PTEN基因诱导人脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡及bcl-2蛋白表达下调

目的　探讨PTEN基因对人脑胶质瘤SHG 44细胞凋亡及凋亡相关基因bcl 2表达的影响 ,阐明PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机理。方法　PTEN基因体外转染SHG 44细胞 ,筛选阳性细胞克隆 ,以原位杂交、免疫组化方法检测PTEN基因的表达情况采用透射电镜、流式细胞仪和核DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞的凋亡情况以免疫荧光法检测bcl 2基因的表达。结果　PTEN基因转染的SHG 44细胞有PTEN基因和蛋白的表达。透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞浆浓缩、核碎裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表现 ;流式细胞仪示细胞周期从G1 期到S期发生抑制 ,并且在G1 期峰前出现一明显的凋亡峰 (1 2 .9% ) ;细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡细胞特有的梯状条带 ;bcl 2的表达也显著下调。转染空载体和未转染的SHG 44细胞无明显的凋亡表现。结论　PTEN基因可诱导SHG 44细胞凋亡 ,并下调bcl 2蛋白的表达 ,这可能是PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的分子机制之一     

Bak基因过表达诱导肝癌细胞凋亡

目的：本文旨在研究ｂｃｌ－２基因家族促凋亡蛋白Ｂａｋ在肝癌细胞凋亡中的作用,同时评价它作为肿瘤治疗的潜在靶基因的可能性。方法：免疫组织化学法研究Ｂａｋ在ＨＣＣ组织中的分布,并结合ＴＵＮＥＬ染色,分析Ｂａｋ在肝癌细胞凋亡中潜在的作用。采用ＭＴ－Ⅱ调节系统,通过加锌离子（ＺｎＳＯ４,１００μｍｏｌ／Ｌ）诱导Ｂａｋ基因表达。ＨＣＣ－９２０４肝癌细胞系作为靶细胞,获得表达Ｂａｋ基因的稳定转染子。结果：在Ｈ     

TNF-α诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及调控Bcl-2蛋白的表达

细胞有增殖、分化和凋亡3方面的特性.在维持正常组织的生长平衡过程中,细胞增殖、分化与凋亡3者相互协调,共同调节,其中细胞周亡(apoptosis)对细胞衰老与更新、保持细胞数目的相对恒定方面起着重要作用.肿瘤不仅是增殖和分化异常的疾病,同时也是凋亡异常的疾病,治疗肿瘤就是杀伤和清除肿瘤细胞,诱导肿瘤细胞凋亡是治疗肿瘤的一条有效途径,临床上用的化疗、放疗和热疗等方法的作用机制之一就是引发肿瘤细胞凋亡.肿瘤坏死因子(TNF)是一种由活化的巨噬细胞或单核细胞分泌的具有多种生物学效     

低分子量肝素抑制骨肉瘤细胞Livin表达并诱导细胞凋亡的实验研究

Objective： To investigate the inhibitory effects of LMWH suppressing the expression of Livin and inducing the apoptosis of the osteosarcoma cells. Methods： Osteosarcoma cells line MG-63 was cultured in vitro. MTT assay and flow cytometry were used to study the effect of LMWH with different concentration suppressed the prolifetation and induced apoptosis in osteosarcoma cells line MG-63. The expression of Livin of osteosarcoma cells line MG-63 was analysed by the immunohistochemistrical method and PT-PCR. Results： Low molecular weight heparin could inhibit the growth of osteosarcoma cell line MG-63. With the LMWH＇s increasing, the apoptosis rate was increased significantly. Immunohistochemistrical method and PT-PCR showed that the expression of Livin of osteosarcoma cells line MG-63 declined obviously than that before medication. Conclusion： LMWH has very strong anti-tumor effect in vitro. The possible mechanisms of LMWH anti-tumor effect are associate with the effect of suppressing the expression of Livin and inducing cell apoptosis.     

