谷氨酰胺酶反义基因对裸鼠胃癌移植瘤生长的抑制作用

目的 研究反义核酸技术封闭谷氨酰胺酶（GA）基因对裸鼠体内胃癌生长的抑制作用。方法将携带GA反义基因的质粒转染胃癌细胞SGC-7901，并将转染的胃癌细胞接种于裸鼠皮下，观察其在裸鼠体内的生长情况，通过病理学检查和免疫组化方法评价细胞增殖活性的改变；RT-PCR技术检测移植瘤内GA mRNA的含量。结果GA反义基因质粒载体成功转染胃癌细胞后，癌细胞成瘤能力下降，肿瘤生长速度减慢，肿瘤血管生成减少，肿瘤组织GA mRNA的含量减少。结论GA反义基因有效抑制GA基因的表达并抑制胃癌细胞在裸鼠体内的生长。     

谷氨酰胺酶反义基因对裸鼠胃癌移植瘤生长的抑制作用

目的研究反义核酸技术封闭谷氨酰胺酶(GA)基因对裸鼠体内胃癌生长的抑制作用。方法将携带GA反义基因的质粒转染胃癌细胞SGC-7901,并将转染的胃癌细胞接种于裸鼠皮下,观察其在裸鼠体内的生长情况,通过病理学检查和免疫组化方法评价细胞增殖活性的改变;RT-PCR技术检测移植瘤内GA mRNA的含量。结果GA反义基因质粒载体成功转染胃癌细胞后,癌细胞成瘤能力下降,肿瘤生长速度减慢,肿瘤血管生成减少,肿瘤组织GA mRNA的含量减少。结论GA反义基因有效抑制GA基因的表达并抑制胃癌细胞在裸鼠体内的生长。     

TRAIL真核表达质粒的构建及抑制肝癌生长的实验研究

目的构建TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因的真核表达质粒，观察其对BALB／c裸鼠肝癌细胞皮下移植瘤模型的抑瘤作用。方法提取U937细胞总RNA．用RT-PCR方法扩增出胞外区(114—281aa)，连入溶菌酶信号肽序列，构建分泌型TRAIL重组质粒；建立裸鼠7402肝癌细胞皮下移植瘤模型，纯化后的质粒DNA与脂质体聚乙烯胺混合后经肌肉注射进行基因转染，体内验证重组蛋白的抑瘤活性，采用TUNEL法进行肿瘤组织细胞凋亡检测。结果肿瘤体积测定结果显示．TRAIL对肝癌细胞生长有抑制作用；凋亡检测光镜下可见有棕褐色凋亡细胞，细胞凋亡指数增高。结论重组TRAIL质粒能引起肿瘤细胞的凋亡，抑制7402肝癌细胞的生长。     

shRNA介导的热休克蛋白70敲低对人结肠癌细胞在裸鼠体内生长的影响

目的:探讨热休克蛋白70(HSP70)敲低对结肠癌细胞在裸鼠体内生长的影响。方法:构建两种干扰HSP70的shRNA(HSP70 shRNA-1和HSP70 shRNA-2)质粒表达载体,分别转染到结肠癌HT29细胞,并以空质粒转染(阴性对照)和未转染的HT29细胞(空白对照)为对照,用RT-PCR和Western blot方法检测各组HT29细胞HSP70基因和蛋白的表达;将HSP70shRNA-2转染、空质粒转染及未转染的HT29细胞分别接种至裸鼠皮下建立移3组植瘤模型,观察肿瘤生长情况,3周后剥离瘤块,用HE染色、免疫组化和TUNEL法分别检测移植瘤组织形态学、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及细胞凋亡情况。结果:RT-PCR和Western blot结果显示HSP70 shRNA-1和HSP70 shRNA-2均能明显抑制HT29细胞HSP70基因和蛋白的表达,且HSP70 shRNA-2的抑制作用更为明显,空质粒转染对HSP70的表达无明显影响;与空白对照组比较,HSP70 shRNA-2转染组裸鼠移植瘤生长明显较明显减慢(P<0.01),瘤组织中心出现明显坏死,PCNA表达明显降低,细胞凋亡率明显增加(P<0.01),而空质粒转染组无明显上述改变(P>0.05)。结论:HSP70沉默能抑制结肠癌HT29细胞裸鼠移植瘤的生长,促进细胞凋亡,HSP70可能是治疗结肠癌有效靶点。     

