氢过氧化物裂解酶的筛选及纯化

研究了不同植物原料中氢过氧化物裂解酶的含量,并最后筛选出苋菜作为提取原料。利用高速离心、表面活性剂溶解、硫酸铵分级沉淀、羟基磷灰石柱层析和离子交换色谱对苋菜氢过氧化物裂解酶进行纯化至电泳纯。结果表明,纯化的苋菜氢过氧化物裂解酶分子量约为55ku,对于13-亚麻酸氢过氧化物的活力高于13-亚油酸氢过氧化物,最适pH6.0,最适温度为25℃,在常温下酶能保持较高水平的活力。     

从苋菜中提取氢过氧化物裂解酶工艺

在高等植物中,氢过氧化物裂解酶(hydroperoxide lyase,HPL)可将脂肪氧合酶氧化多不饱和脂肪酸产生的氢过氧化物催化裂解,生成的己醛、己烯醛等芳香性物质具有果蔬的新鲜气味,是食品行业和日化工业中的重要芳香风味添加剂。实验以苋菜为研究对象,在单因素[pH、半胱氨酸浓度、匀浆转速、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)浓度]实验基础上,运用4因素3水平的正交实验,对HPL的提取工艺进行了优化,即在12 000 r/min,以pH 8.0的含有1 mmol/L半胱氨酸和0.3%质量浓度的PVP为缓冲液提取HPL,得到的HPL具有很高的酶活。并探索了抽真空对HPL提取的影响,在抽真空完全除去氧的情况下提取HPL,酶活得到显著提高。     

山参磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶cDNA克隆及序列分析

磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)具有明显的抗氧化活性,避免细胞膜受到过氧化损伤。本研究利用RACE技术,克隆出山参phgpx基因全长c DNA。序列分析表明:该克隆片段全长490 bp,编码162个氨基酸,有3个真核生物PHGPx特有的保守亚结构域。该片段编码的蛋白为跨膜亲水性稳定蛋白质,与柑橘、蓖麻等PHGPx氨基酸序列同源性分别为76%和75%。同时建立了9种植物的系统进化树。      

大豆脂肪氧合酶催化合成亚麻酸氢过氧化物的研究

大豆脂肪氧合酶催化亚麻酸生成亚麻酸氢过氧化物,在氢过氧化物裂解酶的作用下可生成具有青草自然风味的化合物.为了得到转化率高、纯度高的亚麻酸氢过氧化物,研究了反应温度、pH、亚麻酸浓度、加酶量、搅拌速度和氧气压力等对亚麻酸氢过氧化物转化率的影响.实验得出:当反应温度为4℃,pH为9.0,亚麻酸浓度为0.025 mol/L,加酶量为2.5 U/mL,搅拌速度为800 r/min,氧气压力为0.2 MPa时,生成的亚麻酸氢过氧化物的转化率和纯度分别为82.3%和87.01%.     

响应面法优化正己醛、反-2-己烯醛熏蒸鲜切菠萝蜜条件

为确定正己醛、反-2-己烯醛熏蒸鲜切菠萝蜜的最佳工艺条件,以八成熟\     

分光光度法同时测定油脂中氢过氧化物和醛含量

采用分光光度法同时测定油脂中氢过氧化物和醛含量,对有关参数进行了研究和优化。结果表明:N,N-二甲基对苯二胺为显色剂,乙酸为催化剂,40℃下反应40 min,用Kaiser法得出的最佳分析波长350、408 nm处可同时准确测定油脂中的氢过氧化物和丙二醛的含量;在120℃进行氧化,并对不同氧化程度的大豆油和鳄梨油中的氢过氧化物和丙二醛含量进行测定,测定结果与标准方法对比无显著性差异。     

海藻酸钠裂解酶酶活测定方法研究

应用酶反应动力学原理对海藻酸钠裂解酶酶活测定反应体系和反应条件进行系统研究,以改进海藻酸钠裂解酶的测定方法。本实验采用紫外吸收法测定酶活,改良后的酶活测定方法为:300 μL底物溶液（海藻酸钠2.2%,KCl 5 mmol/L,0.1 mol/L Na₂HPO₄-NaH₂PO₄缓冲液,pH7.0）加入50 μL稀释至2.4～30 U/mL的酶液,于37 ℃水浴静置反应20 min后用冰浴终止反应,反应液稀释20倍后在235 nm处测定吸光度。每份底物溶液均需用新枪头移取以提高精密度,使移液误差小于2%。本酶活测定方法的相对标准偏差小于5%。     

茉莉醛合成工艺的优化研究

采用PEG-400为相转移催化剂,KOH为碱性催化剂,由苯甲醛和正庚醛经醇醛缩合反应制得茉莉醛。优化的工艺条件为苯甲醛19g、正庚醛17g、KOH5g、PEG-4006g、去离子水48mL、乙醇20mL。反应温度333K、反应时间6h、产品收率可达90.0%。     

Stability of hydroperoxide lyase activity from Amaranthus tricolor (Amaranthus mangostanus L.) leaves: influence of selected additives

BACKGROUND: Hydroperoxide lyase (HPL) has potential value for the flavour additive industry. Currently, the production and application of HPL suffer from stability problems. The objective of this study was to investigate the stabilisation of HPL preparation from Amaranthus tricolor leaves by the addition of selected chemical additives. RESULTS: Amaranthus tricolor leaves were identified as a particularly rich source of 13‐HPL activity. The addition of 100 g L^?1 sucrose and trehalose to microsomal HPL prior to lyophilisation could retain nearly 100% enzymatic activity, compared to only 20% for the lyophilised control. The lyophilised microsomal HPL containing sucrose maintained full activity for even 40 days storage at ? 20 °C. For HPL solution, glycerol was effective for long‐term stability at ? 20 °C. Moreover, poyols (sucrose and trehalose) and amino acid (glycine) enhanced the thermostability of HPL, while KCl and polyol mannitol decreased the thermostability of HPL. CONCLUSION: The flavour‐producing enzyme HPL, found in the leaves of Amaranthus tricolor, was stabilised by the addition of chemical additives. Copyright © 2010 Society of Chemical Industry     

