多囊卵巢综合征患者颗粒细胞自噬的发生及影响因素

目的探讨多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者颗粒细胞自噬的发生及影响因素。方法取卵日收集行体外受精/卵胞质内单精子显微注射(IVF/ICSI)的PCOS患者和非PCOS患者的卵泡液和颗粒细胞,检测患者卵泡液性激素以及颗粒细胞自噬相关基因的表达,进一步将患者的颗粒细胞自噬相关基因与卵泡液性激素和临床结局等指标进行相关性分析。结果 PCOS患者颗粒细胞自噬相关基因BECN1(2.13±0.94)和ATG7(1.38±0.45)mRNA水平显著高于非PCOS组患者颗粒细胞(1.46±0.52,P=0.002;1.16±0.29,P=0.026)mRNA水平;PCOS患者卵泡液黄体生成素(LH)[(5.32±4.14)IU/L]、雌二醇(E2)[(990.36±390.53)mg/L]和睾酮(T)[(53.18±28.36)nmol/L]水平显著高于非PCOS组患者卵泡液[(2.38±1.34)IU/L,P=0.001;(715.61±325.18)mg/L,P=0.007;(24.44±15.12)nmol/L,P=0.000],PCOS患者卵泡液P4[(12.81±6.78)mg/L]水平显著低于非PCOS组患者[(17.77±9.60)mg/L,P=0.036]。相关性分析显示,颗粒细胞中BECN1 mRNA水平与血清基础T水平(r=0.490,P=0.000)、卵泡液T水平(r=0.329,P=0.031)、血清抗苗勒管激素(AMH)(r=0.337,P=0.018)均呈显著正相关。结论 PCOS患者颗粒细胞自噬可能存在异常激活,可能为PCOS发生的重要机制。     

罗格列酮对体外培养的PCOS患者卵巢黄素化颗粒细胞胰岛素抵抗的影响

目的:探讨罗格列酮改善PCOS卵巢局部胰岛素抵抗的作用。方法:收集行IVF-ET治疗的11例PCOS患者(PCOS组)和15例排卵正常的输卵管性不孕患者(对照组)促排卵后黄素化颗粒细胞行体外培养,分别用不同浓度罗格列酮(0nmol/L、1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L、10000nmol/L)处理细胞48h,采用RT-PCR和Westernblotting分别检测卵巢黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物(IRS)-1和IRS-2mRNA的表达及蛋白含量。结果:①基础状态下,PCOS组IRS-1mRNA表达及蛋白含量较对照组显著增加;IRS-2mRNA表达及蛋白含量较对照组显著降低(P<0.05);②不同浓度罗格列酮作用后,PCOS组IRS-1mRNA及蛋白表达显著降低,IRS-2mRNA及蛋白表达显著增加,并呈剂量依赖性,而正常对照组无变化。结论:PCOS患者卵巢局部存在胰岛素抵抗,其原因可能与IRS-1和IRS-2mRNA及蛋白表达异常有关;罗格列酮可通过提高黄素化颗粒细胞IRS-2的表达,降低IRS-1的表达,改善PCOS患者卵巢局部胰岛素抵抗。     

丝裂原活化蛋白激酶信号传导通路对猪卵巢颗粒细胞分泌功能的调节作用

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号传导通路对猪卵巢颗粒细胞分泌功能的调节作用.方法 将体外培养的猪卵巢颗粒细胞分为两组,分别加入浓度为50 μmoL/L的二甲基亚砜(DMSO)和MAPK抑制剂--PD98059(PD),作用48 h后,将加入DMSO的细胞分为两组,观察1组细胞加入浓度为20μmol/L的腺苷酸环化酶激活剂,不加腺苷酸环化酶激活剂的为对照1组;将加入PD的细胞也分为两组,观察2组细胞加入浓度为20 μmol/L的腺苷酸环化酶激活剂,不加腺苷酸环化酶激活剂的为对照2组,继续作用48 h.以化学发光法测定4组细胞中睾酮、孕酮和雌二醇的水平;用RT-PCR技术检测17α羟化酶(CYP17)和细胞色素芳香酶P450的基因表达,以扩增产物的灰度比(GSR)表示.结果 (1)生贿激素水平:对照1组睾酮、孕酮、雌二醇水平分别为(29.5±2.5)nmol/L、(80±5)nmol/L、(49±4)pmol/L,对照2组分别为(42.3±3.4)nmol/L、(170±15)nmoL/L、(75±6)pmol/L,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);观察2组睾酮、孕酮、雌二醇水平分别为(106.2±7.6)nmol/L、(210±16)nmol/L、(130±11)pmol/L,观察1组分别为(47.2±3.5)nmol/L、(130±6)nmol/L、(81±6)pmol/L,两组比较,差异也有统计学意义(P<0.05);(2)酶表达变化:对照2组与对照1组比较,CYP17 mRNA表达增强50%,而芳香酶P450 mRNA表达下降20%,观察2组与观察1组比较,芳香酶P450、CYP17 mRNA表达均增强,且以CYP17 mRNA表达增强更明显,达到125%.结论 MAPK信号传导通路对猪卵巢颗粒细胞的分泌功能具有抑制作用.     

