of production in the late phase of the response between 21 and 28 d later. The peak TGF-beta levels preceded the maximum collagen and noncollagen protein synthesis measured by [3H]proline incorporation into lung fibroblast explants of bleomycin-treated rats. The pattern of immunohistochemical staining localized TGF-beta initially in the cytoplasm of bronchiolar epithelium cells and subepithelial extracellular matrix. The peak of lung TGF-beta levels at 7 d coincided with intense TGF-beta staining of macrophages dispersed in the alveolar interstitium and in organized clusters. Later in the course of the response. TGF-beta was primarily associated with extracellular matrix in regions of increased cellularity and tissue repair, and coincided with the maximum fibroblast collagen synthesis. This temporal and spatial relationship between collagen production and TGF-beta production by macrophages suggests an important if not primary role for TGF-beta in the pathogenesis of the pulmonary fibrosis.     

转化生长因子β与周围神经变性和再生关系研究的最新进展

转化生长因子β(transforminggrowthfactorbeta,TGF-β)是一类多功能的调节细胞生长、分化的细胞因子,在周围神经系统中广泛地存在。周围神经变性和再生中TGF-β及其受体的表达出现有意义的变化,通过其保护神经元,促进轴突生长,促进雪旺细胞再生,刺激瘢痕形成及影响靶器官等对周围神经变性和再生起重要作用。     

Bone regeneration by transforming growth factor beta1 released from a biodegradable hydrogel.

This paper describes the sustained release of transforming growth factor beta1 (TGF-beta1) from a biodegradable hydrogel based on polyion complexation for the enhancement of bone regeneration activity. Basic TGF-beta1 was adsorbed onto the biodegradable hydrogel of acidic gelatin with an isoelectric point of 5.0 by an electrostatic interaction. The TGF-beta1 could not be adsorbed onto basic gelatin. When acidic gelatin hydrogels incorporating 125I-labeled TGF-beta1 were implanted into the back subcutis of mice, the radioactivity decreased with time and the in vivo retention of TGF-beta1 was prolonged with a decrease in the water content of hydrogels. The higher the water content of hydrogels, the faster their biodegradation. The in vivo retention of TGF-beta1 correlated well with that of gelatin hydrogels, indicating that TGF-beta1 was released from the gelatin hydrogel as a result of hydrogel biodegradation. The ability of TGF-beta1-incorporated into acidic gelatin hydrogels to induce bone regeneration was evaluated in a rabbit calvarial defect model. Eight weeks after treatment, the gelatin hydrogels with water contents of 90 and 95 wt% induced significantly high bone regeneration compared with those with lower and higher water contents and free TGF-beta1. This indicates that the sustained release of TGF-beta1 from the hydrogel with suitable in vivo degradability is necessary to effectively enhance its osteoinductive function. Rapid hydrogel degradation will result in a retention time of TGF-beta1 which is too short to induce bone regeneration. It is possible that the slow degradation of the hydrogel physically blocked TGF-beta1-induced bone regeneration at the skull defect. It can be concluded that the gelatin hydrogel is a promising matrix of TGF-beta1 release to induce skull bone regeneration.     

Retinoic acid modulates rat Ito cell proliferation, collagen, and transforming growth factor beta production.

Recent studies suggest that vitamin A plays an inhibitory role with respect to "activation" of the hepatic Ito cell, a likely effector of hepatic fibrogenesis. Ito cell "activation" during fibrogenesis is characterized by a decrease in intracellular vitamin A and an increase in cellular proliferation and collagen production. To explore the hypothesis that retinoids have the capacity to diminish Ito cell activation, cultured Ito cells were exposed to retinoic acid and its effects assessed on three key features: cell proliferation, collagen protein production and mRNA abundance, and transforming growth factor beta protein production. Retinoic acid was 100-1,000X more potent than retinol with respect to inhibition of Ito cell proliferation. Interstitial collagen and transforming growth factor beta production were also reduced by 10(-6) M retinoic acid. The relative abundance of type I collagen mRNA however, was not significantly altered. By contrast, retinoic acid administration to rats caused a marked reduction in the abundance of type I collagen mRNA in both total hepatic and purified Ito cell RNA. The relative abundance of rat hepatic fibronectin or apolipoprotein E mRNA was not significantly altered. These studies demonstrate that retinoic acid can differentially modulate several key features of hepatic fibrogenesis in vitro and in vivo.     

