紫甘薯花色苷对人肝癌细胞HepG2的作用

以人肝癌细胞HepG2为模型研究紫甘薯花色苷的抗肿瘤活性.通过MTT实验检测紫甘薯花色苷对HepG2细胞的生长抑制作用,HE染色观察细胞形态,流式细胞仪测定细胞周期变化.MTT结果表明,不同浓度的紫甘薯花色苷处理HepG2细胞24、48、72,h后,低浓度的紫甘薯花色苷促进肿瘤细胞的生长,高浓度的紫甘薯花色苷抑制肿瘤细胞的生长,800,μg/mL花色苷处理72,h抑制率高达80%.HE染色结果表明,正常HepG2细胞的细胞核和细胞质清晰可见,而加入花色苷后,出现细胞核固缩、染色质浓集于核膜表面、形成新月形致密小斑块、细胞膜形态变得不规则等凋亡的特征.流式细胞仪分析结果表明,花色苷能够促进肿瘤细胞的凋亡,且细胞的凋亡率随花色苷浓度的增加而增大.     

大鼠睑板腺腺泡上皮超微结构及连接装置的研究

本实验采用透射电镜技术对12只成年雌性大鼠睑板腺腺泡上皮进行了观察,根据腺泡上皮的位置、形态、分化程度和超微结构特点,将上皮细胞分为5种类型:未分化的基底细胞、分化早期的过渡细胞、分化中期的过渡细胞、分化晚期的过渡细胞和成熟细胞。腺泡上皮由基底细胞分化为过渡细胞和成熟细胞,其超微结构有如下变化规律:细胞形态由扁平形→多边形→椭圆形;线粒体、高尔基器、滑面内质网和粗面内质网由少增多,然后逐渐减少;脂肪滴从无到有,由少增多;细胞核由椭圆形→圆形→不规则形;染色质由均匀分布到边集在核膜下,最后减少或消失。细胞连接装置除基底细胞与基底膜借质膜内褶相连外,其余部位细胞间以简单的相贴连接为主,可见少量镶嵌连接。     

不同储藏条件对优质稻胚细胞超微结构及抗氧化酶系统活性影响的研究

以两优系列优质稻为材料,探索在常规水分含量(13.5%、14.5%)和温度(15、20、30℃)条件下储藏的稻谷细胞内各项理化指标及其抗氧化防御系统中抗氧化酶和抗氧化剂的变化,观察稻谷胚细胞结构,探究储藏条件对稻谷细胞衰老损伤的影响。结果表明:随着储藏时间的延长和储藏环境温度的增高,超氧阴离子自由基、脂肪酸值和丙二醛呈逐渐上升的趋势,可溶性蛋白呈逐渐下降的趋势。超氧阴离子自由基、脂肪酸等有害物质的积累,破坏了稻谷细胞的代谢平衡,生物酶合成能力降低,超氧化歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)等抗氧化酶的量大大减少,抗氧化酶系统被破坏,细胞衰老加速。储藏后期,高温条件下的稻谷胚细胞形态变形较严重,细胞壁出现溶解,细胞膜内陷并出现了破损,原生质体内缩严重,核膜溶解破损,核仁变形出现分裂,细胞核异染色质凝聚加深,异染色质充满整个细胞核,稻谷胚细胞超微结构破损严重;低温条件下的稻谷胚细胞细胞壁结构无明显褶皱,细胞核膜清晰,细胞核仁形态正常,染色质凝聚,颜色稍有加深,胚细胞结构较完整。低温低水分储藏条件有利于优质稻的品质保鲜。     

家蝇幼虫凝集素的分离纯化及其抑制MCF-7细胞活性的研究

家蝇幼虫血淋巴粗提液经过亲和层析,分离出3种与D-半乳糖特异性结合的蛋白,经高效液相色谱和聚丙烯酰胺凝胶电泳。分离出分子质量为38ku的家蝇幼虫凝集素（MLL-2）,该组分具有明显的凝血活性．圆二色谱结果表明,MLL-2的二级结构主要是以／3折叠（80．3％）和无规卷曲（19．5％）的构象存在．MTT实验结果显示,MLL-2对人乳腺癌（MCF-7）细胞的生长具有明显的抑制作用,其抑制效果具有时间和浓度依赖性．形态学观察表明,MLL-2处理过的MCF-7细胞出现凋亡小体、染色质浓缩凋亡现象．经流式细胞仪分析MCF-7细胞被阻遏在G2／M期,并且凋亡率随作用时间的延长而增加．MLL-2通过诱导MCF-7细胞发生凋亡,从而起到抑制肿瘤细胞生长的作用．     

放线菌素D诱导的SL-1细胞凋亡的初步研究

研究了一定浓度的放线菌素D诱导SL-1细胞凋亡作用.以终浓度为50ng/mL,100ng/mL,200ng/mL,500ng/mL的放线菌素D处理正常SL-1细胞,24h后,终浓度为200ng/mL,500ng/mL的放线菌素D处理的细胞出现较明显的细胞凋亡现象,光学显微镜下可见细胞膜表面突出或形成小泡,细胞碎裂成凋亡小体;DAPI染色荧光显示细胞核逐渐形变,直至碎裂成小块而被凋亡小体包裹;DNA琼脂凝胶电泳呈典型的凋亡细胞DNA梯形条带;流式细胞仪检测结果,对照和以上四种浓度的放线菌素D处理的细胞凋亡率分别为3.43%,10.61%,15.60%,32.67%,72.24%.实验结果证明一定浓度的放线菌素D能诱导SL-1细胞凋亡,且成剂量正相关.     