抗苗勒管激素对卵巢黄素化颗粒细胞中芳香酶表达的影响

目的 探讨抗苗勒管激素(AMH)对卵巢黄素化颗粒细胞激素分泌和芳香酶P450mRNA表达的影响.方法 采集2006年6-12月在中山大学附属第二医院进行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的10例不孕患者的卵巢黄素化颗粒细胞进行原代培养,按照加入AMH浓度的不同,将颗粒细胞分为A、B、C、D、E组及睾酮对照组、空白对照组,A～E组分别加入1、5、10、20、50μg/L的AMH及1×10-7mol/L睾酮,睾酮对照组加入1×10-7mol/L睾酮,空白对照组仅加入培养基.于培养24、48、72 h时分别检测各组细胞中的雌二醇水平;培养72 h后各组均进行细胞计数,并采用RT-PCR技术检测B、C、D、 E组及睾酮对照组细胞中芳香酶P450 mRNA的表达水平.结果 (1)培养24、48、72 h后颗粒细胞中的雌二醇水平,A组分别为(8.529±0.381)×104、(10.977±0.436)x 104、(13.309±0.506)×104pmo/L,B组分别为(7.027±0.276)×104、(9.167±0.300)×104、(10.794±0.555)×104 pmo/L,C组分别为(6.039±0.226)×104、(7.585±0.548)×104、(8.797±0.518)×104pmo/L,D组分别为(5.118±0.460)×104、(5.716±0.496)×104(6.205±0.667)x1044pmol/L,E组分别为(4.932±0.148)×104(5.323±0.184)×104(5.629±0.212)x 1044 pmol/L,各组分别与空白对照组[分别为(0.001±0.001)×104(0.006±0.003)×104(0.029±0.011)×1044pmol/L]比较,差异均有统计学意义(P<0.01);B、C、D、E组分别与睾酮对照组[分别为(8.418±0.569)×104(10.841±0.689)×104(13.301±0.637)×1044pmol/L]比较,差异也均有统计学意义(P<0.01);B组分别与C、D、E组比较,C组分别与D、E组比较,差异也均有统计学意义(P<0.01);D组与E组之间比较,差异无统计学意义(P40.05).A、B、C、D、E组及睾酮对照组培养24 h后颗粒细胞中的雌二醇水平,分别与培养48、72 h比较,差异均有统计学意义(P<0.01);培养48 h后的雌二醇水平与培养72 h比较,差异也均有统计学意义(P<0.01).空白对照组培养24、48、72 h后的雌二醇水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05).(2)培养72 h后,B、C、 D、 E组颗粒细胞中芳香酶P450 mRNA的表达水平分别为0.6148±0.0046、0.5156±0.0012、0.4698±0.0027、0.4282±0.0017,分别与睾酮对照组(0.8224±0.0021)比较,差异均有统计学意义(P<0.01);B组分别与C、D、E组比较,C组分别与D、E组比较,差异也有统计学意义(P<0.01);D组与E组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论AMH可能通过在卵巢局部抑制芳香酶活性而影响颗粒细胞的雌激素合成过程,促使卵泡内局部高雄激素环境的形成.     