乙醇诱导肝癌细胞凋亡及其相关蛋白的研究

目的探讨乙醇对肝细胞癌(简称肝癌)细胞凋亡的诱导作用,并对其相关蛋白的表达进行初步分析。方法用含6%乙醇的培养液培养6h诱导肝癌细胞系HCC-9204细胞凋亡,进行台盼蓝染色、Hoechst33258荧光染色、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测和流式细胞仪DNA含量分析。SDS-PAGE电泳分析诱导凋亡前后的细胞蛋白表达的情况。结果6%乙醇可使HCC-9204细胞产生明显的凋亡形态学变化。大部分细胞呈台盼蓝拒染,并且为TUNEL阳性着色。流式细胞仪分析可见亚二倍体凋亡峰。SDS-PAGE电泳显示,乙醇诱导凋亡的HCC-9204细胞中有新的分子量约大于97.4kD的蛋白产生。结论低剂量乙醇能够明显地诱导HCC-9204肝癌细胞凋亡,并且可使其产生新的大分子量蛋白质。     

吲哚美辛诱导肝癌HepG2细胞凋亡及其对cyclin E蛋白表达的影响

目的　观察吲哚美辛诱导肝癌 Hep G2细胞凋亡 ,及其对 cyclin E蛋白的影响。方法　采用 MTT比色法观察吲哚美辛对肝癌 Hep G2细胞增殖的影响 ;采用流式细胞仪检测吲哚美辛对 Hep G2细胞周期分布的影响 ,同时结合透射电子显微镜观察吲哚美辛诱导肝癌 Hep G2细胞凋亡的作用 ;免疫细胞化学方法观察吲哚美辛对Hep G2细胞周期调控蛋白 cyclin E的影响。结果　吲哚美辛可抑制肝癌 Hep G2细胞的增殖 ,诱导其凋亡 ,改变细胞周期分布 ,使 G0 /G1 期细胞比例增高 ,S期比例降低 ,同时还可使 cyclin E蛋白表达下降。上述作用具有剂量和时间依赖性 (P<0 .0 5 )。结论　吲哚美辛可诱导肝癌 Hep G2细胞凋亡 ,改变细胞周期分布 ,影响细胞周期调控蛋白表达 ,从而抑制细胞增殖。     

肝癌细胞凋亡相关蛋白Bax的表达及意义

Ｂｃｌ 2家族是目前被广泛研究的一个与细胞凋亡相关基因家族。Ｂｃｌ 2家族包括作用相反的 2个亚类 :①促进凋亡的Ｂａｘ和Ｂａｋ等 ;②抑制凋亡的Ｂｃｌ 2和Ｂｃｌ ｘｌ等。Ｂａｘ是Ｂｃｌ 2家族中最主要的促凋亡基因。Ｂａｘ蛋白广泛分布于人体许多组织和细胞中 ,尤其在肝脏和肾小管等组织表达较高。与其起源组织相比 ,Ｂａｘ蛋白在多数肿瘤组织及其细胞系中表达下降。对于原发性肝细胞癌 (简称肝癌 )的Ｂａｘ蛋白表达情况目前报道很少。Ｂｅｅｒｈｅｉｄｅ等的研究显示 ,肝癌组织中的Ｂａｘ蛋白表达水平和Ｂａｘ/Ｂｃｌ 2比例均明显低于…     

肝癌细胞凋亡相关蛋白Bax的表达及意义

主要组织相容复合体 (ＭＨＣ)Ⅱ类分子主要分布在抗原递呈细胞 (ＡＰＣ)表面 ,如Ｂ细胞、单核巨噬细胞及树突状细胞等[1] ,通过激活辅助Ｔ细胞间接活化细胞毒Ｔ细胞 ,在抗肿瘤免疫中发挥重要的作用。一般肿瘤细胞不表达ＭＨＣⅡ类分子 ,若利用基因转移技术 ,促使其在肿瘤细胞中表达 ,可将肿瘤细胞修饰为一种可以递呈自身抗原的抗原递呈细胞 ,增强其免疫原性。体外研究表明 ,ＭＨＣⅡ类分子递呈内源性抗原的作用由于其在胞内与分子伴侣———不变链 (Ⅱ链 )结合而受到抑制。若使ＭＨＣⅡ类分子表达的同时 ,Ⅱ链不表达 ,使胞内ＭＨＣⅡ分子的…     