纳米磷灰石对肝癌癌基因表达的影响

研究纳米磷灰石体外对人肝癌细胞系Bel-7402的作用机理。应用均相共沉淀法室温下合成纳米磷灰石，用透射电镜和电位粒度仪进行表征；利用透射电镜、原位杂交细胞化学检测其对人肝癌细胞系Bel-7402 c-myc和p53基因表达的影响。纳米磷灰石呈均匀分散的针状颗粒．粒径范围在67．5～88．3nm之间。可使肝癌细胞体积增大，胞质空泡化，线粒体肿胀；部分细胞核内染色质分散，凝集在核膜周围，呈团块状，核膜间隙不等，胞浆溶解。抑制c-myc和增强p53基因的表达。纳米磷灰石在体外通过下调c-myc和上调p53基因的表达，致肝癌细胞胀亡。     

细胞质处理小体(P-小体)与基因表达的调控

m RNA处理小体,又称P-小体(processing bodies,P-bodies),是细胞质中含有多种功能蛋白和RNA的聚集体.评述P-小体的形成和运动特点,以及其与小RNA、外切体相互作用,参与基因表达的调控.介绍了本实验室在P-小体植物细胞中的最新研究进展.指出P-小体是m RNA降解和储存的场所,在转录后水平参与基因表达的调控,P-小体在细胞中是动态变化的,P-小体中多样化的功能蛋白在P-小体的组装、功能行使中发挥重要作用.P-小体作为细胞质内m RNA的储存和降解结构在基因表达的转录后调控中起重要作用,其调控机制尚待进一步研究补充,P-小体与小RNA分子(micro RNA,mi RNA)调控的基因沉默之间也存在关联性.     

Hsp90抑制剂BIIB021对人急性T细胞白血病Molt-4细胞周期和凋亡的影响

为了研究Hsp90抑制剂BIIB021对人急性T淋巴细胞白血病细胞株Moh-4增殖和凋亡的影响,采用MTT法检测了BILB021对Molt-4细胞增殖的影响,Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡形态学变化,流式细胞术检测药物作用前后细胞周期和凋亡的改变,Westernblotting检测BIIB02l对细胞周期和凋亡相关蛋白的影响。结果显示：BIIB021以时间和刺量依赖性方式抑制Molt-4细胞增殖,48、72h的IC50分别为384．6nmol／L和301．8nmol／L;Hoechst33258染色可观察到细胞内出现凋亡小体,且随着药物浓度增大,凋亡小体的数目也逐渐增多;流式结果同样显示,随着药物浓度升高,细胞凋亡率逐渐上升,400nmol／LBILB021可诱导细胞凋亡率达34．4％;另外,BIIB021可显著阻滞细胞于GO／G1期;Westernblotting显示BILB021激活Caspase-8、-9、-3和PARP,下调CDK4／6,上调p21和p18,并能明显抑制Akt和p65。由此表明,BIIB021能激活死亡受体途径和线粒体途径诱导Molt-4细胞凋亡,并通过影响CDK4／6和p21、p18使得Molt-4细胞被阻滞于GO／G1期,抑制细胞增殖;BIIB021对Mott-4的Akt和NF-kB也有抑制作用。     

松口蘑菌丝体蛋白质诱导细胞调亡

采用深层发酵技术培养菌丝体并提取分离出的蛋白质,进行体外抗人子宫颈癌HeLa细胞增殖及诱导细胞凋亡机理的研究。试验发现松口蘑菌丝体水提液中活性蛋白质TMP在体外具有抑制肿瘤细胞增殖的作用,扫描电镜观察到TMP处理细胞产生明显的凋亡小体,TMP对细胞周期的影响是通过抑制细胞从S到G2M期的转化来抑制HeLa细胞增殖,诱导细胞发生凋亡的。DNA电泳出现以200bp左右为单位的DNA碎片。结果表明：采用液体培养方法生产的松口蘑菌丝体蛋白质,具有显著的抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡作用。     

用PAMPA和MDCK模型研究川芎嗪的跨膜吸收机制

利用PAMPA(Parallel artificial membrane permeation assay)和狗肾小管上皮(MDCK)细胞模型探讨盐酸川芎嗪(TMPH)的跨膜吸收过程及其机制.用lecithin/n-dodecane溶液在Multi-Screen-IP板上建立PAMPA模型,将MDCK细胞以5×104个/cm2接种到Millicell-CM CulturePlate Inserts(Millicell CPI)上培养至细胞生长融合成完整单层,然后测定TMPH在PAMPA和MDCK单层细胞模型上的跨膜透过情况,计算累积透过量.实验结果表明:TMPH在PAMPA上有一定的被动扩散吸收,在MDCK模型上除存在一定量的被动扩散转运外,还有其它形式的转运机制如依赖于转运蛋白的易化扩散或主动转运等参与.