hUCMSCs移植提高围绝经期大鼠血清雌激素水平的持续时间及对卵巢P450arom表达的影响

目的:探讨人脐带间充质干细胞(h UCMSCs)移植提高围绝经期大鼠血清雌激素(E2)水平的持续时间及其对卵巢细胞色素P450芳香化酶(P450arom)表达的影响。方法:阴道脱落细胞涂片法筛选出30只SPF级12~14月龄的围绝经期SD大鼠,随机分为A、B组;同时筛选出15只SPF级3~5月龄具有生育能力的青年雌性SD大鼠,作为C组。B组:尾静脉移植浓度为1×10~6cells/ml的h UCMSCs单细胞悬液1ml,隔日1次,共两次;A组:与B组在相同时间相同方式移植等量PBS液;C组:不予处理。于移植前所有大鼠经眼眶采血检测血清E2水平,并于末次移植后14d、21d、28d每组随机选取5只大鼠采血并取双侧卵巢组织,ELISA法检测血清E_2水平、免疫组化及Western blot法检测卵巢P450arom表达水平。结果:末次移植后14d、21d、28d,B组大鼠血清E_2水平、卵巢P450arom表达与移植前及A组相比均明显升高,差异有统计学意义(P0.05),B组3个时间段的E_2水平、P450arom表达无明显差异(P0.05)。结论:h UCMSCs移植提高围绝经期大鼠血清E_2水平可至少持续至移植后28d;h UCMSCs移植可促进围绝经期大鼠卵巢细胞色素P450芳香化酶表达,是其提高E_2水平的可能途径。     

胰岛素受体底物1蛋白表达及其酪氨酸磷酸化程度与多囊卵巢综合征发病的关系

目的　研究多囊卵巢综合征 (polycysticovarysyndrome ,PCOS)患者脂肪组织胰岛素受体底物 1(insulinreceptorsubstrate 1,IRS 1)蛋白的表达及其酪氨酸磷酸化程度 ,探讨PCOS患者产生胰岛素抵抗 (insulinresistance ,IR)的分子生物学机制。方法　采用放射免疫法检测PCOS伴IR者19例 (A组 )、PCOS无IR者 10例 (B组 )及单纯子宫肌瘤患者 15例 (对照组 )的血清黄体生成素(luteinizinghormone ,LH)、卵泡刺激素 (folliclestimulatinghormone ,FSH )及睾酮的水平 ;采用放射免疫法测定各组空腹血清胰岛素 (fastinginsulin ,FIN)水平 ;采用葡萄糖氧化酶法测定各组空腹血糖(fastingplasmaglucose ,FPG)水平 ;采用稳态模型 (homeostasismodelassessment,HOMA)计算IR指数(即HOMAIR) ;采用蛋白印迹法检测IRS 1蛋白表达水平 ,同时应用免疫沉淀方法检测IRS 1的酪氨酸磷酸化程度。结果　 (1)A组患者血清LH、LH /FSH、睾酮、FIN及HOMAIR分别为 (15 8±2 8)U/L、2 8± 0 6、(4 3± 0 9)nmol/L、(2 5 2± 3 8)mU/L、1 56± 0 2 5;均显著高于B组的(13 9± 1 9)U/L、2 3± 0 4、(3 6± 0 4)nmol/L、(13 4± 3 8)mU/L、0 87± 0 2 8及对照组的 (7 3± 2 1)U /L、1 3± 0 3、(0 9± 0 2 )nmol/L、(9 5± 2 6     

控制性超促排卵周期多囊卵巢综合征患者生长分化因子-9和骨形成蛋白-15的初步研究

目的:探讨控制性超促排卵(COH)周期多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞生长分化因子-9(GDF-9)、骨形成蛋白-15(BMP-15)的表达及其与体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗结局的关系。方法:选择接受IVF-ET治疗的PCOS患者45例,同期输卵管因素不孕患者103例作为对照组。应用免疫组织化学、Real-time PCR技术检测患者卵巢颗粒细胞GDF-9、BMP-15蛋白和mRNA的表达,并分析与IVF-ET的临床结局关系。结果:GDF-9、BMP-15蛋白在PCOS组和对照组患者卵巢颗粒细胞胞质均呈阳性表达,PCOS患者颗粒细胞GDF-9 mRNA、BMP-15 mRNA的表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。多元线性回归分析显示,颗粒细胞GDF-9 mRNA、BMP-15 mRNA表达水平与优质胚胎数呈正相关关系(P0.05)。临床妊娠组的颗粒细胞GDF-9mRNA、BMP-15 mRNA表达水平高于未妊娠组(P0.05)。结论:COH周期PCOS患者颗粒细胞GDF-9 mRNA、BMP-15 mRNA表达水平可能与胚胎发育潜能存在相关性。     