EGCG诱导胃癌和肝癌细胞凋亡及bcl-2表达下调的研究

目的：探讨表没食子儿茶素投食子酸酯[（－）－epigallocatechin-3-gallate,EGCG]诱导胃癌MGC－803细胞和肝癌BEL－7402细胞凋亡的作用及其调亡相关基因bcl-2产物表达的改变。方法：用MTT法、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术检测EGCG处理MGC-803细胞和BEL-7402细胞后,他们在形态学和生化方面的改变以及bcl－2蛋白表达水平的变化。结果：EGCG以剂量依赖的方式抑制MGC－803细胞和BEL－7402细胞的生长,其IC50值分别为188．52和264．53μg／ml。200～300μg／ml的EGCG处理MGC-803细胞和BEL-7402细胞24～36h,在琼脂糖凝胶电泳上可见凋亡细胞特征性的“梯状”带和PI染色流式细胞仪直方图上可见亚二倍体峰;流式细胞术显示EGCG以时间依赖的方式下调bcl-2蛋白的表达。结论：EGCG对胃癌MGC-803细胞和肝癌BEL-7402细胞生长具有抑制作用,其机制之一是诱导这两株肿瘤细胞的凋亡。诱导细胞凋亡的机制可能与其下调bcl-2蛋白的表达水平有关。     

凋亡抑制基因 Survivin在肝癌细胞中的表达及其与PTEN、cyclin D1蛋白表达的关系

目的:探讨Survivin基因的表达在肝癌发生、发展中的作用及其与PTEN、cyclin D1蛋白表达的相互关系.方法:采用流式细胞术对肝细胞癌(48例)、癌旁肝硬化(32例)、肝硬化(6例)、正常肝组织(6例)Survivin、PTEN、cyclin D1基因蛋白的表达进行定量检测.结果:Survivin和cyclin D1蛋白表达的FI值明显高于癌旁组织、肝硬化和正常肝组织,而肝细胞癌的PTEN蛋白的FI值明显低于癌旁组织、肝硬化和正常肝组织.Survivin和PTEN蛋白的表达量与分化程度、预后有关,与肿瘤大小、门静脉癌栓、肝内转移无关.随着肿瘤恶性程度加重,Survivin与PTEN蛋白表达呈显著负相关;Survivin蛋白与cyclin D1蛋白表达之间呈显著正相关.结论:Survivin、PTEN及cyclin D1基因在肝细胞癌的发生、发展中起着不同的作用,联合检测Survivin和PTEN对判定肝细胞癌预后可提供一定的依据.     

miR-155/PTEN调控轴在肝癌中的表达及其机制

目的 检测microRNA-155（miR-155）在肝细胞癌中的表达并探讨其生物学作用及机制。方法 采用荧光定量PCR法检测miR-155在30对肝细胞癌和癌旁组织中的表达。在体外实验中,采用miR-155 mimic过表达miR-155,利用CCK-8和Transwell实验检测细胞增殖和迁移的变化。采用生物信息学和荧光素酶报告基因实验预测和验证miR-155的靶基因人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因（PTEN）,并分析其生物学作用。应用cBioPortal数据库分析miR-155及PTEN对肝癌患者预后的影响。结果 miR-155在肝癌组织中较癌旁组织表达升高（P<0.0001）,过表达miR-155能促进肝癌细胞的增殖和迁移。miR-155高表达患者的疾病无进展生存期（DFS）较低表达组显著降低（P=0.021）。miR-155直接负性调控PTEN的表达,并增强胞内磷脂酰肌醇激酶（PI3K）通路信号。PTEN表达缺失患者的疾病无进展生存期较PTEN表达正常组差（P=0.0133）。结论 miR-155/PTEN调控轴对肝癌的进展发挥促进作用。     