转染Caspase-1基因对人胃癌细胞株生物学特性影响的研究

目的 探讨转染Caspase-1基因对胃癌细胞生物学特性的影响。方法 将人凋亡基因Caspase-1的重组逆转录病毒导入胃癌细胞株X-108。对转染阳性细胞的体外增殖、细胞培养液中CEA含量及裸鼠致瘤性进行分析。结果 导入的Caspase-1基因使细胞增殖周期发生变化，G1期细胞数目增多，S期细胞数目减少。转染细胞培养液CEA含量有下降趋势胃癌细胞株X-108-Caspase-1体外生长速度明显受抑，裸鼠体内致瘤性降低．肿瘤生长缓慢。结论 Caspase-1不能促使X-108胃癌细胞凋亡，但可以使其增殖受抑，肿瘤细胞的恶性程度降低。     

靶向survivin的RNA干扰对裸鼠前列腺癌的影响

目的探讨利用RNA干扰技术在裸鼠体内抑制survivin基因表达并诱导前列腺癌细胞凋亡的作用。方法设计、构建靶向survivin的重组质粒载体并导入裸鼠皮下移植瘤,称量瘤重,计算抑瘤率,应用RT-PCR法检测survivin基因的干涉效率,TUNEL染色法技术检测细胞凋亡效果。结果PBSsi-survivin A和PBSsisurvivin B两种阳性表达载体转染组均具有显著低瘤重和高抑瘤率特点,两组均显著抑制了Survivin mRNA表达,并诱导前列腺癌细胞凋亡。结论RNAi可有效抑制前列腺癌PC-3细胞survivin基因mRNA表达,减缓肿瘤生长,并诱导细胞凋亡。     

C2基因对人胃癌细胞周期的影响

目的 探索新克隆的编码人蛋白翻译起始因子的全长基因（C2基因）对细胞周期的影响及与细胞凋亡的关系。方法 构建C2基因真核表达载体,转染人胃癌细胞系SGC7901,获得瞬时和稳定表达C2蛋白的人胃癌细胞株,应用流式细胞分析法检测C2蛋白在转染细胞上的表达和转染细胞细胞细胞周期的改变并在电镜下观察转染细胞超微结构的改变。结果 成功构建了C2基因真核表达载体;流式细胞分析法检测转染细胞C2蛋白表达率为32．3％,空白对照为0．9％;细胞周期检测提示瞬时和稳定转染了C2基因的细胞均发生凋亡;电镜下可见转染了C2基因的胃癌细胞发生凋亡。结论 C2基因转染可引起胃癌细胞发生凋亡,机制有待进一步研究。     

MAT2A siRNA对荷瘤鼠肝癌细胞生长的影响

目的探讨MAT2A小干扰RNA对荷瘤鼠肝癌细胞生长和细胞凋亡的影响。方法采用脂质体转染法将MAT2A小干扰RNA质粒表达载体转染人肝癌细胞系Bel-7402细胞，建立持续转录小干扰RNA的细胞系，并将该细胞系皮下接种裸鼠，观察肿瘤生长情况；为进一步观察裸鼠体内抑瘤性，将皮下接种稳定表达小干扰RNA的Bel-7402细胞系的裸鼠分为三组：A、盐水对照组，B、空质粒对照组，C、siRNA治疗组；于接种后第12天，每组动物行纯化质粒DNA瘤内注射，观察肿瘤大小；治疗后2周，处死所有动物，取肿瘤，测量大小；部分石蜡包埋切片、HE染色，部分进行凋亡检测。结果得到稳定转染siRNA载体、并能持续表达siRNA的Bel-7402细胞系，将稳定建系的细胞传代，持续表达siRNA细胞系肿瘤细胞生长明显缓慢。皮下接种建系的Bel-7402细胞建立荷瘤鼠模型，可以观察到siRNA组肿瘤生长缓慢，平均第13天才长出皮下可及、但肉眼看不到的肿瘤，而接种control siRNA组，平均第9天可长出肉眼可见的肿瘤；用裸鼠肿瘤模型观察siRNA的体内抑瘤效果，质粒DNA注射后，对照组瘤体10．93mm^3，空质粒对照组为11．13mm^3，而siRNA质粒转染组为4．26mm^3（P〈0.01）；HE染色显示，对照组和空质粒组质粒DNA注射后，病灶充满肿瘤细胞；而siRNA组质粒DNA注射后，病灶内有大量炎性细胞浸润，坏死明显，仅见少量肿瘤细胞；且siRNA明显诱导荷瘤鼠肝癌细胞凋亡，其凋亡指数为（28．79±2．13）％，较盐水对照组（9．54±1．89）％和空质粒治疗组（10．24±2．06）％明显升高（t=15．41，P〈0．01）。结论靶向MAT2A基因的siRNA诱导荷瘤鼠肝癌细胞凋亡，抑制肝癌细胞生长。     