Kisspeptin对多囊卵巢综合征来源颗粒细胞雌孕激素分泌调节的研究

目的:探讨PCOS患者卵泡微环境中kisspeptin、KISS-1 mRNA及KISS-1R mRNA表达水平的差异及kisspeptin对卵巢颗粒细胞雌激素和孕激素分泌功能的影响。方法:ELISA法检测17例PCOS患者及20例正常女性卵泡液中kisspeptin水平,RT-PCR检测颗粒细胞中KISS-1/KISS-1R mRNA表达。ELISA法检测kisspeptin处理后对颗粒细胞分泌雌激素和孕激素的影响。结果:PCOS患者取卵日卵泡液kisspeptin水平[(28405±2170.4)ng/ml]显著高于正常女性[(206729±2450.8)ng/ml],差异有统计学意义(P0.05)。PCOS患者组颗粒细胞KISS-1 mRNA水平(7.32±1.68)高于对照组(2.25±0.36),差异有统计学意义(P0.05)。Kisspeptin处理黄素化的颗粒细胞后,颗粒细胞分泌雌激素和孕激素增加。结论:Kisspeptin可能参与了PCOS患者卵巢微环境病理改变过程。     

超声检测卵巢髓质面积与总面积的比值在多囊卵巢综合征诊断中的应用

目的　探讨应用超声检测卵巢髓质面积 (S)、总面积 (A) ,计算S/A比值诊断多囊卵巢综合征 (PCOS)的价值。方法　对 5 8例PCOS不孕患者 (PCOS组 )和 6 0例有正常排卵的不孕患者 (对照组 )行阴道B超检测卵巢S、A ,计算S/A比值 ;测定黄体生成素 (LH)、卵泡刺激素 (FSH)及睾酮水平 ,计算LH/FSH比值。并对PCOS组中 32例患者行高胰岛素正葡萄糖钳夹试验 (HGCT)。结果　PCOS组患者S、A及S/A比值分别为 (1 8± 0 6 )cm2 、(5 0± 1 6 )cm2 及 0 37± 0 0 9;对照组分别为 (1 2± 0 6 )cm2 、(4 4± 1 4 )cm2 及 0 2 7± 0 0 6。PCOS组S明显高于对照组 (P <0 0 1)。LH、FSH、LH/FSH比值及睾酮水平 ,PCOS组患者分别为 (8± 4 )U/L、(5± 3)U/L、2 0± 1 2及 (3 7± 0 3)nmol/L ;对照组分别为 (6± 4 )U/L、(5± 4 )U/L、1 6± 0 7及 (2 2± 0 5 )nmol/L。PCOS组 32例患者行HGCT的结果表明 ,葡萄糖输注率低于正常参考值 ,与S、S/A比值呈明显的负相关关系。结论　S/A比值、S可作为辅助诊断PCOS的指标     

Expression of CHOP/GADD153 in Luteinizing Granulosa Cells of Ovary with Polycystic Ovary Syndrome

目的:探讨内质网应激相关因子CHOP/GADD153在多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢黄体颗粒细胞上的表达.方法:收集因PCOS不孕、行IVF-ET取卵时的黄体颗粒细胞(PCOS组,n=45)及因男方因素不孕、行IVF/ICSI-ET取卵时的黄体颗粒细胞(对照组,n=45),应用RT-PCR和Western blotting方法检测患者卵巢黄体颗粒细胞CHOP/GADD 153的表达.结果:PCOS组CHOP/GADD153mRNA水平(0.45±0.20)及蛋白水平(0.62±0.26)均较对照组(分别为0.40±0.18、0.56±0.17)有增高趋势,但差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:内质网应激标志蛋白CHOP/GADD 153在PCOS患者卵巢黄体颗粒细胞上的表达无明显改变,推测PCOS患者卵巢黄体颗粒细胞内质网应激尚处于保护性阶段.     