siRNA干扰MTH1基因对肝癌HepG2细胞凋亡和迁移的影响

目的 应用siRNA干扰技术抑制人肝细胞癌系HepG2细胞MTH1基因表达,并研究MTH1基因干扰后对HepG2细胞凋亡和迁移能力的影响。方法 设计并化学合成3对特异性MTH1-siRNA,采用阳离子脂质体法瞬间转染肝癌HepG2细胞,离体培养肝癌HepG2细胞,并设正常对照组、阴性对照组及MTH1-siRNA1、MTH1-siRNA2、MTH1-siRNA3转染组。采用蛋白印迹（Western blot）法检测转染MTH1-siRNA后HepG2细胞MTH1蛋白水平表达的变化,并筛选干扰效果最佳序列。运用流式细胞技术和划痕实验检测转染siRNA-MTH1后HepG2细胞凋亡、体外迁移能力的变化。结果 MTH1-siRNA3转染组干扰效果与正常组和阴性对照组相比效果具有统计学意义（P=0.002, P=0.005）。MTH1-siRNA3转染组细胞凋亡率高于正常组及阴性对照组,差异有统计学意义（P=0.012, P=0.013）;MTH1-siRNA3转染组细胞的划痕24、36 h愈合率均低于正常组和阴性对照组,差异有统计学意义（P=0.001, P=0.000）。结论 MTH1在肝癌细胞的凋亡及迁移中起重要作用,干扰MTH1的表达能促进肝癌细胞凋亡并降低肝癌细胞的迁移能力。     

CA3诱导肝癌HepG2细胞凋亡及其机制CSCD

目的探讨CA3(CIL56)对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响及其机制。方法体外培养HepG2细胞,分别加入不同浓度CA3(0、0.25、0.5、1.0、2.0和4.0 mmol/L)作用24和48 h。增强型CCK-8试剂检测不同浓度CA3对细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率;检测细胞内活性氧(ROS)的变化;Western blot法分析YAP1、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达。结果增强型CCK-8试剂检测结果显示,0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 mmol/L的CA3作用HepG2细胞24和48 h后,细胞增殖率分别为(80.5±0.3)%、(79.4±0.2)%、(76.2±0.2)%、(76.4±0.1)%、(49.3±0.4)%和(75.3±0.2)%、(64.8±0.3)%、(48.4±0.2)%、(32.2±0.4)%、(31.9±0.2)%。流式细胞术结果显示,CA3浓度升高至2 mmol/L时,凋亡率增加到58.48%。CA3处理后,HepG2细胞内活性氧产量增加,YAP1、Bcl-2蛋白表达降低,Bax、Caspase-3表达增高。结论 CA3可抑制HepG2细胞增殖并诱导凋亡,其机制可能与细胞内活性氧产量增加,调节YAP1、Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白的表达有关。     

茶多酚诱导膀胱癌细胞凋亡及上调PTEN、E-Cadherin表达的研究

目的 :探讨茶多酚抑制膀胱癌细胞生长的可能分子机制。方法 :采用MTT法和流式细胞术 ,观察膀胱癌细胞系 (T2 4及SCaBER)经不同浓度的茶多酚处理后对细胞生长以及PTEN、E cadherin蛋白表达的影响。结果 :茶多酚以剂量依赖的方式抑制膀胱癌细胞的生长 ,加入 0、5 0、10 0、2 0 0、4 0 0 μg·ml-1茶多酚的T2 4细胞和SCaBER细胞抑制率分别为 0 %、11 2 %、33 4 %、36 9%、6 7 5 %和 0 %、16 5 %、19 1%、30 3%、31 4 %。流式细胞仪直方图上可见亚二倍体峰 ,癌细胞出现凋亡 ,凋亡率分别为 6 8%、2 5 1%、2 8 6 %、36 6 %、4 1 1%和 2 1 4、2 7 2 %、2 8 5 %、36 8%、4 7 7% ;同时 ,随茶多酚作用浓度的增加 ,出现G1/S阻滞细胞逐渐增多 ,细胞分裂增殖指数 (PI)降低 ;而细胞PTEN蛋白表达水平由 (37 6 6± 0 4 9)、(38 2 8± 0 6 1)逐渐增加至(16 3 92± 3 36 )、(177 36± 10 79) ,E cadherin蛋白表达水平由 (37 5 2± 1 14 )、(38 5 9± 4 2 4 )逐渐增加至 (12 1 86± 1 5 0 ,15 3 5 8± 2 5 1) (P <0 0 1,P <0 0 1)。结论 :茶多酚对T2 4及SCaBER细胞生长具有抑制作用 ,其机制可能是通过上调PTEN蛋白表达影响细胞周期和诱导细胞凋亡。PTEN、E cadherin蛋白表达水平的上调可能具有逆转细胞恶性生     