转染Caspase—1基因的人胃癌细胞生物学特性的研究

目的 探讨转染Caspase-1基因对胃癌细胞生物学特性的影响.方法 将人凋亡基因Caspase-1的重组逆转录病毒导入胃癌细胞株X-108,对转染阳性细胞的体外增殖、细胞培养液中CEA含量及裸鼠致瘤性进行分析.结果 导入的Caspase-1基因虽不能直接诱导细胞凋亡,但G_1期细胞数目增多,S期细胞数目减少.转染细胞培养液CEA含量有下降趋势.胃癌细胞株X-108-Caspase-1体外生长速度明显受抑,裸鼠体内致瘤性降低,肿瘤生长缓慢.结论Caspase-1不能促使X-108胃癌细胞凋亡,但可以使其增殖受抑,肿瘤细胞的恶性程度降低.     

P27^kip1基因过度表达诱导人胃癌细胞系凋亡机制的研究

目的：研究P27^kipl基因转染对人胃癌细胞系BGC-823的诱导凋亡作用及其可能机制。方法：构建含人P27^kipl基因的逆转录病毒真核表达载体，将外源性P27^kipl基因转染人胃癌细胞系BGC-823，应用Western blot、流式细胞分析术（FCM）等方法，检测P27^kipl蛋白在胃癌细胞内的表达、诱导凋亡作用及其对bcl-2基因表达的影响。结果：外源性P27^kipl蛋白在胃癌细胞中获稳定表达，胃癌细胞凋亡，bcl-2蛋白表达水平降低。结论：P27^kipl的过度表达可通过对bcl-2表达的调控显促进胃癌细胞凋亡，提示P27^kipl基因转染可成为胃癌的有效治疗方法。     

胫骨干骨折的手术治疗对策

目的：明确不同固定器械在胫骨干不同骨折类型固定中的特点，以指导临床应用。方法：68例胫骨干骨折，行加压钢板螺钉、交锁髓内钉、单侧外固定架固定后，作临床疗效分析。结果：加压钢板固定组42例，感染5例，骨不连1例，平均愈合时间3．8个月；交锁髓内钉固定组13例，无感染及骨不连，平均愈合时间5．4个月；单侧外固定架组13例，骨不连1例，踝关节背伸受限3例，平均愈合时间4．5个月。结论：胫骨骨折交锁髓内钉固定并发症少，功能恢复好，适用范围广，但要注意及时进行动力加压。加压钢板及外固定架固定应选择各自的最佳适应证，以达到理想的疗效。     

Faculty of Anaesthetists of the Royal College of Surgeons of Ireland

The Faculty of Anaesthetists of the Royal College of Surgeons of England, 35–43 Lincoln's Inn Fields, London WC2A 3PN. Telephone: 01-405 3474.     

Surgical correction of rupture of aneurysm of the sinus of Valsalva

Operations were performed on 48 patients with aneurysms of the thoracic aorta, one of them had a rupture of aneurysm of the noncoronary sinus followed by the formation of a fistula between the aorta and the right atrium. The fistula was ligated by an access through the right atrium with good nearest and long-term results.