核因子-κB和肿瘤坏死因子-α与多囊卵巢综合征患者糖脂代谢指标相关性研究

目的探讨血清中核因子-κB(NF-κB)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与多囊卵巢综合征(PCOS)患者糖脂代谢指标的相关性。方法选择80例PCOS患者为研究组,同期来院就诊的80例非PCOS不孕症患者为对照组。根据体质量指数(BMI)是否≥25 kg/m2,将研究组分为PCOS肥胖亚组(A组,40例)、PCOS非肥胖亚组(B组,40例);对照组分为非PCOS肥胖亚组(C组,40例)和非PCOS非肥胖亚组(D组,40例)。检测静脉血NF-κB、TNF-α及血糖血脂相关指标,并对各因素间关系采用Spearman相进行关性分析。结果 A组稳态胰岛素评价指数(HOMA-IR)、空腹胰岛素(FIN)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平指标明显高于B组(P值分别为0.022、0.036、0.044、0.023)、C组(P值分别为0.014、0.029、0.021、0.018)及D组(P值分别为0.007、0.021、0.014、0.003),B组HOMA-IR及FIN指标高于C组(P值分别为0.041、0.033)及D组(P值分别为0.030、0.017);A组血清中总胆固醇(TC)水平高于D组(P=0.023);B组血清中TG和LDL-C水平高于D组(P值分别为0.032、0.026);A组血清中高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平低于D组(P=0.001);A组血清中NF-κB水平[(655.59±273.41)IU/L]高于B组[(502.84±165.48)IU/L](P=0.034)、C组[(352.10±132.45)IU/L](P=0.019)及D组[(319.62±112.57)IU/L](P=0.005),B组血清中NF-κB水平高于C组(P=0.039)及D组(P=0.031);A组血清中TNF-α水平[(86.18±18.32)ng/L]高于B组[(66.86±22.71)ng/L](P=0.042)、C组[(58.40±17.90)ng/L](P=0.029)及D组[(54.67±22.34)ng/L](P=0.013),B组血清中TNF-α水平高于D组(P=0.038);在相关性分析中显示,PCOS患者中NF-κB及TNF-α均与BMI、FIN、HOMA-IR、TG、LDL-C等指标有相关性(P0.05),且NF-κB与TNF-α也有相关性(P0.05)。结论 TNF-α可能与NF-κB相互作用共同参与PCOS的糖脂代谢紊乱的发生及发展,为临床治疗PCOS提供了新的思路。     

胚胎干细胞因子Nanog、Oct4、Sox2与多囊卵巢综合征的相关性

目的探讨颗粒细胞中胚胎干细胞因子Nanog、Oct4、Sox2与多囊卵巢综合征(PCOS)发生的关系。方法选择接受体外受精/卵胞质内单精子注射-胚胎移植术(IVF/ICSI-ET)治疗的PCOS患者40例,同期输卵管因素或男方因素不孕患者40例作为对照组。利用Real time-PCR技术检测颗粒细胞中Nanog、Oct4、Sox2以及抗苗勒管激素(AMH)mRNA的表达水平,并用Western blotting分析蛋白表达水平与PCOS发生的关系。结果 PCOS组体质量指数(BMI)[(26.44±3.46)kg/m~2]、黄体生成素(LH)[(7.56±0.98)IU/L]、LH/卵泡刺激素(FSH)(1.06±0.15)及获卵数(28.7±3.9)较对照组[(22.43±3.17)kg/m~2、(4.26±0.34)IU/L、0.57±0.04、15.1±2.0]有显著升高(P均0.05)。Real time-PCR结果显示,PCOS组胚胎干细胞因子Nanog(0.60±0.09)和Oct4(0.85±0.14)mRNA表达水平显著低于对照组(1.65±0.17,1.59±0.17)(P0.05),AMH转录水平(1.28±0.11)显著高于对照组(0.89±0.07)(P0.05)。Logistic回归分析结果显示,Nanog是PCOS发生的危险因素(OR=26.577,P=0.002),且Nanog与BMI、获卵数及AMH呈显著负相关(r1=-0.415,P=0.023;r2=-0.415,P=0.022;r3=-0.373,P=0.043),与Oct4呈显著正相关(r=0.684,P0.01)。Western blotting结果显示,与对照组比较,PCOS组Nanog蛋白表达降低,AMH蛋白表达水平增高。结论 PCOS卵巢颗粒细胞中胚胎干细胞因子Nanog以及AMH的异常表达可能参与了PCOS的发生并影响卵母细胞的发育与成熟,为PCOS的临床治疗提供理论依据。     