MMP-7和PTEN蛋白在原发性肝细胞性肝癌中的表达及其意义

目的探讨基质金属蛋白酶7(matrilysin,MMP-7) 和PTEN在原发性肝细胞性肝癌(HCC)中的表达状况,并探讨他们之间的关系及其临床意义。方法应用免疫组织化学SP法检测原发性肝细胞性肝癌150例、肝硬化50例、肝炎50例、正常肝组织30例中MMP-7、PTEN的表达。结果MMP-7,PTEN主要表达于细胞质,MMP-7和PTEN在原发性肝细胞性肝癌、肝硬化、肝炎和正常肝组织的表达差异有统计学意义,且MMP-7在原发性肝细胞性肝癌组织中的表达明显高于在正常肝组织中的表达（χ²=20.17,P< 0.05）,而PTEN的阳性表达率明显弱于正常肝组织（χ² =16.26,P<0.05）。MMP-7,PTEN关系密切,呈负相关。结论PTEN、MMP-7的表达一定程度上反映HCC侵袭性强弱,PTEN缺失可引起MMP-7表达增加,在HCC侵袭、转移中发挥作用。     

靶向CD24分子3E10增强肝癌HuH-7细胞的化疗敏感度

目的 探讨靶向分子CD24单克隆抗体3E10调节肝癌HuH-7细胞对化疗药顺铂敏感度的作用及其分子机制。方法 Western blot和流式细胞术检测抗CD24抗体3E10的特异性;Annexin V-FITC/PI双染色检测细胞凋亡;Real-time PCR和Western blot检测耐药基因和肿瘤干细胞特性基因的表达水平;Western blot检测JAK/STAT3和PI3K/AKT信号通路的活性水平。结果 3E10可有效识别CD24蛋白及HuH-7细胞。3E10显著增强HuH-7细胞对顺铂的敏感度（P<0.05）,抑制率由（10.3±3.0）%提高至（34.4±10.8）%。3E10显著降低HuH-7细胞耐药基因ABCB1、ABCB5、ABCC1和肿瘤干性基因NANOG、CD24的表达水平及干性基因β-catenin的磷酸化水平（P<0.05）。3E10显著降低STAT3和AKT的磷酸化水平（P<0.05）。结论 靶向CD24分子3E10通过降低HuH-7细胞的耐药性、肿瘤干性和JAK/STAT3、PI3K/AKT信号通路活性来增强HuH-7细胞对化疗药顺铂的敏感度。     

蛇葡萄素通过Dermcidin蛋白调节肝癌细胞株HepG2侵袭活力及侵袭基因表达的实验

 目的 研究蛇葡萄素（AMP）对肝癌细胞株HepG2侵袭活力及侵袭基因表达的调节作用及分子机制。方法 培养肝癌细胞株HepG2后用不同剂量的AMP处理（20、40、60、80 μmol/L）、转染Dermcidin的siRNA,测定细胞的迁移能力、侵袭能力以及Dermcidin、侵袭基因mRNA表达量。结果 不同剂量AMP处理后细胞的迁移、侵袭数目及细胞中Dermcidin、基质金属蛋白酶（MMP）2、MMP9、MMP10 mRNA水平均低于对照组,且AMP剂量越大,细胞的迁移、侵袭数目及细胞中Dermcidin、MMP2、MMP9、MMP10 mRNA水平越低;80 μmol/L AMP联合dermcidin siRNA后,HepG2细胞的迁移、侵袭数目以及细胞内MMP2、MMP9、MMP10 mRNA表达水平均增多。结论 AMP通过下调Dermcidin蛋白来抑制肝癌细胞株HepG2的侵袭活力、降低侵袭基因的表达水平。     