转化生长因子β1对新鲜同种异体神经移植后神经再生的影响

背景周围神经缺损多采用自体神经移植,但存在一些问题,许多学者尝试异体神经移植,但存在许多问题,免疫排斥反应就是其中之一.目的观察局部应用转化生长因子β1对新鲜同种异体神经移植后神经再生的影响.设计随机对照的实验.单位华中科技大学同济医学院附属协和医院手外科.材料实验于2001-08/2002-10在华中科技大学同济医学院附属协和医院完成.选择健康成年不同窝的Wistar大鼠60只,随机分为实验组、空白组、对照组3组,每组20只.方法制备转化生长因子β1质粒待用.制备动物模型,将两组大鼠的坐骨神经在梨状肌孔下0.5 cm处,用消毒的剃须刀片整齐切断并切除2.0 cm,切除的神经段互换移植修复神经缺损,实验组局部肌肉及神经两断端注射转化生长因子β1质粒,空白组、对照组注射等量的生理盐水,实验组、空白组不使用任何药物,对照组给予环孢霉素A(15 mg/kg)喂养.分别于6周和12周各取10只取材、切片、染色染色①Gleesluxotfast blue法染色.②髓鞘坚牢蓝染色法.轴索计数术后12周的移植体中段染色标本,随机取视野,在光镜400倍下计算1.0mm2内轴索数.组间比较采用t检验.主要观察指标各组移植区形态学观察和轴突计数.结果实验动物数量分析60只动物在实验过程中无死亡,全部进入结果分析.①空白组可见移植物的不同地方出现广泛的单核细胞浸润,髓鞘脱水,可见大量的空泡变性,以6周时最为明显,整个移植物均被单核细胞浸润,排异反应严重,在移植段中,有极少量的轴突再生.12周时,移植体变细,大量瘢痕组织增生,水肿明显,可见极少量的许旺氏细胞和再生轴突,绝大多数再生的轴突未通过整个移至段.实验组、对照组有少量的单核细胞浸润,水肿较明显,但可见新生的血管在移植神经中形成,再生的轴突通过移植体.6周时,可见较多的许旺氏细胞增生.12周时,再生轴突已通过移植体,有一定量的髓鞘形成,许旺氏细胞增生明显,轴索间水肿减轻.各组移植段中外周的神经再生的轴突数量和髓鞘再生的数量较中心的多,且实验组中外周的轴索间水肿较中心的明显减轻.②术后12周,每组各取5只大鼠,在神经移植体中段随机取视野,400倍显微镜下观察计算1.0 mm2内轴突数,实验组、对照组轴突数显著高于空白组,组间差异有极显著性[(78.3±4.6),(76.1±4.2),(15.0±3.5),t=3.056,t=2.948,P＜0.01].实验组和对照组接近,差异无显著性[(78.3±4.6),(76.1±4.2),t=1.982 P＞0.05].结论局部使用转化生长因子β1质粒,可在局部发挥免疫抑制作用,降低宿主的免疫排斥反应.并使移植体轴突数增多,促进神经生长.     

NKT cells promote antibody-induced joint inflammation by suppressing transforming growth factor beta1 production

Although NKT cells has been known to exert protective roles in the development of autoimmune diseases, the functional roles of NKT cells in the downstream events of antibody-induced joint inflammation remain unknown. Thus, we explored the functional roles of NKT cells in antibody-induced arthritis using the K/BxN serum transfer model. NKT cell-deficient mice were resistant to the development of arthritis, and wild-type mice administrated with alpha-galactosyl ceramide, a potent NKT cell activator, aggravated arthritis. In CD1d-/- mice, transforming growth factor (TGF)-beta1 was found to be elevated in joint tissues, and the blockade of TGF-beta1 using neutralizing monoclonal antibodies restored arthritis. The administration of recombinant TGF-beta1 into C57BL/6 mice reduced joint inflammation. Moreover, the adoptive transfer of NKT cells into CD1d-/- mice restored arthritis and reduced TGF-beta1 production. In vitro assay demonstrated that interleukin (IL)-4 and interferon (IFN)-gamma were involved in suppressing TGF-beta1 production in joint cells. The adoptive transfer of NKT cells from IL-4-/- or IFN-gamma-/- mice did not reverse arthritis and TGF-beta1 production in CD1d-/- mice. In conclusion, NKT cells producing IL-4 and IFN-gamma play a role in immune complex-induced joint inflammation by regulating TGF-beta1.