多囊卵巢综合征大鼠卵巢组织脑源性神经营养因子及其受体TrkB的表达

目的:研究来曲唑(LE)诱导的多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠模型卵巢组织中脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体——TrkB蛋白的表达及对卵泡发育的影响。方法:应用LE诱导大鼠PCOS模型,放射免疫法测定大鼠血清性激素水平,酶联免疫法(ELISA)测定血清细胞色素P450芳香化酶(P450arom)含量;HE染色观察卵巢组织学变化;免疫印迹法检测BDNF及其TrkB蛋白在卵巢组织中的表达;免疫组织化学法检测TrkB在各级卵泡中的表达差异。结果:与对照组比较,模型组血清睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)浓度显著增高,雌二醇(E2)、孕酮(P)浓度显著降低,血清P450arom含量显著降低;差异均有统计学意义(P0.05)。模型组卵巢体积增大,囊状扩张卵泡明显增多,黄体数量明显减少。模型组卵巢组织中BDNF蛋白表达水平显著高于对照组(P0.01),而TrkB在卵巢组织中的表达有2个片段,即fl-TrkB和tr-TrkB。fl-TrkB在模型组的表达明显高于对照组,而tr-TrkB的表达明显低于对照组,差异均有统计学意义(P0.01)。TrkB在各级卵泡卵母细胞上的表达呈递减趋势;模型组大窦前卵泡的颗粒细胞中的表达强度高于对照组,在卵母细胞中的表达强度低于对照组(P0.05);在模型组囊状卵泡颗粒细胞中的表达强度远高于对照组窦状卵泡颗粒细胞的表达,且差异有统计学意义(P0.05)。结论:LE诱导的PCOS大鼠模型是研究PCOS病理机制的一种理想的动物模型,卵巢组织内BDNF/TrkB表达水平的变化可能与PCOS卵泡发育障碍相关。     

卵泡刺激素对多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞分泌抗苗勒管激素的影响

目的 研究卵泡刺激素(FSH)对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞分泌抗苗勒管激素(AMH)的影响.方法 选择2008年8月至2009年12月于中山大学附属第六医院生殖中心就诊的33例PCOS患者,从其直径为8～10 mm的窦卵泡中分离颗粒细胞,并分为以下3组进行培养:未经FSH刺激的颗粒细胞(未刺激组,n=12);外源性FSH刺激的颗粒细胞(体外刺激组,n=12),此组颗粒细胞来源同未刺激组;对患者行FSH促排卵治疗,采集FSH体内刺激的颗粒细胞(体内刺激组,n=21).分别采用ELISA法和实时荧光定量PCR技术检测培养液中颗粒细胞分泌的AMH水平,及AHM mRNA表达水平;构建AMH荧光报告载体,检测卵巢颗粒细胞中AMH启动子的活性.结果 培养液中颗粒细胞分泌的AMH水平,未刺激组为(11.4±4.0)μg/L,体外刺激组为(7.9±1.1)μg/L,体内刺激组为(5.6±1.7)μg/L,体内、体外刺激组分别与未刺激组比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05).AMH mRNA表达水平未刺激组为2.5±1.2,体外刺激组为1.5±0.5,体内刺激组为1.1±0.7,未刺激组高于体内、外刺激组,分别比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05).未刺激组颗粒细胞中AMH启动子的活性为11.5±2.3,体外刺激组为8.7±2.4,体内刺激组为6.8±2.4,未刺激组高于体内、外刺激组,分别比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 FSH可能通过抑制PCOS患者卵巢颗粒细胞中AMH的启动子活性及其mRNA表达,抑制AHM的过度分泌,促进卵泡的生长发育.     