Platycodin D Induces Apoptosis,and Inhibits Adhesion,Migration and Invasion in HepG2 Hepatocellular Carcinoma Cells

Background: Platycodin D (PD), a triterpenoid saponin isolated from the Chinese medicinal herb Platycodonisradix, possesses anti-cancer effects in several cancer cell lines. The aim of this study was to evaluate its anticanceractivities in hepatocellular carcinoma cells. Materials and Methods: MTT and colony formation assayswere performed to evaluate cell proliferation, along with flow cytometry and Western blotting for apoptosis.Cell adhesion was tested by observing cellular morphology under a microscope, while the transwell assay wasemployed to investigate the cell migration and invasion. Results: PD concentration-dependently inhibited cellproliferation in both HepG2 and Hep3B cells, and significantly suppressed colony formation and induced apoptosisin HepG2 cells. The protein levels of cleaved poly ADP-ribose polymerase (PARP) and Bax were up-regulatedwhile that of survivin was down-regulated after treatment with PD. Moreover, PD not only obviously suppressedthe adhesion of HepG2 cells to Matrigel, but also remarkably depressed their migration and invasion induced by12-O-tetradecanoylphorbol 13-acetate (TPA) . Conclusions: PD presents anti-cancer potential in hepatocellularcarcinoma cells via inducing apoptosis, and inhibiting cell adhesion, migration and invasion, indicating promisingfeatures as a lead compound for anti-cancer agent development.     

沉默B7-H3基因表达对人肝癌细胞侵袭能力的影响

目的 研究靶向沉默B7-H3基因表达对HepG2细胞侵袭能力的影响及可能机制。方法 设计针对B7-H3基因的shRNA沉默质粒,转染HepG2细胞,下调B7-H3的表达。划痕修复实验检测转染前后HepG2细胞移行能力的变化,Transwell实验检测基因沉默对细胞侵袭能力的影响,MST-1法和ELISA凋亡试剂盒分别检测细胞增殖和凋亡水平变化。通过Western blot实验和明胶酶谱实验检测侵袭相关分子MMP-2、MMP-9的表达和活性变化。结果 成功构建B7-H3 shRNA沉默质粒并转染HepG2细胞。与对照质粒转染组和未转染组比较,沉默B7-H3基因表达后,B7-H3 shRNA转染组HepG2细胞的移行（24 h: P=0.001; 48 h: P<0.001; 72 h: P<0.001）和侵袭（P<0.001）能力受到显著抑制,细胞的增殖和凋亡水平没有明显变化（P>0.05）。MMP-2、MMP-9的蛋白表达（MMP-2: P<0.001; MMP-9: P=0.007）和活性（MMP-2: P<0.001; MMP-9: P<0.001）均显著下降。结论 通过B7-H3 shRNA沉默质粒靶向沉默B7-H3的基因表达能抑制HepG2细胞的侵袭能力,其机制可能与抑制MMP-2、MMP-9的表达和活性有关。     

结直肠癌中PTEN蛋白的表达

目的探讨结直肠癌中PTEN蛋白的表达及其与侵袭和转移的关系。方法应用免疫组化SP法检测67例结直肠癌中PTEN、Ecad、MMP2的表达情况,5例正常大肠黏膜作对照。结果PTEN蛋白表达定位于细胞质。与正常大肠黏膜相比,癌组织中PTEN表达明显降低,并随分化程度降低呈递减趋势;淋巴结转移组明显低于无淋巴结转移组;与浸润深度呈负相关。结直肠癌中PTEN表达与Ecad呈正相关,与MMP2呈负相关;淋巴结转移组PTEN、Ecad低表达且MMP2高表达的人数明显高于无淋巴结转移组。结论PTEN、Ecad低表达,MMP2高表达在结直肠癌的侵袭和转移过程中可能起协同作用,联合检测可为结直肠癌生物学行为判定和进一步的研究和治疗提供有效病理学依据。