硅胶吸附脱除注射用大豆油氢过氧化物的研究

开展了硅胶吸附脱除注射用大豆油氢过氧化物的研究。以过氧化值为评价指标,筛选硅胶种类,优化吸附工艺参数,并对吸附脱除氢过氧化物后的注射用大豆油的其他质量指标进行评价。结果表明,最佳吸附工艺条件为:选用粒度为70~200μm的进口硅胶,硅胶添加量11%,反应温度60℃,反应时间1. 0 h。在最佳工艺条件下,注射用大豆油的过氧化值、酸价、皂化值、碱性杂质、不皂化物等指标均符合注射用大豆油国家标准。     

一株褐藻酸裂解酶高产菌的筛选及其酶学性质研究

从腐烂的海带中筛选出一株褐藻酸裂解酶（Aly）高产菌,经形态学分析、生理生化特征和分子水平鉴定,该菌为交替假单胞菌属,命名为Pseudoalteromonas sp. EE258。利用硫酸铵沉淀、快流速DEAE-琼脂糖凝胶（DEAE-sepharose Fast Flow）和丙烯葡聚糖凝胶（Sephacryl S-100）柱层析等方法,对Pseudoalteromonas sp. EE258产生的褐藻酸裂解酶Aly-EE258进行分离纯化,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测定该酶的分子质量为23 ku。酶学性质研究显示：该酶的最适反应温度为40 ℃,最适反应pH值为7.0,在20 ℃以下时稳定性较好,Ca2+和Ba2+能明显提高酶的活性,Fe2+、Al3+、Mg2+和乙二胺四乙酸（EDTA）抑制酶的活性。Aly-EE258能不同程度地裂解褐藻酸、聚古洛糖醛酸和聚甘露糖醛酸,其中聚甘露糖醛酸裂解后主要产生单一的低聚寡糖,在实际应用方面具有重要意义。     

褐藻胶裂解酶酶学性质及酶解马尾藻工艺的响应面优化

海洋细菌是褐藻胶裂解酶的重要来源。该试验以实验室制备的褐藻胶裂解酶粗酶液为研究对象,对其酶学性质及酶解工艺进行初步研究。结果表明,酶的最适反应条件为50 ℃、pH 8,在4～40 ℃、pH 5～9范围内酶活力较稳定;Ca2+、Mg2+和Fe2+等离子对该酶有促进作用,EDTA、Ba2+、Zn2+等有抑制作用。以孤囊马尾藻（Sargassum oligocystum）为试验原料,以褐藻寡糖含量为响应值,通过单因素试验和响应面法对马尾藻的固态酶解工艺条件进行优化,当含水率75%、温度40.7 ℃、酶解10.3 h时,寡糖含量达到（50.42±0.24） mg/g。该试验可为褐藻寡糖的酶解法规模制备提供理论依据与应用参考。     

酶法催化合成生物柴油的研究进展

生物柴油是一种可再生、可生物降解、无毒的清洁能源,可以部分替代石油柴油。酶法合成生物柴油和传统碱法、酸法催化相比,具有反应条件温和、不产生废水、反应产物容易分离等优点。对脂肪酶的种类、特性和酶法催化酯交换合成生物柴油的主要工艺进行了介绍,同时展望了酶法催化合成生物柴油的前景。     

离子交换树脂吸附法固定化脂肪酶的研究

以D311离子交换树脂为载体,通过离子交换吸附法对Lipolase100L脂肪酶进行了固定化。采用考马斯亮蓝法测定了酶蛋白在离子交换树脂上的吸附率,考察并得到了酶固定化的最佳条件：在pH10缓冲液下,加酶液量为每克预处理过的树脂加入1.5mL,吸附时间为10h,吸附温度为35℃。所得固定化酶用于催化合成月桂酸月桂醇酯,在反应物质的量比为1∶1时,水质量分数为8%,在50mL异辛烷有机溶剂中固定化酶用量为200mg,反应时间为210min,温度为55℃的最佳条件下,酯化率可达91.3%。     

微波协同强酸性大孔树脂催化合成肉桂酸异戊酯的研究

研究了在微波辐射强酸性大孔树脂催化合成肉桂酸异戊酯的新工艺,通过优化得到最佳工艺条件:肉桂酸0.01 mol,酸醇摩尔比1∶3.5,催化剂为CAT600树脂,催化剂用量为反应物质量的35%,微波功率700W,反应时间10m in,在此条件下产率达91.4%。在最佳工艺条件下催化剂再生循环使用,催化性能稳定。     

耦合吸附树脂对细胞酶法合成谷胱甘肽的影响

通过静态吸附-解吸试验从3种吸附树脂中筛选出最适合分离谷胱甘肽（GSH）的树脂,将其与酵母渗透细胞耦合,通过补加前体物质,酶法合成GSH。结果表明,在试验的3种树脂中,D301吸附效果最佳。采用单因素和正交试验法,确定酶法合成GSH的优化工艺为：反应2.0 h后添加树脂2.0 g/10 mL,反应3.0 h时补加60%初始浓度的前体物质,最终得到GSH产量1 154 mg/L,与未添加树脂和前体合成法相比GSH产量提高77.5%。