机械力对小鼠成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响研究

目的:探讨机械力对小鼠成纤维细胞L929细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅠ、CollagenⅢ)表达的影响及其可能机制。方法:选取L929细胞为研究对象,使用四点弯曲细胞力学加载系统对细胞进行机械力干预,加力时间为4小时,加力频率为1 Hz;L929细胞分别经0、1333μ和5333μ机械力干预后,采用CCK8检测不同大小机械力对细胞活性的影响。L929细胞分别经0和5333μ机械力干预后,采用Western blot检测两组细胞转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad蛋白(Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3)和CollagenⅠ、CollagenⅢ的表达,采用实时荧光定量PCR检测两组细胞TGF-β1、Smad2、Smad3、CollagenⅠ和CollagenⅢmRNA的表达,采用细胞免疫荧光检测细胞内Smad2/3的核转移情况。结果:与对照组相比,L929细胞经1333μ机械力干预后细胞增殖活性明显上升,而5333μ机械力干预后细胞增殖活性显著下降(P0.05)。与对照组相比,5333μ组细胞TGF-β1、pSmad3、CollagenⅠ、CollagenⅢ水平及TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢmRNA表达均明显降低(P0.05),且Smad2/3核转移被明显抑制;而细胞Smad2、Smad3、p-Smad2蛋白及Smad2、Smad3 mRNA表达差异均无统计学意义(P0.05)。结论:5333μ机械力可降低小鼠成纤维细胞CollagenⅠ、CollagenⅢ的表达,其机制可能与TGF-β1/Smads信号转导通路抑制有关。     

多囊卵巢综合征患者高尔基体磷酸化蛋白3表达与颗粒细胞凋亡和促排卵结局的相关性

目的探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者控制性超促排卵(COH)周期卵巢颗粒细胞高尔基体磷酸化蛋白3(GOLPH3)的表达与颗粒细胞凋亡和COH结局的关系。方法选择因输卵管因素或男方因素首次接受体外受精/卵胞质内单精子显微注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)助孕治疗的PCOS患者70例和同期非PCOS患者70例作为对照组。应用免疫细胞化学(ICC)和Real-time PCR技术检测颗粒细胞GOLPH3、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白和mRNA的表达,并行相关性分析。结果①GOLPH3在卵巢颗粒细胞胞质中呈阳性表达,PCOS患者颗粒细胞GOLPH3和Bcl-2的表达低于对照组(P0.05),Bax和Caspase-3的表达均高于对照组(P0.05);②PCOS患者卵巢颗粒细胞GOLPH3 mRNA、Bcl-2 mRNA表达水平均低于对照组(P0.05),Bax mRNA、Caspase-3mRNA表达水平均高于对照组(P0.05);③PCOS患者中临床妊娠亚组颗粒细胞GOLPH3蛋白和mRNA的表达水平均高于未妊娠亚组(P0.05);④相关性分析显示:GOLPH3蛋白表达与抗凋亡因子Bcl-2呈正相关(P0.001),与促凋亡相关因子Bax、Caspase-3呈负相关(P0.001),与COH结局[获卵数、双原核(2PN)受精数、卵裂数、优质胚胎数、优质囊胚数、可利用胚胎数]呈正相关;颗粒细胞GOLPH3 mRNA表达水平与优质胚胎数呈正相关;多元线性回归分析提示GOLPH3表达与Bcl-2表达、可利用胚胎数呈正相关,与Bax表达呈负相关。结论 COH周期PCOS患者颗粒细胞GOLPH3表达水平下降可能促进颗粒细胞凋亡,影响卵母细胞质量,进而影响胚胎发育潜能。     

PCOS患者卵巢胰岛素抵抗的发生机理探讨

目的:探讨胰岛素抵抗/高胰岛素血症在PCOS生殖功能障碍中的作用。方法:收集行IVF-ET治疗的11例PCOS患者(PCOS组)和15例排卵正常的输卵管性不孕患者(对照组)促排卵后卵巢黄素化颗粒细胞,行体外培养,分别用不同浓度胰岛素处理细胞48h,采用RT-PCR和Westernblot检测黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物(IRS)-1和IRS-2mRNA及蛋白的表达。采用放射免疫法检测血清性激素及空腹血清胰岛素(FIN)水平;采用葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖(FPG)水平;计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。结果:①PCOS患者血清LH、LH/FSH、T、FIN及HOMA-IR均明显高于对照组(P<0.05);②0mU/ml胰岛素时,PCOS组黄素化颗粒细胞IRS-1mRNA及蛋白的表达水平明显高于对照组(P<0.05),而IRS-2mRNA及蛋白的表达水平较对照组明显降低(P<0.05);③10mU/ml胰岛素对二组患者黄素化颗粒细胞IRS-1和IRS-2mRNA及蛋白的表达均无影响(P>0.05);④100mU/ml或1000mU/ml胰岛素作用后,二组患者IRS-1mRNA及蛋白的表达水平均明显增高(P<0.05),而IRS-2mRNA及蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:PCOS患者胰岛素抵抗/高胰岛素血症通过提高卵巢颗粒细胞IRS-1的表达,降低IRS-2的表达参与患者卵巢生殖功能障碍的发生。     

地塞米松上调禁欲的发情雄性小鼠睾丸间质细胞芳香化酶表达

目的:探讨地塞米松对禁欲的发情雄性小鼠睾丸组织芳香化酶表达的影响。方法:发情昆明雄性小鼠随机分成3组,每组10只:性表达组(A组)、禁欲组(B组)、地塞米松+禁欲组(C组,皮下给地塞米松16.66mg/kg),采用放射免疫法检测各组血清睾酮(T)、雌二醇(E2)水平以及睾丸组织E2含量;采用化学发光法检测血清皮质醇水平;采用原位杂交和免疫组织化学技术检测睾丸组织芳香化酶(P450arom)的表达。结果:C组睾丸间质细胞芳香化酶表达增强(P<0.01),睾丸组织、血清E2水平升高(P<0.01),而血清皮质醇水平降低(P<0.01)。结论:地塞米松可能通过抑制禁欲的发情雄性小鼠肾上腺皮质醇分泌而上调睾丸间质细胞P450arom表达。     

bcl-2表达下调参与PCOS患者颗粒细胞的凋亡增加

目的比较PCOS患者和正常妇女颗粒细胞的凋亡差异,并初步探讨其发生的可能机制。方法采用病例对照的方式,选择体外受精-胚胎移植（IVF-ET）中PCOS患者23例以及对照组31例,收集其颗粒细胞,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,用Hochest 33342荧光染色观察凋亡细胞核形态。用免疫组化和WesternBlot法分析两组原代培养颗粒细胞间bcl-2蛋白的表达差异。结果PCOS组和对照组颗粒细胞凋亡率分别是（0.26±0.18）和（0.16±0.10）,PCOS颗粒细胞的凋亡率明显增高（P〈0.05）,Hochest 33342荧光染色在PCOS组颗粒细胞中可见更多的凋亡细胞核形态。免疫组化显示bcl-2主要表达在颗粒细胞胞浆中表达,形态计量学积分显示PCOS组和对照组的H-Score分别是（7.45±3.85）和（10.73±4.17）,在PCOS组颗粒细胞中bcl-2蛋白表达明显下调（P〈0.05）。结论PCOS患者颗粒细胞凋亡增多;bcl-2表达下调可能是导致PCOS患者颗粒细胞凋亡增多的关键因素。     

来曲唑对EM大鼠P450arom mRNA及COX-2mRNA表达的影响

目的:探讨来曲唑对大鼠EM模型子宫内膜异位病灶中P450arom mRNA、COX-2 mRNA表达的影响及其治疗EM的作用机制。方法:参照Jones法用自体移植建立EM大鼠模型,随机将建模成功的大鼠分为来曲唑组及盐水对照组,比较治疗前后EM大鼠异位病灶体积的变化。用RT-PCR法检测各组大鼠异位病灶中P450arom mRNA及COX-2 mRNA的表达。结果:来曲唑组异位病灶体积明显缩小或萎缩,与对照组差异有统计学意义(P<0.05)。来曲唑治疗后P450arom mRNA、COX-2 mRNA在异位内膜中表达降低,与对照组比较均有统计学差异(P<0.05),且两者变化有相关性(r=0.918,P=0.001)。结论:来曲唑对大鼠异位病灶体积的影响明显,短时间内就有明显效果,可能通过降调P450arom mRNA、COX-2 mRNA在异位内膜组织中的表达起作用。